一種氯胺酮人工抗原的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種氯胺酮人工抗原的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氯胺酮（KET)是苯環(huán)己哌陡（phencyclidine)的衍生物，屬于非鴉片系麻醉科藥 物，臨床上用作手術(shù)麻醉劑或麻醉誘導(dǎo)劑，具有一定的精神依賴性潛力。由韋恩州立大學(xué)克 雷格教授研發(fā)。于1962年交由派克-戴維斯藥廠開發(fā)，作為較安全的麻醉藥，以取代當(dāng)年 副作用大的的天使塵（phencyclidine,PCP)，除了麻醉作用外，氯胺酮亦因其鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)， 直至目前仍廣泛應(yīng)用。目前本藥也被獸醫(yī)廣泛使用，并在發(fā)展中國(guó)家被用作麻醉劑，其結(jié)構(gòu) 式為：
[0003]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氯胺酮人工抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 制備人工半抗原： (a) 將鹽酸氯胺酮溶于純化水，滴加氨水，使之變混；用二氯甲烷萃取，轉(zhuǎn)干，得到白色 固體產(chǎn)物I ;TLC:層析液為乙酸乙酯：石油醚=I: I (v/v)，產(chǎn)物Rf =0.8; (b) 將產(chǎn)物I溶于無(wú)水丙酮中，加入300mg無(wú)水碳酸鉀、363ul溴乙酸乙酯，加熱至 70-75°C回流攪拌反應(yīng)22小時(shí)以上；反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾，將濾液減壓蒸餾，轉(zhuǎn)干得黃色油狀 液體11;!1(： :石油醚=1:1(>八），產(chǎn)物1^==0.9; (c) 加入的四氫呋喃,油狀液體II溶解,然后再加入甲醇、IN氫氧化鈉，（反應(yīng)比例為油 狀液體II :四氫呋喃：甲醇：IN氫氧化鈉=IOOmg : I. 93ml :2. 43ml :9. 65ml )，室溫反應(yīng)16小 時(shí)以上；反應(yīng)結(jié)束后用IN鹽酸調(diào)pH=3. 57-3. 59 ;用乙酸乙酯萃取，合并所有有機(jī)相，用無(wú)水 硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濾入圓底燒瓶中，轉(zhuǎn)干，得黃色油狀氯胺酮半抗原II ;TLC :層析液為95% 乙醇：氨水：二氯甲燒：1，4_二氧六環(huán)=8: 1: 10: I (v/v)，產(chǎn)物Rf =0.4?0.5; (2) 制備氯胺酮人工抗原： (d) 將氯胺酮半抗原II溶于N，N-二甲基甲酰胺中（DMF)，加入N-羥基琥珀酰亞胺 (NHS)、環(huán)己基碳酰二亞胺（DCC)，（反應(yīng)比例為氯胺酮半抗原II :DMF:NHS:DCC= 20mg:lml: llmg: 19mg),室溫?cái)嚢璺磻?yīng)18小時(shí)以上,反應(yīng)結(jié)束后離心取上清液記為A液； (e) 將氯化鈉與十二水磷酸氫二鈉、二水磷酸二氫鈉以摩爾比為78. 3:4. 2:1溶于雙 蒸水中，制備鈉離子濃度為〇. lmol/L的PBS緩沖液，pH為7. 2~7. 4 ; ⑴將牛丙種球蛋白（BGG)溶于PBS緩沖液中，得到濃度為5mg/ml的B液； (g) 將A液緩慢滴加到B液，A液與B液的體積比為1:5,得到的混合液在2-8°C條件 下靜置保存過(guò)夜，得到人工抗原混合液； (h) 將人工抗原混合液于PBS緩沖液中透析，透析結(jié)束后離心取上清液即得到人工抗 原：氯胺酮-牛丙種球蛋白。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種氯胺酮人工抗原的制備方法，第一步為半抗原的制備及檢測(cè)：以鹽酸氯胺酮與溴乙酸乙酯為原料通過(guò)游離，接臂，水解，反應(yīng)得到含羧基的半抗原；第二步為人工抗原的制備與檢測(cè)：通過(guò)碳二亞胺法使之與牛丙種球蛋白(BGG)結(jié)合制備氯胺酮的人工抗原即氯胺酮-牛丙種球蛋白。所制備的氯胺酮人工抗原可進(jìn)行動(dòng)物免疫，取得相應(yīng)的氯胺酮抗體，可用于各種氯胺酮類免疫分析法的研究，為氯胺酮的檢測(cè)提供更加方便快速準(zhǔn)確的途徑。
【IPC分類】C07K14-47, C07K1-107
【公開號(hào)】CN104558140
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310522215
【發(fā)明人】董媛媛, 韓潔茹
【申請(qǐng)人】艾博生物醫(yī)藥(杭州)有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年10月29日