平； OF-ODPA?0F-4DPA :開花當天的胚珠（含纖維細胞）到開花后4天的胚珠（含纖維細胞）； F-6DPA?F-16DPA :開花后6天的纖維到開花后16天的纖維；0-6DPA?0-16DPA :開花后 6天的胚珠到開花后16天的胚珠。本圖顯示GhCYP734AlL-l基因在纖維細胞中特異表達， 在根、莖、葉、花、子葉、下胚軸和胚珠幾乎不表達。圖中胚珠中的微弱表達可能是纖維細胞 從胚珠表面剝離時殘留的纖維細胞所致。
[0033] 圖4 :GhCYP734AlL-l基因在陸地棉野生型TM-I和其超短纖維突變體Ii-I的纖維 和胚珠中的表達；
[0034] TM-I :陸地棉野生型；Ii-I :超短纖維突變體；F0-0DPA:開花當天的胚珠纖維； F0-6DPA:開花后6天的胚珠纖維；F-10DPA :開花后10天的纖維細胞；0-10DPA :開花后10 天的胚珠。本圖顯示GhCYP734AlL-l基因在超短纖維突變體開花后6天的胚珠纖維中和 開花后10天的纖維細胞中的表達遠遠低于其野生型相同發(fā)育時期對應纖維和胚珠中的表 達。說明GhCYP734AlL-l基因在纖維伸長過程中具有重要作用。
[0035] 圖5 :含GhCYP734AlL-l基因的植物表達載體的結構圖；
[0036] 其中 CaMV 35S 代表 CaMV 35S 啟動子；GhCYP734AlL-l 代表 GhCYP734AlL-l 基因 cDNA ; Ter代表終止子；LB代表T-DNA左邊界；RB代表T-DNA右邊界。
[0037] 圖6 :本發(fā)明優(yōu)選的植物表達載體pC-CaMV 35S-GhCYP734AlL-l結構圖；
[0038] 其中GusPlus-His6代表⑶SPlus報告基因，該基因在C端融合了 His6序列標簽； NPTII代表新霉素磷酸轉移酶基因，具有卡拉霉素抗性；Ter :Nos終止子；CaMV35S :來源于 花椰菜花葉病毒的植物組成性啟動子；LB :T-DNA左邊界；RB :T-DNA右邊界。植物表達載體 為改造的PCambia載體（詳見實施例三）。
[0039] 圖7 :本發(fā)明優(yōu)選的反義抑制GhCYP734AlL-l基因植物表達載體pC-CaMV 35S-反 義GhCYP734AlL-l結構圖。其中GusPlus-His6代表⑶SPlus報告基因，該基因在C端融 合了 His6序列標簽；NPTII代表新霉素磷酸轉移酶基因，具有卡拉霉素抗性；Ter :Nos終止 子；CaMV35S :來源于花椰菜花葉病毒的植物組成性啟動子；LB :T-DNA左邊界；RB :T-DNA右 邊界。植物表達載體為改造的PCambia載體（詳見實施例三）。
[0040] 圖8 :轉基因棉花的鑒定；
[0041] 其中A :轉基因棉花的組織化學鑒定，WT:非轉基因棉花（野生型），作對照； pC-CaMV35S-反義GhCYP734AlL-l為反義抑制GhCYP734AlL-l基因的轉基因棉花葉片； PC-CaMV35S-GhCYP734AlL-l代表超量表達GhCYP734AlL-l基因的轉基因棉花葉片；
[0042] 其中B :超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花的擴增驗證，M :DNA marker2000 ; H2O :以水為PCR擴增模板，作空白對照；+ :以pC-CaMV 35S-GhCYP734AlL-l質(zhì)粒為PCR擴增 模板，作陽性對照；1和2 :超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花1#和2#。
[0043] 其中C :反義抑制GhCYP734AlL-l轉基因棉花的擴增驗證，M :DNA markerl5 : 非轉基因棉花（野生型），作陰性對照；H2O :以水為PCR擴增模板，作空白對照；+ :以 pC-CaMV35S-反義GhCYP734AlL-l質(zhì)粒為PCR擴增模板，作陽性對照；1?3 :反義抑制 GhCYP734AlL-l轉基因棉花1#?3#。
[0044] 圖9 :轉基因棉花中GhCYP734AlL-l基因的表達分析；
[0045] 其中A :反義抑制GhCYP734AlL-l轉基因棉花纖維中GhCYP734AlL-l基因的表達 分析，WT:非轉基因棉花（野生型）；S1?S13:反義抑制GhCYP734AlL-l轉基因棉花1#? 13# 〇
[0046] 其中B :超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花葉片中GhCYP734AlL-l的表達分析， WT :非轉基因棉花（野生型）；01?014:超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花1#?14#。
[0047] 本圖表明，通過棉花遺傳轉化，獲得GhCYP734AlL-l基因表達水平增加和降低的 轉基因棉花。
[0048] 圖10 :超量表達GhCYP734AlL-l基因?qū)γ藁ㄖ仓晟L發(fā)育的影響；
[0049] 其中A :非轉基因棉花（野生型）和超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花植株的 生長狀況；左為野生型棉花植株，右為超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花植株，標尺= IOcm0
[0050] 其中B :野生型棉花葉片和轉基因棉花葉片的比較；左為野生型棉花成熟葉片，右 上為轉基因棉花幼葉，右下為轉基因棉花成熟葉片，標尺=l〇cm。
[0051] 其中C :野生型棉花葉片和轉基因棉花葉片的葉綠素含量比較;WT:非轉基因棉花 (野生型）葉片；01:超量表達GhCYP734AlL-l轉基因棉花葉片。
[0052] 其中D :野生型棉花葉片和轉基因棉花葉片的氣孔開閉情況；下圖為非轉基因棉 花（野生型）葉片上氣孔的開閉情況，上圖為轉基因棉花葉片上氣孔的開閉情況。
[0053] 圖11 :反義抑制GhCYP734AlL-l基因?qū)γ藁ɡw維長度的影響；
[0054] 其中A:棉花成熟纖維的長度比較；WT :非轉基因棉花（野生型）；S1:反義抑制 GhCYP734AlL-l轉基因棉花1#株系；
[0055] 其中B :棉花胚珠離體培養(yǎng)體系中，非轉基因棉花（野生型）和反義抑制 GhCYP734AlL-l轉基因棉花纖維的生長情況；WT :非轉基因棉花（野生型）；S1:反義抑制 GhCYP734AlL-l轉基因棉花1#株系；
[0056] 其中C :成熟纖維的纖維長度測量統(tǒng)計，野生型和轉基因纖維各檢測20粒，經(jīng)過纖 維梳理后測量其長度。WT:非轉基因棉花（野生型）；S1:反義抑制GhCYP734AlL-l轉基因 棉花1#株系。
【具體實施方式】
[0057] 本發(fā)明實例中的試劑藥品未做具體說明的均為普通市售，材料方法未做具體說明 的均參考《分子克隆實驗指南》（Sambrook和Russell, 2001)。
[0058] 在本發(fā)明的下述實例中，所用的棉花實驗材料為冀棉14(Gossypium hirsutum cv. Jimianl4)，為生產(chǎn)上栽培品種；TM-I (Gossypium hirsutum cv. TM-1)及其超短纖維突 變體（ligon lintless-1，Ii-I)。野生型TM-I從每次播種的Ii-I突變體中分離出來（Ii-I 突變體是一個顯性突變體，純合體致死。因此每季只需要收獲突變體種子，該種子播種后長 出的棉花幼苗中有一部分是分離出來的野生型，即TM-1)，Ii-I突變體來自中國農(nóng)科院棉 花研宄所種質(zhì)庫，公開發(fā)放。
[0059] 實施例I GhCYP734AlL-l基因的克隆和序列分析
[0060] 1、棉花RNA的提取
[0061] 選取約3g新鮮棉花材料，在液氮中迅速磨成精細粉末，裝入50mL離心管，加入 15ml65°C預熱的 RNA 提取液（2% CTAB (W/V)，2% PVP (W/V)，lOOmmol/L Tris-HCl (ρΗ8· 0)， 0. 5g/L亞精胺，2.0mol/L NaCl，2%巰基乙醇（V/V)，使用前加入）），顛倒混勻。65°C水浴 3?lOmin，期間混勻2?3次。氯仿：異戊醇（24 : 1)抽提2次（10,000r/min，室溫，5min)。 取上清，加入1/4體積10m〇l/L LiCl溶液，4°C放置6h，以氯仿：異戊醇（24 : 1)各抽提 1次（10, 000r/min，室溫，5min)。加2倍體積的無水乙醇，在-70°c冰箱沉淀30min以上。 12,000r/min，4°C離心20min，棄上清。沉淀用200 yL的DEPC處理水溶解。酚（ρΗ4·5): 氯仿：異戊醇（25 : 24 : 1)、氯仿：異戊醇（24 : 1)各抽提1次（10,000r/min，室溫， 5min)。加1/10體積3mol/L NaAc溶液和2. 5倍體積的無水乙醇，在-70°C冰箱沉淀30min 以上。12,0001'/11^11，4°〇離心201^11，棄上清。沉淀用70%的酒精漂洗一次，風干。加20(^1^ 的DEPC處理水溶解。用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量。
[0062] 2、cDNA 合成
[0063] 以棉花各種樣品總RNA，用試劑盒（Fermentas)合成cDNA-鏈。具體方法為：取 約10 μ g總RNA到DEPC處理的擴增管中，加入1 μ L 2. 5 μ mol/L 01 igo-dT，加