專利名稱:一種制備高純度紅景天苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種從植物紅景天中分離高純度紅景天苷的方法。
背景技術(shù)：
紅景天(Rhodila)為多年生草本植物，具有抗衰老、抗缺氧、抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)等作用，，在軍事醫(yī)學(xué)、航天醫(yī)學(xué)、運動醫(yī)學(xué)和保健醫(yī)學(xué)等方面具有十分重要的意義。紅景天中主要成分為苷類、黃酮類、香豆素類、氨基酸類、鞣質(zhì)和揮發(fā)油等。其中主要成分紅景天苷(Salidroside)常作為質(zhì)量控制指標(biāo)，具有抗氧化、抗輻射、抗缺氧、抗疲勞等作用。目前制備紅景天苷的主要方法有化學(xué)合成方法，和從紅景天屬植物中提取的方法。目前有報道的從紅景天中分離高純度紅景天苷的方法其純化的關(guān)鍵步驟均采用了正相硅膠柱制備色譜(葛永潮等，紅景天甙的制備工藝改進，中國藥物化學(xué)雜志，1994，4(3)196；咸漠等，紅景天甙的分離提純方法，吉林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，1998，(3)107；李靜等，制備紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品的新方法，大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報，2002，19(3)189；邰韌輝，高純度紅景天苷的制備工藝研究，現(xiàn)代中藥研究與實踐，2004，18(4)58；張杰克等，紅景天甙的提取工藝，中國專利01128982.1)、高速逆流色譜技術(shù)(韓笑等，高純度紅景天甙的制備方法，中國專利02100489.7)、以及反相高效液相色譜(丁朝武等，紅景天甙和紅景天甙元標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法研究，分析測試學(xué)報，1997，16(1)38)。上述研究中，無論是采用正相硅膠柱制備色譜還是高速逆流色譜技術(shù)，均存在如下缺陷使用了大量低極性的有機溶劑，毒性較大，特別是正相硅膠柱制備色譜，所用的硅膠填料，使用后往往不回收而被廢棄，造成環(huán)境的污染，而且，采用高效液相色譜需要價格昂貴的儀器，且制備的量受限制，一般只能達到毫克級的分離。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是為了克服上述已有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種有利于環(huán)保的可大規(guī)模制備高純度紅景天苷的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是以紅景天屬植物為原料，經(jīng)粉碎后，采用熱水或含不高于50％的甲醇或乙醇水溶液進行提??；所得提取物經(jīng)濃縮、乙醇沉淀后，經(jīng)高分子填料固定相的色譜柱，采用不高于10％的甲醇或乙醇水溶液進行洗脫；分離的產(chǎn)物經(jīng)含鍵合相硅膠填料固定相的色譜柱進行分離，得高純度的紅景天苷。
本發(fā)明的技術(shù)方案通過下述步驟實現(xiàn)(1).以紅景天屬植物為原料，粉碎至10目以下，加入2～10倍的水進行煎煮2～3次，每次時間為1～2小時，合并水溶液，于減壓下濃縮至1/10～1/20體積，得到含紅景天苷的水提物。
(2).在攪拌的情況下，緩慢加入95％的乙醇，至溶液的乙醇濃度達75％，過濾，濾液濃縮至1/5～1/10體積，重復(fù)上述步驟2～3次，減壓下濃縮，除去乙醇，得到富含紅景天苷而不含或僅含少量大分子水溶性成分的濃縮物。
(3).濃縮物用少量水溶解，注入填充有高分子填料固定相的色譜柱內(nèi)，用3～5倍量的水進行洗脫，除去水溶性的碳水化合物，然后改用3～5倍量、含乙醇或甲醇的濃度為5％的水溶液進行洗脫，再用2～4倍量、含乙醇或甲醇的濃度為10％的水溶液進行洗脫，用HPLC進行檢測，合并含紅景天苷的組分，減壓濃縮，得紅景天苷含量在30～70％的提取物。
(4)上述含量在30～70％的紅景天苷提取物用少量水溶解，注入填充有鍵合相硅膠填料固定相的色譜柱內(nèi)，用3～5倍量的水進行洗脫，除去其它水溶性成分，然后改用3～5倍量、含乙醇或甲醇的濃度為5％的水溶液進行洗脫，用HPLC檢測，合并含紅景天苷的部分，減壓濃縮，除去甲醇或乙醇后，冷凍干燥，得到含量高于98％的紅景天苷。
所述的高分子填料固定相選自多空型苯乙烯二乙烯基苯聚合物或多空型交聯(lián)聚丙烯酸酯共聚物或多空型交聯(lián)甲基丙烯酸酯共聚物或離子交換樹脂，粒徑為30～200微米，比表面積為50～900m2/g，孔度為30～70％。
所述的鍵合相硅膠填料固定相為鍵合了C-18、C-8、苯基或腈基的反相硅膠，粒徑為10～100微米，孔徑為60～120。
本發(fā)明的提取方法為用水、以及水和其它親水有機溶劑，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮、丙二醇、丙三醇或甲基甲酰胺等，提取時采用滲漉或加熱回流，提取后的溶液，經(jīng)過濾、濃縮致小體積后，用高濃度乙醇進行沉淀，過濾后的溶液用高分子吸附材料進行初步分離；所述的高分子材料包括但不限于大孔吸附樹脂、陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂、聚酰胺、聚丙或葡聚糖凝膠，首選為大孔吸附樹脂；用于大孔吸附樹脂洗脫的溶液為水、以及水和其它親水有機溶劑，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮等按不同比例混合的溶劑，按親水溶劑的比例不斷增加的秩序進行洗脫，首選為乙醇；洗脫溶液中乙醇的含量為0～20％，并按0％、5％、10％的次序進行洗脫，洗脫下來的流份用薄層色譜(TLC)或高效液相色譜(HPLC)技術(shù)進行檢測，收集含紅景天苷部分，經(jīng)濃縮，除去親水有機溶劑后，用反相色譜材料進行分離；所述的反相色譜材料包括但不限于烷基硅烷鍵合硅膠，如十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)、辛基硅烷鍵合硅膠C8、苯基硅烷鍵合硅膠、氰基硅烷鍵合硅膠等，首選為十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)；用于反相色譜洗脫的溶液為水、以及水和其它親水有機溶劑，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮等按不同比例混合的溶劑，按親水溶劑的比例不斷增加的秩序進行洗脫，洗脫下來的流份用薄層色譜(TLC)或高效液相色譜(HPLC)技術(shù)進行檢測，收集含紅景天苷部分；收集得到的含紅景天苷的溶液，可用以下方法除去溶劑(1)直接采用噴霧干燥技術(shù)，得到含量大于95％的高純度的紅景天苷，(2)紅景天苷的溶液經(jīng)濃縮、除去親水有機溶劑后，采用冷凍干燥方法除去水，得到含量大于95％的高純度的紅景天苷。
本發(fā)明與已有技術(shù)比較具有如下優(yōu)點及效果(a).制備的紅景天苷的規(guī)模大、收率高、純度高，(b).所采用的高分子填料固定相和鍵合相硅膠填料固定相可反復(fù)使用，(c).用于洗脫的有機相僅為甲醇或乙醇，不含其它易揮發(fā)、毒性大、對環(huán)境有嚴(yán)重污染低極性的有機溶劑，(d).有機相的比例不高于10％，回收后，經(jīng)調(diào)整比例，可重復(fù)利用，(e).能同時得到紅景天植物中的其它成分。
具體實施方式實施例1
取紅景天屬植物為原料，粉碎至10目以下，加入2倍的水進行煎煮2次，每次時間為1小時，合并水溶液，于減壓下濃縮至1/10體積，得含紅景天苷的水提物。
取上述200克紅景天水提物，用少量水溶解后，加入95％乙醇至多糖沉淀完全，過濾，溶液濃縮至無醇味，上大孔吸附樹脂，用水洗脫，約4～5倍柱體積，然后改用5％乙醇水溶液進行洗脫，收集該濃度的流分，減壓濃縮至無醇味，上反相C18硅膠柱，先用水洗脫，然后改用10％醇洗脫，用HPLC檢測，收集含紅景天苷的部位，減壓濃縮除去甲醇后，冷凍干燥，得白色紅景天苷固體，經(jīng)HPLC測定，含量為98.7％。
實施例2取紅景天屬植物為原料，粉碎至10目以下，加入10倍的水進行煎煮3次，每次時間為2小時，合并水溶液，于減壓下濃縮至1/20體積，得含紅景天苷的水提物。
取上述200克紅景天水提物，用少量水溶解后，加入95％乙醇至多糖沉淀完全，過濾，溶液濃縮至無醇味，再用氯仿萃取3次，水層減壓除去氯仿后，上大孔吸附樹脂，用水洗脫，約4～5倍柱體積，然后改用10％甲醇水溶液進行洗脫，收集該濃度的流分，減壓濃縮除去甲醇，上反相C8硅膠柱，先用水洗脫，然后改用5％的乙醇洗脫，用HPLC檢測，收集含紅景天苷的部位，減壓濃縮除去乙醇后，冷凍干燥，得白色紅景天苷固體，經(jīng)HPLC測定，含量為99.2％。
權(quán)利要求
1.一種制備高純度紅景天苷的方法，其特征是通過下述步驟(1)以紅景天屬植物為原料，粉碎后，采用熱水或含不高于50％的甲醇或乙醇水溶液進行提??；(2)所得提取物經(jīng)濃縮、乙醇沉淀后，經(jīng)高分子填料固定相的色譜柱，采用不高于10％的甲醇或乙醇水溶液進行洗脫；(3)分離的產(chǎn)物經(jīng)含鍵合相硅膠填料固定相的色譜柱進行分離，得高純度的紅景天苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的制備高純度紅景天苷的方法，其特征是所述的填料固定相的色譜柱其中高分子材料選自大孔吸附樹脂、陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂、聚酰胺、聚丙、葡聚糖凝膠。
3.根據(jù)權(quán)利要求
3的制備高純度紅景天苷的方法，其特征是所述的填料固定相的色譜柱其中高分子材料為大孔吸附樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的制備高純度紅景天苷的方法，其特征是所述的步驟2的洗脫溶液中乙醇的含量為0～20％，按0％、5％、10％的次序進行洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的制備高純度紅景天苷的方法，其特征是所述的步驟3的含鍵合相硅膠填料固定相的色譜柱其中反相色譜材料包括但不限于烷基硅烷鍵合硅膠，選自十八烷基硅烷鍵合硅膠C18、辛基硅烷鍵合硅膠C8、苯基硅烷鍵合硅膠或氰基硅烷鍵合硅膠。
6.根據(jù)權(quán)利要求
5的方法，其中所述的反相色譜材料是十八烷基硅烷鍵合硅膠C18。
專利摘要
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種從植物紅景天中分離高純度紅景天苷的方法。本發(fā)明采用熱水或含不高于50％的甲醇或乙醇水溶液提取原料；所得提取物經(jīng)濃縮、乙醇沉淀后，經(jīng)高分子填料固定相的色譜柱，采用不高于10％的甲醇或乙醇水溶液進行洗脫；分離的產(chǎn)物經(jīng)含鍵合相硅膠填料固定相的色譜柱進行分離，得高純度的紅景天苷。本方法制備的產(chǎn)物規(guī)模大、收率高、純度高，所采用的高分子填料固定相和鍵合相硅膠填料固定相可反復(fù)使用，用于洗脫的有機相不含易揮發(fā)、毒性大、對環(huán)境有嚴(yán)重污染低極性的有機溶劑，有機相回收后，可重復(fù)利用。
文檔編號C07H1/00GK1990496SQ200510112432
公開日2007年7月4日 申請日期2005年12月29日
發(fā)明者俞培忠, 丁溪影, 劉珊林 申請人:復(fù)旦大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan