專利名稱:一種動物細胞的分離方法及分離裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品生產(chǎn)過程中動物細胞的貼壁培養(yǎng)技術(shù)，尤其是貼壁生長的動
物細胞從微載體上分離出來的方法及其分離裝置。
技術(shù)背景
在生物制品生產(chǎn)過程中，特別是疫苗和蛋白藥物的生產(chǎn)，利用生物反應(yīng)器來培養(yǎng) 貼壁生長的動物細胞，并利用微載體來增加細胞貼壁生長的表面積，才能實現(xiàn)規(guī)?；纳?產(chǎn)。為了能實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，必須要實現(xiàn)生物反應(yīng)器的逐級放大，而實現(xiàn)生物反應(yīng)器的逐級 放大的關(guān)鍵技術(shù)是如何把貼在微載體上面的動物細胞分離出來。
傳統(tǒng)的分離方法是采用機械震蕩來實現(xiàn)，其方法是將表面上長滿細胞的微載體 經(jīng)過胰酶處理后，利用震蕩原理，將放在容器中的微載體快速震蕩，將細胞從微載體表面分 離出來，再把細胞單獨取出接種到更大的反應(yīng)器或者將細胞與原來的微載體一起接種到更 大的反應(yīng)器中。這種方法可以實現(xiàn)把細胞從微載體上分離的目的，但是由于生物制品對容 器密封要求非常的高，不得有任何泄露而造成污染，而機械震蕩不可避免的對整個容器進 行震蕩，會影響容器的密封性能；另外，利用這種方法將細胞從微載體上完全分離需要的時 間較長，并且震蕩產(chǎn)生的剪切力非常的大，這樣，就會對細胞造成非常大的損傷，影響下一 步放大時細胞的正常生長。
為了克服采用機械震蕩來分離細胞所存在的問題，現(xiàn)在，人們使用得比較多的方 法是機械攪拌，即將表面上長滿細胞的微載體經(jīng)過胰酶處理后，利用機械攪拌的剪切力，將 細胞從微載體表面分離出來。在公開號為CN1483805A
公開日為2004年3月24日的專利 文件中公開了一種用于動物細胞擴大接種的消化反應(yīng)器，包括由一筒體構(gòu)成的消化區(qū)，該 消化區(qū)包括與筒體上端密封連接的蓋板，安裝于蓋板中央，與之可轉(zhuǎn)動且密封連接的攪拌 裝置，與蓋板密封銜接且流體相通的至少一個進料口 ，與蓋板密封銜接且流體相通的至少 一個出/入氣口 ；還包括由一底封頭構(gòu)成的與消化區(qū)下端周緣密封銜接的分離區(qū)，該分離 區(qū)包括固定于底封頭上端面的篩網(wǎng)，所述篩網(wǎng)的孔徑大于所述動物細胞直徑且小于動物 細胞所附著的載體直徑，與底封頭密封銜接且流體相通的至少一個進/出料口 ，至少一個 洗滌液/消化液入口和至少一個洗滌液/消化液出口 。專利文件中公開的攪拌裝置就是將 細胞從微載體中分離的裝置，其就是利用攪拌原理。這種方法雖然能夠?qū)崿F(xiàn)把細胞從微載 體上分離的目的，但是由于這種方法的攪拌速度只能低速進行，否則細胞將會造成損傷，因 此，需要很長的時間才能將細胞從微載體上完全分離，而過長的時間將會造成細胞的生長 狀態(tài)變差，影響下一步放大時細胞的正常生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種動物細胞的分離方法，利用本發(fā)明的分離方法，貼 壁動物細胞容易從微載體上分離，貼壁動物細胞分離時不容易損傷，貼壁動物細胞從微載 體上完全分離所需要的時間短。[0006] 本發(fā)明的另一目的是為了提供一種動物細胞分離的裝置，利用本發(fā)明的分離裝 置，貼壁動物細胞容易從微載體上分離，貼壁動物細胞分離時不容易損傷，貼壁動物細胞從 微載體上完全分離所需要的時間短。
為達到上述目的，動物細胞分離的方法為使具有流速的貼有動物細胞的微載體與 容器壁產(chǎn)生撞擊，使動物細胞從微載體上分離。
用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會產(chǎn)生大的剪切力，這 樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離時不容易損傷，完全 分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實現(xiàn)分離的目的，因此， 貼壁動物細胞容易從微載體上分離。
作為改進，貼有動物細胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為
(1)用泵將長滿動物細胞的微載體從第一容器經(jīng)出料管抽出并通過輸出管使長滿
動物細胞的微載體撞擊第一容器的內(nèi)壁，使動物細胞和微載體重新流入到第一容器內(nèi)；
(2)觀察動物細胞與微載體的分離情況，如果動物細胞與微載體已經(jīng)分離，則使泵
停止工作；如果動物細胞與微載體沒有完全分離，則繼續(xù)上述的(1)步驟直到動物細胞與
微載體完全分離為止。
上述分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離 時不容易損傷，完全分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對貼壁動物細 胞從微載體上分離的情況進行觀察一次，當完全分離后，就停止撞擊過程，因此，能夠及時 跟蹤到貼壁動物細胞的分離情況，避免因貼壁動物細胞完全分離后繼續(xù)進行撞擊而浪費時 間。
作為改進，貼有動物細胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為
1、準備兩個容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在密
封塞上安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在密封塞上還開設(shè)一個進料
口和進氣口 ；第三容器內(nèi)插入一根出料管，出料管插入到第三容器的底部；
11、使第二容器處于密封狀態(tài)下；
ni、通過進氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)長滿動物細胞的微載體經(jīng)第
二容器上的出料管和第三容器上的出料管進入到第三容器內(nèi)，在進入第三容器時，長滿動 物細胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊； IV、從第三容器中取樣；
V、觀察動物細胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種 到生物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)；如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則將第二容器上的 密封塞拆卸下來安裝到第三容器的容器口上，通過第三容器密封塞上的進氣口對第三容器 加壓，使得第三容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料管和第二容器上的出 料管返回到第二容器內(nèi)，在進入第二容器時，動物細胞和微載體與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞 擊；
VI、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生物反應(yīng)器 中進行細胞培養(yǎng)，如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則重復(fù)上述的III、 IV、 V步驟直到動物細胞從微載體上分離為止。
上述分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會
產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離
時不容易損傷，完全分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實
現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對貼壁動物細
胞從微載體上分離的情況進行觀察一次，當完全分離后，就停止撞擊過程，因此，能夠及時
跟蹤到貼壁動物細胞的分離情況，避免因貼壁動物細胞完全分離后繼續(xù)進行撞擊而浪費時
間。在分離時，由于表面上有貼壁動物細胞的微載體是從一個容器進入到另一個容器，經(jīng)前
撞擊的貼壁動物細胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動物細胞的微載體不會出現(xiàn)混合，因
此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動物細胞的分離情況。
作為改進，貼有動物細胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為
①、準備兩個容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在
第二容器的密封塞安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在第二容器的密
封塞上還開設(shè)一個進料口和進氣口 ；在第三容器的容器口上安裝密封塞，在第三容器密封
塞安裝一根出料管，第三容器的出料管插入到第三容器的底部，在第三容器的密封塞上還
開設(shè)一個進料口和進氣口；
②、使第二容器處于密封狀態(tài)下；
③、通過第二容器上的密封塞上的進氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)的長 滿動物細胞的微載體經(jīng)第二容器上的出料管和第三容器上的出料管進入到第三容器內(nèi)，在 進入第三容器時，長滿動物細胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
、從第三容器中取樣；
⑤、觀察動物細胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種 到生物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)；如果動物細胞和微載體沒有完全分離，通過第三容器密封 塞上的進氣口對第三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第三容器上的 出料管和第二容器上的出料管返回到第二容器內(nèi)，在進入第二容器時，動物細胞和微載體 與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
⑥、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生物反應(yīng)器 中進行細胞培養(yǎng)，如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則重復(fù)上述的③、④、⑤步驟直到 動物細胞從微載體上分離為止。
上述分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離 時不容易損傷，完全分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對貼壁動物細 胞從微載體上分離的情況進行觀察一次，當完全分離后，就停止撞擊過程，因此，能夠及時 跟蹤到貼壁動物細胞的分離情況，避免因貼壁動物細胞完全分離后繼續(xù)進行撞擊而浪費時 間。在分離時，由于表面上有貼壁動物細胞的微載體是從一個容器進入到另一個容器，經(jīng)前 撞擊的貼壁動物細胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動物細胞的微載體不會出現(xiàn)混合，因 此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動物細胞的分離情況。
為達到上述的另一目的，本發(fā)明分離裝置的第一技術(shù)方案為一種將貼壁動物細
6胞從微載體上分離的裝置包括第一容器，所述第一容器上設(shè)有出料管，出料管的一端伸入 到第一容器的底部，另一端連接有泵；所述泵上連接有輸出管，輸出管的輸出端通過容器口 伸入到第一容器內(nèi)，且對著第一容器的容器壁。
這種分離裝置，由于附有貼壁動物細胞的微載體直接與第一容器壁發(fā)生撞擊，不 會產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分 離時不容易損傷，完全分離所需要的時間短，貼壁動物細胞容易從微載體上分離；并且這種 分離裝置結(jié)構(gòu)簡單，制造容易，成本低。
本發(fā)明的分離裝置的第二技術(shù)方案為一種將貼壁動物細胞從微載體上分離的裝 置包括第二容器和第三容器，所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封 塞上設(shè)有出料管，出料管伸入到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進料口和 進氣口 ；所述的第三容器內(nèi)設(shè)有出料管，所述第二容器上的出料管與第三容器上的出料管 相連通。
第二技術(shù)方案的分離裝置，由于附有貼壁動物細胞的微載體直接與容器壁發(fā)生撞 擊，不會產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞 分離時不容易損傷，完全分離所需要的時間短，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。在分離 時，由于表面上有貼壁動物細胞的微載體是從一個容器進入到另一個容器，經(jīng)前撞擊的貼壁 動物細胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動物細胞的微載體不會混合，因此，分離徹底，容易 觀察每次撞擊后的貼壁動物細胞的分離情況；由于在第二容器和第三容器之間進行撞擊時， 采用同一個密封塞，因此，成本低；并且這種分離裝置結(jié)構(gòu)簡單，制造容易，成本低。 作為改進，所述第二容器上的出料管和第三容器上的出料管通過管道相連通。 本發(fā)明分離裝置的第三技術(shù)方案為一種將貼壁動物細胞從微載體上分離的裝置 包括第二容器和第三容器，所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封塞 上設(shè)有出料管，出料管伸入到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進料口和進 氣口 ；所述的第三容器的容器口上設(shè)有密封塞，第三容器上的密封塞上設(shè)有出料管，第三容 器上的出料管伸入到第三容器的底部，在第三容器的密封塞上還設(shè)有進料口和進氣口 ；所 述第二容器上的出料管與第三容器上的出料管相連通。
第三技術(shù)方案的分離裝置，由于附有貼壁動物細胞的微載體直接與容器壁發(fā)生撞 擊，不會產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細 胞分離時不容易損傷，完全分離所需要的時間短，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。在分 離時，由于表面上有貼壁動物細胞的微載體是從一個容器進入到另一個容器，經(jīng)前一次撞 擊的貼壁動物細胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動物細胞的微載體不會混合，因此，分 離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動物細胞的分離情況；由于在第二容器和第三容器之 間進行撞擊時，分別在第二容器和第三容器上設(shè)置了密封塞，這樣，在第二容器和第三容器 之間撞擊時，不需要反復(fù)調(diào)換密封塞，因此，分離的效率高；并且這種分離裝置結(jié)構(gòu)簡單，制 造容易，成本低。
作為改進，述第二容器上的出料管和第三容器上的出料管通過管道相連通。


圖1為本發(fā)明第一實施方式的結(jié)構(gòu)圖；[0038] 圖2為本發(fā)明第二實施方式的結(jié)構(gòu)圖；
圖3為本發(fā)明第三實施方式的結(jié)構(gòu)圖；
具體實施方式
下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明進行進一步詳細說明。 第一實施方式
如圖1所示的將貼壁動物細胞從微載體上分離的裝置，包括第一容器l，第一容器 1的容器口上設(shè)有密封塞2，在密封塞2上插有出料管3和輸出管4，出料管3的下端插入到 第一容器1的底部，另一端連接有泵5，輸出管4的一端連接泵5，另一端對著第一容器1的 內(nèi)側(cè)壁上。
利用這種分離裝置的分離方法為
(1)用泵5將長滿動物細胞的微載體從第一容器經(jīng)出料管4抽出并通過輸出管4 使長滿動物細胞的微載體撞擊所述第一容器1的內(nèi)壁，動物細胞和微載體重新流入到第一 容器l內(nèi)；
(2)觀察動物細胞與微載體的分離情況，如果動物細胞與微載體已經(jīng)分離，則使泵 5停止工作；如果動物細胞與微載體沒有完全分離，則繼續(xù)上述的(1)步驟直到動物細胞與 微載體完全分離為止。
這種分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離 時不容易損傷，完全分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對貼壁動物細 胞從微載體上分離的情況進行觀察一次，當完全分離后，就停止撞擊過程，因此，能夠及時 跟蹤到貼壁動物細胞的分離情況，避免因貼壁動物細胞完全分離后繼續(xù)進行撞擊而浪費時 間。
這種結(jié)構(gòu)的分離裝置，結(jié)構(gòu)簡單，成本低。 第二實施方式
如圖2所示的將貼壁動物細胞從微載體上分離的裝置，包括第二容器11和第三容 器12，在第二容器11的容器口上設(shè)有密封塞13，在密封塞13上設(shè)有出料管14，出料管14 的下端插入到第二容器的底部；在密封塞13上還開設(shè)有進料口和進氣口，在進料口上設(shè)有 進料管15，在進氣口上設(shè)有進氣管16。在第三容器12內(nèi)設(shè)有出料管17，出料管14和出料 管17之間連接有管道18，在本實施方式中，管道18為硅膠管。 這種結(jié)構(gòu)的分離裝置結(jié)構(gòu)簡單，成本低。
利用這種分離裝置的分離方法為 1)、密封第二容器11;
2)、通過進氣管16向第二容器11內(nèi)加壓使得第二容器11內(nèi)的長滿動物細胞的微 載體經(jīng)第二容器上的出料管13、硅膠管和第三容器上的出料管17進入到第三容器12內(nèi)，在 進入第三容器時，長滿動物細胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊； 3)、從第三容器中取樣；
4)、觀察動物細胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種
8到生物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)；如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則將第二容器11上 的密封塞拆卸下來安裝到第三容器12的容器口上，通過第三容器密封塞上的進氣管對第 三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料管和第二容器 上的出料管返回到第二容器ll內(nèi)，在進入第二容器ll時，動物細胞和微載體與第二容器的 內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
5)、從第二容器11中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生物反 應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)，如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則重復(fù)上述的2) 、3) 、4)步驟 直到動物細胞從微載體上分離為止。
這種分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離 時不容易損傷，完全分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對貼壁動物細 胞從微載體上分離的情況進行觀察一次，當完全分離后，就停止撞擊過程，因此，能夠及時 跟蹤到貼壁動物細胞的分離情況，避免因貼壁動物細胞完全分離后繼續(xù)進行撞擊而浪費時 間。在分離時，由于表面上有貼壁動物細胞的微載體是從一個容器進入到另一個容器，經(jīng)前 撞擊的貼壁動物細胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動物細胞的微載體不會出現(xiàn)混合，因 此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動物細胞的分離情況。 第三實施方式
如圖3所示的將貼壁動物細胞從微載體上分離的裝置，包括第二容器11和第三容 器12，在第二容器11的容器口上設(shè)有密封塞13，在密封塞13上設(shè)有出料管14，出料管14 的下端插入到第二容器的底部；在密封塞13上還開設(shè)有進料口和進氣口，在進料口上設(shè)有 進料管15，在進氣口上設(shè)有進氣管16。在第三容器12的容器口上設(shè)有密封塞20，在密封塞 20上設(shè)有出料管17，出料管17的下端插入到第三容器的底部；在密封塞20上還開設(shè)有進 料口和進氣口 ，在進料口上設(shè)有進料管21 ，在進氣口上設(shè)有進氣管22，出料管13和出料管 17之間連接有管道18，在本實施方式中，管道18為硅膠管。 這種結(jié)構(gòu)的分離裝置結(jié)構(gòu)簡單，成本低。
利用這種分離裝置分離的方法為
①、使第二容器11處于密封狀態(tài)下；
②、通過第二容器11上的密封塞上的進氣管16向第二容器11內(nèi)加壓使得第二容 器11內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第二容器11上的出料管14和第三容器上的出料管17 進入到第三容器12內(nèi)，在進入第三容器時，長滿動物細胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生 撞擊；
③、從第三容器12中取樣；
、觀察動物細胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種 到生物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)；如果動物細胞和微載體沒有完全分離，通過第三容器密封 塞上的進氣口對第三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第三容器上的 出料管和第二容器上的出料管返回到第二容器內(nèi)，在進入第二容器時，動物細胞和微載體 與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
⑤、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)，如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則重復(fù)上述的②、③、④步驟直到 動物細胞從微載體上分離為止。
這種分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動物細胞從微載體上分離，不會 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進行，因此，貼壁動物細胞分離 時不容易損傷，完全分離所需要的時間短；由于貼壁動物細胞和微載體是通過撞擊力來實 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動物細胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對貼壁動物細 胞從微載體上分離的情況進行觀察一次，當完全分離后，就停止撞擊過程，因此，能夠及時 跟蹤到貼壁動物細胞的分離情況，避免因貼壁動物細胞完全分離后繼續(xù)進行撞擊而浪費時 間。在分離時，由于表面上有貼壁動物細胞的微載體是從一個容器進入到另一個容器，經(jīng)前 撞擊的貼壁動物細胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動物細胞的微載體不會出現(xiàn)混合，因 此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動物細胞的分離情況。
權(quán)利要求
一種動物細胞的分離方法，其特征在于使具有流速的貼有動物細胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊，使動物細胞從微載體上分離。
2. 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的動物細胞的分離方法，其特征在于貼有動物細胞的微載體 與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為(1) 用泵將長滿動物細胞的微載體從第一容器經(jīng)出料管抽出并通過輸出管使長滿動物 細胞的微載體撞擊第一容器的內(nèi)壁，使動物細胞和微載體重新流入到第一容器內(nèi)；(2) 觀察動物細胞與微載體的分離情況，如果動物細胞與微載體已經(jīng)分離，則使泵停止 工作；如果動物細胞與微載體沒有完全分離，則繼續(xù)上述的(1)步驟直到動物細胞與微載 體完全分離為止。
3. 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的動物細胞的分離方法，其特征在于貼有動物細胞的微載體 與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為1、準備兩個容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在密封塞 上安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在密封塞上還開設(shè)一個進料口和 進氣口 ；第三容器內(nèi)插入一根出料管，出料管插入到第三容器的底部；n、使第二容器處于密封狀態(tài)下；ni、通過進氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)長滿動物細胞的微載體經(jīng)第二容器上的出料管和第三容器上的出料管進入到第三容器內(nèi)，在進入第三容器時，長滿動物細 胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；IV、 從第三容器中取樣；V、 觀察動物細胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生 物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)；如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則將第二容器上的密封 塞拆卸下來安裝到第三容器的容器口上，通過第三容器密封塞上的進氣口對第三容器加 壓，使得第三容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料管和第二容器上的出 料管返回到第二容器內(nèi)，在進入第二容器時，動物細胞和微載體與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞 擊；VI、 從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)，如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則重復(fù)上述的ni、iv、v步驟直到動物細胞從微載體上分離為止。
4. 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的動物細胞的分離方法，其特征在于貼有動物細胞的微載體 與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為① 、準備兩個容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在第二 容器的密封塞安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在第二容器的密封塞 上還開設(shè)一個進料口和進氣口 ；在第三容器的容器口上安裝密封塞，在第三容器密封塞安 裝一根出料管，第三容器的出料管插入到第三容器的底部，在第三容器的密封塞上還開設(shè) 一個進料口和進氣口；② 、使第二容器處于密封狀態(tài)下；③ 、通過第二容器上的密封塞上的進氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第二容器上的出料管和第三容器上的出料管進入到第三容器內(nèi)，在進入 第三容器時，長滿動物細胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；④ 、從第三容器中取樣；⑤ 、觀察動物細胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生 物反應(yīng)器中進行細胞培養(yǎng)；如果動物細胞和微載體沒有完全分離，通過第三容器密封塞上 的進氣口對第三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長滿動物細胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料 管和第二容器上的出料管返回到第二容器內(nèi)，在進入第二容器時，動物細胞和微載體與第 二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；⑥ 、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動物細胞接種到生物反應(yīng)器中進 行細胞培養(yǎng)，如果動物細胞和微載體沒有完全分離，則重復(fù)上述的③、④、⑤步驟直到動物 細胞從微載體上分離為止。
5. —種實現(xiàn)權(quán)利要求
1分離方法的分離裝置，其特征在于包括第一容器，所述第一容 器上設(shè)有出料管，出料管的一端伸入到第一容器的底部，另一端連接有泵；所述泵上連接有 輸出管，輸出管的輸出端通過容器口伸入到第一容器內(nèi)，且對著第一容器的容器壁。
6. —種實現(xiàn)權(quán)利要求
1分離方法的分離裝置，其特征在于包括第二容器和第三容器， 所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封塞上設(shè)有出料管，出料管伸入 到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進料口和進氣口 ；所述的第三容器內(nèi)設(shè) 有出料管，所述第二容器上的出料管與第三容器上的出料管相連通。
7. 根據(jù)權(quán)利要求
6所述的分離裝置，其特征在于所述第二容器上的出料管和第三容 器上的出料管通過管道相連通。
8. —種實現(xiàn)權(quán)利要求
l分離方法的分離裝置，其特征在于包括第二容器和第三容器， 所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封塞上設(shè)有出料管，出料管伸入 到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進料口和進氣口 ；所述的第三容器的容 器口上設(shè)有密封塞，第三容器上的密封塞上設(shè)有出料管，第三容器上的出料管伸入到第三 容器的底部，在第三容器的密封塞上還設(shè)有進料口和進氣口 ；所述第二容器上的出料管與 第三容器上的出料管相連通。
9. 根據(jù)權(quán)利要求
8所述的分離裝置，其特征在于所述第二容器上的出料管和第三容 器上的出料管通過管道相連通。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種動物細胞的分離方法及其分離裝置，涉及到貼壁動物細胞的分離，本發(fā)明的分離方法為使具有流速的貼有細胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊，使得動物細胞從微載體上分離。利用本發(fā)明的分離方法和分離裝置，貼壁動物細胞容易從微載體上分離，貼壁動物細胞分離時不容易損傷，貼壁動物細胞從微載體上完全分離所需要的時間短。
文檔編號C12N5/07GKCN101775364SQ201010121423
公開日2010年7月14日 申請日期2010年3月5日
發(fā)明者伍活鐮, 尹順義 申請人:廣州齊志生物工程設(shè)備有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan