本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)，具體涉及一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法。

背景技術(shù)：

1、乳腺癌是中國女性最常見的惡性腫瘤，也是癌癥相關(guān)死亡的主要原因。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞是活化的成纖維細(xì)胞，是腫瘤微環(huán)境的主要成分，在促進(jìn)腫瘤生長、轉(zhuǎn)移、耐藥、免疫屏障等方面發(fā)揮重要作用。因此，腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的研究成為乳腺癌研究的一個熱點。然而，目前腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的原代提取存在耗時長、易污染、獲得細(xì)胞數(shù)量少等問題。目前常用的方法為應(yīng)用i型膠原酶消化組織，消化過程需每半小時觀察一次，大約2小時作用可見細(xì)胞游出，一般需連續(xù)觀察10小時左右，實驗人員工作量大，且反復(fù)于孵箱中取放，增加污染風(fēng)險。因此，本領(lǐng)域亟需開發(fā)新的原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法，從而快速提取和培養(yǎng)出乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法。本發(fā)明通過改變消化液配方，縮短了原代細(xì)胞提取時間，降低了污染風(fēng)險，同時提高消化效率，獲得細(xì)胞量大，0代細(xì)胞即可置于t25培養(yǎng)瓶中，7天左右可進(jìn)行傳代，縮短了培養(yǎng)周期。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案。

3、本發(fā)明公開了一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法，其特征在于，所述方法包括：

4、步驟1：將乳腺癌組織樣品置于pbs中后修剪多余的脂肪及血管，反復(fù)清洗至無血清及脂肪；

5、步驟2：將步驟1所得組織剪至肉糜狀；

6、步驟3：將步驟2所得組織轉(zhuǎn)移至離心管中，加入消化液1消化，后經(jīng)濾器過濾，棄所得濾液，保留過濾器中未消化的組織；

7、步驟4：步驟3中過濾后所得未消化組織至于離心管中，以消化液2重懸后消化過夜；

8、步驟5：步驟4中所得培養(yǎng)瓶過夜培養(yǎng)后的組織吹打至組織消失，離心，棄上清，用完全培養(yǎng)基重懸后培養(yǎng)；

9、步驟6：3天換一次完全培養(yǎng)基，第7天獲得可進(jìn)行后續(xù)傳代或純化實驗的原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞。

10、進(jìn)一步地，所述步驟3中消化液1組成為：ii型膠原酶、透明質(zhì)酸酶和dmem/f12培養(yǎng)基。

11、進(jìn)一步地，所述步驟4中消化液2組成為：ii型膠原酶、透明質(zhì)酸酶、dna酶、胰酶和dmem/f12培養(yǎng)基。

12、進(jìn)一步地，所述步驟3中消化液1消化時間為60分鐘，消化條件為37℃恒溫?fù)u床。

13、進(jìn)一步地，所述步驟4中消化液2消化時間為過夜消化，消化條件為37℃、5%co2培養(yǎng)箱中。

14、進(jìn)一步地，所述方法中細(xì)胞培養(yǎng)條件為37℃、5%co2培養(yǎng)箱中。

15、本發(fā)明還提供了一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞提取產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括：消化液1、消化液2；

16、所述消化液1組成為：ii型膠原酶、透明質(zhì)酸酶和dmem/f12培養(yǎng)基；

17、所述消化液2組成為：ii型膠原酶、透明質(zhì)酸酶、dna酶、胰酶和dmem/f12培養(yǎng)基。

18、進(jìn)一步地，上述所述的產(chǎn)品用于體外提取培養(yǎng)原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞。

19、與現(xiàn)有技術(shù)比，本發(fā)明的有益效果如下。

20、本發(fā)明提供的方法操作簡單，能夠有效提高原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)效率。采用本發(fā)明所述方法僅用容易獲取的常規(guī)試劑便能達(dá)到超過傳統(tǒng)方法的優(yōu)良效果，在較短時間內(nèi)實現(xiàn)p0代細(xì)胞培養(yǎng)，值得推廣。

21、本發(fā)明所公開的一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法，通過改變消化液配方，縮短了原代細(xì)胞提取時間，降低了污染風(fēng)險，同時提高消化效率，獲得細(xì)胞量大，0代細(xì)胞即可置于t25培養(yǎng)瓶中，7天左右可進(jìn)行傳代，縮短了培養(yǎng)周期。

技術(shù)特征：

1.一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟3中消化液1組成為：ii型膠原酶、透明質(zhì)酸酶和dmem/f12培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟4中消化液2組成為：ii型膠原酶、透明質(zhì)酸酶、dna酶、胰酶和dmem/f12培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟3中消化液1消化時間為60分鐘，消化條件為37℃恒溫?fù)u床。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟4中消化液2消化時間為過夜消化，消化條件為37℃、5%co2培養(yǎng)箱中。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述方法中細(xì)胞培養(yǎng)條件為37℃、5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7.一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞提取產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括：消化液1、消化液2；

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的產(chǎn)品用于體外提取培養(yǎng)原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的提取方法，屬于細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所提供的方法能夠有效解決現(xiàn)有技術(shù)中原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞提取耗時長、易污染、獲得細(xì)胞數(shù)量少等問題，能夠有效提高原代乳腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)效率。此外，通過改變消化液配方，縮短了原代細(xì)胞提取時間，降低了污染風(fēng)險，同時提高消化效率，獲得細(xì)胞量大，0代細(xì)胞即可置于T25培養(yǎng)瓶中，7天左右可進(jìn)行傳代，縮短了培養(yǎng)周期，對于實驗研究的經(jīng)濟性具有重要價值。

技術(shù)研發(fā)人員：田雨,李敏,李云鵬,呂超
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19