專(zhuān)利名稱(chēng)：:通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚樣品中的皮膚蛋白質(zhì)的直接分析的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及測(cè)定通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚量的方法。更具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及直接分析通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚樣品中蛋白質(zhì)的方法，用于確定反映取下皮膚量的蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。另外，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種直接分析膠帶剝離獲得的皮膚樣品中蛋白質(zhì)的方法，以將獲得的蛋白質(zhì)測(cè)量值與相應(yīng)的皮膚膽固醇測(cè)量值進(jìn)行組合，來(lái)鑒定有動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)的個(gè)體、以及有發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化和與高膽固醇水平有關(guān)或由于其引起的類(lèi)似疾病之危險(xiǎn)的個(gè)體。如所述，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種直接分析通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚樣品中蛋白質(zhì)的方法，以將獲得的蛋白質(zhì)測(cè)量值和相應(yīng)的皮膚膽固醇測(cè)量值進(jìn)行組合，來(lái)鑒定有動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)的個(gè)體、以及有發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化和與高膽固醇水平有關(guān)或由于其引起的類(lèi)似疾病之危險(xiǎn)的個(gè)體。許多研究已顯示，動(dòng)脈粥樣硬化及其并發(fā)癥，如心臟病發(fā)作和休克，在幾乎世界上所有的國(guó)家都是發(fā)病和死亡的主要原因。成本合算的預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化就需要確定一個(gè)人是否有患動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)，從而采取治療措施并改變其生活方式。確定哪些人屬于高風(fēng)險(xiǎn)人群雖然是期望的目標(biāo)，但要選擇確定一個(gè)人是否有患病風(fēng)險(xiǎn)的最佳方法卻是困難的。一種確定一個(gè)人是否有患動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)的被廣泛使用的方法是測(cè)定靜脈血漿中的總膽固醇水平(ConsensusConferenceonLoweringBloodCholesteroltoPreventHeartDisease,JAMA，1985，253，第2080頁(yè))。如果患者的膽固醇水平超過(guò)240mg/dL，那么這個(gè)患者就被認(rèn)為有高風(fēng)險(xiǎn)，最近有人提議將此閾值降低到更低的水平。然而，單純憑總膽固醇指標(biāo)無(wú)法精確地預(yù)測(cè)患者的患病風(fēng)險(xiǎn)。更好的預(yù)測(cè)方法是分析血漿脂蛋白；尤其有利的是測(cè)定低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)月旦固醇水平(TotalandHighDensityLipoproteinCholesterolintheSerumandRiskofMortality,BritishMedicalJournal,1985，290，第1239-1243頁(yè))。利用上述方法雖然有其優(yōu)點(diǎn)，但是這種方法需要在禁食一段時(shí)間后采集血液樣本。而且，采血令人不舒服，有感染的風(fēng)險(xiǎn)，分析血漿脂蛋白和膽固醇水平復(fù)雜而昂貴。另外，研究表明，血漿分析并不能完整反映膽固醇在動(dòng)脈壁和其他組織內(nèi)的累積過(guò)程。在許多情況下，血漿膽固醇水平和完整的脂質(zhì)檢測(cè)(lipidprofile)都與動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)。膽固醇水平的升高既發(fā)生在組織內(nèi)，也發(fā)生在血漿中，研究表明組織膽固醇在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中起主導(dǎo)作用?，F(xiàn)已證實(shí)，組織(包括皮膚)以與動(dòng)脈壁相同的方式累積膽固醇，研究表明動(dòng)脈壁和皮膚內(nèi)的膽固醇含量呈密切相關(guān)關(guān)系。例如，從凍干的皮膚樣本中提取膽固醇，利用傳統(tǒng)的化學(xué)和生物化學(xué)技術(shù)測(cè)定(NikitinY.P.，GordienkoI.A.，DolgovA.V.，F(xiàn)ilimonovaT.A."Cholesterolcontentintheskinanditscorrelationwithlipidquotientintheseruminnormalsandinpatientswithischemiccardiacdisease",Cardiology,1987，II，第10期，第48-51頁(yè))。這種方法雖然有用，但是很復(fù)雜，用于大規(guī)模的人群篩選時(shí)是很痛苦的。美國(guó)專(zhuān)利No.4,458,686描述了一種在皮膚之下或其表面上直接定量測(cè)定血液中各種化合物的方法。該方法的根據(jù)是利用電化學(xué)方法，如通過(guò)極譜分析法，測(cè)定氧濃度的變化。如果使用的是不會(huì)透過(guò)皮膚擴(kuò)散的非揮發(fā)性物質(zhì)，就需要在皮膚下植入酶以影響皮膚表面氧的變化。該專(zhuān)利還公開(kāi)了使用膽固醇氧化酶通過(guò)該方法定量測(cè)定膽固醇含量的可能性。由于該方法需要復(fù)雜的設(shè)備和操作過(guò)程，因而需要高技能的人員來(lái)完成測(cè)定，從而限制了該方法用于篩選大量的人群。皮膚膽固醇含量的測(cè)定可用于確定動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室分析方法分析皮膚活檢樣品就可以完成。但是，在采集皮膚樣品時(shí)是很痛苦的，并且采樣點(diǎn)有感染的風(fēng)險(xiǎn)。另外，該方法還有一個(gè)缺點(diǎn)，那就是較厚的皮膚標(biāo)本包括幾層皮膚，有最外面的角質(zhì)層、表皮和真皮。由于真皮層是高度血管化的，因此皮膚活檢樣品含有血管和血管成分。還可能含有汗腺和皮脂腺及其所包含的分泌物。另外，真皮下就是皮下脂肪，皮下脂肪也可能污染標(biāo)本。因此，皮膚活檢標(biāo)本成分復(fù)雜，在分析皮膚的膽固醇含量時(shí)會(huì)得到不真實(shí)的數(shù)據(jù)。美國(guó)專(zhuān)利No.5,489,510描述了一種視覺(jué)判斷皮膚膽固醇含量的非侵入性方法，該方法使用了一種含有特異性膽固醇結(jié)合組分的試劑和一種含有指示劑組分的試劑，后者可根據(jù)是否存在與皮膚膽固醇結(jié)合的組分來(lái)顯示可見(jiàn)的顏色變化。該方法克服了以前方法的許多缺點(diǎn)，滿(mǎn)足了簡(jiǎn)單的群體篩選以鑒定個(gè)體是否具有動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)的目標(biāo)。該方法可在手掌皮膚上直接測(cè)定，雖然簡(jiǎn)單而快捷，但是需要所有接受檢測(cè)的人都要到進(jìn)行檢測(cè)的醫(yī)生辦公室或診所去檢測(cè)。這也會(huì)限制進(jìn)行大規(guī)模篩選?，F(xiàn)在已經(jīng)有方法可以測(cè)定皮膚的溶劑直接提取物中角質(zhì)層的脂質(zhì)(包括膽固醇)摩爾比例，(NorlenL.等，J.Invest.Dermatology72-77，112，1999)。高效液相色譜(HPLC)和氣液色譜與質(zhì)譜聯(lián)用可用于分離和分析脂質(zhì)。這種分析方法很復(fù)雜，而且更重要的是，使用有腐蝕性且刺激的有機(jī)溶劑系統(tǒng)提取人皮膚對(duì)于常規(guī)的測(cè)定方法來(lái)說(shuō)是不切實(shí)際的。利用膠帶剝離方法來(lái)確定皮膚角質(zhì)層的脂質(zhì)組成見(jiàn)A.Weerheim和M.Ponec(Arch.Dermatol.Res.，191-199，293，2001)的描述。在該研究中，在用膠帶粘貼皮膚再剝離后用溶劑從角質(zhì)層提取脂質(zhì)，其中包括膽固醇。所得到的脂質(zhì)提取物通過(guò)高效薄層色譜分離。該方法是很費(fèi)力的。需要三種連續(xù)的溶劑系統(tǒng)來(lái)完成脂質(zhì)的分離，需要用染色和焦化方法使組分顯色，還需要通過(guò)密度測(cè)定來(lái)確定脂質(zhì)的相對(duì)含量。該方法不是一種適于大樣本的膽固醇含量的簡(jiǎn)單快速測(cè)定方法。提供用于測(cè)定皮膚上膽固醇的簡(jiǎn)單高通量分析的裝置是一種用于皮膚采樣的粘膠帶裝置，它和其使用的新方法公開(kāi)于申請(qǐng)人共同待批的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào)US-2005-0272112-Al)，其內(nèi)容在此完整引入以供參考。該申請(qǐng)公開(kāi)的方法可用于從許多個(gè)體獲得許多皮膚樣品，從而能確定各個(gè)體的皮膚膽固醇水平并確定其動(dòng)脈粥樣硬化和相關(guān)心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。該專(zhuān)利申請(qǐng)的膠帶剝離裝置和方法提供了一種簡(jiǎn)單和成本合算的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分析法，它能用于大規(guī)模篩選。用粘膠帶通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚樣品中總膽固醇量與膠帶樣本的大小有關(guān)。因此，為了比較個(gè)體之間的皮膚膽固醇水平，必須分析和比較相同大小的樣本。這是通過(guò)使用一種膠帶剝離裝置實(shí)現(xiàn)的，該裝置能夠?qū)崿F(xiàn)在皮膚上貼上粘膠帶以獲得樣品時(shí)，獲得具有固定面積的膠帶片。一些獲得的膠帶可用于皮膚膽固醇分析。例如，通過(guò)將粘膠帶重復(fù)貼在皮膚上，使其沾滿(mǎn)皮膚，得到來(lái)自不同個(gè)體的具有穩(wěn)定大小的皮膚樣本。然后從裝置上切下具有固定大小的小"檢測(cè)片(dipstick)"或"圓片(disk)"，得到用于分析的具有穩(wěn)定面積的皮膚樣本。然而，在個(gè)體之間使用沾滿(mǎn)皮膚的固定面積的膠帶比較皮膚膽固醇水平并不一定能確保比較的皮膚量是相似的。當(dāng)從不同個(gè)體取樣時(shí)，在各膠帶上留下的皮膚總量可能是不同的。通過(guò)將皮膚膽固醇量與標(biāo)準(zhǔn)化的皮膚量聯(lián)系起來(lái)，可更好地比較來(lái)自不同個(gè)體的皮膚膽固醇水平。例如，用膠帶剝離裝置分析測(cè)定皮膚膽固醇的一個(gè)用途是為了申請(qǐng)人壽保險(xiǎn)的個(gè)人。測(cè)試保險(xiǎn)申請(qǐng)人的風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)(例如年齡、抽煙狀態(tài)、血壓等)是常規(guī)做法，能根據(jù)測(cè)試結(jié)果確定保險(xiǎn)費(fèi)用。由于皮膚膽固醇是患有或發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化或相似疾病的風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)，其值可影響保險(xiǎn)費(fèi)，樣本可以經(jīng)過(guò)處理，以支持結(jié)果。因此，需要確保獲得足夠分析皮膚膽固醇的皮膚樣本，從而分辨出故意少取樣，以產(chǎn)生較低皮膚膽固醇水平的"欺騙者"。因此，對(duì)于該用途，需要測(cè)量得到的用于皮膚膽固醇分析的皮膚量，以確保獲得了足夠的樣本，并能比較個(gè)體之間的皮膚膽固醇水平，以評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)狀態(tài)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種測(cè)定通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚量的方法。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種直接測(cè)定通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚中蛋白質(zhì)的方法，以將獲得的蛋白質(zhì)測(cè)量值與相應(yīng)的皮膚膽固醇測(cè)量值進(jìn)行組合，來(lái)鑒定有動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)的個(gè)體以及有發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化和與高膽固醇水平有關(guān)或由于其引起的類(lèi)似疾病之危險(xiǎn)的個(gè)體。另外，本發(fā)明還能夠比較性測(cè)量膠帶剝離獲得的皮膚量，該量不僅僅依賴(lài)于獲得樣品的面積。此外，在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的方法能根據(jù)獲得的皮膚的相對(duì)量比較皮膚膽固醇的相對(duì)水平。還理想的是，測(cè)定通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚樣本量的方法應(yīng)當(dāng)是簡(jiǎn)單而成本節(jié)約的，適合高通量處理，但和其它方法相容，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，這些方法例如但不限于通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚樣本中皮膚膽固醇的分析。特別是，本發(fā)明包括測(cè)定膠帶剝離獲得的皮膚量的方法，包括a)提供包括背襯件的膠帶，其中該膠帶至少有一面涂有醫(yī)用膠粘劑；b)將膠帶放置到皮膚的指定區(qū)域，使膠帶粘貼到該指定皮膚區(qū)域；C)從皮膚的指定區(qū)域剝離下膠帶，得到代表皮膚外角質(zhì)層的樣品，該樣本粘附到膠帶上，從而帶有暴露的皮膚組分；d)將蛋白染料加到樣本的預(yù)選表面區(qū)域上，使蛋白染料與其保持接觸一段時(shí)間，足以導(dǎo)致所述染料與存在于暴露的皮膚組分中的蛋白質(zhì)結(jié)合；和e)測(cè)定暴露的皮膚組分中染色的蛋白質(zhì)，以確定指示獲得的皮膚量的蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。蛋白染料可選自陰離子和酸性染料。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，蛋白染料是PonceauS染色劑。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，蛋白染料是考馬斯藍(lán)。另外，可測(cè)定暴露的皮膚組分中染色蛋白質(zhì)的強(qiáng)度，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。在一個(gè)實(shí)施例中，可用分光光度法測(cè)定染色的蛋白質(zhì)，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。在另一個(gè)實(shí)施例中，將蛋白質(zhì)量的測(cè)量值與預(yù)定的閾值水平比較。如果測(cè)得的蛋白質(zhì)量低于預(yù)定的閾值，可棄去樣本。另外，在本發(fā)明的另一個(gè)方面，背襯件可由聚酯制成。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，醫(yī)用膠粘劑可以是例如，但不限于，壓敏膠粘劑；丙烯酸基膠粘劑；合成橡膠彈性體膠粘劑；聚硅氧烷(silicone)基膠粘劑；或包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體。此外，本發(fā)明還包括了用于實(shí)施上述方法的試劑盒。該試劑盒包含-膠帶；禾卩-蛋白質(zhì)染料的來(lái)源。蛋白染料可選自陰離子和酸性染料。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，蛋白染料是PonceauS染色劑。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，蛋白染料是考馬斯藍(lán)。另外，在本發(fā)明的另一個(gè)方面，背襯件可由聚酯制成。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，醫(yī)用膠粘劑可以是例如，但不限于，壓敏膠粘劑；丙烯酸基膠粘劑；合成橡膠彈性體膠粘劑；聚硅氧垸基膠粘劑；或包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體。另外，在本發(fā)明的另一個(gè)方面，膠粘劑由一個(gè)可閉合的裝置攜帶，所述可閉合的裝置包括一個(gè)攜帶膠粘劑的采樣件和一個(gè)能與釆樣件嚙合并使膠粘劑保持在裝置內(nèi)的閉合件。當(dāng)閉合件與采樣件嚙合時(shí)，膠粘劑被密封在裝置內(nèi)。至少閉合件或采樣件可帶有邊框(peripheralrim)，閉合件或采樣件中的另一個(gè)可帶有容納邊框的邊槽(peripheralgroove),從而可將膠粘劑密封在裝置內(nèi)。此外，閉合件可通過(guò)絞鏈16連接采樣件。另外，至少一部分采樣件能從可閉合裝置上切下，以形成檢測(cè)片(dipstick)，檢測(cè)片的第一端上沒(méi)有膠粘劑，而第二端上有膠粘劑。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，至少一部分采樣件能從可閉合裝置上切下，以形成圓片，圓片的一面上有膠粘劑。通過(guò)使用從可閉合裝置切下的在一端具有膠粘劑的檢測(cè)片或圓片，可確定預(yù)定或固定的膠粘劑面積。因此，在從皮膚采樣后，檢測(cè)片或圓片具有與確定或預(yù)定面積的膠粘劑結(jié)合的皮膚樣本。另外，在本發(fā)明的另一個(gè)方面，可閉合采樣裝置的采樣件可具有，例如但不限于，預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的檢測(cè)片或圓盤(pán)，以預(yù)先確定膠粘劑的固定面積。此外，本發(fā)明的一個(gè)方面提供了一種比較來(lái)自許多個(gè)體的皮膚膽固醇相對(duì)水平的方法，包括a)用膠帶剝離獲得代表皮膚外角質(zhì)層的樣品，分析粘附在膠粘劑上的暴露的皮膚組分，以獲得個(gè)體的皮膚膽固醇水平，從而測(cè)定來(lái)自各個(gè)個(gè)體的皮膚膽固醇；b)將蛋白染料加到樣本的暴露皮膚組分的預(yù)定表面區(qū)域上，該區(qū)域與測(cè)定皮膚膽固醇的區(qū)域分開(kāi)，使蛋白染料與其保持接觸一段時(shí)間，足以導(dǎo)致所述染料與存在于暴露的皮膚組分中的蛋白質(zhì)結(jié)合；c)測(cè)定暴露的皮膚組分中染色的蛋白質(zhì)，以確定指示獲得的皮膚量的蛋白質(zhì)量的測(cè)量值；和d)用蛋白質(zhì)量的測(cè)量值對(duì)皮膚膽固醇測(cè)量值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。標(biāo)準(zhǔn)化可包括皮膚膽固醇測(cè)量值除以蛋白質(zhì)測(cè)量值。蛋白染料可選自陰離子和酸性染料。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，蛋白染料是PonceauS染色劑。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，蛋白染料是考馬斯藍(lán)。另外，可測(cè)定暴露的皮膚組分中染色蛋白質(zhì)的強(qiáng)度，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。在一個(gè)實(shí)施例中，可用分光光度法測(cè)定染色的蛋白質(zhì)，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。在另一個(gè)實(shí)施例中，將蛋白質(zhì)量的測(cè)量值與預(yù)定的閾值水平比較。如果蛋白質(zhì)量低于預(yù)定的閾值，可棄去樣本。另外，在本發(fā)明的另一個(gè)方面，背襯件可由聚酯制成。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，醫(yī)用膠粘劑可以是例如，但不限于，壓敏膠粘劑；丙烯酸基膠粘劑；合成橡膠彈性體膠粘劑；聚硅氧垸基膠粘劑；或包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體。申請(qǐng)人:教授的這些和其它特征如本文所述。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解下文所述的附圖僅是為了說(shuō)明。附圖并不以任何方式限制申請(qǐng)人教授內(nèi)容的范圍。圖l是具有選定反射率值的特定樣本的概率圖，來(lái)自xl、x3和xl0次剝離的樣本；圖2是具有570nm光密度(OD)值的特定樣本的概率圖，來(lái)自xl、x3和x10次剝離的樣本；圖3是實(shí)施例所使用的釆樣裝置的俯視圖；圖4是圖3所述采樣裝置的局部圖，顯示的是其采樣件的細(xì)節(jié)；圖5是從本發(fā)明的釆樣裝置上切下的檢測(cè)片的透視圖；圖6是可用于實(shí)施例的另一種采樣裝置的透視圖；；和圖7是從圖6所述的另一種實(shí)施方式的本發(fā)明采樣裝置上切下的圓盤(pán)的透視具體實(shí)施方式提供用于測(cè)定皮膚上膽固醇的簡(jiǎn)單高通量分析的裝置是一種用于皮膚采樣的粘膠帶裝置，如申請(qǐng)人的共同待批的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào)US-2005-0272112-A1)所公開(kāi)，其內(nèi)容在此完整引入以供參考。在本發(fā)明的一個(gè)方面，該申請(qǐng)公開(kāi)的方法可用于從許多個(gè)體獲得許多皮膚樣品，從而能確定各個(gè)體的皮膚膽固醇水平并確定其動(dòng)脈粥樣硬化和相關(guān)心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。該專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)的膠帶剝離裝置和方法提供了一種簡(jiǎn)單和成本合算的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分析法，它能用于大規(guī)模篩選。例如，使用含有由聚酯形成的背襯件的膠帶。膠帶的至少一個(gè)面上涂有醫(yī)用膠粘劑。本文所用的術(shù)語(yǔ)"醫(yī)用膠粘劑"是指用于皮膚時(shí)過(guò)敏性較低且安全的膠粘齊廿。這種膠粘劑優(yōu)選壓敏膠粘劑，例如，包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體的膠粘劑。正如大家所清楚的，現(xiàn)在有多種類(lèi)和類(lèi)型的膠粘劑?？傊m用于本發(fā)明的膠粘劑是上面所定義的、在用于皮膚采樣時(shí)一般不會(huì)發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的醫(yī)用膠粘劑。發(fā)明人試驗(yàn)了幾種類(lèi)型的膠粘劑來(lái)采集皮膚樣品；其中的大多數(shù)是丙烯酸基壓敏膠粘劑，但是也試驗(yàn)了幾種合成橡膠類(lèi)型的彈性體膠粘劑和聚硅氧烷基膠粘劑。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，由苯乙烯和丁二烯或苯乙烯和異戊二烯的嵌段聚合物制成的合成橡膠膠粘劑可用于很好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。合成橡膠膠粘劑的一個(gè)例子是基于苯乙烯和丁二烯嵌段聚合物的合成KratonTM型膠粘劑(不含膠乳)。這種膠粘劑具有良好的皮膚樣品穩(wěn)定性，有利于樣品的運(yùn)輸以便于隨后的分析?？捎糜诒景l(fā)明方法中的另一類(lèi)優(yōu)選粘膠帶是雙涂層的壓敏醫(yī)用級(jí)膠帶。這種醫(yī)用級(jí)膠帶的例子有3M(產(chǎn)品編號(hào)為弁9877)和AdhesiveResearch,Inc.(產(chǎn)品編號(hào)為弁8570)所出售的膠帶。發(fā)明人所試驗(yàn)的其他類(lèi)型的一些膠帶顯示在附表中。一個(gè)不變的要求是使用過(guò)敏性較低的醫(yī)用級(jí)膠帶。表I<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>應(yīng)當(dāng)理解的是，表l所列的粘膠帶并不是窮盡性的，僅僅描述了現(xiàn)有的適用于本發(fā)明的幾種不同粘膠帶，以及本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的其他粘膠帶。雙涂層的壓敏膠帶通常都帶有易于去掉的保護(hù)襯里。襯里可保護(hù)膠帶在襯里被去掉前不會(huì)粘貼，并且可防止膠粘劑受到污染。襯里可放置在雙涂層膠帶的每一面，或者膠帶只有一個(gè)襯里，并且膠帶纏繞在其自身上，這樣就可以保護(hù)兩個(gè)表面?？梢允褂镁哂胁煌弘x特性的襯里，這樣在第一面膠粘劑暴露時(shí)第二面膠粘劑還可以得到保護(hù)。具有不同襯里的雙涂層膠帶特別適用于皮膚采樣。去掉第一襯里后將膠帶粘貼到采樣裝置的背襯上，同時(shí)膠帶的皮膚采樣面還被第二襯里覆蓋。這個(gè)第二襯里可保護(hù)皮膚采樣的膠粘劑區(qū)域在其被使用前不會(huì)粘貼和被污染。當(dāng)需要進(jìn)行皮膚采樣時(shí)將第二襯里去掉。膠帶可以用到任何部位的皮膚上，但是最合適的部位是手掌的表明，因?yàn)槭终茮](méi)有皮脂腺，后者的分泌物含有膽固醇，可影響本發(fā)明某些方面，尤其是涉及測(cè)定膽固醇的那些方面的檢測(cè)結(jié)果。另外，手掌的皮膚易于采樣。能夠獲得均一量的皮膚樣品用于分析是我們所期望的。使用粘膠帶采樣通常并且常規(guī)地只在皮膚上粘貼一次膠帶。在皮膚上多次粘貼膠帶可以得到更多的角質(zhì)層材料。在皮膚上多粘貼一次膠帶就能使膠帶多粘附一些皮膚樣品。繼續(xù)這個(gè)過(guò)程直到膠帶上沾滿(mǎn)皮膚樣品，然后膠帶就變成沒(méi)有粘性的了。使膠帶沾滿(mǎn)皮膚樣品所需要的粘貼次數(shù)因所使用的膠粘劑類(lèi)型不同而不同，但是對(duì)于最常用的粘膠帶來(lái)說(shuō)，膠帶沾滿(mǎn)皮膚樣品所需的粘貼次數(shù)都少于10次，其中包括而不限于3到7次。在每次將膠帶從皮膚上剝離下來(lái)并重新粘貼時(shí)最好將膠帶粘貼到新的皮膚區(qū)域，這樣可以使膠帶更好更快地沾滿(mǎn)皮膚樣品。因此，為了達(dá)到均一而良好的采樣目的，最好用膠帶粘貼皮膚10次，每次都粘貼到新的區(qū)域。對(duì)于本發(fā)明的要測(cè)定皮膚膽固醇的方面，膠粘劑上的皮膚樣品內(nèi)所存在的膽固醇的總量與所得到的皮膚樣品的大小有關(guān)。另外，需要得到大小一致的皮膚樣品，從而可以比較不同個(gè)體之間皮膚膽固醇的相對(duì)水平。因此，可從裝置上切下檢測(cè)片，以呈現(xiàn)膠粘劑的固定區(qū)域(例如但不限于長(zhǎng)方形或圓形區(qū)域)，該區(qū)域上結(jié)合有通過(guò)膠帶剝離獲得的暴露的皮膚組分。這些檢測(cè)片能夠基于要分析的固定單位面積的皮膚來(lái)實(shí)現(xiàn)不同個(gè)體之間皮膚膽固醇水平的比較。作為從具有大面積膠帶或膠粘劑的裝置切割檢測(cè)片的替代手段，檢測(cè)片可以是，例如但不限于，預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的，從而能與裝置方便的分離。如上所述，這種預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的檢測(cè)片可在其一端確定固定或預(yù)定面積的膠帶或膠粘劑。采樣后，可從裝置上方便的取下這種預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的檢測(cè)片，它含有具有固定或預(yù)定面積的用于分析的皮膚樣本區(qū)域D通過(guò)下列步驟可以從不同個(gè)體上(或者從同一個(gè)體上重復(fù)采樣)得到大小一致的皮膚樣品。首先，如上所述，通過(guò)將膠粘劑重復(fù)粘貼到皮膚上獲得皮膚樣品，這樣膠粘劑就會(huì)沾滿(mǎn)皮膚樣品并且變得沒(méi)有粘性。膠粘劑在皮膚上粘貼約3到7次后就會(huì)沾滿(mǎn)皮膚樣品，一般來(lái)說(shuō)要重復(fù)粘貼IO次以確保膠粘劑沾滿(mǎn)皮膚樣品。其次，為了獲得用于檢測(cè)的恒定面積的皮膚樣品，從皮膚采樣裝置上取下一個(gè)固定大小的面積(如下文實(shí)施例描述的)，將其浸到標(biāo)準(zhǔn)體積的檢測(cè)試劑和指示劑中，如下文所描述的。皮膚外角質(zhì)層(stratumcomeum)主要由被含有膽固醇的脂質(zhì)混合物包圍的富含蛋白質(zhì)的角化細(xì)胞(comeocyte)組成。從結(jié)構(gòu)上說(shuō)，它常常被描述為"磚和灰漿"模型，其中角化細(xì)胞代表磚，周?chē)闹|(zhì)代表灰漿(P.M.Elias，JInvestDermatol.1983，80，44S-9S)。角質(zhì)層中蛋白質(zhì)量在不同個(gè)體之間是相對(duì)穩(wěn)定的；因此，膠帶剝離獲得的皮膚樣本中的蛋白質(zhì)可提供對(duì)獲得的皮膚量的間接測(cè)量。在本發(fā)明的一個(gè)方面，通過(guò)測(cè)定蛋白質(zhì)和因而獲得的皮膚樣本量，可確定獲得了足夠的皮膚樣本以用于皮膚膽固醇分析。另外，測(cè)出的皮膚膽固醇水平可與蛋白質(zhì)值比較，以獲得每單位蛋白水平的膽固醇值，和由此獲得每單位皮膚量的膽固醇。測(cè)定膠帶剝離獲得的皮膚樣本中蛋白質(zhì)的分析方法可使用，例如但不限于，考馬斯藍(lán)作為通用蛋白染料(例如，作為BioRadTM購(gòu)得的蛋白染料)。已顯示，考馬斯藍(lán)可用于定量估計(jì)固定在載體材料上的蛋白質(zhì)(S.FazekasdeSt.Groth等，BiochemicaEtBiophysicaActa,1863,71,377-391)?？捡R斯藍(lán)染料加到膠粘劑上的皮膚區(qū)域，在適當(dāng)染色一段時(shí)間后，洗去過(guò)量染料。然后通過(guò)測(cè)量膠粘劑上染上藍(lán)色的樣本的色度測(cè)定被染色的皮膚蛋白的強(qiáng)度，該強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的量成正比。測(cè)定被染色的皮膚樣本的相對(duì)強(qiáng)度(例如色度)使得通過(guò)膠帶剝離從個(gè)體獲得的皮膚樣本的相對(duì)量可進(jìn)行比較。采用下列測(cè)量法來(lái)確定膠帶剝離次數(shù)如何與獲得的皮膚量關(guān)聯(lián)，該皮膚量用Bio-Rad蛋白質(zhì)染色測(cè)定。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，這些測(cè)量法是用于確定獲得的皮膚量不足是否會(huì)影響皮膚膽固醇測(cè)試。因此，進(jìn)行分析，測(cè)定不同次數(shù)的膠帶剝離獲得的蛋白。具體說(shuō)，志愿者的手掌經(jīng)過(guò)膠帶剝離一次(l)、三次(3)和十次(10)，通過(guò)在用Bio-Rad蛋白質(zhì)染色試劑染色后，讀取色度和610nm處的反射率獲得蛋白質(zhì)水平。這些蛋白質(zhì)水平為獲得皮膚的程度和膠帶剝離的效率提供了一種量度。在該試驗(yàn)中，Bio-Rad蛋白測(cè)定是在從四十五(45)個(gè)志愿者中收集的樣本上進(jìn)行的。每個(gè)志愿者提供用一(l)、三(3)和十(10)次剝離獲得的皮膚樣本。在三個(gè)不同樣本組(標(biāo)為xl、x3和xl0)中，發(fā)現(xiàn)色度和610nm處的反射率之間良好相關(guān)。在線(xiàn)性最小平方回歸分析中，xl、x3和x10樣本的R2值分別為0.961、0.978和0.959。xl剝離樣本(11=45)的平均色度值為11.07，sdl.83,CV16.3%;x3剝離樣本(11=44)的平均色度值為15.46，sd2.32，CV17.3%;x10剝離樣本(n-44)的平均色度值為23.50，sd1.06，CV4.6%。xl剝離樣本(n-45)的平均反射率為55.69，sd2.95，CV5.6%;x3剝離樣本(n-44)的平均反射率為48.07，sd3.08，CV6.4%;xl0剝離樣本(r^44)的平均反射率為36.19，sd1.48，CV4.1%。每組之間有顯著的差異。對(duì)每組中具有某反射率(610nm)值的特定樣本幾率進(jìn)行分析，結(jié)果示于圖1。該分析表明，93.2%的x10剝離樣本具有<45的反射率值，36.4%的x3剝離樣本具有<45的反射率值，而僅4.4%的xl剝離樣本具有<45的反射率值。此外，77.3%的x10剝離樣本具有<40的反射率值，11.4%的x3剝離樣本具有<40的反射率值，而僅2.2%的xl剝離樣本具有<40的反射率值。發(fā)現(xiàn)使用<45的截止值(cut-offvalue)作為充分剝離的可接受條件(acceptancecriterion)會(huì)排斥6.8%的10次剝離獲得的樣本。使用<45的截止值作為充分剝離的可接受條件會(huì)排斥63.6%的3次剝離獲得的樣本和95.6%的僅1次剝離獲得的樣本。雖然考馬斯藍(lán)染色法運(yùn)作良好，但它需要能閱讀色度值的反射分光光度計(jì)。此外，它需要分別對(duì)每個(gè)染色的樣本進(jìn)行讀數(shù)，而皮膚膽固醇分析法可使用96孔微量滴定板，適合處理大量樣本。已開(kāi)發(fā)了一種能夠容易地測(cè)定皮膚樣本上的蛋白質(zhì)量(如需要，同時(shí)能對(duì)許多皮膚樣本進(jìn)行測(cè)定)的實(shí)驗(yàn)。另外，這種實(shí)驗(yàn)?zāi)苡萌菀撰@得的分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)，例如96-孔讀數(shù)分光光度計(jì)，而不是單樣本色度測(cè)量。這種方法是基于PonceauS染色(即與蛋白質(zhì)(例如但不限于堿性氨基酸殘基)結(jié)合的陰離子或酸性染料的普通種類(lèi)中的一員)。PonceauS染料與蛋白質(zhì)結(jié)合，用于組織的組織化學(xué)染色，也用作硝基纖維素結(jié)合的蛋白質(zhì)的可逆膜染色(O.Salinovich和R.C.Montelaro，Anal.Biochem.1986,156,341-347)。該方法使得被染色的蛋白質(zhì)在膜上變得可見(jiàn)，然后，在除去染料后能進(jìn)一步確定蛋白質(zhì)特征，而不受到任何結(jié)合的染料的影響。對(duì)于本發(fā)明進(jìn)一步開(kāi)發(fā)了PonceauS法(如下文將會(huì)解釋的)，顯示可對(duì)膠帶剝離獲得的皮膚樣本進(jìn)行染色，在洗滌皮膚樣本后，可洗脫染料，并用分光光度法定量。PonceauS特別良好地對(duì)角蛋白進(jìn)行染色，而角蛋白是膠帶剝離獲得的皮膚角質(zhì)層中主要的蛋白質(zhì)。盡管事實(shí)上IO次粘貼導(dǎo)致膠粘劑飽和(即喪失粘性)，結(jié)果顯示不同的個(gè)體得到了不同的皮膚量。雖然個(gè)體之間有輕微不同水平的角蛋白和其它皮膚蛋白質(zhì)，發(fā)明人相信，觀(guān)察到的差異不是由此引起的。例如，不同個(gè)體可能在測(cè)定的蛋白質(zhì)水平中有幾倍的差異，但對(duì)于本發(fā)明獲得的皮膚樣本而言，角化細(xì)胞的蛋白質(zhì)水平不出意外改變量不會(huì)這么大。發(fā)明人相信，差異更可能是由于在膠帶剝離過(guò)程中獲得的皮膚總量不同。從某些個(gè)體似乎在2-4次剝離后就沾滿(mǎn)了膠粘劑，而其它需要6-8次剝離來(lái)沾滿(mǎn)膠粘劑也暗示是這樣。這提示獲得了不同的皮膚量。在本發(fā)明的一個(gè)方面，膠帶剝離獲得的皮膚膽固醇測(cè)量值常用于測(cè)定冠動(dòng)脈疾病和相關(guān)不良血栓事件的風(fēng)險(xiǎn)，這在保險(xiǎn)業(yè)特別有用。需對(duì)人壽保險(xiǎn)的申請(qǐng)人評(píng)估各種風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)(例如年齡、抽煙狀態(tài)、血壓等)，保險(xiǎn)金基于總風(fēng)險(xiǎn)。由于皮膚膽固醇是風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)，其值可影響保險(xiǎn)金，樣本可能經(jīng)過(guò)處理，以支持結(jié)果。因此，測(cè)定蛋白質(zhì)水平的進(jìn)一步優(yōu)點(diǎn)在于確保獲得足夠樣本(即高于預(yù)定閾值)，從而分辨出故意少取樣，以產(chǎn)生較低皮膚膽固醇水平的"欺騙者"。為了確保獲得足夠的皮膚樣本以測(cè)定皮膚膽固醇，確定了皮膚蛋白質(zhì)的最小閾值水平。該最小閾值水平是通過(guò)分析許多皮膚樣本和測(cè)定蛋白質(zhì)值的分布范圍確定的。準(zhǔn)備單次膠帶剝離或多次膠帶剝離(包括飽和剝離，即10次膠帶剝離)獲得的皮膚樣本的分布范圍。從這些分布范圍可選擇一個(gè)閾值極限，從而可確定特定樣本的蛋白質(zhì)值是在預(yù)定人群極限范圍內(nèi)的可能性。理想狀態(tài)下，應(yīng)有一個(gè)閾值，它能使所有用IO次膠帶剝離的所有樣本都能和用一次膠帶剝離，或也可與例如三次膠帶剝離獲得的樣本完全區(qū)分開(kāi)。在實(shí)踐中，分布曲線(xiàn)重疊，這是由于個(gè)體在膠帶剝離時(shí)釋放皮膚不同，完全分辨是不可能的。不過(guò)，仍可選擇閾值，使得高百分?jǐn)?shù)的10次膠帶剝離獲得的樣本與大部分單次膠帶剝離獲得的樣本區(qū)分開(kāi)。例如，選擇一個(gè)基于IO次膠帶剝離的閾值水平是有用的，例如98%的人群具有高于該水平的值，而平均100個(gè)分析的樣本中有2個(gè)樣本會(huì)被作為不充分樣本而被拒絕。然而，該閨值水平應(yīng)當(dāng)確保單次膠帶剝離獲得的大部分樣本不具有足夠蛋白質(zhì)，并被拒絕。這些給出低于預(yù)定閾值水平的值的膠帶剝離被認(rèn)為皮膚樣本不足以可靠地進(jìn)行皮膚膽固醇測(cè)定。為了確定膠帶剝離次數(shù)是如何與PonceauS蛋白染色測(cè)定的獲得的皮膚量聯(lián)系起來(lái)的，進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。為了觀(guān)察獲得的皮膚量是如何隨進(jìn)行的膠帶剝離次數(shù)改變的，從50個(gè)志愿者(N-50)手掌通過(guò)一(1)、三(3)和十(10)次剝離獲得皮膚樣本，用PonceauS染料溶液染色后，測(cè)定蛋白質(zhì)水平。蛋白質(zhì)水平是基于從被染色的皮膚樣本上洗脫下來(lái)的染料的光密度讀數(shù)。分析結(jié)果，以確定值是否正常分布，并測(cè)定是否可確立截止值，以分辨用特定次數(shù)的膠帶剝離獲得的樣本。從50個(gè)志愿者獲得xl、x3、xlO次剝離的樣本(結(jié)果僅反映了49個(gè)樣本的完整數(shù)據(jù))。xl剝離(11=50)的平均光密度為0.078，平均CV13.0%;x3剝離(n-450的平均光密度為0.131，平均CV12.3%;x10剝離(11=49)的平均光密度為0.263，平均CV12.0%。用Anderson-Darling或S叩iro-Wilk測(cè)試分析表明，數(shù)據(jù)有非正態(tài)分布。對(duì)每組具有光密度(OD)570nm值的特定樣本的幾率進(jìn)行分析，示于圖2。該分析表明，98%的x10剝離樣本具有>0.1的OD570nm值，60%的x3剝離樣本具有>0.1的OD570nm值，而僅18%的xl剝離樣本具有>0.1的OD570nm值。因此，選擇>0.1的OD的截止值作為充分剝離的可接受條件會(huì)排斥2%的10次剝離獲得的樣本，40%的3次剝離獲得的樣本和82%的僅1次剝離獲得的樣本。還可用蛋白水平來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化(normalize)皮膚膽固醇水平，該水平會(huì)隨著不同皮膚樣本而改變。例如，提供小皮膚樣本，但具有高皮膚膽固醇水平的個(gè)人可能會(huì)給出與具有低皮膚膽固醇水平但提供大皮膚樣本的個(gè)人的值相似。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化到恒定蛋白質(zhì)水平，可以將這兩個(gè)個(gè)體區(qū)分為具有高和低膽固醇水平。標(biāo)準(zhǔn)化可涉及將膽固醇水平除以蛋白質(zhì)水平的樣本操作；這有效的給出了每單位蛋白質(zhì)的膽固醇水平。實(shí)施例下列實(shí)施例會(huì)有助于進(jìn)一步了解申請(qǐng)人公開(kāi)內(nèi)容的各方面，這不應(yīng)被視為以任何方式限制本公開(kāi)內(nèi)容的范圍。采用圖3所示的采樣裝置。采樣裝置一般用參考數(shù)字10表示，它是由塑料(聚丙烯)制成的，包括通過(guò)整合絞鏈16連接到閉合件14的采樣件12。閉合件14帶有邊框18和四個(gè)釘20，分別鎖定到采樣件12的邊槽22和四個(gè)孔24內(nèi)。折疊絞鏈16使邊框18和邊槽22嚙合、釘20與孔24嚙合，從而保證裝置10的兩個(gè)部分閉合密封，防止灰塵和內(nèi)表面被污染。閉合件14的外表面(圖3和4中未顯示)有平坦區(qū)用于粘貼標(biāo)記和條形碼，以便于樣品識(shí)別。采樣件12和閉合件14分別帶有用于打開(kāi)裝置10的手柄(fmgertab)26和28。雙涂層壓敏醫(yī)用膠帶30帶有牛皮紙制成的保護(hù)性剝離襯里32，是3M的產(chǎn)品，產(chǎn)品編號(hào)為#9877，膠帶30被粘貼到采樣件12的中央?yún)^(qū)域。剝離襯里32比粘膠帶30寬，這樣在襯里32的一邊就形成一個(gè)不與膠帶粘貼的條帶32，，襯里的這個(gè)條帶32'懸垂在裝置的邊上形成易于將襯里剝離的手柄(tab)。在使用前，捏住懸垂的手柄32'將襯里32撕下，暴露出膠帶30上的膠粘劑，進(jìn)行皮膚采樣。清洗供采樣的手掌皮膚區(qū)域并使其干燥。將有暴露的膠粘劑的膠帶30粘貼到手掌上。在采樣件12的背面粘貼區(qū)域施加壓力將膠帶30按壓到皮膚上，使其與角質(zhì)層粘貼在一起。然后將裝置10撕下，再粘貼到手掌的另一個(gè)區(qū)域，再次按壓到皮膚上。以這種方式重復(fù)撕下裝置然后粘貼到皮膚上，總共進(jìn)行10次。在完成皮膚粘貼過(guò)程以后從裝置10上切下約5mm寬的小檢測(cè)片40(見(jiàn)圖5)。如圖4所示，沿邊槽22將采樣件12鄰近手柄26的一端切下。沿采樣件12上模壓的指導(dǎo)線(xiàn)36(如圖4所示)切割三次得到5mm的檢測(cè)片，切割從邊上開(kāi)始直到剛剛越過(guò)中心線(xiàn)。沿著件12上模壓的指導(dǎo)線(xiàn)38跨過(guò)件12的中央進(jìn)行第三次切割就可以從采樣件12上切下5mm寬的檢測(cè)片。檢測(cè)片40包括無(wú)膠帶的第一端42和帶有膠帶的第二端44，后者有皮膚樣品粘附其上。與從具有大面積膠帶或膠粘劑的裝置10上切下檢測(cè)片40的模式不同，檢測(cè)片40可具有預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的指導(dǎo)線(xiàn)36和38，從而能使檢測(cè)片40與裝置10方便的分離。不論是切割、預(yù)先切開(kāi)、或預(yù)先刻痕的檢測(cè)片都可在第二端部分44確定固定或預(yù)定面積的膠帶或膠粘劑。從而在采樣后，從裝置10上取下檢測(cè)片40，它含有固定或確定面積的要分析的皮膚樣本區(qū)域。與檢測(cè)片40不同，圖6顯示了能用于取下圓片50(如圖7所示)的切割工具60。圓片50在其一個(gè)面52上帶有粘附到采樣裝置10的粘膠帶30上的皮膚樣品。如圖所示，當(dāng)裝置10處于如圖所示的折疊狀態(tài)(閉合)時(shí)，可用切割工具60從裝置10上切下圓片。將閉合的裝置放置到堅(jiān)硬的表面上(圖中未顯示)，裝置10的采樣件12的外表面62朝上。將切割工具60插到圓形凹陷64上，64位于裝置10的采樣件12的外表面62上，然后壓下切割工具60，切過(guò)塑料層和膠帶30/皮膚樣品。但是不要將切割工具60壓得太厲害，以免切過(guò)裝置10閉合件14的塑料層。與從裝置IO切下圓片50不同，可預(yù)先切割或預(yù)先對(duì)圓片50進(jìn)行刻痕(例如但不限于在圓形凹陷邊界上)，使得圓片50能夠和裝置10輕易分開(kāi)。然而和檢測(cè)片一樣，不論圓片是切割、預(yù)切割、或預(yù)先刻痕，它都確定具有固定或確定面積的膠帶或膠粘劑的面52。因此，在采樣后，可從裝置10取下圓片50，它含有固定或確定的皮膚樣本區(qū)域用于分析。用圖5的檢測(cè)片40繼續(xù)實(shí)施例，將要分析的檢測(cè)片放置到96孔微孔板的孔中(未顯示)，每孔約含150uLPonceauS染色試劑的溶液(例如，SigmaAldrichCanadaLtd.提供的產(chǎn)品P7170)。在室溫下使檢測(cè)片在溶液中浸泡約15分鐘，然后將其取出放置到微孔板的新孔中，每孔約含200yL水洗滌溶液。振蕩微孔板以提高洗滌效果，約1分鐘后將檢測(cè)片取出放置到微孔板的新孔中，每孔約含200uL新鮮的水洗滌溶液，再振蕩約l分鐘。振蕩洗滌第3次，第3次洗滌后，通過(guò)溫和的用吸水紙(至于清潔平面上)吸水除去檢測(cè)片底部殘留的任何洗液液滴。然后將檢測(cè)片置于含有約O.IN氫氧化鈉溶液的孔中，從檢測(cè)片上洗脫結(jié)合的染色試劑。在微孔中振蕩檢測(cè)片約5分鐘，取出檢測(cè)片，通過(guò)測(cè)定溶液在550-570nm處的吸光度測(cè)定洗脫的染料量。為了使許多樣品可以被一起處理，需要將檢測(cè)片40切成與標(biāo)準(zhǔn)96孔(8X12)微孔板的孔相匹配的統(tǒng)一形狀?，F(xiàn)有的設(shè)備可用于將試劑加入到微孔板的孔中，并且可以洗滌這些孔，有一個(gè)要求是要避免各分析步驟之間有試劑殘留。利用現(xiàn)有的分光光度計(jì)在試驗(yàn)的最后一步可以直接閱讀孔內(nèi)的有色溶液。這是通過(guò)使用定制的固定物實(shí)現(xiàn)的，這些固定物將多達(dá)96個(gè)檢測(cè)片保持在正確朝向和位置，從而使其適合標(biāo)準(zhǔn)96孔微量滴定板。固定物使得多達(dá)96個(gè)一組的檢測(cè)片能夠在分析的每一步中作為一組一起被取出置于新的孔中。然后用如上所述對(duì)于單個(gè)檢測(cè)片分析相同的試劑和方法處理一組檢測(cè)片。除了上面的蛋白質(zhì)測(cè)定，在本發(fā)明的一個(gè)方面，可從裝置上切下另外的檢測(cè)片，用于檢測(cè)皮膚膽固醇量。為了測(cè)定皮膚膽固醇量，將每個(gè)檢測(cè)片放置到96孔微孔板的孔中(未顯示)，每孔約含IOOiiLA-C-B試劑的溶液。該試劑是毛地黃皂苷(A)通過(guò)馬來(lái)酸酐-N-乙烯基吡咯烷酮共聚物(C)連接到辣根過(guò)氧化物酶(B)上的綴合物(conjugate)，濃度約為1ug/mL。在室溫下使檢測(cè)片在溶液中浸泡約15分鐘，然后將其取出放置到微孔板的新孔中，每孔約含200UL洗滌溶液。振蕩微孔板以有效洗滌，約l分鐘后將檢測(cè)片取出放置到微孔板的新孔中，每孔約含200uL新鮮的水洗滌溶液，再振蕩約1分鐘。振蕩洗滌第3次，然后將檢測(cè)片取出放置到約100yL底物溶液(EnhancedK-Blue試劑)中。室溫下在暗處使檢測(cè)片與底物溶液溫育約15分鐘。在此期間不斷搖動(dòng)微孔板。檢測(cè)片溫育好以后取出。在含有底物溶液的孔中加入約100uL1N的硫酸以終止反應(yīng)，在微孔板讀數(shù)分光光度計(jì)上讀取所得溶液在約450nm處的光密度值，該值代表了皮膚樣品中的膽固醇含量。通過(guò)測(cè)定來(lái)自上述采樣裝置的蛋白質(zhì)水平和皮膚膽固醇量，能夠使得膽固醇測(cè)定能交叉參照不同蛋白質(zhì)水平，以測(cè)定例如是否獲得了足夠的皮膚樣本，以提供可用的皮膚膽固醇測(cè)量值。另外，可用蛋白質(zhì)水平標(biāo)準(zhǔn)化皮膚膽固醇水平，例如通過(guò)將個(gè)人的膽固醇水平除以蛋白質(zhì)水平。雖然結(jié)合各實(shí)施方式描述了申請(qǐng)人的
發(fā)明內(nèi)容，并不意味著申請(qǐng)人的
發(fā)明內(nèi)容局限于這些實(shí)施方式。相反，本領(lǐng)域技術(shù)人員都能夠理解，申請(qǐng)人的
發(fā)明內(nèi)容包括了各種替代形式、改變和等價(jià)方式。權(quán)利要求1.一種測(cè)定膠帶剝離獲得的皮膚量的方法，其特征在于，該方法包括a)提供包括背襯件的膠帶，其中該膠帶至少有一面涂有醫(yī)用膠粘劑；b)將膠帶放置到皮膚的指定區(qū)域，使膠帶粘貼到該指定皮膚區(qū)域；c)從皮膚的指定區(qū)域剝離下膠帶，得到代表皮膚外角質(zhì)層的樣本，該樣本粘附到膠帶上，從而帶有暴露的皮膚組分；d)將蛋白染料加到樣本的預(yù)選表面區(qū)域上，使蛋白染料與其保持接觸一段時(shí)間，足以導(dǎo)致所述染料與存在于暴露的皮膚組分中的蛋白質(zhì)結(jié)合；和e)測(cè)定暴露的皮膚組分中染色的蛋白質(zhì)，以確定指示獲得的皮膚量的蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白染料選自陰離子染料和酸性染料。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白染料是PonceauS染色劑。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白染料是考馬斯藍(lán)。5.如權(quán)利要求l-4任一所述的方法，其特征在于，測(cè)定暴露的皮膚組分中染色蛋白質(zhì)的強(qiáng)度，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。6.如權(quán)利要求l-4任一所述的方法，其特征在于，用分光光度法測(cè)定染色的蛋白質(zhì)，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。7.如權(quán)利要求l-6任一所述的方法，其特征在于，將蛋白質(zhì)量的測(cè)量值與預(yù)定的閾值水平進(jìn)行比較。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，如果蛋白質(zhì)量低于預(yù)定的閾值，棄去樣本。9.如權(quán)利要求l-8任一所述的方法，其特征在于，所述背襯件由聚酯制成。10.如權(quán)利要求1-9任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是壓敏膠粘劑。11.如權(quán)利要求l-9任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是丙烯酸基膠粘劑。12.如權(quán)利要求l-9任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是合成橡膠彈性體膠粘劑。13.如權(quán)利要求1-9任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是聚硅氧烷基膠粘劑。14.如權(quán)利要求l-9任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體。15.—種比較來(lái)自多個(gè)個(gè)體的皮膚膽固醇相對(duì)水平的方法，該方法包括a)用膠帶剝離獲得代表皮膚外角質(zhì)層的樣本，分析粘附在膠粘劑上的暴露的皮膚組分，以獲得個(gè)體的皮膚膽固醇水平，從而測(cè)定來(lái)自各個(gè)個(gè)體的皮膚膽固醇；b)將蛋白染料加到樣本的暴露皮膚組分的預(yù)定表面區(qū)域上，該區(qū)域與測(cè)定皮膚膽固醇的區(qū)域分開(kāi)，使蛋白染料與其保持接觸一段時(shí)間，足以導(dǎo)致所述染料與存在于暴露的皮膚組分中的蛋白質(zhì)結(jié)合；c)測(cè)定暴露的皮膚組分中染色的蛋白質(zhì)，以確定指示獲得的皮膚量的蛋白質(zhì)量的測(cè)量值；和d)用蛋白質(zhì)量的測(cè)量值對(duì)皮膚膽固醇測(cè)量值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)化包括皮膚膽固醇測(cè)量值除以蛋白質(zhì)測(cè)量值。17.如權(quán)利要求15或16所述的方法，其特征在于，所述蛋白染料選自陰離子染料和酸性染料。18.如權(quán)利要求15或16所述的方法，其特征在于，所述蛋白染料是PonceauS染色劑。19.如權(quán)利要求15或16所述的方法，其特征在于，所述蛋白染料是考馬斯藍(lán)。20.如權(quán)利要求15-19任一所述的方法，其特征在于，.測(cè)定暴露的皮膚組分中染色蛋白質(zhì)的強(qiáng)度，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。21.如權(quán)利要求15-19任一所述的方法，其特征在于，用分光光度法測(cè)定染色的蛋白質(zhì)，以測(cè)定蛋白質(zhì)量的測(cè)量值。22.如權(quán)利要求15-21任一所述的方法，其特征在于，將蛋白質(zhì)量的測(cè)量值與預(yù)定的閾值水平比較。23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，如果蛋白質(zhì)量低于預(yù)定的閾值，棄去樣本。24.如權(quán)利要求15-23任一所述的方法，其特征在于，所述背襯件由聚酯制成。25.如權(quán)利要求15-24任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是壓敏膠粘劑。26.如權(quán)利要求15-24任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是丙烯酸基膠粘劑。27.如權(quán)利要求15-24任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是合成橡膠彈性體膠粘劑。28.如權(quán)利要求15-24任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑是聚硅氧烷基膠粘劑。29.如權(quán)利要求15-24任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體。30.用于實(shí)施權(quán)利要求1所述的方法的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含-所述膠帶；和-所述蛋白質(zhì)染料的來(lái)源。31.如權(quán)利要求30所述的試劑盒，其特征在于，所述蛋白染料選自陰離子染料和酸性染料。32.如權(quán)利要求30所述的試劑盒，其特征在于，所述蛋白染料是PonceauS染色劑。33.如權(quán)利要求30所述的試劑盒，其特征在于，所述蛋白染料是考馬斯藍(lán)。34.如權(quán)利要求30-33任一所述的試劑盒，其特征在于成。35.如權(quán)利要求30-34任一所述的試劑盒，其特征在于敏膠粘劑。36.如權(quán)利要求30-34任一所述的試劑盒，其特征在于烯酸基膠粘劑。37.如權(quán)利要求30-34任一所述的試劑盒，其特征在于成橡膠彈性體膠粘劑。38.如權(quán)利要求30-34任一所述的試劑盒，其特征在于硅氧烷基膠粘劑。39.如權(quán)利要求30-34任一所述的方法，其特征在于，所述醫(yī)用膠粘劑包含由苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯或苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段聚合物形成的彈性體。40.如權(quán)利要求30-39任一所述的試劑盒，其特征在于，所述膠粘劑由一個(gè)可閉合的裝置攜帶，所述可閉合的裝置包括一個(gè)攜帶膠粘劑的采樣件和一個(gè)能與所述采樣件嚙合并使膠粘劑保持在所述裝置內(nèi)的閉合件。41.如權(quán)利要求40所述的試劑盒，其特征在于，當(dāng)所述閉合件與所述采樣件嚙，所述背襯件由聚酯制，所述醫(yī)用膠粘劑是壓，所述醫(yī)用膠粘劑是丙，所述醫(yī)用膠粘劑是合，所述醫(yī)用膠粘劑是聚合時(shí)，所述膠粘劑被密封在所述裝置內(nèi)。42.如權(quán)利要求41所述的試劑盒，其特征在于，至少所述閉合件或所述采樣件帶有邊框，所述閉合件或所述采樣件的另一個(gè)帶有容納所述邊框的邊槽，從而將所述膠粘劑密封在所述裝置內(nèi)。43.如權(quán)利要求40-42任一所述的試劑盒，其特征在于，所述閉合件可通過(guò)絞鏈連接到所述采樣件。44.如權(quán)利要求40-43任一所述的試劑盒，其特征在于，至少一部分采樣件能從可閉合裝置上切下形成檢測(cè)片，所述檢測(cè)片的第一端上沒(méi)有膠粘劑，而第二端上有膠粘劑。45.如權(quán)利要求40-43任一所述的試劑盒，其特征在于，所述可閉合裝置確定至少一個(gè)預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的檢測(cè)片，所述至少一個(gè)檢測(cè)片的第一端上沒(méi)有膠粘劑，而第二端上有膠粘劑。46.如權(quán)利要求44或45所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)片的有膠粘劑的第二端確定固定或預(yù)定面積的膠粘劑。47.如權(quán)利要求40-43任一所述的試劑盒，其特征在于，至少一部分釆樣件能從可閉合裝置上切下形成圓片，所述圓片在其一個(gè)面上有膠粘劑。48.如權(quán)利要求40-43任一所述的試劑盒，其特征在于，所述可閉合裝置確定至少一個(gè)預(yù)先切割或預(yù)先刻痕的圓片，所述至少一個(gè)圓片在其一個(gè)面上有膠粘劑D49.如權(quán)利要求47或48所述的試劑盒，其特征在于，所述圓片具有膠粘劑的面確定固定或預(yù)定面積的膠粘劑。專(zhuān)利摘要本發(fā)明提供了一種測(cè)定通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚量的方法。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種直接測(cè)定通過(guò)膠帶剝離獲得的皮膚中蛋白質(zhì)的方法，以將獲得的蛋白質(zhì)測(cè)量值與相應(yīng)的皮膚膽固醇測(cè)量值進(jìn)行組合，來(lái)鑒定有動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)的個(gè)體以及有發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化和與高膽固醇水平有關(guān)或由于其引起的類(lèi)似疾病之危險(xiǎn)的個(gè)體。另外，本發(fā)明還能夠比較性測(cè)量膠帶剝離獲得的皮膚量，該量不僅僅依賴(lài)于獲得樣品的面積。此外，在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的方法能根據(jù)獲得的皮膚的相對(duì)量比較皮膚膽固醇的相對(duì)水平。文檔編號(hào)C12Q1/60GKCN101194022SQ200680017583公開(kāi)日2008年6月4日申請(qǐng)日期2006年5月19日發(fā)明者P·豪斯伍德,R·扎瓦蒂斯基申請(qǐng)人:普雷姆德股份有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan