1.一種細(xì)胞培養(yǎng)用l-谷氨酰胺的生產(chǎn)方法,其特征在于:包括如下步驟:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述谷氨酰胺酶基因glsa的基因序列為seq?id?no.1,谷氨酰胺酶基因glsb的基因序列為seq?id?no.2,谷氨酰胺合酶基因glna的基因序列為seq?id?no.3,聚磷酸激酶基因ppk的基因序列為seq?id?no.4。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:具體步驟如下:
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(1)中谷氨酰胺酶基因glsa來源于escherichia?coli?bl21?(accc11171),核苷酸序列如序列表seq?id?no.1所示;谷氨酰胺酶基因glsb來源于escherichia?coli?bl21?(accc11171),核苷酸序列如序列表seqid?no.2所示;
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(3)中培養(yǎng)重組菌株e.?coligln2的具體培養(yǎng)步驟為:
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(4)中細(xì)胞破碎的方法為超聲破碎、凍融破碎、液氮研磨破碎或者高壓勻漿破碎,破碎條件為:4?℃,800-1000?bar;
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(6)中陶瓷膜的截留分子量為50?kd、超濾膜截留分子量為3000?d-6000?d、納濾膜截留分子量為300?d-500?d,材質(zhì)均為聚醚砜、溫度控制不超過35?℃,工作壓力為0.5-1.0?mpa;
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(8)中乙醇的結(jié)晶條件為:將電滲析液濃縮至110-120?g/l,加入濃縮液體積1-2倍的95%乙醇,降溫至5-10?℃;
9.如權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的生產(chǎn)方法在細(xì)胞培養(yǎng)用l-谷氨酰胺生產(chǎn)中的應(yīng)用。