本發(fā)明涉及微生物，尤其涉及一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、近年來，利用降解細(xì)菌去除有毒有機(jī)污染物（例如鄰苯二甲酸酯（paes））的微生物修復(fù)技術(shù)，因其高效經(jīng)濟(jì)、環(huán)境友好，已成為頗具前景的有機(jī)污染控制技術(shù)之一?，F(xiàn)有技術(shù)中的大多數(shù)研究采用具有專性降解功能的單菌株。然而，單菌株通常只能針對某一類或某幾類特定的污染物進(jìn)行降解。如果污染物種類復(fù)雜、成分多樣，單一菌株的代謝途徑往往不足以實(shí)現(xiàn)全面的降解。此外，單菌株對環(huán)境條件（如溫度、ph值、氧濃度、營養(yǎng)物質(zhì)等）的適應(yīng)性較差。在自然環(huán)境中，這些條件往往波動(dòng)較大，如果單菌株不適應(yīng)某些變化，可能會(huì)喪失活性或生存能力，從而影響污染物（例如鄰苯二甲酸酯）的降解效率?？梢姡瑔尉陮τ卩彵蕉姿狨サ慕到庑Ч^差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提出一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法及其應(yīng)用，能夠通過多種菌株的協(xié)同作用，實(shí)現(xiàn)對于污染土壤和植物中鄰苯二甲酸酯的高效降解。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的采用如下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法，包括：

4、活化谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌；

5、采用活化后的谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌制備復(fù)合菌懸液；

6、對復(fù)合菌懸液和生物炭進(jìn)行固化處理，得到固定化復(fù)配菌群；

7、其中，谷氨酸桿菌的16s?rrna序列如seq?id?no：1所示，戈登氏菌的16s?rrna序列如seq?id?no：2所示，不動(dòng)桿菌的16s?rrna序列如seq?id?no：3所示。

8、在第一方面的一種實(shí)現(xiàn)方式中，采用活化后的谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌制備復(fù)合菌懸液，包括：

9、分別將活化后的谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌進(jìn)行離心后，棄去上清液，再次離心后得到谷氨酸桿菌菌體、戈登氏菌菌體以及不動(dòng)桿菌菌體。

10、將谷氨酸桿菌菌體、戈登氏菌菌體以及不動(dòng)桿菌菌體分別用msm液體培養(yǎng)基制成菌懸液，按照1~2：1~2：1的體積比例進(jìn)行復(fù)配，得到所述復(fù)合菌懸液。

11、在第一方面的一種實(shí)現(xiàn)方式中，對復(fù)合菌懸液和生物炭進(jìn)行處理，得到固定化復(fù)配菌群，包括：

12、將復(fù)合菌懸液與生物炭按5ml~15ml：1g的比例混合，于恒溫震蕩培養(yǎng)后，再通過多次離心棄去上清液，得到固定化復(fù)配菌群。

13、在第一方面的一種實(shí)現(xiàn)方式中，活化谷氨酸桿菌屬、戈登氏菌屬以及不動(dòng)桿菌屬，包括：分別將谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌接種于lb液體培養(yǎng)基中，并培養(yǎng)至對數(shù)生長期，得到活化后的谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌。

14、在第一方面的一種實(shí)現(xiàn)方式中，生物炭的制備方法為：將楊木枝烘干、粉碎以及過篩后進(jìn)行熱解，得到生物炭。

15、第二方面，本發(fā)明提供一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的應(yīng)用，基于上述一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法制備得到的固定化復(fù)配菌群，將固定化復(fù)配菌群用于降解污染土壤中的鄰苯二甲酸酯。

16、具體的，將固定化復(fù)配菌群按照1~5%質(zhì)量比施加在paes污染土壤中，從而實(shí)現(xiàn)對污染土壤中的鄰苯二甲酸酯的降解。

17、第三方面，本發(fā)明還提供一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的應(yīng)用，基于上述一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法制備得到的固定化復(fù)配菌群，用于降解植物中的鄰苯二甲酸酯。

18、具體的，將固定化復(fù)配菌群按照一定的質(zhì)量比施加在植物所生長的paes污染土壤中，從而實(shí)現(xiàn)對植物中的鄰苯二甲酸酯的降解。

19、第四方面，本發(fā)明還提供一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的應(yīng)用，基于上述的固定化復(fù)配菌群，用于同時(shí)降解污染土壤中的鄰苯二甲酸酯以及植物中的鄰苯二甲酸酯。

20、具體的，將固定化復(fù)配菌群按照一定的質(zhì)量比施加在植物所生長的paes污染土壤中，從而同時(shí)實(shí)現(xiàn)對污染土壤和植物中的鄰苯二甲酸酯的降解。

21、在第二方面、第三方面以及第四方面的一種實(shí)現(xiàn)方式中，鄰苯二甲酸酯包括鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸丁基芐基酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯和鄰苯二甲酸二正辛酯中的至少一種。

22、本發(fā)明的有益效果為：

23、本發(fā)明利用楊木枝制備生物炭并將復(fù)配菌群負(fù)載至生物炭上，克服了游離菌易受外界環(huán)境的影響以及生物有效性低的問題；實(shí)現(xiàn)了paes污染治理和園林廢棄物資源化開發(fā)的耦合。

24、現(xiàn)有技術(shù)采用單一菌株或土著菌群對paes進(jìn)行生物降解的方法，由于單菌降解廣譜性受限，而土著菌群組成復(fù)雜，菌群中不同微生物對污染物的降解能力差異較大，且不一定包含有專門針對特定污染物的菌株，使得現(xiàn)有方法對于paes的降解效率較低，相較于單菌降解paes的現(xiàn)有方法，本發(fā)明提供的復(fù)配菌群能夠通過不同菌株之間的協(xié)同作用，對paes進(jìn)行更徹底的降解轉(zhuǎn)化，從而提高paes降解效率。

25、本發(fā)明提供的固定化復(fù)配菌群不僅能去除土壤以及植物中的paes，還能在分解paes的同時(shí)分解土壤中的有機(jī)質(zhì)，并將有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化為植物可利用的營養(yǎng)物質(zhì)，優(yōu)化植物根際環(huán)境，形成有利于植物生長的微生態(tài)環(huán)境，從而促進(jìn)植物的生長和發(fā)育。

技術(shù)特征：

1.一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法，其特征在于，包括：

2.如權(quán)利要求1所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法，其特征在于，所述采用活化后的谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌制備復(fù)合菌懸液，包括：

3.如權(quán)利要求2所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法，其特征在于，對所述復(fù)合菌懸液和生物炭進(jìn)行固化處理，得到固定化復(fù)配菌群，包括：

4.如權(quán)利要求1所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法，其特征在于，所述活化谷氨酸桿菌屬、戈登氏菌屬以及不動(dòng)桿菌屬，包括：

5.如權(quán)利要求1所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法，其特征在于，所述生物炭的制備方法為：

6.一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的應(yīng)用，基于權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法制備得到的固定化復(fù)配菌群，其特征在于，將所述固定化復(fù)配菌群用于降解污染土壤中的鄰苯二甲酸酯。

7.一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的應(yīng)用，基于權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法制備得到的固定化復(fù)配菌群，其特征在于，將所述固定化復(fù)配菌群用于降解植物中的鄰苯二甲酸酯。

8.一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的應(yīng)用，基于權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法制備得到的固定化復(fù)配菌群，其特征在于，將所述固定化復(fù)配菌群用于同時(shí)降解污染土壤中的鄰苯二甲酸酯以及植物中的鄰苯二甲酸酯。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種降解鄰苯二甲酸酯的固定化復(fù)配菌群的制備方法及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，能夠通過多種菌株的協(xié)同作用，實(shí)現(xiàn)對于污染土壤和植物中鄰苯二甲酸酯的高效降解。該方法包括：活化谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌；采用活化后的谷氨酸桿菌、戈登氏菌以及不動(dòng)桿菌制備復(fù)合菌懸液；對復(fù)合菌懸液和生物炭進(jìn)行固化處理，得到固定化復(fù)配菌群，其中，谷氨酸桿菌的16S?rRNA序列如SEQ?ID?NO：1所示，戈登氏菌的16S?rRNA序列如SEQ?ID?NO：2所示，不動(dòng)桿菌的16S?rRNA序列如SEQ?ID?NO：3所示。

技術(shù)研發(fā)人員：高彥征,左翔之,湯磊,凌婉婷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26