專利名稱：薔薇紅景天總苷及其醫(yī)藥用途和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從薔薇紅景天(Rhodiola Rosea L.)中分離的具有醫(yī)藥用途的總苷提取物，其特征為含有黃酮苷類、苯乙醇苷類、苯丙烯醇苷類和總萜苷類化合物。
背景技術(shù)：
紅景天屬于景天科(Crassulaceae)紅景天屬(Rhodiola L)植物，世界上有90 多種，中國有70多種。要分布于喜馬拉雅山地區(qū)，亞洲西北部和北美洲，我國主產(chǎn)于東北、 華北和西南。紅景天屬植物民間多以全草入藥，有活血止血、清肺止咳的功效，用于治療咳 血、咯血、肺炎咳嗽、婦女白帶等癥[15]，古代亦用作滋補強壯藥。紅景天最早作為藥用見記 載于公元1200年的藏醫(yī)《四部醫(yī)典》中，記為“神藥——蘇羅瑪葆”，即現(xiàn)在的寬果紅景天 (R. eurycarpa S. H. FU)?，F(xiàn)代的醫(yī)藥書籍根據(jù)紅景天植物學(xué)特征分成多種，作為藥用的見 記載有《中華人民共和國藥典》(1985版)和《四川省中成藥標(biāo)準(zhǔn)》(1993版)記載的大花紅 景天(R. crenulataH. Ohba)和狹葉紅景天(R. kirilowii Maxim)。《中華人民共和國藥典》 (1995版)中的成方制劑“九味石灰華散”中有紅景天，它是作為“清熱、滋補元氣”的原料。 紅景天為多年生草本或亞灌木植物，株高10 30cm，因其含花色素，根及根莖呈紅色，浸液 亦呈紅色，又系景天科植物，故名紅景天。新疆是我國薔薇紅景天(Rhodiola rosea L.)的 主要分布地區(qū)，薔薇紅景天在新疆的植物資源豐富，據(jù)《新疆藥用植物志》記載[16]，其主要 分布于沿天山北坡的奇臺、巴里坤、阜康、石河子、伊犁、昭蘇及塔城、托里、阿勒泰、哈巴河 等地。主產(chǎn)于山坡林下或草坡上的高寒地區(qū)，海拔在1800 2700米左右。在眾多種類的紅景天屬植物中，國內(nèi)外學(xué)者的研究主要集中于薔薇紅景 天(R. rosea L.)，大花紅景天[R. erenulata (HK. f. etThoms. )H. Ohba]，庫頁紅景天 (R. saehalinensis A. Bor)，狹葉紅景天[R. Iirilowii (Regel)Maxim]以及圣地紅景天 [R. Sacra (Prain ex Hamet) S. H. Fu]等十余個種類上。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，紅景天具有抗氧 化、抗衰老作用抗缺氧、對機體雙向調(diào)節(jié)作用、抗病毒作用及抗腫瘤作用、抗疲勞及提高記 憶力等許多作用。但對其物質(zhì)基礎(chǔ)的研究還缺乏定論。本專利基于以上調(diào)查研究，本發(fā)明首先實地考察了新疆產(chǎn)薔薇紅景天(Rhodiola RoseaL.)的生長狀況，收集藥材，采集標(biāo)本，進行藥物的鑒定和生藥學(xué)的研究；新疆的薔薇 紅景天根莖的95%乙醇回流提取物進行了深入研究，經(jīng)石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃 取進行極性劃分，各萃取層利用反復(fù)開放硅膠柱色譜、Si^phadex LH-20、0DS、重結(jié)晶和反相 HPLC等多種分離方法對其進行化學(xué)分離，得到21個化合物，并根據(jù)化合物的理化性質(zhì)分析 現(xiàn)代波譜學(xué)手段(MS，IR，UV，NMR)鑒定出、對照品比較及與文獻報道對比鑒定了 20個化合 物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其中化合物1為新化合物，薔薇紅景天黃酮(1)。研究發(fā)現(xiàn)薔薇紅景天黃酮 (1)為其中抗氧化活性最強的化合物，尋找出了新結(jié)構(gòu)類型的、強生物活性的化合物，該成 分的存在使得，提取制備含有該成分的薔薇紅景天總苷提取物，可以有望成為抗凝血、抗氧 化、抗缺氧、抗衰老、抗疲勞、治療和預(yù)防心腦血管疾病的藥物、功能食品和食品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種結(jié)構(gòu)如下的化合物或其藥用鹽。 本發(fā)明還包括，提供一種含有I式化合物的藥物組合物。本發(fā)明還包括提供一種含有I式化合物的薔薇紅景天提取物。本發(fā)明的提取物，含有黃酮苷類、苯乙醇苷類、苯丙烯醇苷類和總萜苷類化合物， 其最顯著特征為含有具有強抗氧化和心腦血管治療作用的薔薇紅景天黃酮(1)本發(fā)明還包括本發(fā)明I式化合物和含有I式化合物的薔薇紅景天提取物的制備方 法，其特征在于，步驟如下它可以采用以下任意一種方法，或這些方法的任意組合進行制 備⑴溶劑萃取法；⑵大孔吸附樹脂法；⑶液-液逆流分配色譜法；⑷柱色譜法。其 中優(yōu)選方法為大孔吸附樹脂法和/或反相C18柱色譜法、溶劑萃取法和/或葡聚糖凝膠柱 色譜法。在使用這些方法進行制備時，包括以下幾個步驟(1)提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及酯類溶劑，或由這些溶劑按 一定比例配成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿配成的酸性或堿性溶劑，其中優(yōu)選結(jié)果為 40% 95%乙醇。提取方法可以是加熱回流、浸漬滲漉、超聲提取、微波提取或高壓提取等， 其中優(yōu)選方法為加熱回流；(2)過濾包括離心、抽濾、壓濾、超濾幾個步驟，使用以下任一種澄清劑或其組合 物醇沉劑、明膠、活性炭、硅藻土、高嶺土、各種樹脂、聚乙二醇、聚乙三醇、殼聚糖以及天然 澄清劑成品；(3)濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等；(4)干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等方法。優(yōu)選的本發(fā)明化合物和提取物的制備方法如下式I化合物的制備薔薇紅景天根莖以95%乙醇提取，減壓回收溶劑。將濃縮后提取物用適量水稀釋， 依次用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得各層萃取物，取乙酸乙酯萃取 層，用常壓硅膠柱色譜法，以氯仿_甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到Fr. 1 999，F(xiàn)r. 471 505經(jīng) 氯仿_甲醇梯度洗脫得化合物(1)(式I化合物)薔薇紅景天總苷的制備薔薇紅景天根莖以95%乙醇提取，減壓回收乙醇，得糖漿狀浸膏。用適量水混懸、 溶解，經(jīng)大孔樹脂PDlOl柱色譜依次以水、10%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脫，分別得到水 洗脫部分、10%乙醇洗脫部分、60%乙醇洗脫部分、95%乙醇洗脫部分。其中，60%乙醇洗脫部分富含薔薇紅景天總苷類成分，薔薇紅景天總苷含量達到80%以上。10%乙醇洗脫部分、 95%乙醇洗脫部分也含有薔薇紅景天總苷類成分，其含量稍低，但其組成和比例與60 %乙 醇洗脫部分不同，因此，以上提取物方法均可用于薔薇紅景天總苷類的制備。最優(yōu)選的薔薇紅景天總苷的制備方法為薔薇紅景天根莖以95%乙醇提取，減壓回收乙醇，得糖漿狀浸膏用適量水混懸、溶解，經(jīng)大孔樹脂PDlOl柱色譜依次以水、60%乙 醇、95%乙醇洗脫，60%乙醇洗脫物即為薔薇紅景天總苷。另外，本發(fā)明還提供利用含有本發(fā)明化合物的薔薇紅景天總苷經(jīng)酸水解反應(yīng)，制 備本發(fā)明薔薇紅景天總苷中分布的次級苷化合物和提取物的方法，其中酸水解反應(yīng)所用酸 選自有機酸如硫酸、鹽酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸等。本發(fā)明還包括本發(fā)明的化合物和含有I式化合物的薔薇紅景天提取物在制備抗 高原低氧性缺氧、抗腦缺氧、抗心肌缺氧、改善血液粘稠度和微循環(huán)、擴張心腦血管、清除自 由基、增強人體免疫力、抗疲勞、抗凝血、保護肝損傷、延緩衰老、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高機 體免疫力、改善心腦血管供血不足、抑制腫瘤細胞生長、以及活血脈、降血脂、降膽固醇、降 甘油三脂、抗腫瘤、抗癌等食品、功能食品和藥物中的應(yīng)用。其作用的發(fā)揮為黃酮苷類、苯乙 醇苷類、苯丙烯醇苷類和總萜苷類化合物的協(xié)同作用，其最顯著特征為薔薇紅景天黃酮(1) 具有強抗氧化和心腦血管治療作用。本發(fā)明還包括上述含有I式化合物的薔薇紅景天提取物的檢測方法如HPLC分 析，以質(zhì)譜(MS)檢測、紫外(UV)檢測、圓二色譜(CD)檢測、蒸發(fā)光散射檢測器等為檢測器。本發(fā)明還包括含有本發(fā)明的化合物和含有I式化合物的薔薇紅景天提取物的藥 物組合物。所述組合物可以是本發(fā)明薔薇紅景天黃酮、薔薇紅景天、薔薇紅景天提取物或者 薔薇紅景天總苷和藥物可接受的載體混合制備成的藥物制劑。這些制劑包括通用的藥物劑型如片劑，膠囊，顆粒，口服液，注射劑等。本發(fā)明的藥物組合物在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每 次1-20劑，如1-20袋或?；蚱縿﹍mg-1000mg。以下為本發(fā)明化合物和含有I式化合物的薔薇紅景天提取物的功效測定實驗試驗表明，其具有抗高原低氧性缺氧、抗腦缺氧、抗心肌缺氧、改善血液粘稠度和 微循環(huán)、擴張心腦血管、清除自由基、增強人體免疫力、抗疲勞、抗凝血、保護肝損傷、延緩衰 老、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高機體免疫力、改善心腦血管供血不足、抑制腫瘤細胞生長、以及 活血脈、降血脂、降膽固醇、降甘油三脂、抗腫瘤、抗癌等活性，提示其可用于食品、功能食品 和藥物。其作用的發(fā)揮為黃酮苷類、苯乙醇苷類、苯丙烯醇苷類和總萜苷類化合物的協(xié)同作 用，其最顯著特征為式1化合物具有強抗氧化和心腦血管治療作用。以下實驗用于說明本發(fā)明提取物比現(xiàn)有類似物更加優(yōu)越。毒性試驗藥品本發(fā)明實施例2方法制備的提取物(60%乙醇洗脫部位)，式1化合物本發(fā)明的小鼠口服一次給與最大給藥濃度10g/Kg體重，均未見毒副反應(yīng)，血液生 化指標(biāo)均正常，對照組本發(fā)明60%乙醇洗脫部位，式1化合物的小鼠口服一次給與最大給藥濃 度10g/Kg體重，解剖尸體見肝臟紅腫，肝功能異常。
因此說明本發(fā)明藥物毒性小于對照組。藥效試驗藥品本發(fā)明實施例2方法制備的提取物(60%乙醇洗脫部位，RRMB,正丁醇萃取 部位，RRB)，式1化合物抗疲勞試驗對照品人參總皂苷延長小鼠負重(體重5% )游泳時間試驗結(jié)果表明本發(fā)明實施例2方法制備的 新疆薔薇紅景天總苷和式1化合物在10mg/Kg體重即可與人參總皂苷的抗疲勞活性相當(dāng)， 說明其活性非常強。表1 RRB對延長小鼠負重(體重5% )游泳時間的影響(無±s, ^10) 與模型組比較*p < 0. 05，**p < 0.01抗肝損傷試驗薔薇紅景天總苷對CC14肝損傷小鼠血清AST、ALT的影響的測定與正常組相比，模型組小鼠血清AST、ALT活力明顯升高，存在顯著性差異(P < 0.05)，表明實驗造模成功；與陽性藥益肝靈相比，薔薇紅景天總苷部分(RBB)高劑量和 式1化合物可使升高的血清AST、ALT活力值下降。結(jié)果見表2，圖7。表2 RRB對急性肝損傷小鼠血清MDA和GSH的影響(J ±s, ^10)給藥劑量 注與模型組比較，*P < 0. 05 ；與正常組比較，flflP < 0.01抗氧化損傷試驗薔薇紅景天總苷對CC14肝損傷小鼠抗氧化損傷的影響測定與正常組相比，模型組肝組織GSH活性明顯降低、MDA含量明顯升高(P < 0. 01)表 明本實驗造模成功；與模型組相比，新疆薔薇紅景天總苷和式1化合物高可顯著降低肝組 織中MDA含量(P < 0. 05)，并能使降低的肝組織GSH活性升高。結(jié)果見表3，圖8，圖9。表3 RRB對急性肝損傷小鼠肝組織MD A和GSH的影響(士 s, n=10) 血液學(xué)試驗薔薇紅景天總苷抗凝血藥理活性測試薔薇紅景天大孔樹脂處理物(RRMB)和式1化合物連續(xù)給大鼠灌胃7d后，低、中、 高劑量組與溶劑對照組比較均顯著延長了 APPT和TT(P < 0. 01)，中、高劑量組能顯著延長 PT和RT (P <0.01)，表明薔薇紅景天總苷部分(RRMB)和式1化合物對內(nèi)源性凝血系統(tǒng)及 外源性凝血系統(tǒng)均有抑制作用。結(jié)果見表4。表4新疆紅景天大孔樹脂處理物的抗凝血活性土 s, n=8)
40% 95%乙醇。提取方法可以是加熱回流、浸漬滲漉、超聲提取、微波提取或高壓提取等， 其中優(yōu)選方法為加熱回流；(2)過濾包括離心、抽濾、壓濾、超濾幾個步驟，使用以下任一種澄清劑或其組合 物醇沉劑、明膠、活性炭、硅藻土、高嶺土、各種樹脂、聚乙二醇、聚乙三醇、殼聚糖以及天然 澄清劑成品；
(3)濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等；(4)干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等方法。當(dāng)采用溶劑萃取法時，是先將提取物混懸于水中，接著用乙酸乙酯、氯仿、正丁醇， 或這些溶劑的組合物，萃取獲得中藥活性成分組合物薔薇紅景天總苷，其中優(yōu)選的是乙酸 乙酯或者正丁醇。其中包括應(yīng)用石油醚、正己烷、環(huán)己烷、汽油等低極性溶劑和/或以上低 極性溶劑與氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲醇等的不同比例混合物先萃取除去部分低 極性雜質(zhì)。當(dāng)采用大孔吸附樹脂法時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的產(chǎn)物，也 可以是經(jīng)過乙醇沉淀或上述溶劑萃取法初步純化后的產(chǎn)物，所用大孔吸附樹脂可以是非極 性、弱極性、中等極性，弱酸性和弱堿性任何一種類型，所用樹脂型號由于生產(chǎn)廠家不同而 不同，其中優(yōu)選的是非極性苯乙烯型大孔吸附樹脂，所用的洗脫劑是水及含水的乙醇、甲 醇、丙酮，其中優(yōu)選的是0 100%的乙醇。當(dāng)采用液-液逆流分配色譜法時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的 產(chǎn)物，也可以是經(jīng)過上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法初步純化后的產(chǎn)物，是先將提取物 混懸于水中，接著用石油醚、正己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、氯仿，或這些溶劑 的組合物，萃取獲得中藥活性成分組合物薔薇紅景天總苷，其中優(yōu)選的是乙酸乙酯或正己 烷_乙酸乙酯組成的混合溶劑。當(dāng)采用柱色譜法時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的產(chǎn)物，也可以是 經(jīng)過上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、液-液逆流分配色譜法初步純化后的產(chǎn)物，所用固 定相可以是硅膠、氧化鋁、聚酰胺、葡聚糖凝膠G-10、葡聚糖凝膠G-25、葡聚糖凝膠LH-20、 C8、0DS、活性炭、纖維素，及非極性、弱極性、中等極性，弱酸性和弱堿性大孔吸附樹脂等； 所用的洗脫溶媒因固定相不同而不同，一般是水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯或正己 烷-乙酸乙酯組成的混合溶劑，或這些溶劑按一定比例配成的混合溶劑。其中固定相優(yōu)選 的是非極性大孔吸附樹脂、硅膠、ODS和葡聚糖凝膠LH-20。建立了分析方法HPLC分析，以質(zhì)譜(MS)檢測、紫外(UV)檢測、圓二色譜(CD)檢 測、蒸發(fā)光散射檢測器等為檢測器。對照品溶液的配置取表5中薔薇紅景天中分離得到的化合物作為化學(xué)對照品， 精密稱取適量，用甲醇配制成適量的對照品溶液。表5從薔薇紅景天中分離得到的化合物的名稱、編號和結(jié)構(gòu)
薔薇紅景天總苷樣品各適量，用IOOml氯仿(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、環(huán)己烷等有機溶劑及其不同濃度的水溶液)提取，回收提取液，甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙 腈、石油醚、環(huán)己烷等有機溶劑及其不同濃度的水溶液)溶解，經(jīng)裝填ODS的SPE小色譜柱 預(yù)處理，95%乙腈(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、石油醚、環(huán)己烷等有機溶劑及其不同濃 度的水溶液)洗滌，合并洗脫液，甲醇定容，過濾，即得。測試方法進行HPLC分析，以質(zhì)譜(MS)檢測、紫外(UV)檢測、圓二色譜(CD)檢 測、蒸發(fā)光散射檢測器等為檢測器。以樣品中各化合物的色譜峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)對照樣品相應(yīng) 色譜峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法(或外標(biāo)1點法、外標(biāo)2點法等)，進行定量分析，計算，即得。實施例1 式I化合物的制備薔薇紅景天根莖2. 0kg，粉碎，以95%乙醇(10、8、8倍量)回流提取三次，每次3h， 合并提取液，減壓回收溶劑。將濃縮后提取物用適量水稀釋，依次用等體積的石油醚、氯仿、 乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得各層萃取物20g、33g、62g、204g。見

圖1取乙酸乙酯萃取層浸膏56g，用常壓硅膠柱色譜法，以氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗 脫，得到Fr. 1 999，合并Fr. 122 170經(jīng)氯仿-甲醇梯度洗脫得化合物(3，20)；合并 Fr. 311 326經(jīng)反復(fù)使用S印hadex LH-20柱色譜法，甲醇為流動相，純化得化合物(2)； 合并Fr. 331 337經(jīng)經(jīng)氯仿-甲醇梯度洗脫，再反復(fù)使用S印hadex LH-20柱色譜法，甲 醇為流動相，純化得化合物(13)；合并Fr. 338 393經(jīng)氯仿-甲醇梯度洗脫，再反復(fù)使用 Sephadex LH-20柱色譜法，甲醇為流動相，純化得化合物(14) ；Fr. 430 452經(jīng)氯仿-甲 醇重結(jié)晶，得化合物(15)，經(jīng)S印hadexLH-20柱色譜法，甲醇為流動相，純化得化合物(17)； Fr. 471 505經(jīng)氯仿-甲醇梯度洗脫得化合物(1)(式I化合物)；Fr. 706 712經(jīng)氯仿-甲 醇梯度洗脫得化合物(21)，詳細的分離流程圖如圖2。實施例2 薔薇紅景天總苷的提取制備薔薇紅景天根莖2. 0kg，粉碎，以95%乙醇(10、8、8倍量)回流提取三次，每次3h， 合并提取液。減壓回收乙醇，得糖漿狀浸膏。用適量水混懸、溶解，經(jīng)大孔樹脂PDlOl柱色譜 依次以水、10%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脫，分別得到水洗脫部分、10%乙醇洗脫部分、 60%乙醇洗脫部分、95%乙醇洗脫部分。其中，60%乙醇洗脫部分富含薔薇紅景天總苷類成 分，薔薇紅景天總苷含量達到80%以上。10%乙醇洗脫部分、95%乙醇洗脫部分也含有薔薇 紅景天總苷類成分，其含量稍低，但其組成和比例與60%乙醇洗脫部分不同，因此，以上提 取物方法均可用于薔薇紅景天總苷類的制備。最佳制備方法為用適量水混懸、溶解，經(jīng)大孔 樹脂PDlOl柱色譜依次以水、60%乙醇、95%乙醇洗脫，60%乙醇洗脫物即為薔薇紅景天總 苷。實施例3 薔薇紅景天總苷的HPLC-T0F-MS分析對照品溶液的配置表1所列對照品精密稱取適量，用甲醇配制成適量的對照品 溶液。樣品溶液的配置精密稱取薔薇紅景天黃酮、薔薇紅景天、薔薇紅景天提取物或者 薔薇紅景天總苷樣品各適量，用IOOml甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、環(huán)己烷 等有機溶劑及其不同濃度的水溶液)提取，回收提取液，甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙 腈、石油醚、環(huán)己烷等有機溶劑及其不同濃度的水溶液)溶解，經(jīng)裝填ODS的SPE小色譜柱 預(yù)處理，95%甲醇(或乙腈、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、石油醚、環(huán)己烷等有機溶劑及其不同濃度的水溶液)洗滌，合并洗脫液，甲醇定容，過濾，即得。測試方法進行HPLC分析，以質(zhì)譜(MS)檢測、紫外(UV)檢測、圓二色譜(CD)檢 測、蒸發(fā)光散射檢測器等為檢測器。以樣品中各化合物的色譜峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)對照樣品相應(yīng) 色譜峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法(或外標(biāo)1點法、外標(biāo)2點法等)，進行定量分析，計算，即得。利用表1所列對照品的精確分子量， 進行HPLC-T0F-MS等分析，定性、定量地確定 薔薇紅景天總苷中的化學(xué)成分及其含量。結(jié)果見表6-表9和圖3—圖6。表6苯乙醇苷類化合物
表7苯丙稀醇苷類化合物 表8黃酮類化合物 實施例4 薔薇紅景天總苷對CC14肝損傷小鼠血清AST、ALT的影響的測定與正常組相比，模型組小鼠血清AST、ALT活力明顯升高，存在顯著性差異(P
<0.05)，表明實驗造模成功；與陽性藥益肝靈相比，薔薇紅景天總苷部分(RBB)高劑量可 使升高的血清AST、ALT活力值下降。結(jié)果見表2，圖7。表6 RRB對急性肝損傷小鼠血清MDA和GSH的影響(J ±s, ^10) 「0123l 注與模型組比較，*P < 0. 05 ；與正常組比較，flflP < 0.01實施例5 薔薇紅景天總苷對CCl4肝損傷小鼠肝組織中GSH、MDA的影響測定與正常組相比，模型組肝組織GSH活性明顯降低、MDA含量明顯升高(P < 0.01) 表明本實驗造模成功；與模型組相比，新疆薔薇紅景天高可顯著降低肝組織中MDA含量(P
<0. 05)，并能使降低的肝組織GSH活性升高。結(jié)果見表3，圖8，圖9。表7 RRB對急性肝損傷小鼠肝組織MDA和GSH的影響(J 士 s, n=10)
組別給藥劑量/GSHMDA(nmol/
‘(mg/kg) (mg/g)mg)
正常組—2.20±0.430.59士 0.15
模型組一1.70±0.08#1.24±0.32#益肝靈組2001.90±0.59 *0.63士0.18* RRB 低劑量組301.35±0.161.18士0.25 RRB 中劑量組1002.11 士0.34*1.01 士0.16 RRB 髙劑量組3003.46±0.53 *0.88±0.15*
式化合物203.24±0.36*0.78士0.14*注與模型組比較，*P < 0. 05 ；與正常組比較，flP < 0. 05實施例6 薔薇紅景天總苷對肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響 HE染色，在光鏡下發(fā)現(xiàn)，正常對照組肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，結(jié)構(gòu) 正常、清晰。CCl4模型組小鼠肝竇及中央靜脈明顯擴張，肝細胞廣泛壞死，細胞膜不清楚，胞 漿液連成一片，病灶區(qū)周圍肝細胞發(fā)生不同程度的氣球樣變及嗜酸性變，有大量炎性細胞 浸潤，新疆薔薇紅景天高劑量組肝細胞變性、壞死、炎癥反應(yīng)明顯減輕。新疆薔薇紅景天中 劑量組和低劑量組肝細胞的腫脹變性、壞死和炎癥反應(yīng)較四氯化碳組有所改善。結(jié)果見圖 10。 實施例7 薔薇紅景天總苷抗凝血藥理活性測試
薔薇紅景天正丁醇萃取物連續(xù)給大鼠灌胃7d后，中、高劑量組與溶劑對照組比較 均顯著延長了 APTT、PT、TT和RT時間。表明薔薇紅景天對內(nèi)源性凝血系統(tǒng)及外源性凝血系 統(tǒng)均有抑制作用，結(jié)果見表8。對于TT的測定，低、中、高三個劑量組都能明顯的延長TT的時間(P <0.01)，結(jié)果 表明薔薇紅景天具有顯著的抗凝血活性。對于APTT的測定，中、高劑量組都能明 顯的延長APTT的時間(P < 0. 01)，結(jié)果表 薔薇紅景天對內(nèi)源性凝血途徑有顯著的影響。對于PT的測定，低、中、高三個劑量組都能明顯的延長PT的時間(P <0.01)，結(jié)果 表明薔薇紅景天對外源性凝血途徑有影響。對于TT、APTT、PT三個指標(biāo)的測定結(jié)果表明，薔薇紅景天具有顯著的抗凝血活性， 對內(nèi)源性凝血途徑和外源性凝血途徑均有影響。表10新疆紅景天正丁醇萃取物的抗凝血活性G ±s, n=8) 注與溶劑對照組比較*P <0. 05, **P < 0.01實施例8 薔薇紅景天總苷抗凝血藥理活性測試薔薇紅景天大孔樹脂處理物連續(xù)給大鼠灌胃7d后，低、中、高劑量組與溶劑對照 組比較均顯著延長了 APPT和TT (P <0.01),中、高劑量組能顯著延長PT和RT (P < 0. 01)， 表明薔薇紅景天對內(nèi)源性凝血系統(tǒng)及外源性凝血系統(tǒng)均有抑制作用。結(jié)果見表4。表4新疆紅景天大孔樹脂處理物的抗凝血活性( 士 s, η=8) 注與溶劑對照組比較*P < 0. 05，**P < 0. 01實施例9:酸水解反應(yīng)分別取IOOmg的樣品，用100ml 2N三氟乙酸(TFA)溶解于安瓿瓶中，封瓶，110°C反應(yīng)2h。CHCl3萃取三次，水層用N2吹干，加甲醇，再用N2吹干，反復(fù)此過程直至產(chǎn)物中不 存在TFA，即得。實施例10 式1化合物的鑒定片狀結(jié)晶(甲醇)，m. p. 192 193°C ；FeCl3-Fe [K3 (CN) 6]反應(yīng)陽性，示含酚羥基。
表 11化合物 1 的 1H-WR (600MHz in (D6) DMSO) and 13C-WR (150MHz in (d6) DMSO)
數(shù)據(jù) 實施例11 =HPLC測定薔薇紅景天中7個黃酮類化合物的含量建立了 HPLC法同時測定紅景天中7種主要黃酮類成分含量的方法(化合物結(jié)構(gòu) 見表12)。結(jié)果表明本方法快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性好。表12標(biāo)準(zhǔn)對照品的化合物結(jié)構(gòu) 分析方法365nm為HPLC測定波長，分別精密移取1、2、3、4、5、6、7對照品儲備溶 液 50.5μ 1、188μ 1、320μ 1、56μ 1、117μ 1、10μ 1、66.4μ 1，至 2ml 的容量瓶中，用甲醇定 溶至刻度，即得對照品溶液。精密稱取樣品約l.Og，加入20ml甲醇，稱重，超聲提取30min， 放至室溫，補足失重，過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液用0. 22um微孔濾膜過濾，即為供試品溶 液。色譜柱ScienhomeKromasil C18 150mmX 4. 6mm，5 μ m)；流動相甲醇-乙 腈-0. 磷酸水梯度洗脫(見表13)；流速lml/min ；柱溫30°C ；檢測波長365nm。在該色 譜條件下，樣品中被測成分能夠達到基線分離，保留時間在65min內(nèi)。(圖11和圖12)表13梯度洗脫條件
權(quán)利要求
一種結(jié)構(gòu)如下的化合物或藥學(xué)上可接收的鹽。FSA00000110883300011.tif
2.一種藥物組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1的化合物。
3.一種薔薇紅景天提取物，其特征在于含有黃酮苷類、苯乙醇苷類、苯丙烯醇苷類和 總萜苷類化合物，同時含有權(quán)利要求1的化合物。
4.權(quán)利要求3的提取物的制備方法，其特征在于，包括提取，提取后分離，分離用以下 方法⑴溶劑萃取法；⑵大孔吸附樹脂法；⑶液_液逆流分配色譜法；⑷柱色譜法，各 法步驟如下提取(1)提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及酯類溶劑，或由這些溶劑按一 定比例配成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿配成的酸性或堿性溶劑，其中優(yōu)選結(jié)果為 40% 95%乙醇。提取方法可以是加熱回流、浸漬滲漉、超聲提取、微波提取或高壓提取等， 其中優(yōu)選方法為加熱回流；(2)過濾包括離心、抽濾、壓濾、超濾幾個步驟，使用以下任一種澄清劑或其組合物 醇沉劑、明膠、活性炭、硅藻土、高嶺土、各種樹脂、聚乙二醇、聚乙三醇、殼聚糖以及天然澄 清劑成品；(3)濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等；(4)干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等方法。當(dāng)分離采用溶劑萃取法時，是先將提取物混懸于水中，接著用乙酸乙酯、氯仿、正丁醇， 或這些溶劑的組合物，萃取獲得中藥活性成分組合物薔薇紅景天總苷，其中優(yōu)選的是乙酸 乙酯或者正丁醇。其中包括應(yīng)用石油醚、正己烷、環(huán)己烷、汽油等低極性溶劑和/或以上低 極性溶劑與氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲醇等的不同比例混合物先萃取除去部分低 極性雜質(zhì)。當(dāng)分離采用大孔吸附樹脂法時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的產(chǎn)物，也 可以是經(jīng)過乙醇沉淀或上述溶劑萃取法初步純化后的產(chǎn)物，所用大孔吸附樹脂可以是非極 性、弱極性、中等極性，弱酸性和弱堿性任何一種類型，所用樹脂型號由于生產(chǎn)廠家不同而 不同，其中優(yōu)選的是非極性苯乙烯型大孔吸附樹脂，所用的洗脫劑是水及含水的乙醇、甲 醇、丙酮，其中優(yōu)選的是O 100%的乙醇。當(dāng)分離采用液-液逆流分配色譜法時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的 產(chǎn)物，也可以是經(jīng)過上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法初步純化后的產(chǎn)物，是先將提取物混懸于水中，接著用石油醚、正己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、氯仿，或這些溶劑 的組合物，萃取獲得中藥活性成分組合物薔薇紅景天總苷，其中優(yōu)選的是乙酸乙酯或正己 烷-乙酸乙酯組成的混合溶劑。當(dāng)分離采用柱色譜法時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的產(chǎn)物，也可以是 經(jīng)過上述溶劑萃取法、大孔吸附樹脂法、液-液逆流分配色譜法初步純化后的產(chǎn)物，所用固 定相可以是硅膠、氧化鋁、聚酰胺、葡聚糖凝膠G-10、葡聚糖凝膠G-25、葡聚糖凝膠LH-20、 C8、ODS、活性炭、纖維素，及非極性、弱極性、中等極性，弱酸性和弱堿性大孔吸附樹脂等； 所用的洗脫溶媒因固定相不同而不同，一般是水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯或正己 烷-乙酸乙酯組成的混合溶劑，或這些溶劑按一定比例配成的混合溶劑。其中固定相優(yōu)選 的是非極性大孔吸附樹脂、硅膠、ODS和葡聚糖凝膠LH-20。
5.權(quán)利要求4的制備方法，其特征在于，薔薇紅景天根莖以95%乙醇提取，減壓回收乙醇，得糖漿狀浸膏。用適量水混懸、溶解， 經(jīng)大孔樹脂PDlOl柱色譜依次以水、10%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脫，分別得到水洗脫 部分、10%乙醇洗脫部分、60%乙醇洗脫部分、95%乙醇洗脫部分。其中 ，60%乙醇洗脫部分 富含薔薇紅景天總苷類成分。
6.權(quán)利要求3的提取物的制備方法，其特征在于，利用含薔薇紅景天總苷類化合物的 薔薇紅景天提取物，經(jīng)酸水解反應(yīng)，制備薔薇紅景天總苷中分布的次級苷化合物和提取物， 其中酸水解反應(yīng)所用酸選自有機酸如硫酸、鹽酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸等。
7.權(quán)利要求1的化合物的制備方法，其特征在于，薔薇紅景天根莖以95%乙醇提取，減壓回收溶劑。將濃縮后提取物用適量水稀釋，依次 用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得各層萃取物，取乙酸乙酯萃取層， 用常壓硅膠柱色譜法，以氯仿_甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，得到Fr. 1 999，F(xiàn)r. 471 505經(jīng)氯 仿_甲醇梯度洗脫得式I化合物。
8.權(quán)利要求3的提取物和權(quán)利要求1的化合物在制備抗高原低氧性缺氧、抗腦缺氧、 抗心肌缺氧、改善血液粘稠度和微循環(huán)、擴張心腦血管、清除自由基、增強人體免疫力、抗疲 勞、抗凝血、保護肝損傷、延緩衰老、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高機體免疫力、改善心腦血管供 血不足、抑制腫瘤細胞生長、以及活血脈、降血脂、降膽固醇、降甘油三脂、抗腫瘤、抗癌的藥 物、功能食品和食品中的應(yīng)用。
9.含有權(quán)利要求3提取物的藥物組合物。
10.權(quán)利要求2或9的藥物組合物，其特征在于，含有藥物可接受的載體，為任何可藥用 劑型如片劑，膠囊，顆粒，口服液，注射劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及薔薇紅景天總苷及其醫(yī)藥用途和制備方法，從薔薇紅景天制備的總苷提取物，含有黃酮苷類、苯乙醇苷類、苯丙烯醇苷類和總萜苷類化合物，其最顯著特征為含有薔薇紅景天黃酮(1)。
文檔編號A61K31/353GK101863871SQ201010177549
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日
發(fā)明者盧立娜, 張珂, 李國玉, 李曉東, 魏秀巖 申請人:于非