一種高純度莫能菌素鈉精品的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物發(fā)酵產(chǎn)品生產(chǎn)領(lǐng)域，特別涉及一種高純度莫能菌素鈉精品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]莫能菌素是一種單價聚醚類離子載體型抗球蟲藥，具有廣譜抗球蟲作用。其殺球蟲作用機理是通過干擾球蟲細胞內(nèi)K+、Na+的正常滲透，使大量的Na+進入細胞內(nèi)，為了平衡滲透壓，大量的水分進入球蟲細胞，引起腫脹而死亡。對雞的毒害、柔嫩、巨型、變位、堆型、布氏等艾美耳球蟲均有作用。對火雞的腺艾美耳球蟲和火雞艾美耳球蟲、鵪鶉的分散和萊泰艾美耳球蟲以及羔羊的雅氏和阿撒地艾美耳球蟲亦有效。莫能菌素的作用峰期是在球蟲生活周期的最初2日，對子孢子及第一代裂殖體都有抑制作用，在球蟲感染第二天用藥效果最好。此外，莫能菌素對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等革蘭氏陽性菌亦有較強的抗菌作用，并能促進動物生長發(fā)育，增加體重和提高飼料利用率。
[0003]莫能菌素在正常牛和家禽腸道內(nèi)吸收很少，經(jīng)糞便排出的藥物及代謝產(chǎn)物約占給藥劑量的99%。莫能菌素在牛和大鼠體內(nèi)的代謝試驗證明，少量吸收后的莫能菌素可在組織中代謝成多種代謝物。經(jīng)糞便排泄的6種代謝物與肝臟代謝物相同。
[0004]莫能菌素易溶于甲醇、乙醇、氯仿，微溶于丙酮、石油醚，幾乎不溶于水。
[0005]莫能菌素是通過生物發(fā)酵法，利用豆油、葡萄糖、豆餅粉及硫酸銨、磷酸二氫鉀等糧食化工類原材料，通過生產(chǎn)菌的次級代謝作用合成而得，代謝完成后，由于莫能菌素不溶于水，其是存在于生產(chǎn)菌的菌絲中，與菌絲體、殘存培養(yǎng)基等混合在一起，無法直接得到莫能菌素納廣品。
[0006]莫能菌素鈉產(chǎn)品的主要應(yīng)用劑型為預(yù)混劑，但目前市場沒有直接生產(chǎn)的莫能菌素鈉產(chǎn)品，現(xiàn)在行業(yè)主要采用發(fā)酵結(jié)束后直接將發(fā)酵液過濾不提取精品的方式生產(chǎn)，參見CN102973516A。該方式雖然有環(huán)保等方面的優(yōu)勢，但在安全用藥、產(chǎn)品純度等方面存在隱患，且無法滿足對該產(chǎn)品需要純品時的使用要求。
[0007]現(xiàn)有技術(shù)還有將莫能菌素發(fā)酵液結(jié)晶得到莫能菌素晶體，然后再加堿鹽化得到莫能菌素鈉鹽。但是，由于莫能菌素幾乎不溶于水，而該工藝的前期預(yù)處理步驟全是在水相中進行的，然后過濾，不易得到高濃度的含莫能菌素鈉的濾液，因而需要耗費大量的水。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種高純度莫能菌素鈉精品的制備方法。
[0009]本發(fā)明以現(xiàn)有技術(shù)制備的莫能菌素發(fā)酵液為原料，通過氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值使莫能菌素生成為鈉鹽，通過板框壓濾去除發(fā)酵液中的水分，然后用甲醇將莫能菌素鈉從菌絲體中提取出來，再經(jīng)過濃縮、結(jié)晶、精制、烘干一系列工藝步驟制得莫能菌素鈉精品。
[0010]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0011]一種高純度莫能菌素鈉精品的制備方法，步驟如下:
[0012](I)調(diào)pH:將莫能菌素發(fā)酵液用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.5-11.0，使莫能菌素生成為鈉鹽；
[0013](2)過濾:板框過濾步驟(I)處理好的發(fā)酵液，將發(fā)酵液中的水分除去，得到含有莫能菌素鈉的濾餅；
[0014](3)浸提:按4-8m3甲醇/噸莫能菌素鈉濾餅的比例，向浸提罐中加入甲醇，再投入濾餅，攪拌30-60分鐘，過濾，收集甲醇浸提液；向浸提罐中加入等體積的甲醇溶液，再次浸提20-40分鐘，過濾，收集甲醇浸提液，與第一次甲醇浸提液混合，用于下步濃縮；
[0015]第三次浸提:用同體積的甲醇溶液再浸提濾餅一次，檢測濾餅中莫能菌素含量低于300u/mL，停止浸提，得到的浸提液用于下批生產(chǎn)；
[0016](4)濃縮:將步驟(3)前兩次浸提得到的浸提液在溫度55-65?，真空度不小于0.03Mpa下濃縮至剛有結(jié)晶析出時，停止?jié)饪s得濃縮液；
[0017](5)結(jié)晶:將步驟(4)得到的濃縮液冷卻至常溫，靜置6-10小時，離心得到莫能菌素鈉的濕精品，在58-62°C，真空度多0.06MPa的烘箱中烘干，即得莫能菌素鈉粗品；
[0018](6)精制:常溫下，將步驟(5)得到的莫能菌素鈉粗品用甲醇溶解后，按1-5% (w/w)的比例向溶解液中加入活性炭，然后攪拌20-30分鐘；將溶解液過濾得到濾液，然后將濾液在溫度55— 65°C，真空度不小于0.03MPa下濃縮至有莫能菌素鈉結(jié)晶出現(xiàn)停止?jié)饪s，降溫至30°C以下，靜置4-6小時在甲醇中得到莫能菌素鈉的結(jié)晶，離心分離，即得莫能菌素鈉濕品；
[0019](7)烘干:將步驟(6)得到的莫能菌素鈉濕品烘干干燥，即得到莫能菌素鈉干品。
[0020]優(yōu)選的，上述步驟(I)中用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至8.0-10.0之間，進一步優(yōu)選的，調(diào)節(jié)PH值至8.5。所用氫氧化鈉配制成質(zhì)量百分比20-30%的水溶液。
[0021]優(yōu)選的，上述步驟(3)中甲醇的用量為5-8m3甲醇/噸莫能菌素鈉濾餅，進一步優(yōu)選的，甲醇的用量為4.Sm3甲醇/噸莫能菌素鈉濾餅。
[0022]優(yōu)選的，上述步驟(5)中烘干時間為0.5-1.5小時。
[0023]優(yōu)選的，上述步驟(6)中濃縮液降溫至20°C以下。
[0024]優(yōu)選的，上述步驟(6)中活性炭的加入比例在2.5-3.5% (w/w)之間，進一步優(yōu)選的，活性炭的加入比例為3.0% (w/w)，w/w單位為kg/kg。
[0025]優(yōu)選的，上述步驟(6)中所述的離心分離過程中每次離心用20-50升甲醇淋洗在離心機轉(zhuǎn)鼓內(nèi)壁上的莫能菌素鈉結(jié)晶。
[0026]優(yōu)選的，上述步驟(7)中所述的烘干干燥是指放置于58_62°C，真空度彡0.06MPa的烘箱中烘干6-8小時。
[0027]優(yōu)選的，上述步驟(3)中所述的第三次浸提液用于下一批生產(chǎn)時，下一批生產(chǎn)時替代部分新甲醇用來浸提，直接加到浸提罐中浸提濾餅。
[0028]優(yōu)選的，上述步驟(I)中所述的莫能菌素發(fā)酵液，化學(xué)效價為35000-42000u/mL。
[0029]本發(fā)明所使用的原料莫能菌素發(fā)酵液是按照現(xiàn)有技術(shù)制備得到的。其他原料及設(shè)備沒有特別說明的均按照現(xiàn)有技術(shù)。
[0030]本發(fā)明的有益效果:
[0031]本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，利用莫能菌素不溶于水的特性，先將發(fā)酵液中的水去除后，再用有機溶劑將莫能菌素提取出來進行純化，操作具有很好的可行性，并且耗用溶媒少，成本低，且制備的莫能菌素鈉純度高。
[0032]本發(fā)明的制備方法可將莫能菌素有效成份從生產(chǎn)過程中的發(fā)酵液中提取出來，能夠有效去除生產(chǎn)過程中剩余的培養(yǎng)基殘留、水及其他可能的雜質(zhì)，提高了產(chǎn)品的純度，減少產(chǎn)品使用過程中由于其他雜質(zhì)存在可能產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，提高了用藥的安全性，能夠提供滿足中國藥典和美國標準的高純度莫能菌素鈉精品。
【具體實施方式】
[0033]以下實施例用于對本發(fā)明做出進一步的說明，但不限于此。實施例中所使用的設(shè)備均按照現(xiàn)有技術(shù)。
[0034]實施例1
[0035]一種高純度莫能菌素鈉精品的制備方法，步驟如下:
[0036](I)調(diào)pH:收集42000u/mL莫能菌素發(fā)酵液20噸，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)料液pH值至
8.5 ；
[0037](2)過濾:用裝有濾布的板框過濾步驟(I)處理好的發(fā)酵液，將發(fā)酵液中的水分除去，得到含有莫能菌素鈉的濾餅3.3噸；
[0038](3)浸提:按4.Sm3甲醇/噸莫能菌素鈉濾餅的比例向浸提罐中加入16m3甲醇，然后投入步驟(2)得到的濾餅3.3噸，攪拌60分鐘，過濾，收集甲醇浸提液，再向浸提罐中加入等體積的甲醇溶液，浸提40分鐘，過濾，收集甲醇浸提液，與第一次甲醇浸提液混合，用