miR-30家族分子在精神分裂癥診斷及治療中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學材料技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種rniR-30家族分子及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 微小RNA(microRNA，miRNA)是一類發(fā)揮重要轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用的非編碼小RNA，根 據(jù)信息學分析，整個人類基因轉(zhuǎn)錄組中1/3-2/3的mRNA受miRNAs調(diào)控。近年不斷積累的證 據(jù)顯示miRNAs不僅與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育有關(guān)，而且miRNAs也參與了多種神經(jīng)精神疾病的發(fā) 病過程。例如：SLITRK1基因:V-非翻譯區(qū)（3'untranslatedregions，3'UTR) -個單核 苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP)與人類Tourette's綜合征和兒童注 意缺陷多動障礙相關(guān)聯(lián)，該SNP正好位于miR-189的結(jié)合部位上，該變異增強了miR-189對 SLITRK1基因調(diào)控作用。FGF20基因3'UTR區(qū)的rsl2720208與帕金森病關(guān)聯(lián)，rsl2720208 則通過影響miR-433而增加FGF20基因的轉(zhuǎn)錄水平。近年研究表明miRNAs與精神分裂癥 發(fā)生也相關(guān)，然而其機制遠未闡明。因此，面對精神分裂癥病因和病理機制研究困境，從基 因調(diào)控障礙新視角出發(fā)，圍繞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)miRNAs這一重要環(huán)節(jié)，利用分子、細胞、動物整 體以及臨床追蹤的多水平研究設(shè)計，全面開展精神分裂癥miRNAs調(diào)控紊亂的機制研究，將 開啟精神分裂癥研究的新領(lǐng)域，以期部分闡明精神分裂癥的發(fā)病機制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明旨在提供一種miR-30家族分子及其在精神分裂癥的診斷和治療方面的應(yīng) 用。
[0004] 實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下：
[0005] 本發(fā)明提供了miRNA30家族，其特征在于，包括miR-30a、miR-30b、 miR-30cmiR-30d、和miR_30e。
[0006] 上述的miR-30家族分子在精神分裂癥診斷方面的應(yīng)用。
[0007] 上述的miR-30家族分子在治療精神分裂癥方面的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明通過⑴遺傳驗證：對文獻報道精神分裂癥相關(guān)所有的miRNAs，使 用病例-對照樣本開展遺傳變異篩查，我們首次發(fā)現(xiàn)miR-30e前體上的一個新SNP ssl78077483,并證明了這個SNP與精神分裂癥陽性關(guān)聯(lián)；（2)隨后對于miR-30e所屬的 miR-30家族我們進行了進一步的臨床驗證：使用Real-time技術(shù)檢測了精神分裂癥患者外 周血白細胞的miR-30家族分子的表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-30e在精神分裂癥患者與對照人 群存在明顯差異；（3)另外在抗精神病治療前后的研究中我們亦發(fā)現(xiàn)miR-30e的表達水平 無論是在病例對照研究還是急性期治療前后均有隨疾病狀態(tài)變化的趨勢。綜上，可以推測 miR-30e不僅是精神分裂癥發(fā)病的關(guān)鍵miRNA之一，而且與抗精神病治療療效存在相關(guān)。
[0009] 本發(fā)明通過一系列實驗證明了miR-30e是精神分裂癥發(fā)明的關(guān)鍵基因，并將 miR-30e在精神分裂癥的診斷和治療方面進行了應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0010] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步 詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0011] 本具體實施研究篩選收集了 36例首發(fā)未經(jīng)治療（符合DSM-IV精神分裂癥診斷標 準，且PANSS評分> 70分）的精神分裂癥患者及50例正常對照，同時對其中30例患者完成 了 12周的抗精神病急性期治療（分別使用利培酮、奧氮平、奎硫平治療）的跟蹤隨訪。采 集血樣的同時收集其一般人口學資料，并使用PANSS評定精神病性癥狀。通過實時熒光定 量PCR的方法，在基線的病例對照樣本及治療12周前后的病例樣本的外周血中對miR-30 家族（miR-30a、miR-30b、miR-30c、miR-30d和miR_30e)的表達水平進行了相關(guān)研究。結(jié) 果：研究顯示在miR-30家族中只有miR-30a和miR-30e的表達水平無論是在病例對照研究 還是急性期治療前后均有隨疾病狀態(tài)變化的趨勢。
[0012] 實施例
[0013] 本實施例樣本來源：
[0014] 包括漢族精神分裂癥患者和漢族正常對照兩組人群，全部樣本來自合作單位山西 醫(yī)科大學第一醫(yī)院精神衛(wèi)生科2005年1月-2008年6月期間的門診和住院患者。
[0015] 其中，精神分裂癥組，所有病例均經(jīng)過2名副主任醫(yī)師一致診斷，以美國《精神疾 病診斷與統(tǒng)計手冊》（第四版）為診斷標準，以中文版《DSM-IV-TR軸I障礙用臨床定式檢 查》為篩查工具，選擇符合精神分裂癥診斷標準的門診和住院患者。
[0016] 納入標準為：年齡在18?45歲之間；患者本人及家屬均對本研究內(nèi)容知情和愿 意參加本研究；陽性陰性癥狀量表（positiveandnegativesymptomsscale，PANSS)彡50 分入組。
[0017] 排除標準：患有其它神經(jīng)精神疾??；患有嚴重軀體疾病或顱腦外傷者；入組前4周 服用任何抗精神病藥、抗躁狂藥、抗抑郁藥、心境穩(wěn)定劑或進行電休克治療者；懷孕女性患 者；嚴重的興奮、沖動不合作的患者。
[0018] 正常對照組：來自山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院的工作人員及健康獻血者，也采取相應(yīng) 的納入和排除標準。
[0019] 納入標準：年齡、性別、種族和受教育程度與患者組匹配；無重大軀體疾病、顱腦 損傷、神經(jīng)與精神疾病；知情同意參加本研究，并同意采集靜脈血；采血前1個月內(nèi)未患任 何疾病或服用任何藥物；采血前3日內(nèi)未吸煙、飲酒、熬夜、服用刺激性食物等。
[0020] 排除標準：精神疾病病人；有明確神經(jīng)或精神疾病家族史；有強烈自殺意念或自 殺未遂史者；嚴重頭部外傷；嬰幼兒或童年期出現(xiàn)過高熱驚厥的。
[0021] 遺傳學樣本
[0022] (1)基礎(chǔ)樣本：病例對照設(shè)計，包括141例精神分裂癥和139例對照。
[0023] (2)擴大樣本：病例對照設(shè)計，包括456例精神分裂癥和453例對照。
[0024] miRNA表達分析樣本
[0025] 病例對照設(shè)計，包括43例首發(fā)未用藥的精神分裂癥患者和40例對照。
[0026] 外周血DNA提取
[0027] 取受試靜脈血5ml，以0. 5mol/LEDTA抗凝，采用酚/氯仿常規(guī)方法提取外周血白 細胞中的DNA。
[0028] 一、前期候選遺傳因子的選擇
[0029] miRNA的選擇，選擇8個精神分裂癥相關(guān)miRNAs，其中：（1)差異表達miRNAs， 共 6 個，包括miR-26b，miR-30b，miR-30e，miR-92(92a-l，92a-2)，miR-24(24-l，24-2)和 miR-181b(181b-l，181b-2)，來源于精神分裂癥病人尸腦組織差異表達miRNAs(經(jīng)qRT-PCR 驗證，P< 0. 05)。
[0030] miRNA的相關(guān)靶位點選擇
[0031] 通過Tarbasedatabase(version5. 0)數(shù)據(jù)庫檢索我們選擇了 15個經(jīng)功能實驗 驗證的靶標結(jié)合位點（表2. 1)。
[0032] 表2. 1本研究miRNAs的經(jīng)實驗驗證的祀標結(jié)合位點（數(shù)據(jù)來源TarbaseV5. 0a)
[0033]
【主權(quán)項】
1. miRNA30 家族，其特征在于，包括 miR-30a、miR-30b、miR-30c miR-30d、和 miR-30e。
2. 如權(quán)利要求1所述的miR-30家族分子在精神分裂癥診斷方面的應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求1所述的miR-30家族分子在治療精神分裂癥方面的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種miR-30家族分子及其應(yīng)用，本發(fā)明通過一系列實驗證明了miR-30e是精神分裂癥發(fā)病的易感基因，并將miR-30e在精神分裂癥治療方面進行了應(yīng)用。
【IPC分類】C12N15-113, C12Q1-68, A61K48-00, A61P25-18
【公開號】CN104531703
【申請?zhí)枴緾N201410747278
【發(fā)明人】徐勇, 張克讓, 劉破資, 劉莎
【申請人】山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月1日