本發(fā)明涉及與bcma和gprc5d的同時(shí)結(jié)合car分子結(jié)構(gòu)及序列。

背景技術(shù)：

1、多發(fā)性骨髓瘤(multiple?myleloma)是一種發(fā)生于骨髓的漿細(xì)胞腫瘤。該腫瘤會(huì)引發(fā)高鈣血癥，貧血，腎功能障礙，骨壞死和骨髓衰竭等病癥。目前多發(fā)性骨髓瘤是第二大常見血液腫瘤[1]。以2020年世界衛(wèi)生組織who公布的多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病率統(tǒng)計(jì)顯示，亞洲人群發(fā)病率和死亡率占比分別為36％和42％，居所有洲統(tǒng)計(jì)的首位。全球多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病率和死亡率比為1.8:1.1，亞洲為1.1:0.76，可見多發(fā)性骨髓在發(fā)病人群的生存率較低。主要原因一是發(fā)生人群的年齡中位值偏高在66歲左右，40歲以下人群的發(fā)生率在2％左右。二是多發(fā)性骨髓瘤在常用的化療，免疫調(diào)節(jié)劑以及單抗療法下幾乎無治愈可能性，勉強(qiáng)緩解也伴隨著極高的復(fù)發(fā)率，即復(fù)發(fā)難治性骨髓瘤(relapsed/refractory?multiplemyeloma(rrmm)，五年生存率僅有51％[1],[2]。

2、近年來在多發(fā)性骨髓瘤治療上，t細(xì)胞雙特異性抗體療法bispecific?t?cellengagers(bites)，和繼發(fā)性t細(xì)胞療法adoptive?t?cell?therapy(act)取得了突破性進(jìn)展。針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的靶向療法產(chǎn)品靶點(diǎn)主要有bcma、cd38、cd138、gprc5d等[2]。cd38和cd138會(huì)在正常組織的細(xì)胞上及造血干細(xì)胞上表達(dá)，利用靶向療法清除后副作用較大，往往會(huì)對(duì)正常器官造成損傷或是自身免疫系統(tǒng)受損，而bcma和gprc5d主要表達(dá)在漿細(xì)胞或骨髓瘤中的漿細(xì)胞上，而漿細(xì)胞可以依靠人體自身b細(xì)胞的不斷再生得到彌補(bǔ)。以t細(xì)胞雙特異性抗體產(chǎn)品為例，bcma靶點(diǎn)的產(chǎn)品主要有再生元制藥公司研發(fā)(regeneronpharmaceuticals,inc.(regn))的regn5458，強(qiáng)生研發(fā)的teclistama，以及安進(jìn)的amg420。regn5458目前已結(jié)束臨床一期實(shí)驗(yàn)(nct03761108)。19名接受治療的患者種，42％達(dá)到完全緩解(cr)或者嚴(yán)格完全緩解(scr)；teclistamab已進(jìn)入臨床二期實(shí)驗(yàn)(nct04557098)，臨床一期結(jié)果顯示，總體響應(yīng)率(orr)為65％，40％的患者完全緩解(cr)；amg420的臨床一期(nct03836053)顯示，總體響應(yīng)率(orr)為71％[2],[3]。

3、百時(shí)美施貴寶(bms)研發(fā)的針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤bcma靶點(diǎn)的car-t產(chǎn)品－bb2121在2021年5月被fda批準(zhǔn)為第一款多發(fā)性骨髓瘤上市的car-t產(chǎn)品。該產(chǎn)品總體響應(yīng)率(orr)為72％，28％患者可達(dá)到嚴(yán)格完全緩解(scr)[4]。盡管該產(chǎn)品為多發(fā)性骨髓的治愈帶來了希望，但是從公布的數(shù)據(jù)來看，其完全緩解(cr)的患者中22個(gè)月疾病無進(jìn)展生存期占比也不到50％，可見治療后期也存在較高的復(fù)發(fā)率。此外，由于該療法清除所有的漿細(xì)胞，仍然有血細(xì)胞減少免疫球蛋白降低等引發(fā)的副作用。gprc5d表達(dá)相對(duì)bcma更為特異，僅在骨髓瘤患者的漿細(xì)胞中表達(dá)，而正常組織幾乎不表達(dá)，僅在毛囊組織中能檢測(cè)到明顯的rna和蛋白表達(dá)[5],[6]。在敲除gprc5d的老鼠與正常野生型的表型比較上(包括體重，器官形態(tài)學(xué)差異，生殖率等)，也未發(fā)現(xiàn)明顯差異[7]，可見gprc5d缺失對(duì)生存和正常器官的生長(zhǎng)發(fā)育和代謝并非必需，其清除的副作用較小。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，bcma的表達(dá)和gprc5d并沒有相關(guān)性，兩者雖然都同時(shí)在漿細(xì)胞中表達(dá)，但表達(dá)譜相對(duì)獨(dú)立?？梢妼?duì)于bcma?car-t療法后期患者中bcma表達(dá)偏低，也可用靶向gprc5d來治療。

4、目前在研的靶向gprc5d產(chǎn)品主要有兩款，雙抗有強(qiáng)生公司開發(fā)的gprc5d/cd3的雙抗talquemab也處于臨床1/2期研究中，中等劑量的響應(yīng)率為70％，其中65％的三重耐藥者有響應(yīng)，83％的五重耐藥者有響應(yīng)[6]。car-t產(chǎn)品主要有優(yōu)瑞科公司研發(fā)的mcarh109，處于臨床一期試驗(yàn)中，2021ash年會(huì)報(bào)道的數(shù)據(jù)顯示12名接受gprc5d?car-t注射液的患者，3/12為pr部分緩解，3/12為vgpr非常好部分緩解，2/12為scr嚴(yán)格完全緩解(scr)[5]。

5、醫(yī)療市場(chǎng)上仍需要病人覆蓋率更廣，藥效好和復(fù)發(fā)率低的car-t產(chǎn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本技術(shù)提供了一種靶向bcma和gprc5d的雙特異性抗體和嵌合抗原受體(car)。本技術(shù)還提供了編碼所述雙特異性抗體和嵌合抗原受體的核酸分子和包含所述核酸分子的表達(dá)載體，以及表達(dá)所述雙特異性抗體和嵌合抗原受體的細(xì)胞。本技術(shù)還涉及所述雙特異性抗體和嵌合抗原受體在疾病治療中的應(yīng)用，特別是在多發(fā)性骨髓癌治療中的應(yīng)用。

2、即，本發(fā)明主要涉及以下方面：

3、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物，其包含靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)；以及靶向第二靶點(diǎn)的抗原結(jié)合區(qū)，其中，靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

4、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：1、seq?id?no：6；

5、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：2、seq?id?no：7；

6、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：3、seq?id?no：8，

7、其中，所述第二靶點(diǎn)包括cd3或gprc5d；

8、優(yōu)選地，所述第二靶點(diǎn)的抗原結(jié)合區(qū)為重鏈可變區(qū)，或包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的抗體可變區(qū)。

9、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物，其中，

10、所述hcdr1包含如seq?id?no：1所示的氨基酸序列；

11、所述hcdr2包含如seq?id?no：2所示的氨基酸序列；

12、所述hcdr3包含如seq?id?no：3所示的氨基酸序列。

13、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物，其中，

14、所述hcdr1包含如seq?id?no：6所示的氨基酸序列；

15、所述hcdr2包含如seq?id?no：7所示的氨基酸序列；

16、所述hcdr3包含如seq?id?no：8所示的氨基酸序列。

17、在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?id?no：4、seq?id?no：9所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

18、在一些實(shí)施方式中，所述第二靶點(diǎn)為gprc5d，

19、并且，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)包含：

20、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：11所示的氨基酸序列；

21、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：12所示的氨基酸序列；

22、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：13所示的氨基酸序列。

23、在一些實(shí)施方式中，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)包含如seqid?no：14所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

24、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物，其從n末端至c末端依次包含：anti-bcma?vh、anti-gprc5d?vh、鉸鏈區(qū)、抗體重鏈恒定區(qū)ch2、抗體重鏈恒定區(qū)ch3，各部分之間可以通過或不通過任選的接頭連接。

25、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物，其從n末端至c末端依次包含：anti-gprc5d?vh、anti-bcma?vh、鉸鏈區(qū)、抗體重鏈恒定區(qū)(ch2)、抗體重鏈恒定區(qū)(ch3)，各部分之間可以通過或不通過任選的接頭連接。

26、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種重組微生物，其表達(dá)在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物。

27、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種重組細(xì)胞，其表達(dá)在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物。

28、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物

29、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包含在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物或雙特異性抗原結(jié)合片段。

30、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種核酸分子，其編碼在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物或雙特異性抗原結(jié)合片段。

31、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性抗體、其抗原結(jié)合片段或它們的衍生物或雙特異性抗原結(jié)合片段和/或在上述實(shí)施方式中所述的核酸分子用于治療增殖性疾病或自身免疫性疾病的用途。

32、在一些實(shí)施方式中，所述增殖性疾病包含淋巴增殖性疾病或腫瘤。

33、在一些實(shí)施方式中，所述腫瘤為漿細(xì)胞惡性腫瘤或b細(xì)胞惡性腫瘤，優(yōu)選地為骨髓瘤。

34、在一些實(shí)施方式中，所述自身免疫性疾病為抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病，優(yōu)選地，所述自身免疫性疾病包含系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎、狼瘡性腎炎。

35、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種靶向bcma和gprc5d的雙特異性嵌合抗原受體(car)分子，其包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激結(jié)構(gòu)域以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)和靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

36、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：1、seq?id?no：6；

37、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：2、seq?id?no：7；

38、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：3、seq?id?no：8。

39、在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

40、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：1所示的氨基酸序列；

41、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：2所示的氨基酸序列；

42、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：3所示的氨基酸序列。

43、在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

44、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：6所示的氨基酸序列；

45、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：7所示的氨基酸序列；

46、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：8所示的氨基酸序列。

47、在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?id?no：4、seq?id?no：9所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

48、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性嵌合抗原受體(car)分子，其以以下的順序排列：抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激結(jié)構(gòu)域、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

49、在一些實(shí)施方式中，所述的雙特異性嵌合抗原受體(car)分子，其進(jìn)一步包含胞外信號(hào)肽序列。

50、在一些實(shí)施方式中，所述胞外信號(hào)肽序列為衍生自cd8α的胞外信號(hào)肽序列。

51、在一些實(shí)施方式中，所述鉸鏈區(qū)為衍生自cd8α的鉸鏈區(qū)。

52、在一些實(shí)施方式中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域?yàn)檠苌詂d8α的跨膜結(jié)構(gòu)域。

53、在一些實(shí)施方式中，所述共刺激結(jié)構(gòu)域包含衍生自4-1bb的共刺激結(jié)構(gòu)域或衍生自cd28的共刺激結(jié)構(gòu)域。

54、在一些實(shí)施方式中，所述信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含衍生自cd3ζ的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

55、在一些實(shí)施方式中，胞外信號(hào)肽序列包含如seq?id?no：17所示的氨基酸序列。

56、在一些實(shí)施方式中，鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no：19所示的氨基酸序列。

57、在一些實(shí)施方式中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no：21所示的氨基酸序列。

58、在一些實(shí)施方式中，衍生自4-1bb的共刺激結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no：23所示的氨基酸序列。

59、在一些實(shí)施方式中，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no：25所示的氨基酸序列。

60、在一些實(shí)施方式中，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)包含：

61、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：11所示的氨基酸序列；

62、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：12所示的氨基酸序列；

63、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：13所示的氨基酸序列。

64、在一些實(shí)施方式中，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)與所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)以任意順序排列，且通過或不通過任意的接頭連接。

65、在一些實(shí)施方式中，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?id?no：14所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

66、在一些實(shí)施方式中，所述的嵌合抗原受體(car)分子包含選自以下序列中的任意序列：如seq?id?no：44、seq?id?no：46、seq?id?no：48所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

67、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種核酸分子，其編碼在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性嵌合抗原受體(car)分子

68、在一些實(shí)施方式中，所述的核酸分子進(jìn)一步表達(dá)標(biāo)簽分子。

69、在一些實(shí)施方式中，在所述核酸分子所編碼的多肽鏈中，所述標(biāo)簽分子通過自裂解肽序列與嵌合抗原受體(car)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)相連。

70、在一些實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽分子為tegfr，和/或所述自裂解肽為p2a或t2a。

71、在一些實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽分子包含如seq?id?no：31所示的氨基酸序列。

72、在一些實(shí)施方式中，所述自裂解肽包含如seq?id?no：33所示的氨基酸序列。

73、在一些實(shí)施方式中，所述的核酸分子包含選自下列序列中的任意序列：如seq?idno：45、seq?id?no：47、seq?id?no：49所示的核酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的核酸序列。

74、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種重組細(xì)胞，其包含在上述實(shí)施方式中所述的核酸分子。

75、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種重組細(xì)胞，其表達(dá)在上述實(shí)施方式中所述的雙特異性嵌合抗原受體(car)分子。

76、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在一些實(shí)施方式中所述的重組細(xì)胞，其中，所述重組細(xì)胞為t細(xì)胞或nk細(xì)胞。

77、在一些實(shí)施方式中，所述的重組細(xì)胞進(jìn)一步表達(dá)標(biāo)簽分子。

78、在一些實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽分子為tegfr。

79、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含在上述實(shí)施方式中所述的核酸分子或在一些實(shí)施方式中所述的重組細(xì)胞。

80、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了上述的雙特異性嵌合抗原受體(car)分子、上述的核酸分子或上述的重組細(xì)胞用于治療增殖性疾病或自身免疫性疾病的用途。

81、在一些實(shí)施方式中，所述增殖性疾病包含淋巴增殖性疾病或腫瘤。

82、在一些實(shí)施方式中，所述腫瘤漿細(xì)胞惡性腫瘤或b細(xì)胞惡性腫瘤，優(yōu)選地，所述腫瘤為骨髓瘤。

83、在一些實(shí)施方式中，所述自身免疫性疾病為抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病，較佳地，所述自身免疫性疾病包含系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎、狼瘡性腎炎。

84、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種核酸構(gòu)建物，其包含編碼靶向bcma的第一嵌合抗原受體(car)的第一核酸分子以及編碼靶向gprc5d的第二嵌合抗原受體(car)的第二核酸分子，其中，所述第一嵌合抗原受體(car)包含第一鉸鏈區(qū)、第一跨膜結(jié)構(gòu)域、第一共刺激結(jié)構(gòu)域、第一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域以及第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中所述第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

85、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：1、seq?id?no：6；

86、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：2、seq?id?no：7；

87、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?idno：3、seq?id?no：8。

88、在一些實(shí)施方式中，所述第二嵌合抗原受體(car)包含第二鉸鏈區(qū)、第二跨膜結(jié)構(gòu)域、第二共刺激結(jié)構(gòu)域、第二信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域以及第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中所述第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)包含：

89、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：11所示的氨基酸序列；

90、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：12所示的氨基酸序列；

91、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：13所示的氨基酸序列。在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

92、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：1所示的氨基酸序列；

93、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：2所示的氨基酸序列；

94、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：3所示的氨基酸序列。在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含：

95、(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)，其包含如seq?id?no：6所示的氨基酸序列；

96、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(hcdr2)，其包含如seq?id?no：7所示的氨基酸序列；

97、(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(hcdr3)，其包含如seq?id?no：8所示的氨基酸序列。

98、在一些實(shí)施方式中，所述靶向bcma的重鏈可變區(qū)(anti-bcma?vh)包含選自以下序列中的任一氨基酸序列：seq?id?no：4、seq?id?no：9所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

99、在一些實(shí)施方式中，所述靶向gprc5d的重鏈可變區(qū)(anti-gprc5d?vh)包含如seqid?no：14所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

100、在一些實(shí)施方式中，所述的核酸構(gòu)建物，其中，第一嵌合抗原受體(car)以以下的順序排列：第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、第一鉸鏈區(qū)、第一跨膜結(jié)構(gòu)域、第一共刺激結(jié)構(gòu)域、第一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

101、在一些實(shí)施方式中，所述的核酸構(gòu)建物，其中，第二嵌合抗原受體(car)以以下的順序排列：第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、第二鉸鏈區(qū)、第二跨膜結(jié)構(gòu)域、第二共刺激結(jié)構(gòu)域、第二信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

102、在一些實(shí)施方式中，所述第一嵌合抗原受體(car)進(jìn)一步包含第一胞外信號(hào)肽序列；和/或

103、第二嵌合抗原受體(car)進(jìn)一步包含第二胞外信號(hào)肽序列。

104、在一些實(shí)施方式中，所述第一胞外信號(hào)肽序列和/或所述第二胞外信號(hào)肽序列為衍生自cd8α的胞外信號(hào)肽序列。

105、在一些實(shí)施方式中，所述第一鉸鏈區(qū)和/或所述第二鉸鏈區(qū)為衍生自cd8α的鉸鏈區(qū)。

106、在一些實(shí)施方式中，所述第一跨膜結(jié)構(gòu)域和/或所述第二跨膜結(jié)構(gòu)域?yàn)檠苌詂d8α的跨膜結(jié)構(gòu)域。

107、在一些實(shí)施方式中，所述第一共刺激結(jié)構(gòu)域和/或所述第二共刺激結(jié)構(gòu)域包含衍生自4-1bb的共刺激結(jié)構(gòu)域或衍生自cd28的共刺激結(jié)構(gòu)域。

108、在一些實(shí)施方式中，所述第一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和/或所述第二信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含衍生自cd3ζ的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

109、在一些實(shí)施方式中，所述第一胞外信號(hào)肽序列和/或所述第二胞外信號(hào)肽序列包含如seq?id?no：17所示的氨基酸序列。

110、在一些實(shí)施方式中，所述第一鉸鏈區(qū)和/或所述第二鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no：19所示的氨基酸序列。

111、在一些實(shí)施方式中，所述第一跨膜結(jié)構(gòu)域和/或所述第二跨膜結(jié)構(gòu)域包含如seqid?no：21所示的氨基酸序列。

112、在一些實(shí)施方式中，衍生自4-1bb的共刺激結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no：23所示的氨基酸序列。

113、在一些實(shí)施方式中，所述第一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和/或所述第二信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no：25所示的氨基酸序列。

114、在一些實(shí)施方式中，所述第一嵌合抗原受體(car)包含選自以下序列中的任意序列：如seq?id?no：35、seq?id?no：37所示的氨基酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的氨基酸序列。

115、在一些實(shí)施方式中，所述第一核酸分子和第二核酸分子通過編碼自裂解肽的核酸序列連接。

116、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種核酸分子，其包含在上述實(shí)施方式中所述的核酸構(gòu)建物。

117、在一些實(shí)施方式中，所述的核酸分子進(jìn)一步表達(dá)標(biāo)簽分子。

118、在一些實(shí)施方式中，在所述核酸分子所編碼的多肽鏈中，所述標(biāo)簽分子通過自裂解肽序列與第一嵌合抗原受體(car)和/或第二嵌合抗原受體(car)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)相連。

119、在一些實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽分子為tegfr，和/或所述自裂解肽為p2a或t2a。

120、在一些實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽分子包含如seq?id?no：31所示的氨基酸序列。

121、在一些實(shí)施方式中，所述自裂解肽包含如seq?id?no：33所示的氨基酸序列。

122、在一些實(shí)施方式中，所述的核酸分子包含選自下列序列中的任意序列：如seq?idno：38、seq?id?no：40所示的核酸序列或與以上序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的核酸序列。

123、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種重組細(xì)胞，其包含在上述實(shí)施方式中所述的核酸分子。

124、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種重組細(xì)胞，其包含在上述實(shí)施方式中所述的核酸構(gòu)建物。

125、在一些實(shí)施方式中，所述重組細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)有靶向bcma的第一嵌合抗原受體(car)和靶向gprc5d的第二嵌合抗原受體(car)。

126、在一些實(shí)施方式中，所述重組細(xì)胞為t細(xì)胞或nk細(xì)胞。

127、在一些實(shí)施方式中，所述的重組細(xì)胞進(jìn)一步表達(dá)標(biāo)簽分子。

128、在一些實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽分子為tegfr。

129、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含在上述實(shí)施方式中所述的核酸分子或在一些實(shí)施方式中所述的重組細(xì)胞。

130、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了上述的核酸構(gòu)建體和/或上述的核酸分子用于治療增殖性疾病和自身免疫性疾病的用途。

131、在一些實(shí)施方式中，所述增殖性疾病包含淋巴增殖性疾病或腫瘤。

132、在一些實(shí)施方式中，所述腫瘤為漿細(xì)胞惡性腫瘤或b細(xì)胞惡性腫瘤，優(yōu)選地，所述腫瘤為骨髓瘤。

133、在一些實(shí)施方式中，所述自身免疫性疾病為抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病，優(yōu)選地，所述自身免疫性疾病包含系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎、狼瘡性腎炎。

134、本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠從下文的詳細(xì)描述中容易地洞察到本技術(shù)的其它方面和優(yōu)勢(shì)。下文的詳細(xì)描述中僅顯示和描述了本技術(shù)的示例性實(shí)施方式。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到的，本技術(shù)的內(nèi)容使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)λ_的具體實(shí)施方式進(jìn)行改動(dòng)而不脫離本技術(shù)所涉及發(fā)明的精神和范圍。相應(yīng)地，本技術(shù)的附圖和說明書中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。