本發(fā)明屬于微生物防治，涉及一種煙草花葉病的微生物防治技術(shù)，具體涉及一株抑制煙草花葉病毒的空氣芽孢桿菌菌株及其應(yīng)用煙草種植方法。

背景技術(shù)：

1、煙草花葉病毒(tobaco?mosaic?virus,?tmv)作為煙草產(chǎn)業(yè)的主要病原體之一，其傳播途徑簡(jiǎn)便且宿主范圍廣泛，能夠侵染包括煙草在內(nèi)的超過?65?個(gè)科的?885?種植物。目前，防治?tmv?的措施包括農(nóng)業(yè)管理、化學(xué)控制和生物防治等。隨著公眾對(duì)健康和環(huán)境的日益關(guān)注，化學(xué)農(nóng)藥的過度使用造成了環(huán)境農(nóng)藥殘留、病蟲害抗藥性的增強(qiáng)，以及病蟲害復(fù)發(fā)等問題。在這樣的背景下，生物農(nóng)藥作為一種新型的農(nóng)藥，因其具有低毒、低殘留、不易產(chǎn)生抗藥性的特點(diǎn)，成為了現(xiàn)代農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)。

2、微生物農(nóng)藥，作為生物農(nóng)藥領(lǐng)域的關(guān)鍵分支，涵蓋了活體微生物制劑和農(nóng)業(yè)抗生素兩大類。這些制劑源自自然界的生物資源，經(jīng)過精心的分離和純化過程，不僅能夠直接對(duì)病蟲害進(jìn)行有效防治，還能通過其代謝過程生成具有潛在農(nóng)藥價(jià)值的化合物。其中芽孢桿菌（ bacillus?cereus）因其營養(yǎng)需求簡(jiǎn)單，繁殖快，代謝產(chǎn)物豐富，成為目前開發(fā)應(yīng)用最廣泛的生防菌資源。以貝萊斯芽孢桿菌（ bacillus?velezensis）sg11?為例，其對(duì)由灰葡萄孢菌（ botrytis?cinerea）引起的番茄灰霉病抑制效果高達(dá)?79.81%。此外，解淀粉芽孢桿菌（ bacillus?amyloliquefaciens）f11?的懸浮液對(duì)核盤菌（ sclerotinia?sclerotiorum）的相對(duì)抑制率均達(dá)到了?100%?？諝庋挎邨U菌（ bacillus?aerius）papm-14?菌株對(duì)立枯絲核菌（ rhizoctonia?solani）的抑制效果也達(dá)到了?81.60%。盡管生物農(nóng)藥在一定時(shí)期內(nèi)還不能取代化學(xué)農(nóng)藥，但隨著對(duì)化學(xué)農(nóng)藥危害性的認(rèn)識(shí)和使用條件的限制，芽孢桿菌菌株將成為一類有著廣泛實(shí)際用途的微生物資源。

3、自?1926?年?mulvania?首次揭示了細(xì)菌抑制植物病毒活性的可能性以來，研究者們便致力于探索微生物及其代謝產(chǎn)物中蘊(yùn)含的?tmv?抑制活性物質(zhì)。目前，國內(nèi)已有不少針對(duì)煙草花葉病毒生物防治的研究，對(duì)生防菌株的篩選亦有不少，大多為細(xì)菌少部分真菌。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一，為應(yīng)對(duì)化學(xué)農(nóng)藥過度使用帶來的危害，挖掘本土優(yōu)質(zhì)生防菌資源，本發(fā)明提供了一株具有防治煙草花葉病毒效果的空氣芽孢桿菌?a3-5，該菌株具有抗?tmv?高效性、無毒性與非致病性、環(huán)境友好性、抑菌活性穩(wěn)定性。該菌株的發(fā)現(xiàn)，為防治煙草花葉病毒提供了一種新的有效手段，擴(kuò)充了生防菌菌種資源庫。

2、本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下：

3、本發(fā)明的第一方面提供一株具有防治煙草花葉病功效的空氣芽孢桿菌a3-5，所述空氣芽孢桿菌菌株（ bacillus?aerius）a3-5已于2024年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no:?m?20241594，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)。

4、優(yōu)選地，所述空氣芽孢桿菌a3-5的菌落形態(tài)不規(guī)則，呈淡黃色，易挑起，表明光滑；顯微鏡觀察菌體形態(tài)為革蘭氏陽性菌，桿狀。

5、本發(fā)明的第二方面提供所述的空氣芽孢桿菌a3-5在防治煙草花葉病中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明的第三方面提供所述的空氣芽孢桿菌a3-5防治煙草花葉病的方法，所述方法包括以下步驟：

7、將空氣芽孢桿菌a3-5接種于液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到發(fā)酵液；

8、將所述發(fā)酵液噴施在煙草葉片上。

9、優(yōu)選地，所述煙草葉片為三生煙草葉片。

10、優(yōu)選地，所述液體培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

11、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)條件為：在37℃、200?r/min?條件下恒溫振蕩培養(yǎng)?24h，獲得空氣芽孢桿菌a3-5?發(fā)酵液，放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

12、本發(fā)明的第四方面提供一種防治煙草花葉病的生物制劑，其有效成分包含上述的空氣芽孢桿菌a3-5。

13、本發(fā)明的第五方面提供一種防治煙草花葉病的藥物組合物，其有效成分包含上述的空氣芽孢桿菌a3-5。

14、一種煙草種植方法，包括上述的生物制劑或上述的藥物組合物噴施于煙草葉片上的步驟

15、本發(fā)明至少具有以下有益效果之一：

16、本發(fā)明篩選出的空氣芽孢桿菌（ bacillus?aerius）a3-5具有高效抗?tmv、綠色無污染等特性，不僅豐富了抗?tmv?的生防菌菌種資源庫，也為植物病毒防治策略的多樣化和可持續(xù)發(fā)展提供了有力支持。

17、本發(fā)明的空氣芽孢桿菌a3-5菌株發(fā)酵液對(duì)煙草普通花葉病毒的抑制作用顯著，首先是在三生煙枯斑實(shí)驗(yàn)中對(duì)?tmv?抑制率較高，a3-5?發(fā)酵液對(duì)?tmv?鈍化作用的抑制率可達(dá)?91.18%。對(duì)?a3-5?發(fā)酵液對(duì)?tmv?的抑制作用進(jìn)一步探究，在k326?煙草內(nèi)病毒表達(dá)量以及防御酶的變化情況中可以看出，a3-5?能夠誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗病性，在接種?tmv后，因其體內(nèi)產(chǎn)生的抗性而使得煙草感染的病毒無法在其體內(nèi)大量繁殖，從而達(dá)到比較好的抗病毒效果。將菌株?a3-5?應(yīng)用于抗花葉病毒生物農(nóng)藥的開發(fā)，能夠開出發(fā)新的、高效、安全的微生物制劑來控制植物病毒病。

技術(shù)特征：

1.一株具有防治煙草花葉病功效的空氣芽孢桿菌a3-5，其特征在于，所述空氣芽孢桿菌菌株（bacillus?aerius）a3-5已于2024年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no:?m?20241594，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的空氣芽孢桿菌a3-5，其特征在于，所述空氣芽孢桿菌a3-5的菌落形態(tài)不規(guī)則，呈淡黃色，易挑起，表明光滑；顯微鏡觀察菌體形態(tài)為革蘭氏陽性菌，桿狀。

3.如權(quán)利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5在防治煙草花葉病中的應(yīng)用。

4.一種采用如權(quán)利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述煙草葉片為三生煙草葉片。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治煙草花葉病的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)條件為：

8.一種防治煙草花葉病的生物制劑，其特征在于，其有效成分包含權(quán)利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5。

9.一種防治煙草花葉病的藥物組合物，其特征在于，其有效成分包含權(quán)利要求1~2任一所述的空氣芽孢桿菌a3-5。

10.一種煙草種植方法，其特征在于：包括將權(quán)利要求8所述的生物制劑或權(quán)利要求9所述的藥物組合物噴施于煙草葉片上的步驟。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一株具有防治煙草花葉病功效的空氣芽孢桿菌A3?5及其應(yīng)用，涉及微生物防治技術(shù)領(lǐng)域，所述空氣芽孢桿菌（Bacillus?aerius）A3?5已于2024年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO:M?20241594；空氣芽孢桿菌A3?5在防治煙草花葉病中的應(yīng)用；一種具有防治煙草花葉病的制劑，其有效成分包含所述的空氣芽孢桿菌A3?5。本發(fā)明的有益效果是菌株具有高效抗TMV、綠色無污染等特性，豐富了抗TMV的生防菌菌種資源庫，也為植物病毒防治策略的多樣化和可持續(xù)發(fā)展提供了有力支持，能夠誘導(dǎo)煙草產(chǎn)生抗病性，達(dá)到較好的抗病毒效果，能夠應(yīng)用于抗花葉病毒生物農(nóng)藥的開發(fā)。

技術(shù)研發(fā)人員：吳麗萍,王建楓,張文鈺,彭月琪,趙微
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南昌大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19