本發(fā)明涉及煙草病害防治方法領(lǐng)域，具體涉及一種防治煙草角斑病的生防菌劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、煙草角斑病病原菌為丁香假單胞菌煙草致病變種(pseudomonassyringaepv.tabaci)，屬假單胞桿菌屬。是各煙區(qū)普遍發(fā)生的細(xì)菌性葉斑病害之一，且常與野火病混合發(fā)生。除四川、山東省的個(gè)別煙區(qū)外，一般為害較輕。煙草細(xì)菌性角斑病多發(fā)生在生長(zhǎng)后期，主要為害葉片、蒴果、萼片、莖部等。葉片染病，在葉片上產(chǎn)生多角形至不規(guī)則形黑褐色病斑，邊緣明顯，周圍沒(méi)有明顯黃色暈圈。病斑顏色也有較大差異，黑褐色或邊緣褐色而中央呈黃褐色或乳白色，病斑常出現(xiàn)多重輪紋。煙株下部的葉片病斑往往較多。在潮濕條件下，病斑上出現(xiàn)溢膿，形成膠膜，干燥時(shí)病斑破裂脫落，病斑較多的葉片，整張枯黃，失去收烤價(jià)值。

2、煙草角斑病菌可依附在種子上越冬，也可在殘留于土壤中病殘?bào)w上越冬，成為翌年的初侵染源。種植病苗是引起大田發(fā)病的主要原因之—。病菌可從傷口和自然孔口侵入。大田發(fā)病后，病菌主要借助風(fēng)雨傳播，引起再侵染，昆蟲、人、畜的活動(dòng)也可起到傳播病菌的作用。在條件適宜的狀況下，病菌的潛育期僅4天。南方煙區(qū)在5-6月，北方煙區(qū)在7-8月病害開(kāi)始發(fā)生，大流行往往出現(xiàn)在暴風(fēng)雨之后。病菌侵人需高濕，傳播需要雨水沖濺，凡是形成葉片大面積充水造成水漬狀，都利于病害迅速擴(kuò)展，而在暴風(fēng)雨后就出現(xiàn)這種情況，這種現(xiàn)象稱為“風(fēng)雨性充水”。白天氣孔張開(kāi)，葉片容易充水，高氮低鉀的營(yíng)養(yǎng)狀況也能增加葉片的充水程度，并導(dǎo)致煙株抗病力下降，從而對(duì)病害發(fā)展產(chǎn)生重要影響。煙草種植密度過(guò)大，通風(fēng)透光差，田間過(guò)于潮濕，若遇暴風(fēng)雨天氣，葉片間很易互相摩擦，造成大量傷口，有利于病菌的侵入和傳播。過(guò)早或過(guò)遲打頂都不利于植株體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)的正常利用，會(huì)加重病害程度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種防治煙草角斑病的生防菌劑及其制備方法和應(yīng)用，旨在解決煙株上在暴風(fēng)雨之后易生出煙草角斑病的問(wèn)題。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、第一方面、一種防治煙草角斑病的生防菌劑，所述生防菌劑由細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液、粘著劍菌發(fā)酵液混合而成；

4、所述細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液、粘著劍菌發(fā)酵液用量比為8～10:6～8；

5、所述細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的活性成分為細(xì)黃鏈霉菌168，保藏編號(hào)為cgmccno.15355；

6、粘著劍菌發(fā)酵液的活性成分為粘著劍菌sneb2006，保藏編號(hào)為cgmcc?no.28087。

7、進(jìn)一步地，所述生防菌劑中細(xì)黃鏈霉菌168的活菌數(shù)不少于1ⅹ108cfu/ml；粘著劍菌sneb2006的活菌數(shù)不少于5×108cfu/ml。

8、第二方面、一種防治煙草角斑病的生防菌劑的制備方法，包括：

9、步驟1、分別制備細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液和粘著劍菌發(fā)酵液；

10、步驟2、將細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液、粘著劍菌發(fā)酵液按質(zhì)量比為8～10:6～8均勻混合，獲取生防菌劑。

11、進(jìn)一步地，細(xì)黃鏈霉菌的發(fā)酵液制備包括如下步驟：

12、s1：將細(xì)黃鏈霉菌置于固體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為28℃、24h后接種于液體高氏培養(yǎng)基中獲得種子液；

13、s2：將s1中制備得到的種子液按5％接種量接種于新的液體培養(yǎng)基中，于28℃、140r/min下培養(yǎng)48h，獲得發(fā)酵液。

14、進(jìn)一步地，s1和s2中，活化菌株所用的培養(yǎng)基為高氏培養(yǎng)基。

15、進(jìn)一步地，粘著劍菌的發(fā)酵液制備包括如下步驟：

16、s1：將粘著劍菌接種于固體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為32℃，24h后接種于液體培養(yǎng)基中獲得種子液；

17、s2：將s1中制備得到的種子液按照接種量10％接種于新的液體培養(yǎng)基中，于32℃、150r/min下培養(yǎng)48h，獲得發(fā)酵液。

18、進(jìn)一步地，s1和s2中，活化菌株所用的培養(yǎng)基為na培養(yǎng)基。

19、第三方面、生防菌劑的應(yīng)用，其特征在于，生防菌劑是用于放置煙草角斑病，且所述煙草角斑病是由丁香假單胞菌煙草致病變種侵染發(fā)生的，在使用時(shí)，移栽后到成熟期均可施用，發(fā)病前和發(fā)病初期使用效果最佳，每次用量100ml/畝。

20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

21、1、本發(fā)明制備得到的生防菌劑能夠抑制丁香假單胞菌煙草致病變種的生長(zhǎng)，為防治煙草角斑病提供了技術(shù)支撐和理論依據(jù)；

22、2、本發(fā)明制備得到的生防菌劑不僅能夠防止丁香假單胞菌煙草致病變種引起的煙草角斑病，還能誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗病性，增強(qiáng)對(duì)煙草角斑病的防治作用。兩種菌能夠提高彼此對(duì)丁香假單胞菌煙草致病變種的抑菌效果。

23、3、本發(fā)明制備得到的生防菌劑的有效成分為細(xì)黃鏈霉菌168、粘著劍菌sneb2006，目前并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)以上菌株能用于煙草角斑病的防治中，而本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了其在煙草角斑病防治中的新用途。

24、所述生防菌劑由細(xì)黃鏈霉菌、粘著劍菌的發(fā)酵液混合而成，所述細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的活性成分為細(xì)黃鏈霉菌168，保藏編號(hào)為cgmcc?no.15355；粘著劍菌發(fā)酵液的活性成分為粘著劍菌sneb2006，保藏編號(hào)為cgmcc?no.28087。該生防菌劑能夠抑制丁香假單胞菌煙草致病變種的生長(zhǎng)，為丁香假單胞菌煙草致病變種侵染產(chǎn)生的煙草角斑病的防治提供了技術(shù)支撐和理論依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.一種防治煙草角斑病的生防菌劑，其特征在于，所述生防菌劑由細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液、粘著劍菌發(fā)酵液混合而成；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治煙草角斑病的生防菌劑，其特征在于，所述生防菌劑中細(xì)黃鏈霉菌168的活菌數(shù)不少于1ⅹ108cfu/ml；粘著劍菌sneb2006的活菌數(shù)不少于5×108cfu/ml。

3.一種如權(quán)利要求1所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的制備方法，其特征在于，包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的制備方法，其特征在于，細(xì)黃鏈霉菌的發(fā)酵液制備包括如下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的制備方法，其特征在于，s1和s2中，活化菌株所用的培養(yǎng)基為高氏培養(yǎng)基。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的制備方法，其特征在于，粘著劍菌的發(fā)酵液制備包括如下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的制備方法，其特征在于，s1和s2中，活化菌株所用的培養(yǎng)基為na培養(yǎng)基。

8.一種權(quán)利要求1所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的應(yīng)用，其特征在于，生防菌劑是用于防治煙草角斑病，且所述煙草角斑病是由丁香假單胞菌煙草致病變種侵染發(fā)生的。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的防治煙草角斑病的生防菌劑的應(yīng)用，其特征在于，移栽后到成熟期均可施用，發(fā)病前和發(fā)病初期使用效果最佳，每次用量100ml/畝。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及煙草病害防治方法領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種防治煙草角斑病的生防菌劑及其制備方法和應(yīng)用，所述生防菌劑由細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液、粘著劍菌發(fā)酵液混合而成，所述細(xì)黃鏈霉菌發(fā)酵液的活性成分為細(xì)黃鏈霉菌168，保藏編號(hào)為CGMCC?No.15355；粘著劍菌發(fā)酵液的活性成分為粘著劍菌Sneb2006，保藏編號(hào)為CGMCC?No.28087。本發(fā)明中的生防菌劑防治煙草角斑病非常理想，同時(shí)具有誘導(dǎo)、預(yù)防和治療多重作用，其增效作用顯著；對(duì)人畜安全、對(duì)環(huán)境友好，抗逆性強(qiáng)、抑菌活性穩(wěn)定、持久，具有潛在的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：劉鶴,王譽(yù)喆,吳元華,安夢(mèng)楠,夏子豪,趙秀香,張瑛瑛,汪諾
受保護(hù)的技術(shù)使用者：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19