本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)及在抗細(xì)菌感染中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、長(zhǎng)牡蠣(crassostrea?gigas)是世界上廣泛養(yǎng)殖的海洋軟體動(dòng)物之一，不僅具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，也具有重要的生態(tài)價(jià)值。然而近年來(lái)，養(yǎng)殖長(zhǎng)牡蠣常出現(xiàn)大規(guī)模死亡事件，其中細(xì)菌性病原感染是導(dǎo)致其大規(guī)模死亡的重要原因之一。燦爛弧菌(vibriosplendidus)是長(zhǎng)牡蠣的主要病原菌之一，在大量增殖和感染后可造成長(zhǎng)牡蠣炎癥反應(yīng)、組織壞死甚至死亡。目前仍然缺乏針對(duì)燦爛弧菌感染的有效防控方法。

2、mirna是一種非編碼小rna，通過(guò)與靶基因mrna互補(bǔ)結(jié)合進(jìn)而調(diào)控基因表達(dá)。在大多數(shù)情況下，mirna誘導(dǎo)靶基因mrna降解或在翻譯后水平阻止蛋白質(zhì)合成。已有研究表明，mirna在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答以及抗細(xì)菌感染等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在脊椎動(dòng)物中，mir-146、mir-155、mir-125、let-7和mir-21等在人類遭受細(xì)菌感染期間調(diào)控炎癥反應(yīng)，并參與免疫應(yīng)答過(guò)程。在無(wú)脊椎動(dòng)物中，例如長(zhǎng)牡蠣cgi-mir-2d通過(guò)靶向核因子(nf-κb)途徑中的cgiκb2，調(diào)節(jié)血淋巴細(xì)胞的吞噬作用，說(shuō)明mirna參與調(diào)節(jié)無(wú)脊椎動(dòng)物抗細(xì)菌感染和免疫應(yīng)答過(guò)程。目前越來(lái)越多的mirnas功能被揭示，其抑制劑或模擬物在調(diào)控生物生理代謝和抗病等方面也發(fā)揮重要作用。例如，一種用于日本對(duì)蝦抗wssv感染的amo-mirna，能夠顯著抑制wssv在日本對(duì)蝦體內(nèi)的增殖，有效解決了養(yǎng)殖對(duì)蝦感染wssv致死的現(xiàn)象。mir-96a-5p是在長(zhǎng)牡蠣組織和外泌體中發(fā)現(xiàn)的較為保守的mirna。已有研究表明，人類mir-96-5p能夠調(diào)控lps介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，提高lps處理的hsaec細(xì)胞活力。此外，mir-96-5p抑制劑能夠阻斷人類crc細(xì)胞遷移并參與癌癥調(diào)控。但是目前關(guān)于長(zhǎng)牡蠣mir-96-5p抑制劑的應(yīng)用還未有研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)及在抗細(xì)菌感染中的應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案為：

3、一種長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)，長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)為seqid?no.1中堿基所示。

4、seq?id?no.1

5、5’-gugacuauuccgccagugccaag-3’。

6、一種所述的長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)的應(yīng)用，所述長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)在抗細(xì)菌感染中的應(yīng)用。

7、所述長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)在制備抗細(xì)菌感染制劑中的應(yīng)用。

8、所述長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)在制備抗?fàn)N爛弧菌感染制劑中的應(yīng)用。

9、所述抗?fàn)N爛弧菌感染制劑的使用劑量為100μl/只，制劑中mir-96a-5p濃度20μm。

10、一種長(zhǎng)牡蠣抗?fàn)N爛弧菌(vibrio?splendidus)感染的制劑，所述制劑含seq?idno.1所示的長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)。

11、本發(fā)明研究長(zhǎng)牡蠣mirnas在燦爛弧菌感染過(guò)程中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)燦爛弧菌感染后長(zhǎng)牡蠣血淋巴細(xì)胞中mir-96a-5p的表達(dá)水平顯著下降，表明mir-96a-5p可能參與了長(zhǎng)牡蠣抗?fàn)N爛弧菌感染過(guò)程。本發(fā)明設(shè)計(jì)了mir-96a-5p的反義mirna抑制劑，抑制mir-96a-5p的表達(dá)水平。對(duì)長(zhǎng)牡蠣注射mir-96a-5p抑制劑，并進(jìn)行燦爛弧菌刺激后，長(zhǎng)牡蠣血淋巴中的燦爛弧菌數(shù)量與注射mir-96a-5p抑制劑陰性對(duì)照nc組相比顯著下降。結(jié)果說(shuō)明，mir-96a-5p抑制劑能夠通過(guò)抑制燦爛弧菌在長(zhǎng)牡蠣體內(nèi)的增殖來(lái)抵御細(xì)菌感染。

技術(shù)特征：

1.一種長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)，其特征在于：長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)為seq?id?no.1中堿基所示。

2.一種權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)的應(yīng)用，其特征在于：所述長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)在抗細(xì)菌感染中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)在制備抗細(xì)菌感染制劑中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)在制備抗?fàn)N爛弧菌感染制劑中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述抗?fàn)N爛弧菌感染制劑的使用劑量為100μl/只，制劑中mir-96a-5p濃度20μm。

6.一種長(zhǎng)牡蠣抗?fàn)N爛弧菌(vibrio?splendidus)感染的制劑，其特征在于：所述制劑含權(quán)利要求1所述的seq?id?no.1所示的長(zhǎng)牡蠣非編碼小rna(mir-96a-5p)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種長(zhǎng)牡蠣非編碼小RNA(miR?96a?5p)及在抗細(xì)菌感染中的應(yīng)用。長(zhǎng)牡蠣非編碼小RNA(miR?96a?5p)為SEQ?ID?No.1中堿基所示。其在抵御細(xì)菌感染中具有明顯效果。本發(fā)明涉及的miR?96a?5p抑制劑在注射長(zhǎng)牡蠣后能夠顯著抑制長(zhǎng)牡蠣體內(nèi)細(xì)菌的增殖。

技術(shù)研發(fā)人員：宋林生,高磊,劉璐,王玲玲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：大連海洋大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19