本發(fā)明涉及生物洗滌劑，具體是一種復合酶制劑及其制備方法和在去除鮮茶葉氨基甲酸酯類農藥殘留中的應用。

背景技術：

1、

2、據(jù)統(tǒng)計，百草枯會造成人的肺、肝、腎組織的損傷；二硫代氨基甲酸鹽類藥劑的代謝物乙撐硫脲(etu)會誘發(fā)人體甲狀腺癌并調節(jié)甲狀腺激素；有機氯農藥如滴滴涕(ddt，雙對氯苯基三氯乙烷)與癌癥、哮喘、糖尿病和兒童生長障礙等有關，還有干擾內分泌的作用。

3、目前去除農藥殘留的傳統(tǒng)方法主要是清洗、削皮、水煮等等，但上述方法應用在茶葉上存在降解率低、局限性大等缺陷。專利公布號為“cn110037130a(申請?zhí)?01910241167.x)”的中國專利申請中公開了一種超臨界二氧化碳流體技術脫除茶葉中農殘的方法，將含有農藥殘留的干茶葉與低毒有機溶劑混勻，在萃取釜中浸泡一定的時間，然后通入超臨界co2，調節(jié)co2的流量和流速以及萃取的壓力、溫度和時間，萃取時間結束后萃取物便進入分離釜中，調節(jié)分離釜的壓力即可從分離釜處收集到茶葉中的農藥殘留，從而得到脫農殘的茶葉；該專利能夠達到90％以上的農藥去除率，但僅針對于干茶葉上的農藥殘留。

4、鮮茶葉的農殘去除技術尚不健全，比如專利公布號為“cn117461704a(申請?zhí)?02311653589.0)”的中國專利申請中通過將茶葉原料用氯化鈉溶液進行浸泡，再經(jīng)純化水漂洗得到去農殘茶葉原料a，將去農殘茶葉原料a在溫度60～85℃的純化水中進行浸水處理2～4次得到物料b，將物料b進行烘炒得到物料c，對物料c進行后續(xù)步驟得到目標物。該專利雖然適用于鮮茶葉，但農殘去除率較低，不能滿足市場需求。

5、為了解決農藥殘留所帶來的問題，目前市場上出現(xiàn)了采用酶制劑對果蔬進行農藥殘留的洗滌劑，比如專利公布號為“cn109965189a(申請?zhí)?019103295515)”的中國專利申請中公開了一種果蔬農藥清洗劑，主要成分包括植物復合酶、水、葡萄糖、硅藻土，該清洗劑不含任何化學物質，能夠有效地分解果蔬中的農藥殘留，達到零農殘，但該果蔬農藥清洗劑中所采用的酶為游離酶，游離酶進入水相后會快速運動，因此將其應用在去除常規(guī)果蔬農殘時的效果良好，但應用于茶葉時則會出現(xiàn)農殘去除率低、對茶葉損傷大等缺點。

6、綜上，如何在保證茶葉品質的前提下高效去除鮮茶葉表面的農藥殘留，是目前亟待解決的技術問題。

技術實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種復合酶制劑及其制備方法和在去除鮮茶葉氨基甲酸酯類農藥殘留中的應用，能夠在保證茶葉品質的同時，全面、有效地去除鮮茶葉表面的農藥殘留。

2、本發(fā)明技術方案如下：

3、一種復合酶制劑，包括生物復合酶和泡騰試劑，所述生物復合酶包括磷脂酶、羧酸脂酶和脂肪酶。

4、優(yōu)選的，所述生物復合酶與泡騰試劑的質量比例為(3～5):(2～8)。

5、生物復合酶與泡騰試劑的質量比例應嚴格控制。當生物復合酶的用量過大時，泡騰效果不明顯，且酶制劑在氣泡表面的吸附能力也會大打折扣，緩釋的作用下降，容易導致復合酶制劑產(chǎn)品在入水時，生物復合酶與泡騰試劑之間相互作用損傷茶葉表面，造成茶葉品質受損；當泡騰試劑的用量過大時，一方面會造成輔料的浪費，另一方面洗滌液的ph值也會發(fā)生降低，無法營造出弱堿性環(huán)境，在造成茶葉的品質下降的同時農殘去除率也會下降。

6、優(yōu)選的，所述磷脂酶為磷脂酶a和磷脂酶b，所述羧酸脂酶為豬肝酯酶。

7、進一步優(yōu)選的，所述磷脂酶a、磷脂酶b、豬肝酯酶、脂肪酶之間的質量比例為(1～2):(1～2):(0.5～1):(2～7)。

8、進一步優(yōu)選的，所述磷脂酶a的酶活力為100000～200000u/g，所述磷脂酶b的酶活力為100000～300000u/g；其中，1u為每分鐘將磷脂轉化為1μmol游離脂肪酸所需的酶量；

9、所述豬肝酯酶的酶活為5000～9000u/g，1u為每分鐘將1.0mmol/l乙酸-1-萘酯為轉化為1μmolα-萘酯所需的酶量；

10、所述脂肪酶的酶活力為20000～100000u/g，1u為每分鐘將脂肪轉化為1μmol脂肪酸所需的酶量。

11、優(yōu)選的，所述泡騰試劑包括有機弱酸與食品級無機鹽。

12、進一步優(yōu)選的，所述有機弱酸與食品級無機鹽之間的質量比例為1:(1～2)。

13、優(yōu)選的，所述泡騰試劑的粒度為160～400目。

14、進一步優(yōu)選的，所述有機弱酸包括檸檬酸、蘋果酸中的一種或者多種。

15、進一步優(yōu)選的，所述食品級無機鹽包括nah2po4、na2co3中的一種或多種。

16、進一步優(yōu)選的，所述nah2po4、na2co3之間的質量比例為1:(2～4)。

17、所述復合酶制劑的制備方法，包括如下步驟：

18、(1)將聚乙二醇-6000于70～75℃溫度下熔融后，加入食品級無機鹽，攪拌均勻，冷卻，粉碎，得粉末；

19、(2)將生物復合酶分為兩部分，分別為a部分和b部分，將a部分與步驟(1)的粉末混合，攪拌均勻，加入乙醇溶液進行造粒、干燥、整粒，得堿粒；將b部分與有機弱酸混合，加入乙醇溶液進行造粒、干燥、整粒，得酸粒；

20、(3)將步驟(2)的酸粒和堿?；旌暇鶆?，加入聚乙二醇-6000，混勻，得復合酶制劑。

21、優(yōu)選的，步驟(1)中所述聚乙二醇-6000和食品級無機鹽之間的質量比例為(0.1～0.9):1。

22、優(yōu)選的，步驟(2)中所述a部分和b部分之間的質量比例為1:(0.9～1.1)。

23、所述復合酶制劑在去除鮮茶葉農藥殘留中的應用。

24、優(yōu)選的，所述農藥為氨基甲酸酯類農藥。

25、進一步優(yōu)選的，所述氨基甲酸酯類農藥為茚蟲威、仲丁威、甲萘威中的一種或多種。

26、優(yōu)選的，應用方法是：將復合酶制劑與水按照質量比為1：200～600的比例復配制成洗滌劑，然后通過浸洗的方式去除鮮茶葉表面的農藥殘留。

27、氨基甲酸酯類農藥以毒扁豆堿結構為基礎結構，骨架為氨基甲酸，常用的是n-甲酰氨基，它不需經(jīng)代謝活化，可直接與乙酰膽堿酯酶形成疏松復合體，抑制乙酰膽堿酯酶的活性；氨基甲酸酯類農藥在酯鍵斷裂后將失去其毒性作用。磷脂酶能夠催化水解酯鍵，酯酶通過其活性位點的絲氨酸殘基攻擊底物的羰基碳原子，即絲氨酸引發(fā)親核攻擊和c-o鍵切割。同時，羧酸酯酶能夠特異性地識別并作用于農藥殘留，通過水解反應切斷酯鍵，釋放出甲醇和相應的氨基甲酸衍生物，這個過程中，農藥的毒性結構被破壞，從而降低了其對環(huán)境和生物體的潛在危害。本發(fā)明中的復合酶制劑作為一種蛋白質，能夠與氨基甲酸酯類農殘結合從而形成絮狀沉淀，從而實現(xiàn)農殘從茶葉表面脫除。

28、納微泡騰緩釋技術基于有機弱酸與食品級無機鹽之間的復分解反應，通過控制原料(泡騰試劑)的粒度在160～400目，使泡騰產(chǎn)生的氣泡尺寸達到納米或微米級別。復合酶制劑結合納微泡騰緩釋技術，利用co2供體和h+供體反應產(chǎn)生co2氣泡，促進復合酶制劑吸附在氣泡表面上并分散，可達到緩釋的效果，且不損傷茶葉表面。另外，本發(fā)明采用聚乙二醇-6000對泡騰試劑進行包膜，得到保證泡騰效果穩(wěn)定的基礎泡騰堿源，后進一步與生物復合酶、泡騰試劑酸源充分混合，得到復合酶制劑。本發(fā)明中的復合酶制劑在常溫下自動進行水解，微小氣泡上升攪動的過程代替了常見洗滌劑搓洗的過程，大大降低了茶葉的破損率，并且復合酶制劑入水反應后能營造一種弱堿性的環(huán)境(堿性條件可以增加毒性價鍵的電子密度，使其更易被水分子攻擊和斷裂)，有助于分解茶葉表面的氨基甲酸酯類農藥。

29、有益效果：

30、(1)本發(fā)明提供了一種復合酶制劑及其制備方法，采用特定的生物復合酶結合納微泡騰緩釋技術，能夠在保證茶葉表面完好的同時，全面、有效地去除鮮茶葉表面的農藥殘留。

31、(2)本發(fā)明所提供的復合酶制劑，作為一種生物催化劑，其相比于化學方法對環(huán)境更加友好，不會造成二次污染。