專利名稱:嗜硒zm短桿菌及其在生物紅硒制備方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物制藥領(lǐng)域，特別涉及一種嗜硒ZM短桿菌及其在生物紅硒制備方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
硒元素是瑞典化學(xué)家Bezeliu1817年發(fā)現(xiàn)并予以命名。1957年Schwarz和Foltz首先證明硒是動(dòng)物和人體必需微量元素。80年代我國(guó)醫(yī)學(xué)家最早應(yīng)用補(bǔ)硒防治克山病，大骨節(jié)病取得舉世矚目的成果。大量的工作證實(shí)硒具有廣泛生物學(xué)作用，缺硒會(huì)引起一系列疾病癌癥、艾滋病、心血管疾病、肝臟和胰臟疾病、高血壓、糖尿病、貧血、克山病等。
硒所呈現(xiàn)出的一系列生化效應(yīng)與其濃度密切相關(guān)，在硒的抗癌作用中需要較高濃度，硒化物毒性使得有效作用濃度范圍極窄。從而使硒的利用受到較大局限，致力開發(fā)高效、低毒的硒源是研究的一個(gè)課題。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種嗜硒ZM短桿菌，并利用其制備生物紅硒的工藝路線，所得目標(biāo)產(chǎn)物具有很高藥理活性，又不具有硒的毒性，能治療多種疾病，安全有效。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的嗜硒ZM短桿菌保藏名稱為生孢噬纖維細(xì)菌(Sporocytophaga sp.)，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2006年04月21日，保藏號(hào)CGMCC1694。
本發(fā)明所述嗜硒ZM短桿菌，菌體長(zhǎng)1～2μm，運(yùn)動(dòng)方式滑動(dòng)，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對(duì)抗菌素敏感性差別很大。
針對(duì)上述嗜硒ZM短桿菌，本發(fā)明還提供了一種其在生物紅硒制備方面的應(yīng)用，具體步驟可按如下順序依次進(jìn)行(A)菌液制備將嗜硒ZM短桿菌接種于1.5％蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，備用；(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進(jìn)行1)于1～5％蛋白胨液體培養(yǎng)基50ml～1000ml中，分別加入上述菌液、4～5％的亞硒酸鈉溶液1ml～10ml，在24℃～40℃環(huán)境下培養(yǎng)，發(fā)酵液由淺黃色變?yōu)榧t色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動(dòng)；2)經(jīng)濃縮處理可得到以Na2SeO35H2O計(jì)20～50mg/ml的紅色菌硒。
作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明所述A項(xiàng)菌液制備中蛋白胨液體培養(yǎng)基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
生物硒作為主藥用于抗癌的劑量，具有很高的藥理活性，而不具有硒的毒性。該藥在配以某些生命成分調(diào)整多種酶活性，改變肌體內(nèi)環(huán)境，用生物化學(xué)或植物化學(xué)方法制成復(fù)方制劑，口服給藥，用于多種癌癥治療，并將在預(yù)防及保健事業(yè)發(fā)揮重要作用。該藥可顯著提高肌體免疫力，增強(qiáng)食欲，改善睡眠，增強(qiáng)體力，調(diào)節(jié)精神，消除抑郁，提高生活質(zhì)量。對(duì)癌細(xì)胞作用逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，阻斷復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，加速其凋亡。
美國(guó)科學(xué)院FNB提出成人硒的需要量為50～200μg/d，硒攝入量超過(guò)0.1.～0.2mg/kg/d始有中毒現(xiàn)象。硒抗癌作用需要較高硒濃度，才能充分發(fā)揮療效。市售硒制劑用于癌癥預(yù)防和治療劑量(以Se計(jì))硒酵母片 200μg/d，900～1200μg/d(0.9～1.2mg/d)硒卡拉膠 4000μg/d(4mg/d)生物紅硒 2000～2500μg/d(2～2.5mg/d)為此通過(guò)自然選擇得到嗜硒ZM菌用以制造生物紅硒，時(shí)間證明安全有效。以生物紅硒作為主藥之一的復(fù)方抗癌制劑，硒用量2～3mg/d，未見有毒副作用、不良反應(yīng)。
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅限于下列表述。
圖1為本發(fā)明生物紅硒紅外光譜圖。
具體實(shí)施方式在哺乳動(dòng)物體內(nèi)硒功能主要是通過(guò)各種硒酶和硒蛋白(Selenoproteins)實(shí)現(xiàn)。體內(nèi)的硒主要以硒代半胱氨酸(Se-Cys)與蛋白組成。金屬硫蛋白的排列CYS-X-CYS，半胱氨酸-其他氨基酸-半胱氨酸，令人驚奇的是半胱氨酸的位置以及近旁的絲氨酸和堿性氨基酸位置，從微生物到人的進(jìn)化過(guò)程中全無(wú)改變的保存了下來(lái)。這種相似性提示由微生物產(chǎn)出菌硒的生物利用度和安全性，要優(yōu)于其他人工合成的硒化合物。
通過(guò)大量自然選擇及純培養(yǎng)，分離得到可以利用化學(xué)能的ZM短桿菌，對(duì)硒元素具有特殊選擇吸收、利用能力，稱為嗜硒的ZM短桿菌。對(duì)硒承受力為耐受硒量較大的酵母菌的兩千倍以上。
嗜硒的ZM短桿菌，菌體長(zhǎng)1～2μm，運(yùn)動(dòng)方式滑動(dòng)，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對(duì)抗菌素敏感性差別很大，無(wú)抑菌作用，能分解瓊脂及利用纖維素。吸收硒后菌體變紅、縮小。
實(shí)施例1一種嗜硒ZM短桿菌，該嗜硒ZM短桿菌為噬纖維菌屬(Cytophaga)的短桿菌，保藏菌名稱為生孢噬纖維細(xì)菌(Sporocytophaga sp.)，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2006年04月21日，保藏號(hào)CGMCC1694。所述嗜硒ZM短桿菌，菌體長(zhǎng)1～2μm，運(yùn)動(dòng)方式滑動(dòng)，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對(duì)抗菌素敏感性差別很大。
利用載體攜帶目的基因，靶向高效表達(dá)是基因治療成功的關(guān)鍵。篩選出對(duì)人體無(wú)毒副作用、與硒具有高度親和力，能利用化學(xué)能的菌種作為載體，硒結(jié)合到菌體上形成硒蛋白，并在靶器官腫瘤細(xì)胞表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤組織的特異性殺傷。
本發(fā)明經(jīng)大量篩選工作，得到嗜硒ZM短桿菌，菌體無(wú)色，菌體長(zhǎng)1～2μm，寬0.4～0.6μm，運(yùn)動(dòng)方式靈活，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，耐干燥，對(duì)抗菌素敏感性差別很大，無(wú)抑菌作用。
上述的嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應(yīng)用，可按如下順序依次進(jìn)行(A)菌液制備將嗜硒ZM菌接種于1.5％蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，備用。
(B)硒的制備按下列順序依次進(jìn)行1)于1％蛋白胨液體培養(yǎng)基50ml中，分別加入上述菌液、4％的亞硒酸鈉溶液1ml，在24℃環(huán)境下培養(yǎng)，發(fā)酵液由淺黃色變?yōu)榧t色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動(dòng)；2)經(jīng)濃縮處理可得到20mg/ml(以Na2SeO3 5H2O計(jì))的紅色菌硒。每個(gè)菌體都像一個(gè)盛硒的袋子，內(nèi)里裝著紅色生物硒，為此也稱為生物紅硒，產(chǎn)量極高，十分罕見。
嗜硒ZM菌可在硒濃度為2％～4％的培養(yǎng)基中繁殖發(fā)酵，由于發(fā)酵液濃度高，一般微生物無(wú)法生存，因此制備過(guò)程中不會(huì)染雜菌。
上述A項(xiàng)菌液制備中蛋白胨液體培養(yǎng)基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
實(shí)施例2如實(shí)施例1所述嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應(yīng)用，可按如下順序依次進(jìn)行(A)菌液制備將嗜硒ZM菌接種于1.5％蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，備用。
(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進(jìn)行1)于1～2％蛋白胨液體培養(yǎng)基1000ml中，分別加入上述菌液、5％的亞硒酸鈉溶液10ml，在40℃環(huán)境下培養(yǎng)，發(fā)酵液由淺黃色變?yōu)榧t色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動(dòng)；2)經(jīng)濃縮處理可得到50mg/ml(以Na2SeO35H2O計(jì))的紅色菌硒。
上述A項(xiàng)菌液制備中蛋白胨液體培養(yǎng)基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
以生物硒作為主藥制成的復(fù)方制劑(長(zhǎng)壽飲)治療腫瘤的療效1)單獨(dú)使用手術(shù)患者(包括淋巴轉(zhuǎn)移1/2)，如及時(shí)給藥(手術(shù)后一、二月內(nèi))可阻斷轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，可達(dá)痊愈(五年以上生存)。無(wú)手術(shù)機(jī)會(huì)晚期患者，用藥2～3月，可見腫瘤不同程度穩(wěn)定、縮小、消失。帶瘤生存或部分治愈(三年以上生存者不鮮見)。
2)聯(lián)合用藥與放化療聯(lián)合使用，可減輕對(duì)骨髓粒系的毒性反應(yīng)，腎毒性，胃腸反應(yīng)等，增加肌體對(duì)放化療的耐受性，提高療效。
本品為廣譜抗癌藥，未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)和耐藥性選擇嗜硒ZM菌經(jīng)生物發(fā)酵制得產(chǎn)量高、毒性低、療效好的生物紅硒，是一種理想的硒源，可制成原料藥，亦可制成單方或復(fù)方制劑，治療多種疾病。
作為原料藥硒對(duì)人體健康有著重要作用，長(zhǎng)壽老人血硒比正常高出3倍，硒與癌癥、艾滋病等40多種疾病有關(guān)，且有良好預(yù)防和治療作用，生物硒可作為單味藥使用或作為原料藥開發(fā)。
作為復(fù)方制劑以生物紅硒作為主藥，配以某些生命成分調(diào)整多種酶系統(tǒng)，改變肌體內(nèi)環(huán)境，用生物化學(xué)或植物化學(xué)方法制成復(fù)方制劑(口服給藥)，用于多種癌癥(廣譜)治療，收到理想療效，未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)和耐藥性。
對(duì)癌癥治療可顯著提高肌體免疫力，縮小腫塊，消除抑郁調(diào)節(jié)精神，明顯緩解晚期癌癥病人劇痛。對(duì)癌細(xì)胞作用逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞為正常細(xì)胞，阻斷復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，加速其凋亡。
推測(cè)生物紅硒類藥物對(duì)艾滋病、自身免疫系統(tǒng)疾病也會(huì)有很好的療效。
權(quán)利要求
1.一種嗜硒ZM短桿菌，其特征在于該嗜硒ZM短桿菌保藏名稱為生孢噬纖維細(xì)菌(Sporocytophaga sp.)，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2006年04月21日，保藏號(hào)CGMCC1694。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的嗜硒ZM短桿菌，其特征在于所述嗜硒ZM短桿菌，菌體長(zhǎng)1～2μm，運(yùn)動(dòng)方式滑動(dòng)，菌落平薄有光澤，邊緣不整齊，半透明，格蘭氏染色陰性，對(duì)抗菌素敏感性差別很大，無(wú)抑菌作用。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應(yīng)用，其特征在于按如下順序依次進(jìn)行(A)菌液制備將嗜硒ZM短桿菌接種于1.5％蛋白胨液體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，備用；(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進(jìn)行1)于1～5％蛋白胨液體培養(yǎng)基50ml～1000ml中，分別加入上述菌液、4～5％的亞硒酸鈉溶液1ml～10ml，在24℃～40℃環(huán)境下培養(yǎng)，發(fā)酵液由淺黃色變?yōu)榧t色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動(dòng)；2)經(jīng)濃縮處理可得到以Na2SeO35H2O計(jì)20～50mg/ml的紅色菌硒。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的嗜硒ZM短桿菌在生物紅硒制備方面的應(yīng)用，其特征在于所述A項(xiàng)菌液制備中蛋白胨液體培養(yǎng)基中含有0.1％磷酸氫二鉀K2HPO43H2O。
專利摘要
本發(fā)明公開一種嗜硒ZM短桿菌及其在制備生物紅硒方面的應(yīng)用，該嗜硒ZM短桿菌保藏名稱為生孢噬纖維細(xì)菌(Sporocytophagasp.)，保藏日期2006年04月21日，保藏號(hào)CGMCC1694。上述短桿菌在制備生物紅硒時(shí)，可采用下列步驟(A)菌液制備將嗜硒ZM菌接種于培養(yǎng)基中，備用。(B)生物紅硒的制備按下列順序依次進(jìn)行1)于培養(yǎng)基中，分別加入上述菌液、亞硒酸鈉溶液進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)酵液由淺黃色變?yōu)榧t色，顯微鏡下可見紅色ZM菌滑動(dòng)；2)經(jīng)濃縮處理可得到紅色菌硒。本發(fā)明所得目標(biāo)產(chǎn)物無(wú)毒，具有很高藥理活性，能治療多種疾病。它必將有效地參與癌癥，艾滋病等重大疾患的攻克，并發(fā)揮其巨大威力。
文檔編號(hào)C12P1/04GK1995328SQ200610087448
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年6月12日
發(fā)明者張敏, 劉曉濤 申請(qǐng)人:張敏導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan