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一種細(xì)胞培養(yǎng)用L-谷氨酰胺的生產(chǎn)方法和應(yīng)用

文檔序號(hào):40387611發(fā)布日期:2024-12-20 12:10閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種細(xì)胞培養(yǎng)用l-谷氨酰胺的生產(chǎn)方法,其特征在于:包括如下步驟:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述谷氨酰胺酶基因glsa的基因序列為seq?id?no.1,谷氨酰胺酶基因glsb的基因序列為seq?id?no.2,谷氨酰胺合酶基因glna的基因序列為seq?id?no.3,聚磷酸激酶基因ppk的基因序列為seq?id?no.4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:具體步驟如下:

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(1)中谷氨酰胺酶基因glsa來源于escherichia?coli?bl21?(accc11171),核苷酸序列如序列表seq?id?no.1所示;谷氨酰胺酶基因glsb來源于escherichia?coli?bl21?(accc11171),核苷酸序列如序列表seqid?no.2所示;

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(3)中培養(yǎng)重組菌株e.?coligln2的具體培養(yǎng)步驟為:

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(4)中細(xì)胞破碎的方法為超聲破碎、凍融破碎、液氮研磨破碎或者高壓勻漿破碎,破碎條件為:4?℃,800-1000?bar;

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(6)中陶瓷膜的截留分子量為50?kd、超濾膜截留分子量為3000?d-6000?d、納濾膜截留分子量為300?d-500?d,材質(zhì)均為聚醚砜、溫度控制不超過35?℃,工作壓力為0.5-1.0?mpa;

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(8)中乙醇的結(jié)晶條件為:將電滲析液濃縮至110-120?g/l,加入濃縮液體積1-2倍的95%乙醇,降溫至5-10?℃;

9.如權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的生產(chǎn)方法在細(xì)胞培養(yǎng)用l-谷氨酰胺生產(chǎn)中的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域,公開了一種細(xì)胞培養(yǎng)用L?谷氨酰胺的生產(chǎn)方法和應(yīng)用,包括如下步驟:敲除Escherichia?coli?BL21(ACCC11171)中的谷氨酰胺酶基因glsA和glsB;構(gòu)建重組菌株質(zhì)粒過表達(dá)谷氨酰胺合酶基因glnA和聚磷酸激酶基因ppk,谷氨酰胺合酶催化L?谷氨酸、ATP和銨鹽形成L?谷氨酰胺,聚磷酸激酶催化ATP再生;培養(yǎng)重組菌株誘導(dǎo)產(chǎn)酶,配置酶反應(yīng)體系催化L?谷氨酰胺的合成;分離純化得到細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)的L?谷氨酰胺。本發(fā)明中篩選的谷氨酰胺合酶可以高效催化L?谷氨酸向L?谷氨酰胺轉(zhuǎn)化,L?谷氨酰胺的最高產(chǎn)量可達(dá)到590?mM(86?g/L),摩爾轉(zhuǎn)化率為90%。

技術(shù)研發(fā)人員:趙新奉,范曉光,付永康,張楚揚(yáng),陳湧潤(rùn),曹華杰
受保護(hù)的技術(shù)使用者:天津科技大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/12/19
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