本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)細胞的方法，特別是涉及一種利用促細胞生長的膠體三維培養(yǎng)細胞的方法及使用該方法量產(chǎn)高濃度的胞外組合物。

背景技術(shù)：

1、外泌體(exosome)是由動物、植物、菌類等的真核細胞所釋出的直徑約30nm至150nm的胞外組合物中的一個重要成分，其內(nèi)包含醣類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、信使核糖核酸(mrna)、脫氧核糖核酸(dna)等，對細胞間的信息傳遞表現(xiàn)重要的功能。此外，胞外體也與細胞生長、發(fā)炎反應(yīng)、癌細胞轉(zhuǎn)移及惡化有關(guān)。

2、然而，外泌體的分泌、產(chǎn)量及內(nèi)含成分的生物活性可能受到細胞健康程度及現(xiàn)有二維培養(yǎng)環(huán)境等因素的影響，使其無法有效進行大量生產(chǎn)以及降低批次間差異。

3、故，如何通過培養(yǎng)細胞方法的改良，來提升細胞存活率及提升胞外組合物的產(chǎn)量與批次差異性，來克服上述的缺陷，已成為該項事業(yè)所欲解決的重要課題之一。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種利用促細胞生長的膠體進行三維培養(yǎng)細胞的方法及使用該方法量產(chǎn)高濃度的胞外組合物。

2、為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的其中一技術(shù)方案是提供一種利用促細胞生長的膠體進行三維培養(yǎng)細胞的方法，其包括：提供培養(yǎng)膠體將細胞混合包覆；將包覆有細胞的培養(yǎng)膠體進行交聯(lián)反應(yīng)，使交聯(lián)后的培養(yǎng)膠體呈現(xiàn)立體結(jié)構(gòu)，以使細胞懸浮于交聯(lián)后的培養(yǎng)膠體中；以及進行細胞培養(yǎng)。

3、為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的另外一技術(shù)方案是提供一種使用上述的利用促細胞生長的膠體進行三維培養(yǎng)細胞的方法量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法，其包括：收取條件培養(yǎng)液；以及濾取所述條件培養(yǎng)液。

4、為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的另外再一技術(shù)方案是提供一種胞外組合物，其是通過上述量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法所獲得胞外組合物。

5、本發(fā)明的其中一有益效果在于，本發(fā)明所提供的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法及使用該方法量產(chǎn)高濃度的胞外組合物，其能通過“將包覆細胞的培養(yǎng)膠體進行交聯(lián)反應(yīng)，使交聯(lián)后的培養(yǎng)膠體呈現(xiàn)立體結(jié)構(gòu)，以使細胞懸浮于交聯(lián)后的培養(yǎng)膠體中”的技術(shù)方案，以減少細胞在三維培養(yǎng)過程中的損傷并支持細胞于膠體內(nèi)進行三維生長。

6、更進一步來說，使用本發(fā)明的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法所獲得的胞外組合物，其粒徑有效地減小分布且總蛋白濃度顯著提高，除了有效提高胞外組合物的產(chǎn)能，還具有促進細胞生長的優(yōu)異功效。

7、為使能進一步了解本發(fā)明的特征及技術(shù)內(nèi)容，請參閱以下有關(guān)本發(fā)明的詳細說明與附圖，然而所提供的附圖僅用于提供參考與說明，并非用來對本發(fā)明加以限制。

技術(shù)特征：

1.一種利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)膠體包含海藻酸、明膠、明膠甲基丙烯水凝膠、羧甲基纖維素、膠原蛋白、玻尿酸、黃耆膠、阿拉伯樹膠、黃原膠、果膠、瓜爾豆膠、鹿角菜膠及其任意組合所組成的群組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)膠體還包含促細胞生長劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述促細胞生長劑包含細胞外基質(zhì)組合物、膠原蛋白、纖連蛋白、層黏連蛋白、彈性蛋白、生長因子、細胞外囊泡及其任意組合所組成的群組。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述細胞為人類源與動物源的間充質(zhì)干細胞、纖維母細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、表皮干細胞、牙髓/牙齦干細胞、毛囊乳突細胞、角質(zhì)形成細胞或黑色素細胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述交聯(lián)反應(yīng)通過混合5至25體積百分比的氯化鈣至混合有所述細胞的所述培養(yǎng)膠體進行。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)膠體的儲存模數(shù)1,000pa至5,000pa。

8.一種使用根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的利用促細胞生長膠體三維培養(yǎng)細胞的方法量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法，其特征在于，所述量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法包括：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法，其特征在于，所述量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法進一步包括：

10.一種使用根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的量產(chǎn)高濃度的胞外組合物的方法所獲得的胞外組合物。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種利用促細胞生長的膠體三維培養(yǎng)細胞的方法及使用該方法量產(chǎn)高濃度的胞外組合物。利用促細胞生長的膠體三維培養(yǎng)細胞的方法包括提供培養(yǎng)膠體將細胞混合包覆；將包覆有細胞的培養(yǎng)膠體進行交聯(lián)反應(yīng)，使交聯(lián)后的培養(yǎng)膠體呈現(xiàn)立體結(jié)構(gòu)，以使細胞懸浮于交聯(lián)后的培養(yǎng)膠體中；以及進行細胞培養(yǎng)。通過本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，可減少細胞在三維培養(yǎng)過程中的損傷并支持細胞于膠體內(nèi)進行三維生長。

技術(shù)研發(fā)人員：歐耿良,潘敘安
受保護的技術(shù)使用者：三鼎生物科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19