本技術(shù)涉及用于將寡核苷酸分子載荷遞送至細(xì)胞的靶向復(fù)合物、包含這樣的復(fù)合物的制劑、以及它們的用途，特別是涉及疾病治療的用途。電子序列表的引用電子序列表(d082470076wo00-seq-cob.xml；大小：58,346字節(jié)；以及創(chuàng)建日期：2023年3月22日)的內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文。

背景技術(shù)：

1、強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良(myotonic?dystrophy，dm)是顯性遺傳的遺傳疾病，其特征在于肌強(qiáng)直、肌肉損失或變性、肌肉功能減弱、胰島素抵抗、心律不齊、平滑肌功能障礙和神經(jīng)系統(tǒng)異常。dm是成人發(fā)病的肌營(yíng)養(yǎng)不良的最常見形式，全世界發(fā)病率為全世界8000人中約1人。已經(jīng)描述了該疾病的兩種類型，即1型強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良(myotonic?dystrophy?type1，dm1)和2型強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良(myotonic?dystrophy?type?2，dm2)。dm1是該疾病的更常見形式，其由19號(hào)染色體上dmpk的3’非編碼區(qū)中ctg三核苷酸重復(fù)的重復(fù)擴(kuò)增引起；dm2是由3號(hào)染色體上znf9的第一內(nèi)含子中cctg四核苷酸重復(fù)的重復(fù)擴(kuò)增引起。在dm1患者中，可包含大于約50至約3,000或更多的總重復(fù)的ctg三核苷酸重復(fù)的重復(fù)擴(kuò)增導(dǎo)致產(chǎn)生有毒的rna重復(fù)，所述有毒的rna重復(fù)能夠形成以高親和力結(jié)合必需的胞內(nèi)蛋白(例如肌盲樣蛋白(muscleblind-like?protein))的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)隔離(proteinsequestration)和疾病特征性的功能喪失表型。除了支持性護(hù)理和用于解決疾病癥狀的治療之外，目前尚無(wú)可用于dm1的有效治療劑。

2、根據(jù)一些方面，本公開內(nèi)容提供了復(fù)合物和包含這樣的復(fù)合物的制劑。

3、根據(jù)一些方面，本文中提供的制劑包含復(fù)合物，所述復(fù)合物包含與抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1(anti-transferrin?receptor?1，tfr1)抗體共價(jià)連接的寡核苷酸，

4、其中所述抗tfr1抗體包含：含有seq?id?no:1、7或12中所示的序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(heavy?chain?complementarity?determining?region?1，cdr-h1)，含有seq?id?no:2、8或13中所示的序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(heavy?chain?complementarity?determiningregion?2，cdr-h2)，含有seq?id?no:3、9或14中所示的序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(heavychain?complementarity?determining?region?3，cdr-h3)，含有seq?id?no:4、10或15中所示的序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(light?chain?complementarity?determining?region?1，cdr-l1)，含有seq?id?no:5或11中所示的序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(light?chaincomplementarity?determining?region?2，cdr-l2)以及含有seq?id?no:6或16中所示的序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(light?chain?complementarity?determining?region?3，cdr-l3)，

5、其中所述寡核苷酸包含5’-x-y-z-3’構(gòu)型，其中x和z是包含一個(gè)或更多個(gè)經(jīng)修飾核苷的側(cè)翼區(qū)，并且y是包含一個(gè)或更多個(gè)2’-脫氧核糖核苷的間隔區(qū)，

6、并且其中所述復(fù)合物與三(羥甲基)氨基甲烷和蔗糖配制在一起。

7、根據(jù)一些方面，本文中提供的制劑包含復(fù)合物，所述復(fù)合物包含式(i)：[r1]n1-r2的結(jié)構(gòu)，其中每個(gè)r1獨(dú)立地包含下式(ia)的基團(tuán)：

8、

9、(ia)，其中

10、r2包含抗體，并且

11、r3包含寡核苷酸，所述寡核苷酸包含5’-x-y-z-3’構(gòu)型，其中x和z是包含一個(gè)或更多個(gè)經(jīng)修飾核苷的側(cè)翼區(qū)，并且y是包含一個(gè)或更多個(gè)2’-脫氧核糖核苷的間隔區(qū)，

12、其中r1在連接點(diǎn)a處與r2共價(jià)連接；并且

13、其中n1是整數(shù)，其表示r1的實(shí)例數(shù)，其中r1的每個(gè)實(shí)例與抗體的不同氨基酸殘基共價(jià)連接；

14、其中復(fù)合物與三(羥甲基)氨基甲烷和蔗糖配制在一起。在一些實(shí)施方案中，抗體的每個(gè)不同的氨基酸殘基是賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，所述抗體是抗tfr1抗體。

15、在一些實(shí)施方案中，所述抗體包含：含有seq?id?no:1、7或12中所示的序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(cdr-h1)，含有seq?id?no:2、8或13中所示的序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(cdr-h2)，含有seq?id?no:3、9或14中所示的序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(cdr-h3)，含有seq?id?no:4、10或15中所示的序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(cdr-l1)，含有seq?id?no:5或11中所示的序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(cdr-l2)以及含有seq?id?no:6或16中所示的序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(cdr-l3)。

16、在一些實(shí)施方案中，制劑為凍干形式或冷凍固體形式。

17、在一些實(shí)施方案中，制劑為水溶液。

18、在一些實(shí)施方案中，三(羥甲基)氨基甲烷以5mm至50mm的濃度存在于水溶液中。

19、在一些實(shí)施方案中，蔗糖以5％至15％重量/體積(w/v％)的濃度存在于所述水溶液中。

20、在一些實(shí)施方案中，水溶液的ph為6.5至8.5。

21、在一些實(shí)施方案中，三(羥甲基)氨基甲烷以25mm的濃度存在于所述水溶液中，和/或所述蔗糖以10w/v％的濃度存在于所述水溶液中，和/或所述水溶液的ph為7.5。

22、在一些實(shí)施方案中，抗體是fab片段、全長(zhǎng)igg、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv或fv。

23、在一些實(shí)施方案中，抗體是fab片段。

24、在一些實(shí)施方案中，抗體包含含有與seq?id?no:17具有至少85％同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(vh)；和/或其中所述抗體包含含有與seq?id?no:18具有至少85％同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(vl)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含含有seq?id?no:17的氨基酸序列的vh和/或包含含有seq?id?no:18的氨基酸序列的vl。

25、在一些實(shí)施方案中，抗體包含含有與seq?id?no:19具有至少85％同一性的氨基酸序列的重鏈；和/或其中所述抗體包含含有與seq?id?no:20具有至少85％同一性的氨基酸序列的輕鏈。在一些實(shí)施方案中，抗體包含含有seq?id?no:19的氨基酸序列的重鏈和/或包含含有seq?id?no:20的氨基酸序列的輕鏈。

26、在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長(zhǎng)度為10至30個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含具有針對(duì)seq?id?no:22的至少8個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)的互補(bǔ)區(qū)的核苷酸序列。

27、在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含seq?id?no:21中所示的核苷酸序列的至少8個(gè)連續(xù)核苷酸。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含seq?id?no:21的核苷酸序列。

28、在一些實(shí)施方案中，每個(gè)r1包含下式(ib)的基團(tuán)：

29、

30、其中+n表示lna(2’-4’亞甲基橋)核糖核苷，dn表示2’-脫氧核糖核苷，on表示2’-o-甲氧基乙基(moe)修飾的核糖核苷，oc表示5-甲基-2’-moe-胞苷，+c表示5-甲基-2’-4’-雙環(huán)-胞苷(2’-4’亞甲基橋)，ou表示5-甲基-2’-moe-尿苷，*表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯(lián)，使得所述寡核苷酸包含cagcgcccaccaguca(seq?id?no：21)的核堿基序列。

31、在一些實(shí)施方案中，每個(gè)r1包含下式(ic)的基團(tuán)：

32、

33、在一些實(shí)施方案中，復(fù)合物以10mg/ml至50mg/ml的濃度存在于制劑中。

34、在一些實(shí)施方案中，制劑還包含一種或更多種未與寡核苷酸共價(jià)連接的抗體。

35、在一些實(shí)施方案中，制劑中復(fù)合物的n1的平均值為0.5至5。

36、根據(jù)一些方面，本文中提供了在對(duì)象中降低dmpk表達(dá)和/或治療強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良的方法，所述方法包括向?qū)ο笫┯糜行Я康谋疚闹刑峁┑闹苿?/p>

37、在一些實(shí)施方案中，對(duì)象具有與強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)的dmpk等位基因疾病相關(guān)性重復(fù)的擴(kuò)增。在一些實(shí)施方案中，疾病相關(guān)性重復(fù)包含ctg三核苷酸序列的重復(fù)單元。

38、在一些實(shí)施方案中，復(fù)合物在所述對(duì)象中降低dmpk表達(dá)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路