ress Dictionary of Science and Technology (《學術出版社 科學技術詞典》），Morris(編著），Academic Press(第 1 版，1992) ;0xford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology (《生物化學與分子生物學牛津詞典》），Smith 等（編著），Oxford University Press(修訂版，2〇00) ;Encyclopaedic Dictionary of Chemistry(《化學百科詞典》），Kumar(編著），Anmol Publications Pvt.有限公 司（2002) dictionary of Microbiology and Molecular Biology(《微生物學和分子 生物學詞典》），Singleton 等（編著），John Wiley&Sons (第 3 版，2002) dictionary of Chemistry(《化學詞典》），Hunt(編著），Routledge(第 1 版，I999) dictionary of Pharmaceutical Medicine (《藥物醫(yī)學詞典》），Nahler (編著），Springer-Verlag Telos (1994) dictionary of Organic Chemistry (《有機化學詞典》），Kumar 和 Anandand(編著），Anmol Publications Pvt?有限公司（2002);以及 A Dictionary of Biology(Oxford Paperback Reference)(《生物學詞典（牛津平裝本）》），Martin 和 Hine (編著），Oxford University Press (第4版，2000)。由于這些術語中的一些術語具 體應用于本公開，因此本文提供了對它們的進一步闡明。
[0034] 如本文所用，除非上下文另外明確規(guī)定，否則單數形式"a/an( -和"所述"包 括復數指代對象。因此，例如，提及"a cell (-個細胞）"時，包括多個這樣的細胞，提及"a protein(-種蛋白質）"時，包括一種或多種蛋白質以及本領域技術人員所知的等同物，諸 如此類。
[0035] 真核生物核糖體是80S，由小（40S)亞基和大（60S)亞基組成。它們的40S亞基具 有18S RNA(1900個核苷酸）和約33種蛋白質。大亞基由以下構成：5S RNA(約120個核 苷酸）、28S RNA(約4700個核苷酸）、5. 8S RNA(約160個核苷酸）亞基和約49種蛋白質。 核糖體根據mRNA中編碼的信息合成蛋白質。在此過程中，加進來的氨基酸和新生的肽這兩 者均與tRNA分子結合。核糖體含有三個RNA結合位點，被稱為A、P和E。A位點結合氨酰 tRNA (與氨基酸結合的tRNA) ;P位點結合肽酰tRNA (與正在合成的肽結合的tRNA);并且E 位點結合脫離核糖體前的游離的tRNA。常規(guī)地，蛋白質合成開始于靠近mRNA的5'端的起 始密碼子AUG。mRNA的起始密碼子首先結合核糖體的P位點。
[0036] 核糖體DNA(rDNA)由單位區(qū)段即操縱子的串聯重復序列組成，所述操縱子由以 下構成：非轉錄間隔區(qū)（NTS)、5'端外部轉錄間隔區(qū)（5'端ETS)、18S、內部轉錄間隔區(qū) 1(ITS1)、5. 8S、內部轉錄間隔區(qū)2(ITS2)、28S、以及3'端外部轉錄間隔區(qū)（3'端ETS)序列 元件。rDNA首先被轉錄成多順反子rRNA前體轉錄物。在rRNA成熟期間，ETS和ITS段被切 除并且作為非功能性成熟副產物迅速降解。5'端外部轉錄間隔區(qū)（5'端ETS)對18S rRNA 的形成至關重要并且是高等真核生物的核糖體RNA轉錄物中最長的非編碼區(qū)。
[0037] 短語"所關注的多核苷酸"（或"所關注的基因"或"靶基因"）意在包括編碼多肽 或蛋白產物（"所關注的多肽"或"靶多肽"）的順反子、開放閱讀框（ORF)、或多核苷酸序 列。對于所關注的多肽的增強表達，可將編碼所述多肽的所關注的多核苷酸引入到如本文 所述的帶有修飾的18S rRNA表達系統(tǒng)的宿主細胞中。具體而言，對18S rRNA進行修飾（例 如通過隨機或靶向誘變）以鑒定出引起所關注的多肽的翻譯增強的改變了的18S rRNA。對 于多肽的表達，所關注的多核苷酸通常存在于表達載體中，所述表達載體另外含有可操作 地連接于編碼序列的合適的轉錄調控元件（例如啟動子序列）。根據一些實現方式，多種所 關注的多肽適于用本文所述的方法來增強表達，例如治療性蛋白、營養(yǎng)蛋白和工業(yè)上有用 的蛋白。
[0038] 如本文所用的術語"內源性"指通常存在于野生型宿主中的多核苷酸或多肽，而術 語"外源性"指通常不存在于野生型宿主中的多核苷酸或多肽。
[0039] "宿主細胞"指將要或已經引入有異源多核苷酸序列的活細胞?；罴毎ㄅ囵B(yǎng) 的細胞和活生物體內的細胞這兩者。將異源多核苷酸序列引入到細胞中的方式是公知的， 例如轉染、電穿孔、磷酸鈣沉淀、顯微注射、轉化、病毒感染和/或等。通常，將要被引入到 細胞中的異源多核苷酸序列是可復制的表達載體或克隆載體。在一些實施方案中，可將宿 主細胞工程化以在它的染色體上或它的基因組中并入所需的基因。很多可充當宿主的宿 主細胞（例如CHO細胞）是本領域公知的。參見例如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual (《分子克?。簩嶒炇沂謨浴罚?，Cold Spring Harbor Press (第 3 版，2001);以及 Brent 等，Current Protocols in Molecular Biology (《最新分子生物學 實驗方法匯編》），John Wiley&Sons公司，（ringbou編著，2003)。在一些優(yōu)選的實施方案 中，宿主細胞是哺乳動物細胞。
[0040] 術語"核苷酸序列"、"核酸序列"、"核酸"、或"多核苷酸序列"，指單鏈或雙鏈形式 的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的聚合物，并且除非另有限定，否則其涵蓋以和天然存在 的核苷酸類似的方式與核酸雜交的天然核苷酸的已知類似物。核酸序列可以是例如原核序 列、真核mRNA序列、來自真核mRNA的CDNA序列、來自真核DNA (例如哺乳動物DNA)的基因 組DNA序列、和合成的DNA或RNA序列，但不限于這些。
[0041] 術語"可操作地連接"或"可操作地締合"指以使遺傳元件能夠發(fā)揮它們正常功能 的方式接合的所述遺傳元件之間的功能性連接。舉例來說，當基因的轉錄處于啟動子控制 之下并且產生的轉錄物被正確翻譯成通常由該基因編碼的蛋白質時，該基因與所述啟動子 可操作地連接。類似地，如果翻譯增強子元件允許從所關注的基因轉錄得到的mRNA的翻譯 上調，則該翻譯增強子元件與所述基因可操作地締合。
[0042] 一般而言，篩選是兩步過程，其中首先確定哪些細胞表達或不表達篩選標記物或 帶有功能或表型特性，然后以物理方式分離具有所需特性的細胞。選擇是一種形式的篩選， 其中通過表達選擇標記物、和/或檢測功能/表型特征來同時實現鑒定和物理分離。舉例來 說，在某些遺傳環(huán)境下，選擇允許表達標記物的細胞存活，而其它細胞死亡（或反之亦然）。 如本文所用，篩選和選擇是指產生參考分子（例如18S rDNA)的一種或多種（例如文庫） 候選變體、然后從這些候選變體中鑒定出一種或多種帶有所需結構或功能（例如增強的翻 譯效率）的特定變體的過程。
[0043] "基本上相同的"核酸或氨基酸序列指可包括如下序列的多核苷酸或氨基酸序列， 所述序列如通過本文所述的公知程序之一（例如BLAST)使用標準參數所測量與參考序列 具有至少75 %、80 %或90 %的序列同一性。序列同一性優(yōu)選至少95 %，更優(yōu)選至少98 %，并 且最優(yōu)選至少99 %。在一些實施方案中，目標序列與參考序列相比具有大約相同的長度，即 由大約相同數目的連續(xù)氨基酸殘基（對于多肽序列）或核苷酸殘基（對于多核苷酸序列） 組成。
[0044] 可以容易地用本領域已知的多種方法來確定序列同一性。舉例來說，BLASTN程序 (對于核苷酸序列）使用11的字長（W)、10的期望值（E)、M = 5、N = -4作為默認值并且 對兩條鏈進行比較。對于氨基酸序列，BLASTP程序使用3的字長（W)、10的期望值（E)作 為默認值并且使用BLOSUM62評分矩陣（參見Henikoff和Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915(1989))。通過在比較窗口上比較兩個最佳比對的序列來確定序列同一性百 分比，其中多核苷酸序列處于比較窗口中的部分與參考序列（不包括添加或者缺失）相比 可包括添加或者缺失（即空位）以將這兩個序列進行最佳比對。通過以下方式計算百分比： 確定在兩個序列中存在相同的核酸堿基或氨基酸殘基的位置數目以得到匹配位置的數目， 用匹配位置的數目除以比較窗口中位置的總數，再將該結果乘以100來得到序列同一性百 分比。
[0045] 當外源性或異源多核苷酸已被引入到細胞內時，該細胞被所述多核苷酸"轉化"或 "轉染"。轉化多核苷酸可以整合或不整合（共價連接）到細胞的基因組中。例如在原核生 物、酵母和哺乳動物的細胞中，轉化多核苷酸可保持在附加型（episomal)元件如質粒上。 對于真核細胞，穩(wěn)定轉化的細胞是其中轉化多核苷酸已整合到染色體中、從而它通過染色 體復制而遺傳給子細胞的細胞。這種穩(wěn)定性表現在真核細胞建立具有含轉化多核苷酸的子 細胞群體的細胞系或克隆的能力上。"克隆"是通過有絲分裂由單個細胞或共同的祖先衍生 的細胞群體。"細胞系"是原代細胞能夠在體外穩(wěn)定地生長許多代的克隆。
[0046] 術語"載體"或"構建體"指下述的多核苷酸序列元件，這些多核苷酸序列元件以 確定的組織模式排列從而與這些元件可操作地連接的基因/基因產物的表達能夠被可預 見地控制。通常，它們是可轉移的多核苷酸序列（例如質?；虿《荆?，可將外來多核苷酸序 列的區(qū)段剪接到其中以將該外來DNA引入到宿主細胞中以促進其復制和/或轉錄。
[0047] 克隆載體是能夠在宿主細胞中自主復制并且特征在于具有一個或較少數目限制 性內切酶識別位點的多核苷酸序列（通常是質粒或噬菌體）。可將外來多核苷酸序列片段 剪接到載體中的這些位點以實現該片段的復制和克隆。載體可含有一個或多個適用于鑒定 轉化的細胞的標記物。舉例來說，標記物可提供四環(huán)素（tetracycline)抗性或氨芐青霉素 (ampicillin)抗性。
[0048] 表達載體類似于克隆載體，但是能夠在轉化到宿主中之后誘導已被克隆到該載體 中的多核苷酸序列表達?？寺〉亩嗪塑账嵝蛄型ǔＬ幱谀承┱{控序列（如啟動子或增強 子）的控制之下（即可操作地連接）。啟動子序列可以是組成型、誘導型或阻抑型。
[0049] III.用于表汰哺乳動物18SrRNA的核糖體多核苷酸
[0050] 本文提供了用于研宄哺乳動物18S rRNA表達和相關核糖體活性的合成的（分離 的或修飾的）核糖體多核苷酸或核酸分子。本文描述的核糖體多核苷酸涵蓋了本文所述的 rDNA和rRNA核苷酸序列，以及它們的組合或基本上相同的變體。在一些實施方案中，所述 多核苷酸編碼（對于DNA序列）或包括（對于RNA序列）全長或一部分的哺乳動物（例如 小鼠或人）18S rRNA核苷酸序列，或與其基本上相同的變體。在一些實施方案中，所述多核 苷酸編碼或包括全長或一部分的具有本文所述的一個或多個特定替代的SEQ ID NO: 23,或 與其基本上相同的變體。在這些實施方案中的一些實施方案中，合成的多核苷酸可包括全 長18S rDNA或rRNA序列的片段并且?guī)в幸粋€或多個特定的替代。因此，本文所述的核糖 體多核苷酸可包括哺乳動物（例如小鼠或人）rRNA核苷酸序列、rDNA核苷酸序列、或rRNA 前體核苷酸序列、它們的片段、或與前述序列基本上相同的變體。
[0051] 在一個方面，提供了分離的或合成的核糖體多核苷酸，所述多核苷