本發(fā)明屬于中藥及生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，具體涉及一種利用天然中藥為底物，經(jīng)微生物合成后制備獲得含有中藥抗菌功能的細(xì)菌纖維素膜，并能夠在生物抗菌領(lǐng)域得到應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、細(xì)菌纖維素(bc)是一種天然纖維素納米材料，由革蘭氏陰性需氧菌，以葡萄糖為底物，在酶催化下葡萄糖通過β-1,4-糖苷鍵聚合而成。具有網(wǎng)狀網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)精細(xì)、純度高、生物相容好、無毒、機(jī)械強(qiáng)度高、溶脹能力高、合成可控等優(yōu)點(diǎn)?？赏ㄟ^物理、化學(xué)和微生物方法賦予細(xì)菌纖維素抗菌、抗炎等特性，使其在食品、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

2、目前，利用物理浸漬和化學(xué)修飾賦予細(xì)菌纖維素抗菌性能的方法已經(jīng)很成熟。物理浸漬條件溫和，但是功能性物質(zhì)與細(xì)菌纖維素相互作用弱，結(jié)合不緊密；化學(xué)修飾通過化學(xué)物質(zhì)對(duì)細(xì)菌纖維素的羥基改性，使功能性物質(zhì)與細(xì)菌纖維素以化學(xué)鍵、金屬鍵等方式結(jié)合，作用較強(qiáng)，但是化學(xué)物質(zhì)往往具有毒性，對(duì)環(huán)境和產(chǎn)品的安全性有影響。

3、為賦予細(xì)菌纖維素的抗菌特性，抗菌劑的選擇主要有銀、鋅、鈦等金屬離子，醇類、季銨鹽類等有機(jī)抗菌劑及天然提取物，負(fù)載金屬離子或季銨鹽過程存在安全性問題。如何選擇一種優(yōu)異的抗菌物質(zhì)，并通過綠色安全的合成方法提高細(xì)菌纖維素膜的抗菌活性，是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種具有中藥抗菌功能的細(xì)菌纖維素膜的制備方法。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

3、一種具有中藥抗菌功能的細(xì)菌纖維素膜制備方法，包括以下步驟：

4、(1)采用特征培養(yǎng)基為溶劑，將黃芩原料在80-85℃下浸提3h，過濾去除沉渣，獲得含有黃芩有效抗菌成分的浸提液；黃芩與溶劑的質(zhì)量比為1:10～50；

5、(2)浸提液經(jīng)高壓滅菌，得到細(xì)菌纖維素的合成培養(yǎng)基，冷卻待用；

6、(3)取出冷藏的細(xì)菌纖維素合成菌，無菌狀態(tài)下接種到lb固體培養(yǎng)基中，并劃平板活化微生物；

7、(4)將活化后的微生物，通過單菌落挑菌方式接種到步驟(2)的合成培養(yǎng)基中，于溫度30℃、200rpm條件下?lián)u床培養(yǎng)24h，獲得種子液；

8、(5)將所述種子液以5％-10％的接種量，接種到步驟(2)的合成培養(yǎng)基中，于溫度30℃、200rpm條件下?lián)u床培養(yǎng)24h，然后靜置培養(yǎng)5天，獲得功能性細(xì)菌纖維素膜；

9、(6)將所述的功能性細(xì)菌纖維素膜用去離子水沖洗5-6次，去除表面微生物和其他雜質(zhì)，獲得含黃芩有效抗菌成分的功能性細(xì)菌纖維素膜。

10、步驟(1)的特征培養(yǎng)基組成為：1l水、20g葡萄糖、5g酵母粉。

11、步驟(1)中黃芩原料采用粉碎后的200目顆粒料，含水量低于10％；

12、黃芩原料與溶劑的質(zhì)量比為1:10。

13、步驟(2)中浸提液高壓滅菌條件為：121℃下高壓滅菌20min。

14、步驟(3)所述lb固體培養(yǎng)基配置方法：將牛肉膏3g、蛋白胨10g、nacl5g和18g瓊脂粉混合，加蒸餾水補(bǔ)至1l，121℃高壓滅菌20min。

15、本發(fā)明有益效果：

16、1.本發(fā)明以黃芩為底物，通過配置合適的黃芩浸提液比例，采用微生物發(fā)酵，獲得了具有抗菌功能的細(xì)菌纖維素膜。

17、2.通過液相檢測浸泡液中的中藥有效成分，確定細(xì)菌纖維素膜上含有相應(yīng)的黃芩苷、黃芩素特征化合物；通過電鏡檢測，證明這些化合物存在于細(xì)菌纖維素膜的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中；通過紅外檢測，證明細(xì)菌纖維素膜上存在黃芩苷的特征峰，說明黃芩苷成功結(jié)合在細(xì)菌纖維素膜上；通過抗菌檢測，證明細(xì)菌纖維素膜中負(fù)載的黃芩苷、黃芩素化合物具有優(yōu)良抗菌功效。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該細(xì)菌纖維素膜對(duì)大腸桿菌的抑制圈直徑達(dá)到0.9cm，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑達(dá)到1.4cm。

18、3.本發(fā)明采用中藥底物，利用細(xì)菌纖維素合成菌直接合成細(xì)菌纖維素，方法簡便、綠色，且對(duì)抗菌濃度做了明確探索，合成的細(xì)菌纖維素具有很好抗菌功能，在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種具有中藥抗菌功能的細(xì)菌纖維素膜制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)的特征培養(yǎng)基組成為：1l水、20g葡萄糖、5g酵母粉。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中黃芩原料采用粉碎后的200目顆粒料，含水量低于10％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中黃芩原料與溶劑的質(zhì)量比為1:10。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中浸提液高壓滅菌條件為：121℃下高壓滅菌20min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述lb固體培養(yǎng)基的配置方法：將牛肉膏3g、蛋白胨10g、nacl?5g和18g瓊脂粉混合，加蒸餾水補(bǔ)至1l，121℃高壓滅菌20min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種具有中藥抗菌功能的細(xì)菌纖維素膜制備方法，以黃芩浸提液為底物，通過微生物發(fā)酵合成負(fù)載有黃芩苷、黃芩素的功能性細(xì)菌纖維素。通過液相檢測確定功能性細(xì)菌纖維素膜上含有黃芩苷、黃芩素等特征化合物；電鏡檢測觀察到黃芩的特征化合物存在于細(xì)菌纖維素膜的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中，對(duì)其抗菌功能檢測說明，細(xì)菌纖維素膜對(duì)黃色葡萄球菌和大腸桿菌均具有抑制作用。本發(fā)明采用中藥底物原位合成細(xì)菌纖維素，方法簡便、綠色，對(duì)抗菌濃度進(jìn)行了探索，合成的細(xì)菌纖維素具有較好抗菌功能，在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：葉建斌,王秋惠,徐佳,朱虎,王守安,王香江,胡亦聲,郭清峰,劉梓陽
受保護(hù)的技術(shù)使用者：莆田學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19