本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2012年12月4日、申請(qǐng)?zhí)枮椤?01280070691.1”、發(fā)明名稱為“新化學(xué)實(shí)體鈣錳福地吡和其他混合金屬配合物、制備方法、組合物以及治療方法”的中國(guó)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)是國(guó)際申請(qǐng)pct/ib2012/056959的中國(guó)國(guó)家階段申請(qǐng)。本發(fā)明涉及二吡哆基(dipyridoxyl)化合物(如n，n′-雙-(吡哆醛-5-磷酸)-乙二胺-n，n′-二乙酸(dpdp或福地吡(fodipir))或者其他式i化合物(下文吡哆基乙二胺衍生物或pled衍生物))的混合金屬配合物，其中所述混合金屬包含第iii-xii族過(guò)渡金屬和第ii族金屬。在具體實(shí)施方案中，混合金屬配合物是鈣和錳配合物。本發(fā)明還涉及包含這樣的混合金屬配合物的組合物、用于在例如單步結(jié)晶中制備這樣的混合金屬配合物的方法和使用這樣的混合金屬配合物的治療方法。這樣的治療方法包括常規(guī)地使用錳-dpdp配合物用于治療作用的方法。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述組合物可用于治療體內(nèi)由氧衍生自由基的存在導(dǎo)致的病理學(xué)狀態(tài)中(即，氧化應(yīng)激)。混合金屬配合物，特別是本文所述混合的鈣錳配合物鈣錳福地吡(calmangafodipir)構(gòu)成了新化學(xué)實(shí)體。
背景技術(shù)：
：氧化應(yīng)激始于作為正常細(xì)胞功能的一部分的活性氧物質(zhì)(reactiveoxygenspecies，ros)和活性氮物質(zhì)(reactivenitrogenspecies，rns)的產(chǎn)生。ros的產(chǎn)生具有多種細(xì)胞來(lái)源，但是最重要的來(lái)源是線粒體電子傳遞復(fù)合體i和iii、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的p450酶以及膜結(jié)合nadph氧化酶?？赏ㄟ^(guò)細(xì)胞因子、炎癥、病毒蛋白質(zhì)和其他機(jī)制(如化學(xué)治療藥物、局部缺血-再灌注、以及鐵和銅超載)刺激每一種這些來(lái)源產(chǎn)生ros。重要的是，這些過(guò)程最初產(chǎn)生自由基超氧化物(·o2-)，其隨后被還原以形成過(guò)氧化氫、羥基自由基以及最終的水。然而，在高氧化應(yīng)激以及因此大量產(chǎn)生超氧化物的條件下，這些活性中間體容易與其他分子相互作用以形成次級(jí)的有害ros，例如脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物和過(guò)氧亞硝酸鹽(singal等，liverint.2011；31：1432-1448)。這表明了將細(xì)胞的超氧化物量保持在嚴(yán)格控制下的重要性。在正常條件下，這通過(guò)超氧化物歧化酶(sod)實(shí)現(xiàn)。盡管sod具有已知酶中最快的反應(yīng)速率，但是在高氧化應(yīng)激的條件下，這些酶可能被ros和rns超出以及甚至是不可逆地不可逆失活。這進(jìn)而開(kāi)啟了模擬sod酶的低分子藥物(即，所謂的sod模擬物)與病理性氧化應(yīng)激斗爭(zhēng)的治療用途。很久前就已知短壽命但是高活性的氧衍生自由基參與病理性組織損傷，特別是在癌癥患者中在利用細(xì)胞毒素/細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑和放射療法治療的過(guò)程中(towart等，archpharmacol1998；358(suppl2)：r626，laurent等，cancerres2005；65：948-956，karlsson等，cancerres2006；66：598，alexandre等，jnatlcancerinst2006；98：236-244，doroshow，jnatlcancerinst2006；98：223-225，citrin等，oncologist，2010；15：360-371，kurz等，transloncol2012；5：252-259)、對(duì)乙酰氨基酚誘發(fā)的肝功能衰竭(bedda等，jhepatol2003；39：765-772；karlsson，jhepatol2004；40：872-873)中、局部缺血性心臟病(cuzzocrea等，pharmacolrev2001；53：135-159)中和多種神經(jīng)退行性疾病中，包括阿爾茲海默病(alzheimer′sdisease)、肌萎縮性側(cè)索硬化(als)、帕金森氏病(parkinson′sdisease)和多發(fā)性硬化(knight，annclinlabsci.1997；27：11-25)。氧衍生自由基的過(guò)量產(chǎn)生還與鐵超載的病理學(xué)狀態(tài)有關(guān)(rachmilewitz等，annnyacadsci.2005；1054：118-23)，例如在地中海貧血癥、鐮狀細(xì)胞性貧血和輸血性含鐵血黃素沉著中。氧衍生自由基還與肝炎誘發(fā)的肝硬化(farrell等，anatrec2008；291：684-692)和噪音誘發(fā)的聽(tīng)力損失(wong等，hearres2010；260：81-88)有關(guān)。基于二吡哆基的螯合劑及其金屬螯合物以及某些含錳化合物(特別是錳螯合物)在醫(yī)學(xué)中的用途是已知的。例如，參見(jiàn)ep0910360、us6147094、ep0936915、us6258828、ep1054670、us6310051、ep1060174和us6391895，其公開(kāi)了某些螯合劑、特別是二吡哆基螯合劑及其金屬螯合物在治療或預(yù)防人和動(dòng)物中的以下疾病中有效：蒽環(huán)霉素誘發(fā)的心臟中毒、輻射誘發(fā)的中毒、局部缺血-再灌注誘發(fā)的損傷和撲熱息痛(對(duì)乙酰氨基酚)誘發(fā)的肝功能衰竭，或者從更一般的觀點(diǎn)來(lái)說(shuō)，由于氧衍生自由基的存在導(dǎo)致的每一種病理學(xué)狀態(tài)，即氧化應(yīng)激。此外，已經(jīng)另外并且出乎意料地發(fā)現(xiàn)二吡哆基化合物錳福地吡(mndpdp)對(duì)癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性效應(yīng)(ep16944338)。但是，如在wo2009/078794a1和kurz等，2012中描述的，這是福地吡(dpdp)本身或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物dpmp和pled的固有性質(zhì)，而不是金屬配合物mndpdp或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物mndpmp和mnpled的性質(zhì)。mnpled衍生物的一種，即錳n，n′-雙-(吡哆醛-5-磷酸)-乙二胺-n，n′-二乙酸(錳二吡哆基二膦酸鹽(manganesedipyridoxyldiphosphate)；mndpdp)，也被稱為錳福地吡，已經(jīng)被批準(zhǔn)在人中用作診斷性mri造影劑。有趣的是，已經(jīng)表明錳福地吡保護(hù)小鼠免受多種細(xì)胞毒/細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物(阿霉素、奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶和紫杉醇)的嚴(yán)重副作用，而不會(huì)不利地干擾這些藥物的抗癌作用(towart等，1998，laurent等，2005，karlsson等，2006，alexandre等，2006，doroshow，2006，kurz等，2012)。在正在利用亞葉酸、5-氟尿嘧啶和奧沙利鉑的組合進(jìn)行姑息治療的一個(gè)結(jié)腸癌患者中測(cè)試了錳福地吡(yri等，actaoncol.2009；48：633-635)。來(lái)自該單個(gè)患者的臨床前數(shù)據(jù)和結(jié)果如此有前景以致于已經(jīng)在癌癥患者中開(kāi)始了臨床測(cè)試。就奧沙利鉑的最麻煩的副作用(即，奧沙利鉑誘發(fā)的感覺(jué)神經(jīng)毒性)而言，據(jù)我們所知，不存在顯示錳福地吡保護(hù)作用的臨床前數(shù)據(jù)(karlsson等，transloncol.2012；5：32-38)。yri等，2009描述了患者接受15個(gè)全劑量″nordicflox″。在14個(gè)所述周期中，患者接受錳福地吡的預(yù)治療。患者接受1275mg/m2奧沙利鉑的累積劑量，這是可能產(chǎn)生神經(jīng)毒性癥狀的劑量。除在有意排除錳福地吡并且患者產(chǎn)生了外周感覺(jué)神經(jīng)病變的第5個(gè)周期期間之外，未檢測(cè)到神經(jīng)毒性癥狀。這表明錳福地吡可保護(hù)免受外周神經(jīng)毒性。在5個(gè)周期后，患者的體力狀態(tài)顯著改善，對(duì)鎮(zhèn)痛劑的需要顯著降低。在任何化學(xué)治療周期中，都未發(fā)生中性白細(xì)胞減少癥。已經(jīng)完成了第一可行性研究(manfoli)，并且向swedishmedicalagency報(bào)道和公開(kāi)了陽(yáng)性結(jié)果(包括骨髓保護(hù)作用)(karlsson等，2012)。還已經(jīng)描述了錳福地吡保護(hù)小鼠免受小鼠中的對(duì)乙酰氨基酚誘發(fā)的急性肝功能衰竭(acuteliverfailure，alf)(bedda等，2003；karlsson，2004)。alf以大量肝細(xì)胞死亡、谷胱甘肽耗盡導(dǎo)致的病癥、氧衍生自由基和線粒體損傷為特征。錳福地吡是前藥，就此而言，其可能需要被代謝成n，n′-二吡哆基乙二胺-n，n′-二乙酸(mnpled)，之后其可在體內(nèi)狀態(tài)中發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用(例如，參見(jiàn)karlsson等，actaradiol2001；42：540-547；kurz等，2012)。錳是必需的金屬，也是有潛在的神經(jīng)毒性的金屬。許多年前已經(jīng)知道在長(zhǎng)期暴露于高水平的錳的狀態(tài)下，頻繁發(fā)生錐體束外功能紊亂的綜合征，這是與帕金森氏綜合征類似，但是臨床上不同的疾病實(shí)體(參見(jiàn)scheuhammer&cherian，archenvironmcontamtoxicol1982；11：515-520)。當(dāng)向人靜脈內(nèi)注射診斷性mr成像劑量的錳福地吡?xí)r，約80％所施用錳被釋放(toft等，actaradiol1997；38：677-689)。順磁性錳的釋放實(shí)際上是錳福地吡的診斷性mr成像性質(zhì)的前提(wendland，nmrbiomed2004；17：581-594)。elizondo等，1991(radiology1991；178：73-78)提出福地吡部分與肝細(xì)胞上的吡哆酰基5′磷酸酯受體結(jié)合并且確保肝中錳福地吡的高細(xì)胞內(nèi)濃度。最近在coriat等的論文中也提出了這種假設(shè)(plosone2011；6：1-6，e27005)。這是一種好的假設(shè)，但是遺憾的是未經(jīng)證明并且是非常不可能的一種，其在提出后不久就不流行了。當(dāng)靜脈內(nèi)(i.v.)注射錳福地吡?xí)r，約80％的金屬配合物崩解(toft等，radiol1997)，在每一等摩爾mn劑量下，mncl2具有與錳福地吡相等或更好的肝mr成像對(duì)比效力(southon等，actaradiol1997)。此外，在注射錳福地吡之后，幾乎所有的福地吡都回收在尿(其大部分作為pled)中，而大部分錳回收在糞便中(hustvedt等，actaradiol1997；38：690-699)。另一方面，錳福地吡(mndpdp)及其脫磷酸對(duì)應(yīng)物mndpmp(n，n′-二吡哆基乙二胺-n，n′-二乙酸-5-磷酸)和mnpled的治療作用依賴于完整的金屬配合物(brurok等，biochembiophysrescommun.1999；254：768-721，karlsson等2001；42：540-547)。pled-衍生物模擬線粒體酶錳超氧化物歧化酶(mnsod)(brurok等，1999)。mnsod保護(hù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞免受超氧自由基，超氧自由基為來(lái)自氧代謝的副產(chǎn)物，其在正常需氧條件下以相當(dāng)高的量產(chǎn)生，沒(méi)有哺乳動(dòng)物能夠在無(wú)功能性mnsod的情況下存活。mnsod具有任何已知酶中最快的轉(zhuǎn)換數(shù)(對(duì)于其底物的反應(yīng)速率)(＞109m-1s-1)(fridovich，jexpbiol.1998；201：1203-1209)。低分子量mnsod模擬物可具有接近天然mnsod的轉(zhuǎn)換率(cuzzocrea等，2001)。有趣的是，含有過(guò)渡金屬(如錳)的生理緩沖液可具有類似的高轉(zhuǎn)換數(shù)(culotta等，biochimbiophysacta.2006；1763：747-758)。但是，天然sod酶的重要性與選擇過(guò)程一致，該選擇過(guò)程有利于采用手段將用于超氧化物歧化作用的過(guò)渡金屬催化劑定位在高度需要這樣的歧化作用的細(xì)胞部分(如線粒體)的生物。此外，來(lái)自麻醉的豬的心肌局部缺血-再灌注的結(jié)果不可避免地顯示是完整的mnpled而不是錳本身保護(hù)免受氧化應(yīng)激，如由梗死面積的降低可見(jiàn)(karlsson等，2001)。超氧化物的有效失活對(duì)防止產(chǎn)生非常有破壞性的羥基自由基和過(guò)氧亞硝酸鹽是必要的(cuzzocrea等，2001)。在病理性氧化應(yīng)激期間，超氧自由基的形成通常超過(guò)內(nèi)源失活能力。此外，超氧化物刺激產(chǎn)生過(guò)氧亞硝酸鹽，其硝化內(nèi)源mnsod。這種蛋白質(zhì)被過(guò)氧亞硝酸鹽在tyr-34硝化(radi，procnatlacadsciusa2004；101：4003-4008)。一旦被硝化，mnsod就失去其酶活性，這是有利于超氧化物和超氧化物驅(qū)動(dòng)的損傷積累的事件(muscoli等，brjpharmacol2003；140：445-460)。最近的結(jié)果表明，mnsod通過(guò)硝化失活是撲熱息痛誘發(fā)的肝毒性中的早期事件(agarwal等，jpharmacolexpther2011；337：110-116)。此外，以前的結(jié)果表明mnsod的硝化和失活參與人移植腎的慢性排斥(macmillan-crow等，procnatlacadsciusa1996；93：11853-11858)。還可能相關(guān)的是，注意到在鐮狀細(xì)胞性貧血中肌動(dòng)蛋白(其構(gòu)成了細(xì)胞蛋白質(zhì)的5％或更多)被嚴(yán)重硝化，觀察到的硝化的程度足以誘發(fā)細(xì)胞骨架聚合(radi，2004)。此外，3-硝基酪氨酸的循環(huán)水平可作為評(píng)價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物。此外，除動(dòng)脈粥樣硬化之外，認(rèn)為過(guò)氧亞硝酸鹽和3-硝基酪氨酸參與心肌局部缺血、膿毒性和損傷性肺(septicanddistressedlung)、炎性腸病、肌萎縮性側(cè)索硬化(beckman等，amjphysiol1996；271：c1424-c1437)和糖尿病(等，brjpharmacol.2011；164：213-223)?？寡趸烙鶛C(jī)制的受損(包括sod活性降低和隨后過(guò)氧亞硝酸鹽的產(chǎn)生增加)可能是非酒精性脂肪性肝炎(nash)的發(fā)病機(jī)理的重要因素(koruk等，annclinlabsci.2004；34：57-62)。乙肝或丙肝病毒感染與慢性肝炎的發(fā)生和肝細(xì)胞癌的出現(xiàn)之間的顯著流行病學(xué)和臨床關(guān)聯(lián)是明顯的。有趣的是，在具有慢性病毒性肝炎的患者中，過(guò)氧亞硝酸鹽誘發(fā)的酪氨酸硝化顯著增加(garcia-monzon等，jhepatol.2000；32：331-338)。當(dāng)前，通常引用的在威爾遜氏病(wilson′sdisease)中的病理學(xué)發(fā)生機(jī)制包括因銅超載導(dǎo)致的氧化損傷。在肝中已經(jīng)檢測(cè)到活性氧物質(zhì)(ros)的產(chǎn)生以及脂質(zhì)氧化和dna損傷(burkhead等，biometals2011；24：455-466)，特別是在這種疾病的晚期階段。mnpled衍生物不是過(guò)氧亞硝酸鹽的靶標(biāo)，并且在這種情況下添加外源mnpled衍生物可重建保護(hù)潛能。此外，如在ep1054670、us6310051和rocklage等(inorgchem1989；28：477-485)中描述的，pled衍生物是強(qiáng)的鐵結(jié)合劑，并且一些mnpled衍生物可具有過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽還原酶活性(laurent等，2005)，這可進(jìn)一步提高其抗氧化能力。對(duì)于診斷成像用途和其他零星的用途，錳從錳福地吡離解不產(chǎn)生大的毒性問(wèn)題。但是，由于攝取到cns中，所以對(duì)于更頻繁的使用，例如在治療方法中，累積的錳毒性可產(chǎn)生嚴(yán)重的神經(jīng)毒性問(wèn)題(crossgrove等，nmrbiomed.2004；17：544-53)。因此，對(duì)于更頻繁的治療用途，應(yīng)避免容易解離出錳的化合物，需要開(kāi)發(fā)用于獲得期望的治療效果同時(shí)降低了與這樣的治療用途有關(guān)的不期望的副作用的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的配合物、組合物和方法提供了在制備和使用pled衍生物的金屬配合物中的改進(jìn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式i化合物或其鹽的混合金屬配合物，其中，所述混合金屬包含第iii-xii族過(guò)渡金屬和第ii族金屬：式i其中，x表示ch或n，每一個(gè)r1獨(dú)立地表示氫或-ch2cor5；r5表示羥基，任選地羥基化的烷氧基、氨基或烷基酰氨基；每一個(gè)r2獨(dú)立地表示zyr6，其中z表示鍵或者任選地被r7取代的c1-3亞烷基或氧代亞烷基；y表示鍵、氧原子或nr6；r6是氫原子、coor8、烷基、烯基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基，任選地被選自coor8、conr82、nr82、or8、＝nr8、＝o、op(o)(or8)r7和oso3m的一個(gè)或更多個(gè)基團(tuán)取代；r7是羥基，任選地羥基化、任選地烷氧基化的烷基或氨基烷基；r8是氫原子或任選地羥基化、任選地烷氧基化的烷基；m是氫原子或一當(dāng)量(equivalent)的生理可耐受陽(yáng)離子；r3表示任選地被r7取代的c1-8亞烷基、1，2-亞環(huán)烷基(1，2-cykloalkylene)或1，2-亞芳基；并且每一個(gè)r4獨(dú)立地表示氫或c1-3烷基，或其鹽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式i化合物的鈣和錳配合物。本文描述的混合金屬配合物，特別是混合鈣錳配合物鈣錳福地吡構(gòu)成了新化學(xué)實(shí)體。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生混合金屬配合物的方法，其包括從第iii-xii族過(guò)渡金屬、第ii族金屬和式i化合物的溶液進(jìn)行一步式結(jié)晶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療患者中的病理學(xué)狀態(tài)的方法，其包括向患者施用根據(jù)本發(fā)明的混合金屬配合物，任選地與一種或更多種生理上可接受的載體和/或賦形劑一起。根據(jù)本發(fā)明的配合物的優(yōu)點(diǎn)在于，第ii族金屬使配合物穩(wěn)定而免于釋放第iii-xii族過(guò)渡金屬。這降低了與使用之前的第iii-xii族過(guò)渡金屬配合物(例如mnpled衍生物(如錳福地吡))相關(guān)的毒性作用。本發(fā)明的配合物還可表現(xiàn)出對(duì)病理學(xué)狀態(tài)，特別是由于氧衍生自由基的存在導(dǎo)致的那些病理學(xué)狀態(tài)(即氧化應(yīng)激)的改進(jìn)的治療和/或預(yù)防。通過(guò)以下給出的發(fā)明詳述，本發(fā)明另外的改進(jìn)和優(yōu)點(diǎn)將更明顯。附圖說(shuō)明通過(guò)附圖，將更全面地理解以下的發(fā)明詳述：圖1示出了在根據(jù)本發(fā)明的一步式結(jié)晶方法中獲得的具有約4∶1的ca∶mn摩爾比的福地吡(dpdp)的鈣錳配合物(在本文中稱為“鈣錳福地吡”)的三種晶型的x射線粉末衍射(xrpd)圖，如在實(shí)施例1中所述。圖2示出了鈣福地吡(calfodipir)和錳福地吡(mangafodipir)的混合物而非根據(jù)本發(fā)明的配合物的xrpd圖，；這些xrpd圖表明所有產(chǎn)物都是無(wú)定形的并且被證明迅速吸水，如在實(shí)施例2中所述。圖3示出了鈣錳福地吡lot#7755-c-r0-01-30-01的傅里葉變換紅外(ft-ir)吸收光譜，其具有實(shí)施例3中所述的特征性紅外吸收帶(波數(shù))和相應(yīng)歸屬(assignment)。圖4a和4b示出了鈣錳福地吡lot#7755-c-r0-01-30-01(600-850m/z)的質(zhì)譜(圖4a)和擴(kuò)展的質(zhì)譜(圖4b)，如在實(shí)施例3中所述。圖5示出了鈣錳福地吡的化學(xué)結(jié)構(gòu)，如在實(shí)施例3中所述。圖6a示出了來(lái)自利用分別含有2.59μmol和2.52μmolmn的錳福地吡或鈣錳福地吡注射的大鼠的0至24小時(shí)尿中錳(mn)含量的增加，表示為mn的總含量減去mn的基線含量。圖6b示出了表示為注射劑量的百分比的尿中mn含量的增加。圖6c示出了相同動(dòng)物中24小時(shí)尿中鋅含量的增加。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝4。這些圖在實(shí)施例4中更詳細(xì)描述。圖7a至7d分別示出了在注射后第3和第6天的單次靜脈注射增加劑量(7.5、10.0和12.5mg/kg)的奧沙利鉑對(duì)白細(xì)胞(wbc)、淋巴細(xì)胞(lym)、中心粒細(xì)胞(neu)和血小板(plc)的骨髓抑制(myelosuppressive)作用。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝5，如在實(shí)施例5中所述。圖8a至8d分別示出了在奧沙利鉑單獨(dú)或與鈣錳福地吡或錳福地吡組合治療后balb/c小鼠中的wbc、lym、neu和plc。對(duì)照僅接受載劑治療。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝5，如在實(shí)施例5中所述。圖9a至9b示出了增加濃度的多種pled衍生物和cacl2對(duì)結(jié)腸癌ct26細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。結(jié)果表示為平均值±s.d.；n＝3)，如實(shí)施例6中所述。圖10a示出了在不存在和存在相對(duì)高劑量的鈣錳福地吡(50mg/kg)的情況下ct26同系balb/c小鼠中高劑量奧沙利鉑(20mg/kg)的抗腫瘤作用。圖10b示出了在不存在和存在相對(duì)低劑量的鈣錳福地吡的情況下低劑量奧沙利鉑(10mg/kg)的抗腫瘤作用。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；在圖10a的載劑和奧沙利鉑20mg/kg組中n＝10，在所有其他組中n＝5，如實(shí)施例7中所述。圖11a至11c分別示出了在39劑量的nacl(對(duì)照)、錳福地吡或鈣錳福地吡(在這兩種情況下相當(dāng)于2800μmol/kg錳的累積劑量)之后在腦、胰腺和肝中的mn含量。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝17～18，如實(shí)施例8中所述。圖12a至12d分別示出了注射后第3和第6天的單次靜脈內(nèi)注射增加劑量(75、100和125mg/kg)的卡鉑對(duì)白細(xì)胞(wbc)、淋巴細(xì)胞(lym)、中心粒細(xì)胞(neu)和血小板(plc)的骨髓抑制作用。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝5，如實(shí)施例9中所述。圖13a至13d分別示出了balb/c小鼠中與鈣錳福地吡組合的卡鉑之后的wbc、lym、neu和plc。對(duì)照僅接受載劑治療。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝5，如實(shí)施例9中所述。圖14示出了在不存在和存在相對(duì)低劑量的鈣錳福地吡的情況下，在ct26有免疫能力的balb/c小鼠和免疫缺陷的裸balb/c小鼠(nu/nu)中低劑量的奧沙利鉑(10mg/kg)的抗腫瘤作用。結(jié)果表示為平均值±s.e.m.；每組中n＝5，如實(shí)施例10中所述。圖15a和15b分別示出了在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞u1810和llc1中鈣錳福地吡和錳福地吡的細(xì)胞毒活性。結(jié)果表示為平均值±s.d.；每組中n＝3，如實(shí)施例11中所述。通過(guò)實(shí)施例，可更全面地理解附圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明的配合物、組合物和方法提供了在制備和使用pled衍生物(即吡哆?；叶费苌?的金屬配合物方面的改進(jìn)，但是應(yīng)認(rèn)識(shí)到，所述衍生物還可充當(dāng)pled的前藥，因?yàn)槠湓隗w內(nèi)可代謝形成pled。wo2011/004325a1證明了如何向錳福地吡(mndpdp)添加的過(guò)剩的福地吡(dpdp)使其在施用后穩(wěn)定而不釋放錳，從而降低cns的攝取，從而顯著降低錳福地吡的神經(jīng)毒潛力。由于是完整的含錳配合物發(fā)揮sod模擬和細(xì)胞保護(hù)作用，因此過(guò)剩的福地吡將不僅降低神經(jīng)毒潛力，并且還顯著提高細(xì)胞保護(hù)效力。錳從mnpled衍生物，包括錳n，n′-雙-(吡哆醛-5-磷酸)-乙二胺-n，n′-二乙酸(錳福地吡)的體內(nèi)釋放依賴于體內(nèi)游離或易離解的鋅的存在。鋅對(duì)福地吡或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物的親和力比錳高約1000倍(rocklage等，1989)。實(shí)驗(yàn)研究表明在體內(nèi)錳從錳福地吡釋放在超過(guò)5μmol/kg的劑量下飽和(southon等，1997)。在健康受試者中利用錳福地吡的心臟和肝成像表明在男性中類似的飽和劑量(skjold等，j.magn.reson.imaging2004；20：948-952，toft等，1997)。在wo2011/004325a1中描述的發(fā)明中，假定通過(guò)在即用溶液中混合兩種活性藥物成分(api)(如錳福地吡和福地吡)或者將其分開(kāi)施用來(lái)獲得特定的治療組合物。證明福地吡在約5至10μmol/kg劑量水平對(duì)錳福地吡具有顯著的體內(nèi)穩(wěn)定作用。第一臨床體驗(yàn)(yri等，2009和karlsson等，2011)表明在男性中錳福地吡在2至10μmol/kg之間某處的劑量水平是治療有效的?？紤]到錳福地吡加上福地吡更高的效力，合理地假設(shè)在患者中錳福地吡在接近1μmol/kg劑量水平下應(yīng)該是治療有效的。這轉(zhuǎn)而教導(dǎo)我們(福地吡+錳福地吡)/錳福地吡比接近5，即，含有4倍于錳福地吡的福地吡的即用制劑應(yīng)該是有效的。這進(jìn)一步暗示含有40mm福地吡和10mm錳福地吡的即用制劑——每千克體重施用0.1至0.2ml這種制劑——可導(dǎo)致1至2μmol/kg錳福地吡和4至8μmol/kg福地吡的劑量。鈣對(duì)福地吡的親和力比鋅低約109倍，對(duì)福地吡的親和力比錳低約106倍。但是，考慮到鈣以比鋅和錳以高得多的細(xì)胞外濃度存在，所以快速靜脈內(nèi)團(tuán)注施用福地吡可誘導(dǎo)游離鈣的細(xì)胞外濃度急劇降低。因?yàn)樾呐K的血液泵送活性絕對(duì)依賴于細(xì)胞外鈣，所以游離鈣細(xì)胞外含量的降低可轉(zhuǎn)而誘發(fā)急性心力衰竭。但是，如在wo2011/004325a1中討論的，這個(gè)問(wèn)題可通過(guò)使用鈣絡(luò)合的dpdp即cadpdp容易地解決。出乎意料地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)cadpdp可用與pled衍生物中的錳一起用在配合物中。此外，出乎意料地，可獲得鈣和錳的配合物，例如鈣錳福地吡以及其他第ii族金屬和第iii-xii族過(guò)渡金屬的配合物。因此，根據(jù)一個(gè)方面，本發(fā)明涉及式i化合物的混合金屬配合物或其鹽，其中所述混合金屬包含第iii-xii族過(guò)渡金屬和第ii族金屬：式i其中，x表示ch或n，每一個(gè)r1獨(dú)立地表示氫或-ch2cor5；r5表示羥基，任選地羥基化的烷氧基、氨基或烷基酰氨基；每一個(gè)r2獨(dú)立地表示zyr6，其中z表示鍵或者任選地被r7取代的c1-3亞烷基或氧代亞烷基；y表示鍵、氧原子或nr6；r6是氫原子、coor8、烷基、烯基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基，任選地被選自coor8、conr82、nr82、or8、＝nr8、＝o、op(o)(or8)r7和oso3m的一個(gè)或更多個(gè)基團(tuán)取代；r7是羥基，任選地羥基化、任選地烷氧基化的烷基或氨基烷基；r8是氫原子或任選地羥基化、任選地烷氧基化的烷基；m是氫原子或一當(dāng)量的生理可耐受陽(yáng)離子；r3表示任選地被r7取代的c1-8亞烷基、1，2-亞環(huán)烷基或1，2-亞芳基；并且每一個(gè)r4獨(dú)立地表示氫或c1-3烷基。本文使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”和“亞烷基”包括直鏈和支鏈、飽和和不飽和烴。術(shù)語(yǔ)“1，2-亞環(huán)烷基”包括具有5至8個(gè)碳原子的順式和反式亞環(huán)烷基二者以及烷基取代的亞環(huán)烷基。術(shù)語(yǔ)“1，2-亞芳基”包括苯基和萘基及其具有6至10個(gè)碳原子的烷基取代的衍生物。除非另有說(shuō)明，否則任何烷基、亞烷基或烯基部分可優(yōu)選地包含1至20個(gè)，更特別地1至8個(gè)，更特別地1至6個(gè)，甚至更特別地1至4個(gè)碳原子。環(huán)烷基部分可優(yōu)選地包含3至18個(gè)環(huán)原子，特別地5至12個(gè)環(huán)原子，甚至更特別地5至8個(gè)環(huán)原子。包括苯基或萘基的芳基部分是優(yōu)選的。對(duì)于芳烷基，苯基c1-8烷基，特別是芐基是優(yōu)選的。當(dāng)基團(tuán)可任選地被羥基取代時(shí)，可以是單取代或多取代，并且在多取代的情況下，烷氧基取代基可以攜帶烷氧基和/或羥基取代基。式i化合物在兩個(gè)吡啶環(huán)上可具有相同或不同的r2基團(tuán)，并且它們可連接在相同或不同的環(huán)位置。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，取代在5位和6位，或者更特別地，6位，即羥基的對(duì)位。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，r2基團(tuán)相同并且同位，更特別地，在6，6′-位。在又一些更具體的實(shí)施方案中，每一個(gè)r6是單或多(羥基或烷氧基化的)烷基或?yàn)榫哂惺給p(o)(or8)r7的基團(tuán)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式i化合物的鈣和錳配合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，r5是羥基、c1-8烷氧基、乙二醇、甘油、氨基或c1-8烷基酰氨基；z是鍵或選自ch2、(ch2)2、co、ch2co、ch2ch2co和ch2coch2的基團(tuán)；y是鍵；r6是單或多(羥基或烷氧基化的)烷基或者式op(o)(or8)r7的基團(tuán)；并且r7是羥基或者未經(jīng)取代的烷基或氨基烷基。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，r3是亞乙基，并且每一個(gè)基團(tuán)r1表示-ch2cor5，其中r5是羥基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式i化合物是n，n′-雙-(吡哆醛-5-磷酸)-乙二胺-n，n′-二乙酸(dpdp)或其可藥用鹽。在又一些實(shí)施方案中，藥學(xué)物質(zhì)是n，n′-雙-(吡哆醛-5-磷酸)-乙二胺-n，n′-二乙酸或其鹽的混合錳鈣配合物?；旌辖饘倥浜衔锟砂瑏?lái)自所指示之族金屬的任意組合。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn2+、cu2+、fe2+和/或ni2+，第ii族金屬是ca2+和/或mg2+。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn+，第ii族金屬是ca2+或ca2+與mg的混合物。在一些更具體的實(shí)施方案中，第ii族金屬是ca2+和mg2+的混合物，ca2+/mg2+摩爾比為約0.1至50，更特別地，約0.1至10。在又一些實(shí)施方案中，所述混合金屬配合物包含摩爾比為約1至10的第ii族金屬和第iii-xii族過(guò)渡金屬。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn2+，第ii族金屬是ca2+，并且ca2+/mn2+摩爾比為約4。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn2+，第ii族金屬是ca2+，ca2+/mn2+摩爾比為約4，式i化合物是dpdp，即，所述配合物是本文所述化合物鈣錳福地吡。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及在一步式制備/結(jié)晶步驟中產(chǎn)生本發(fā)明的混合金屬配合物的方法。所述方法包括從第iii-xii族過(guò)渡金屬、第ii族金屬和式i化合物的溶液進(jìn)行一步式結(jié)晶。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，從錳、鈣和式i化合物的溶液進(jìn)行一步式結(jié)晶。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，所述溶液的(ca+mn)/mn比接近(4+l)/1＝5，即組合物化學(xué)計(jì)量接近c(diǎn)a4mn(dpdp)5。x射線粉末衍射(xrpd)是鑒定和表征結(jié)晶固體中最廣泛使用的，其每一種均產(chǎn)生獨(dú)特的衍射圖案。線的位置(對(duì)應(yīng)于晶格間距)和相對(duì)強(qiáng)度二者都指示特定的相和物質(zhì)，提供用于比較的“指紋”。如實(shí)施例中所示，鈣錳福地吡的xrpd分析毋容置疑地證明鈣錳福地吡是一種化學(xué)實(shí)體，即配合物，而不是簡(jiǎn)單的混合物，參見(jiàn)實(shí)施例1。圖1示出了根據(jù)環(huán)境濕度相互轉(zhuǎn)變的鈣錳福地吡的三種晶型的疊置的曲線?？勺儩穸葂rpd分析證明形式b在超過(guò)40％的相對(duì)濕度(rh)下穩(wěn)定，形式a在0至10％rh下穩(wěn)定，形式c在6至36％rh下穩(wěn)定。在38至44％rh下觀察到形式b和形式c的混合物，在10mg規(guī)模下在3小時(shí)內(nèi)觀察到形式轉(zhuǎn)變的發(fā)生?？衫没虿焕眉泳ХN實(shí)施一步式制備，但是加晶種(如實(shí)施例1中所示例的)能夠更好地控制結(jié)晶。以上簡(jiǎn)單提到的一步式制備優(yōu)于將單獨(dú)金屬配合物混合的制備。因此，在一個(gè)具體實(shí)施方案中，鈣和錳的配合物是結(jié)晶物質(zhì)并且容易與期望量的錳福地吡(mndpdp)和鈣福地吡(cadpdp)的簡(jiǎn)單混合物區(qū)分，如實(shí)施例2中所示。所述實(shí)施例還示出了如用鈣-錳配合物鈣錳福地吡表示的根據(jù)本發(fā)明的配合物的改進(jìn)和優(yōu)點(diǎn)。至于體內(nèi)錳穩(wěn)定性，如在實(shí)施例4中證明的，鈣錳福地吡至少與錳福地吡和福地吡的真正混合物一樣穩(wěn)定。這將導(dǎo)致顯著更少的錳保留在腦中，如在實(shí)施例8中證明的。由于細(xì)胞保護(hù)作用主要依賴于完整的錳配合物錳福地吡或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物mndpmp和mnpled，所以鈣錳福地吡的效力優(yōu)于錳福地吡，如在實(shí)施例5中所示例的。此外，出乎意料地發(fā)現(xiàn)錳福地吡對(duì)癌細(xì)胞(如ct26細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性作用(laurent等，2005；alexandre等，2006；ep16944338)。但是，如在wo2009/078794a1和kurz等，2012中描述的，這是福地吡或本身其脫磷酸對(duì)應(yīng)物dpmp和pled的固有性質(zhì)，而不是完整的金屬配合物錳福地吡或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物mndpmp和mnpled的。在實(shí)施例6中，表明在ct26結(jié)腸癌細(xì)胞的殺傷中，福地吡比錳福地吡有效約20倍，并且實(shí)施例11表明在殺傷u1810非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中鈣錳福地吡比錳福地吡有效約28倍。在體外條件下，錳在一定程度上從福地吡離解，最可能地解釋了錳福地吡的癌癥殺傷效力。另一方面，與等摩爾錳濃度的錳福地吡相比，實(shí)施例1、2和3所述的鈣錳福地吡與單獨(dú)福地吡一樣有效，即，鈣錳福地吡的殺傷效力比等摩爾錳濃度的錳福地吡高得多。該發(fā)現(xiàn)暗示了兩個(gè)重要性質(zhì)。首先，脫磷酸的pled可能與其磷酸化的對(duì)應(yīng)物福地吡在癌細(xì)胞殺傷能力方面一樣有效，其次，與錳福地吡相比，mnpled更低的穩(wěn)定性(rocklage等，1989)可能解釋了mnpled更高的效力。zndpdp和znpled不具有任何細(xì)胞毒活性是因?yàn)檫@些配合物比其錳對(duì)應(yīng)物穩(wěn)定性高1000倍(rocklage等，1989)。在開(kāi)發(fā)錳福地吡作為mri造影劑的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)mndpdp在大鼠中導(dǎo)致胎兒骨骼異常，但是在兔中不會(huì)。重要的是，在大鼠中見(jiàn)到的該致畸作用不是由完整的錳福地吡本身導(dǎo)致的，而是由離解的錳導(dǎo)致的(grant等，actaradiol.1997；38：759-769)。盡管不確定錳是否會(huì)在人胎兒中導(dǎo)致骨骼異常，但是當(dāng)然必需要保護(hù)可能懷孕的婦女不暴露于錳福地吡。這代表了對(duì)于大部分臨床應(yīng)用來(lái)說(shuō)是小問(wèn)題，但是卻是主要的職業(yè)問(wèn)題，特別是在生產(chǎn)的過(guò)程中，不得不采取昂貴的措施以保護(hù)能生育和可能懷孕的婦女不暴露于錳福地吡。重要的是，當(dāng)意外地被吸收到體內(nèi)后，鈣錳福地吡將比錳福地吡釋放少得多程度的錳，這將毫無(wú)疑問(wèn)地大幅降低胎兒出現(xiàn)骨骼畸形的風(fēng)險(xiǎn)。其次，由于鈣錳福地吡比等摩爾錳劑量的錳福地吡顯著更有效，對(duì)于產(chǎn)生的每一劑量鈣錳福地吡，錳的需求被大幅降低，其將導(dǎo)致在生產(chǎn)過(guò)程中更少的錳暴露。此外，制備單活性藥物成分降低了生產(chǎn)治療劑量的成本。此外，對(duì)于單物質(zhì)的劑量的需要降低了產(chǎn)品配制中出錯(cuò)的可能性。在穩(wěn)定性測(cè)試中，結(jié)晶產(chǎn)物的穩(wěn)定性被證明優(yōu)于無(wú)定形物質(zhì)，例如通過(guò)噴霧干燥兩種api的混合物形成的那些。如實(shí)施例2所說(shuō)明的，由噴霧干燥獲得的無(wú)定形物質(zhì)被證明為迅速吸收水，在暴露于25℃/60％rh和40℃/75％rh下24小時(shí)內(nèi)形成融合顆粒和/或粘性固體。相比之下，結(jié)晶鈣錳福地吡即使在相同的暴露條件下7天后也保持自由流動(dòng)的固體。如wo2011/004325a1中所述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)向mnpled衍生物治療劑中添加過(guò)量的不含錳的pled衍生物(如dpdp)，保護(hù)錳福地吡在體內(nèi)不釋放神經(jīng)毒性的錳。盡管對(duì)于錳被攝取到腦中背后的機(jī)制尚未完全清楚，但是與含有錳的pled衍生物(如錳福地吡)組合施用過(guò)量的不含錳的pled衍生物(如福地吡)顯著降低了腦對(duì)錳的攝取。盡管不希望受到理論的約束，但是認(rèn)為根據(jù)發(fā)明wo2011/004325a1的組合保持了mnpled的螯合劑形式，從而提高了排泄可用的螯合物的量并且降低了攝取到腦和其他器官中的游離mn的量。低分子量錳螯合物(如mnpled衍生物)及其zn對(duì)應(yīng)物將容易地通過(guò)腎排泄，這受腎小球過(guò)濾率(gfr)的管控，而未與小分子量螯合劑結(jié)合的錳將在體內(nèi)保留相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間，緩慢并且主要通過(guò)膽途徑排泄(toft等，1997)。如在下文實(shí)施例8中所示，重復(fù)地(3個(gè)月內(nèi)39次)向大鼠中靜脈內(nèi)注射高劑量(假定臨床假定劑量的36倍)的鈣錳福地吡，與錳福地吡導(dǎo)致的結(jié)果相比，其導(dǎo)致腦中保留的錳顯著更低。在兩種情況下，總劑量相當(dāng)于約2800μmol/kg的錳。該實(shí)施例還表明胰腺在較大程度上攝取并保持離解的錳，這是之前由ni等(actaradiol1997；38：700-707)描述的性質(zhì)并用作有希望的胰腺診斷mri方法(等，actaradiol1997；38：660-664)。與利用錳福地吡治療的那些相比，鈣錳福地吡治療之大鼠的胰腺中顯著更低的錳水平進(jìn)一步證實(shí)了鈣錳福地吡改進(jìn)的毒理學(xué)譜。盡管在錳福地吡組中肝中mn含量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著提升，但是相對(duì)提升度比腦和胰腺中的那些低得多。已知單個(gè)診斷劑量的錳福地吡(5μmol/kgb.w.)導(dǎo)致大鼠的胰腺和肝中mn含量迅速升高——2小時(shí)后，胰腺的mn含量比基線值高約10倍，肝的對(duì)應(yīng)值升高約2倍(ni等，1997)。而ni等發(fā)現(xiàn)24小時(shí)后胰腺中的mn含量依然是提升的(基線值的約5倍)，在該時(shí)間點(diǎn)肝中的mn含量返回基線。這可能反映了肝高的處理錳的能力及其在錳內(nèi)穩(wěn)態(tài)中的重要生理作用。這進(jìn)一步得到本發(fā)明結(jié)果的支持，其顯示在重度暴露于錳福地吡之后肝中mn僅適度提高。本文實(shí)施例8清楚地說(shuō)明了鈣錳福地吡的改進(jìn)的毒理學(xué)譜。當(dāng)使用臨床劑量的mnpled衍生物(如錳福地吡)(即，5至10μmol/kgb.w.，靜脈內(nèi)施用)作為人中的mri造影劑時(shí)，約80％與福地吡(dpdp)結(jié)合的錳與鋅交換(toft等，1997)。當(dāng)施用了較小劑量的錳福地吡?xí)r，離解的錳的百分比將甚至更大。在這個(gè)觀點(diǎn)上，錳福地吡在大鼠和狗中以類似的方式作用(hustvedt等，1997)；但是，當(dāng)將化合物施用到豬中時(shí)，錳福地吡中幾乎所有的錳都與鋅交換，因此在豬中沒(méi)有細(xì)胞保護(hù)作用(karlsson等，2001)。另一方面，在豬中施用低劑量的mnpled導(dǎo)致廣泛的細(xì)胞保護(hù)作用，由顯著降低局部缺血-再灌注時(shí)的心肌梗死面積可見(jiàn)。盡管已報(bào)道m(xù)n2+和pled之間的穩(wěn)定常數(shù)比mn2+和福地吡的對(duì)應(yīng)數(shù)字大幅降低(rocklage等，1989)，但是mnpled因?yàn)橐恍┪粗脑蛭催M(jìn)行金屬交換。錳的替換是用作mri造影劑的先決條件并且因此是期望的，例如，用于肝和胰腺診斷目的。但是，對(duì)抗多種形式的氧化應(yīng)激的模擬sod的治療效果完全依賴于完整的錳pled衍生物配合物(brurok等，1999；karlsson等，2001)。例如，盡管體內(nèi)施用錳福地吡保護(hù)免受多種氧化應(yīng)激源(例如局部缺血-再灌注、細(xì)胞毒/細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑和對(duì)乙酰氨基酚中毒)，但是其不保護(hù)豬心臟免受局部缺血-再灌注誘發(fā)的心肌梗死(karlsson等，2001)，因其結(jié)果可推斷mnpled衍生物的體內(nèi)細(xì)胞保護(hù)作用是完整錳配合物的固有性質(zhì)。如在鈣錳福地吡中，ca以超過(guò)mn約4倍存在，使配合物或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物在注射后極度穩(wěn)定而不釋放錳，因此提供了另一個(gè)重要優(yōu)點(diǎn)，即提高治療效力。例如，當(dāng)靜脈內(nèi)注射臨床相關(guān)成像劑量的mndpdp(5至10μmol/kg)時(shí)，約80％最初與dpdp結(jié)合的錳被釋放，有助于成像功效。因此，小于20％保持與dpdp或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物結(jié)合，有助于mndpdp的治療活性。由于在鈣錳福地吡中，比mn過(guò)量約4倍的ca可有效地降低錳從配合物的釋放，這意味著對(duì)于相等的治療效果，可大幅減少錳，如在本發(fā)明中清楚示例的。在較低以及在某些實(shí)施方案中在較高治療相關(guān)劑量下，ca的穩(wěn)定作用將甚至更強(qiáng)。這轉(zhuǎn)而意味著使用鈣錳福地吡將比錳福地吡對(duì)神經(jīng)毒潛力具有深刻的影響，這是因?yàn)榫哂薪咏點(diǎn)a4mn(dpdp)5的化學(xué)計(jì)量組成的新藥物鈣錳福地吡的體內(nèi)穩(wěn)定作用和提高的治療效力二者。鋅存在于全身的組織和體液中。已估計(jì)人中的全身鋅含量為2至3g(folin等，biometals1994；7：75-79)。血漿鋅占全身鋅含量的約0.1％，并且在施用后，主要是這一小部分鋅與錳競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合福地吡或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物dpmp和pled。通過(guò)腸胃吸收和排泄的協(xié)同調(diào)節(jié)，人體具有非常高的保持鋅內(nèi)穩(wěn)態(tài)的能力(king等，jnutr2000；130：1360s-1366s)。盡管不希望受到理論的約束，但是通過(guò)臨床前工作(southon等，1997)和臨床工作(skjold等，2004)，可合理地假設(shè)身體含有5至10μmol/kg體重(b.w.)的容易與mnpled衍生物(如錳福地吡)中的錳交換的鋅。這基本符合上述血漿的鋅含量。pled衍生物(如福地吡)每分子含有一個(gè)錳/鋅結(jié)合位點(diǎn)。因此，鑒于鋅與螯合劑的親和力高1000倍，鈣錳福地吡中與錳相比以約4倍比率存在的鈣將保護(hù)在向患者腸胃外施用后不釋放錳。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過(guò)施用所述配合物來(lái)治療患者中的病理學(xué)狀態(tài)的方法，包括但不限于由氧衍生自由基的存在導(dǎo)致的病理學(xué)狀態(tài)(即，氧化應(yīng)激)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述病理學(xué)狀態(tài)由超氧化物導(dǎo)致，所述超氧化物隨后引起脂質(zhì)過(guò)氧化和/或蛋白質(zhì)硝化。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，可施用所述配合物以治療性治療人類患者或其他哺乳動(dòng)物中這樣的病理學(xué)狀態(tài)。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，施用根據(jù)本發(fā)明的配合物以治療哺乳動(dòng)物中由氧衍生自由基的存在導(dǎo)致的病理學(xué)狀態(tài)(即，氧化應(yīng)激)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將所述配合物用在細(xì)胞毒或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物的治療中，其中施用所述配合物以提供保護(hù)而免受細(xì)胞毒/細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物(例如，癌癥患者中的一種或更多種癌癥藥物)的不利副作用。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，細(xì)胞毒或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物包含阿霉素、表柔比星、奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、5-氟尿嘧啶、多西他賽或紫杉醇中的至少一種。在另一些實(shí)施方案中，所述病理學(xué)狀態(tài)是骨髓抑制(myeolosuppression)或神經(jīng)毒性，或者骨髓抑制和神經(jīng)毒性二者。根據(jù)本發(fā)明的方法還可包括，但不限于，治療對(duì)乙酰氨基酚誘發(fā)的肝功能衰竭、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、病毒誘發(fā)的慢性肝炎、威爾遜氏病、糖尿病，局部缺血性心臟病(包括急性環(huán)境和選擇性環(huán)境(electivesetting)二者下的局部缺血-再灌注誘發(fā)的損傷或心肌局部缺血-再灌注誘發(fā)的損傷)，與溶解血栓治療、心肺分流術(shù)或經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)相關(guān)的病癥，或者因心臟或器官移植手術(shù)或中風(fēng)引起的病癥。在另一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法還可包括治療：鐵相關(guān)病癥，包括鐵超載，例如地中海貧血、鐮狀細(xì)胞性貧血或輸血性含鐵血黃素沉著；肝炎誘發(fā)的肝硬化；輻射誘發(fā)的損傷，例如放射治療引起的損傷；多種神經(jīng)退行性疾病，包括阿爾茲海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(als)、帕金森病和多發(fā)性硬化等。在又一些實(shí)施方案中，施用根據(jù)本發(fā)明的方法來(lái)作為低錳超氧化物歧化酶(mnsod)活性的病理學(xué)狀態(tài)(例如，在多種形式的癌癥中發(fā)生的)的替代治療(buettner，anticanceragentsmedchem.2011；11：341-346)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過(guò)施用本發(fā)明的配合物或更具體地說(shuō)鈣錳福地吡來(lái)治療非小細(xì)胞肺癌的方法。在另外一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過(guò)施用本發(fā)明的配合物或更具體地說(shuō)鈣錳福地吡來(lái)治療結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌或惡性黑色素瘤的方法。如實(shí)施例5以及l(fā)aurent等，2005和alexandre等，2006所示，錳福地吡的抗腫瘤作用的一個(gè)有意思并且可能重要的性質(zhì)可能是其淋巴細(xì)胞保護(hù)性能。盡管氧化應(yīng)激繼發(fā)的炎性過(guò)程對(duì)正常組織有損傷，但是實(shí)際上其可能通過(guò)產(chǎn)生富含生長(zhǎng)因子的微環(huán)境和促進(jìn)癌性克隆的生長(zhǎng)而對(duì)腫瘤組織有益(anscher，onclogist2010；15：350-359；kareva，transloncol2011；4：266-270；kerkar等，cancerres2012；72：3125-3130)。一個(gè)顯著的實(shí)例是存在優(yōu)先聚集在較少血管化的腫瘤區(qū)域并且分泌實(shí)際上促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的細(xì)胞因子的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。此外，這些生長(zhǎng)因子不僅可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，并且它們還已示出對(duì)在腫瘤消除中最有效的cd8+t淋巴細(xì)胞活性的抑制。實(shí)際上，為了癌癥化學(xué)治療的結(jié)果，對(duì)于t淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的重要性越來(lái)越感興趣(zitvogel等，natrevclinoncol2011；8：151-160；kerkar等，2012)。已知嚴(yán)重的淋巴細(xì)胞減少癥(＜1000細(xì)胞/μl)不利地影響化學(xué)治療響應(yīng)。小鼠癌癥的集合，包括ct26結(jié)腸癌、mca205纖維肉瘤、tsa細(xì)胞系乳腺癌、gos細(xì)胞系骨肉瘤和el4胸腺瘤，當(dāng)其被植入到同系能夠免疫的小鼠中時(shí)，比植入到免疫缺陷宿主(即，裸小鼠)中時(shí)對(duì)利用阿霉素和奧沙利鉑的化學(xué)治療的響應(yīng)有效得多(zitvogel等，2011)。這符合揭示ifn-γ產(chǎn)生性cd8+t-淋巴細(xì)胞是有效的癌癥免疫效應(yīng)器的臨床研究。此外，高中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比率與具有晚期結(jié)直腸癌的患者的低的總存活率有關(guān)(chua等，brjcancer2011；104：1288-1295)。考慮到錳福地吡以及特別地鈣錳福地吡是化學(xué)治療中的高效淋巴細(xì)胞保護(hù)劑，似乎合理的是，該性質(zhì)在體內(nèi)病癥的過(guò)程中特別重要。為了臨床可用，用于癌癥患者中的化學(xué)治療保護(hù)劑或放射治療保護(hù)劑應(yīng)滿足三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)：(i)藥劑應(yīng)保護(hù)正常組織免受化學(xué)治療/放射治療誘發(fā)的毒性，但是不保護(hù)腫瘤組織(至少不在任何更大的程度上)，否則將不能獲得益處；(ii)藥劑應(yīng)相對(duì)容易遞送并具有最小毒性；并且(iii)藥劑應(yīng)保護(hù)正常組織免受劑量限制性毒性或顯著降低生活質(zhì)量的那些(citrin等，2010)。如本文實(shí)施例證明的，本發(fā)明的化合物以及特別地鈣錳福地吡滿足所有這些標(biāo)準(zhǔn)。為何錳福地吡和鈣錳福地吡保護(hù)非惡性細(xì)胞但是損傷癌細(xì)胞的原因似乎自相矛盾。盡管不希望受到理論的約束，但是可能的是對(duì)非惡性細(xì)胞的保護(hù)和對(duì)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用正好是一枚硬幣的兩面。提升的氧化態(tài)是刺激轉(zhuǎn)化細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂必不可少的(irani等，science1997；275：1649-1652)。若干研究已經(jīng)報(bào)道活性氧物質(zhì)(ros)在促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要作用(例如，behrend等，molcellbiol2005；25：7758-7769)。這些數(shù)據(jù)與大量的文獻(xiàn)一致，表明許多上皮腫瘤細(xì)胞的氧化還原平衡有利于提升的氧化劑設(shè)定點(diǎn)(setpoint)(doroshow，2006)，包括ct26細(xì)胞(laurent等，2005；alexandre等，2006)。mnsod抑制多種癌細(xì)胞系和小鼠模型中的細(xì)胞生長(zhǎng)。此外，mnsod的過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)人結(jié)直腸癌細(xì)胞系hct116中生長(zhǎng)停滯并增加誘導(dǎo)p53所需的衰老(behrend等，2005)。在癌細(xì)胞中引入正常mnsod基因改變了表型，并且細(xì)胞失去了其在培養(yǎng)物中形成群落和在裸小鼠中形成腫瘤的能力(church等，procnatlacadsciusa1993；90：3113-3117)。在癌細(xì)胞中可見(jiàn)的提升的氧化態(tài)通常導(dǎo)致·o2-的產(chǎn)生增加，其容易與·no反應(yīng)形成高毒性onoo-，導(dǎo)致酪氨酸硝化，·no的“丑陋”一面(beckman等，1996；radi，2004)。有趣的是，令人信服的證據(jù)表明酪氨酸硝化參與腫瘤中cd8+淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的上述抑制(bronte等，jexpmed2005；201，1257-1268；molon等，jexpmed2011；208：1949-1962)。可能是鈣錳福地吡通過(guò)其sod模擬活性抑制了onoo-產(chǎn)生和由此的免疫抑制，解釋了在能夠免疫的小鼠中可見(jiàn)但是在不能免疫之小鼠中不可見(jiàn)的提高的抗腫瘤作用，如實(shí)施例10證明的。過(guò)氧亞硝酸鹽不能直接硝化蛋白質(zhì)，通常需要氧化還原活性過(guò)渡金屬如鐵或銅(甚至是錳也可滿足該需要)(radi，2004)。福地吡及其脫磷酸代謝物對(duì)fe3+具有極高的親和力(rocklage等，1989)。除了鈣錳福地吡的sod模擬活性外，該性質(zhì)對(duì)抗腫瘤活性可能特別重要。除t淋巴細(xì)胞依賴作用外，dpdp和pled的不依賴于免疫的直接作用可能是由于抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶ii，如kurz(2012)的最近論文表明的?？稍谒幬锝M合物中施用所述配合物。任選地，本發(fā)明的藥物組合物可可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方式包含一種或更多種生理上可接受的載體和/或賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將所述配合物例如混懸或溶解在液體介質(zhì)中，任選地添加可藥用賦形劑。適合所述藥物組合物的賦形劑包括任何常規(guī)的藥物或獸醫(yī)制劑賦形劑，包括，但不限于：穩(wěn)定劑、抗氧化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、ph調(diào)節(jié)劑、粘合劑、填充劑等。藥物組合物可以是適合于施用的形式，包括腸胃外施用和腸道施用二者。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述組合物是適合于例如注射或輸注的形式。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以是常規(guī)藥物施用形式，例如片劑、膠囊劑、散劑、溶液劑、混懸劑、分散劑、糖漿劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、硬膏劑等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述配合物是凍干形式，并且若需要，可在施用前復(fù)溶。凍干配合物可以是包含一種或更多種穩(wěn)定劑和/或其他已知用于凍干之賦形劑的凍干組合物。根據(jù)本發(fā)明，可通過(guò)多種途徑施用這樣的組合物，例如，經(jīng)口、經(jīng)皮、直腸、鞘內(nèi)、經(jīng)表面，或者通過(guò)吸入或注射，特別是皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)注射。也可使用其他施用途徑，包括鼓室內(nèi)和鼻內(nèi)，優(yōu)選提高產(chǎn)品的效力、生物利用度或耐受性的途徑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)所使用的特定制劑選擇最合適的途徑。相對(duì)于所選擇的治療，合適的劑量將是明顯的。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的治療方法包括施用約0.01至50μmol/kg體重的混合金屬配合物。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的治療方法包括施用約0.1至10μmol/kg或約0.1至5μmol/kg體重的混合金屬配合物。以下實(shí)施例論證了本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方案和方面。實(shí)施例1方法向用n2沖洗的100l有套反應(yīng)器中添加福地吡(dpdp)(4.0kg無(wú)水基，6.27mol，1當(dāng)量)和去離子(di)水(19.2l，4.88體積)。利用稀naoh(總計(jì)8.9l，17.5molnaoh，2.8當(dāng)量，由1.41kg50重量％naoh和8.0ldi水制備)經(jīng)過(guò)35分鐘(21.0至23.3℃，外部冷卻)將該批次的ph調(diào)節(jié)到5.7。將漿體在20℃至25℃攪拌1小時(shí)，在這段時(shí)間中形成了溶液。向該溶液中相繼添加ca(oh)2(361.1g，4.87mol，0.78當(dāng)量)、l-抗壞血酸(55.1g，0.313mol，5摩爾％)和mno(80g，1.13mol，0.18當(dāng)量)。在添加每一種試劑后，將該批次在20℃至25℃攪拌30至60分鐘，并測(cè)量ph(在ca＝6.24后，稍渾濁的淡黃色至鐵銹色；在抗壞血酸＝6.28后，較少渾濁的鐵銹色；在mn＝6.38后，渾濁的鐵銹色至黃綠色)。將渾濁的批次在20℃至25℃攪拌16小時(shí)，測(cè)量ph(6.36)并將該批次通過(guò)0.3μ串聯(lián)過(guò)濾器過(guò)濾到潔凈的100l反應(yīng)器中。同時(shí)，利用丙酮(5.9l，1.47體積)和etoh(74l，18.5體積)制備乙醇(etoh)23a溶液。將一部分etoh23a溶液(8.0l，2體積)在20℃至25℃下經(jīng)過(guò)30分鐘添加到所述批次中，在這段時(shí)間期間溶液變得渾濁。利用鈣錳福地吡(40g，1重量％)向批次中加晶種并在20℃至25℃下攪拌30分鐘以確保固體持續(xù)。將該批次溫度經(jīng)過(guò)1小時(shí)調(diào)節(jié)到15℃，然后在13.8℃至15.5℃下老化30分鐘。向該批次中經(jīng)過(guò)10小時(shí)添加etoh23a(56l，14體積)(11℃至14℃)。將漿體在5℃至10℃下混合13小時(shí)，然后過(guò)濾以收集固體。用冷凍(0℃至10℃)的etoh23a(14l，3.5體積)沖洗反應(yīng)器和固體，使固體適應(yīng)2小時(shí)然后在真空烘箱中于45℃干燥72小時(shí)，得到4.819kg(93％產(chǎn)率，調(diào)節(jié)含水量)作為黃色固體的鈣錳福地吡(lot#11ak0105b)。hplc分析表明純度為98.8％。ovenkarlfisher分析(@170℃)表明10.1％水。icp分析指示4.27％ca、1.37％mn、8.64％na，ca/mn比為4.27，即具有接近c(diǎn)a4mn(dpdp)5的化學(xué)計(jì)量組成。結(jié)果進(jìn)行xrpd(x射線粉末衍射)分析，圖1中示出了所得圖。xrpd圖證明鈣錳福地吡是單一的化學(xué)實(shí)體而不是簡(jiǎn)單的摻合物。圖1示出了鈣錳福地吡的根據(jù)環(huán)境濕度互變的三種已知晶型的疊置曲線?？勺儩穸葂rpd分析表明形式b在超過(guò)40％rh下穩(wěn)定，形式a在0至10％rh下穩(wěn)定，形式c在6至36％rh下穩(wěn)定。在38至44％rh下觀察到了形式b和形式c的混合物，并且在10mg規(guī)模下在3小時(shí)內(nèi)觀察到形式轉(zhuǎn)變的發(fā)生。結(jié)論xrpd出乎意料地證明鈣錳福地吡是一種化學(xué)實(shí)體而不是簡(jiǎn)單的摻合物(圖1)。實(shí)施例2方法在室溫下將比率為4∶1的約200mg鈣福地吡(cadpdp)和50mg錳福地吡(mndpdp)稱量到40ml小瓶中并溶解在40mldi水中以產(chǎn)生黃色溶液。用buchimini-spraydryerb-290將所述黃色水溶液噴霧干燥同時(shí)連接在作為空氣調(diào)節(jié)器的buchi除濕器b-296上，以允許從實(shí)驗(yàn)室吸入空氣。利用不同進(jìn)料速率(20％、30％、40％、50％和60％)在升高的入口溫度(220℃)下實(shí)施噴霧干燥優(yōu)化實(shí)驗(yàn)?；厥债a(chǎn)物180至230mg。結(jié)果通過(guò)xrpd分析所得物質(zhì)(圖2)，其表明所有產(chǎn)物是無(wú)定形的并被證明為迅速吸收水，暴露于25℃/60％rh和40℃/75％rh下在24小時(shí)內(nèi)形成融合顆粒和/或粘性固體。實(shí)施例3本實(shí)施例通過(guò)使用以下手段來(lái)闡明新化學(xué)實(shí)體鈣錳福地吡的結(jié)構(gòu)：紅外吸收光譜、質(zhì)譜和元素分析。由于mn的順磁性，不能使用nmr分析來(lái)分析鈣錳福地吡。方法對(duì)根據(jù)本文所述一步式方法產(chǎn)生的產(chǎn)物進(jìn)行本實(shí)施例所述分析。產(chǎn)物被鑒定為lot#7755-c-r0-01-30-01，基本如實(shí)施例1所述制備。該產(chǎn)物的一部分被證明是鈣錳福地吡的參考標(biāo)準(zhǔn)。紅外吸收光譜。使用衰減全反射(atr)在thermo-nicoletavatar370光譜儀上獲得鈣錳福地吡lot#7755-c-r0-01-30-01的傅里葉變換紅外(ft-ir)吸收光譜。質(zhì)譜。在watersq-tofmicroms/ms系統(tǒng)上獲得鈣錳福地吡lot#7755-c-r0-01-30-01的質(zhì)譜。選擇電噴霧離子化(esi)(陽(yáng)離子極性模式)用于ms分析。將樣品以10μg/ml的濃度溶解在50∶50乙腈/水+0.1％甲酸的溶液中。將溶液以10μl/分鐘的速率直接輸注到源中。元素分析。使用4.26摩爾比的ca/mn和2.8molna/摩爾的福地吡制造鈣錳福地吡lot#7755-c-r0-01-30-01。具有該組成的配合物的理論金屬含量是1.41％mn、4.38％ca和8.69％na。結(jié)果圖3中示出了紅外吸收光譜，并且特征性紅外吸收帶(波數(shù))和對(duì)應(yīng)歸屬如下：波數(shù)(cm-1)歸屬3250n-h3027-2848c-h1581c＝o1528c＝c1471，1437ch2，ch31383ch31277p＝o1092p-oh1038，977，933，913p-o-c827，813，770，751芳族c-h圖4a和4b分別示出了樣品的質(zhì)譜和擴(kuò)大的質(zhì)譜。所述譜表現(xiàn)為鈣福地吡的和錳福地吡的彼此疊加。完全質(zhì)子化的鈣福地吡的精確質(zhì)量是676，并且觀察到[m+1]為677的質(zhì)量。一鈉、二鈉、三鈉和四鈉的精確質(zhì)量分別為698、720、742和764。所述譜表明每一種物質(zhì)的[m+1]分別在699、721、743和765處。完全質(zhì)子化的錳福地吡的精確質(zhì)量為691，相應(yīng)一鈉、二鈉、三鈉和四鈉物質(zhì)分別在713、735、757和779處。所述譜表現(xiàn)為每一種物質(zhì)的[m+1]質(zhì)量在692、714、736、758和780處。lot#7755-c-r0-0l-30-01的金屬含量結(jié)果為1.48％mn、4.44％ca和8.56％na，與預(yù)期值一致，證實(shí)錳和鈣二者都是絡(luò)合的，以鈉作為平衡離子，很少或不存在僅簡(jiǎn)單地作為平衡離子的鈣。結(jié)論這些結(jié)果與圖5中示出的結(jié)構(gòu)一致。圖5示出了理想和一般的4∶1ca/mn，以3個(gè)na作為平衡離子，其給出了圖5中所示745.43的分子量。如所述制備并在本實(shí)施例中研究的物質(zhì)的平均分子量具有4.26ca/mn比率和2.8個(gè)na作為平衡離子，具有740.89的分子量。實(shí)施例4本實(shí)施例測(cè)量了在以mn等摩爾劑量接受鈣錳福地吡或錳福地吡的動(dòng)物中錳(mn)和鋅(zn)的尿排泄。方法利用含有約10mmmn和40mmca的0.25ml50mm鈣錳福地吡(lot#11ak0105b)溶液或者含有10mmmn的0.25ml10mm錳福地吡(lot#02090106)通過(guò)一尾部靜脈經(jīng)靜脈內(nèi)注射八只雄性wistar大鼠(約250g)。注射后，立即將大鼠放在代謝籠中，用于0至24小時(shí)時(shí)間段的尿液收集。為了獲得尿中錳(mn)和鋅(zn)的基線含量，使兩只另外的(對(duì)照)大鼠接受0.25ml生理鹽水并放在代謝籠中，用于相同時(shí)間段的尿液收集。然后將尿樣在-80℃儲(chǔ)存直到mn分析。在分析之前，將樣品解凍并進(jìn)行充分搖動(dòng)以獲得均勻樣品。從每個(gè)樣品中取出5ml等份試樣并添加5ml濃硝酸。然后將樣品在微波爐中溶解(resolve)，然后利用蒸餾水稀釋到50ml終體積。通過(guò)icp-ms(電感耦合等離子體質(zhì)譜)分析每一樣品的mn含量。將與注射到大鼠中的那些(即，0.25ml)相同的鈣錳福地吡和錳福地吡樣品吸出并注射到試管中。將這些樣品與尿樣品以相同的方式進(jìn)行處理并分析其mn含量。結(jié)果表示為總0至24小時(shí)尿mn含量(表示為μmol/kg±s.e.m.)和注射劑量的百分比(±s.e.m.)。對(duì)于錳在尿中的排泄，通過(guò)未配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)接受鈣錳福地吡和錳福地吡的動(dòng)物之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。低于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。結(jié)果結(jié)果在圖6a、6b和6c中給出。在iv注射含有2.59μmol錳(mn)的0.25ml10mm錳福地吡24小時(shí)后，在尿中回收0.60±0.04μmolmn(圖6a)，相當(dāng)于注射劑量的23.1±1.4％(在減去0.035μmol的基線排泄之后，圖6b)。在注射含有2.52μmolmn的0.25ml50mm鈣錳福地吡之后，相應(yīng)數(shù)字為1.27±0.07μmolmn(圖6a)，相當(dāng)于注射劑量的50.5±2.6％(圖6b)。錳福地吡和鈣錳福地吡之間的差異高度顯著(p＜0.0001)。腎mn排泄的差異或多或少地反映在鋅(zn)的腎排泄差異中；表示為增加的zn排泄，即，減去基線24小時(shí)排泄(0.068μmol)(圖6c)。結(jié)論因此，在相等mn劑量下，鈣錳福地吡尿中mn排泄是錳福地吡的2倍。靜脈注射錳福地吡后0至24小時(shí)中在尿中排泄的mn的百分比非常好地符合之前在大鼠(hustvedt等，1997)和人(toft等，1997)中報(bào)道的數(shù)字。本結(jié)果證明與錳福地吡相比，鈣錳福地吡在體內(nèi)條件下釋放少得多的mn。這提供了以下的顯著優(yōu)點(diǎn)：減少了腦和其他器官可攝取的游離mn的量，顯著提高了治療指數(shù)，因?yàn)樵隗w內(nèi)可利用更多治療性錳福地吡或其脫磷酸對(duì)應(yīng)物mndpmp和mnpled。因此，鈣錳福地吡提供了大幅降低了毒性并且比錳福地吡有效得多的治療性治療。實(shí)施例5本實(shí)施例比較了鈣錳福地吡與錳福地吡和mnpled在balb/c小鼠中的奧沙利鉑的骨髓抑制作用方面的細(xì)胞保護(hù)作用。方法在第一系列實(shí)驗(yàn)中，利用奧沙利鉑分別以7.5、10.0和12.5mg/kg奧沙利鉑對(duì)3組每組5只雌性balb/c小鼠進(jìn)行一次腹膜內(nèi)治療。在奧沙利鉑治療前一天(基線)以及3天后和6天后，利用玻璃毛細(xì)管從眼窩靜脈叢采集50μledta血樣。使用自動(dòng)化系統(tǒng)emerald(abbottdiagnostics)分析血樣的白細(xì)胞(wbc)、淋巴細(xì)胞(lym)、中性粒細(xì)胞(neu)和血小板(plc)的含量。由結(jié)果(圖7a至7d)推斷，應(yīng)在12.5mg/kg奧沙利鉑下進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，測(cè)試鈣錳福地吡、錳福地吡和mnpled的骨髓保護(hù)作用，并且應(yīng)當(dāng)在每只小鼠中施用奧沙利鉑前一天和6天后進(jìn)行血細(xì)胞樣品分析。在施用奧沙利鉑(12.5mg/kg)30分鐘前和24小時(shí)后，小鼠經(jīng)靜脈內(nèi)接受鹽水、鈣錳福地吡(5mg/kg；lot#11ak0105b)、錳福地吡(1和10mg/kg；lot#02090106)或mnpled(1mg/kg)(每組5只小鼠)。5mg/kg劑量的鈣錳福地吡與1mg/kg劑量的錳福地吡含有相同量的錳，即，1.3μmol；1mg/kg的mnpled含有稍多的錳(約2μmol)。對(duì)照組替代地接受奧沙利鉑載劑(5％葡萄糖)和鹽水。結(jié)果表示為多種治療和血細(xì)胞從基線的相對(duì)變化的曲線(±s.e.m.)。適當(dāng)時(shí)，通過(guò)非配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)檢驗(yàn)治療組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。低于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。結(jié)果圖8a至8d給出了結(jié)果。在相等mn劑量下，即，5mg/kg鈣錳福地吡在保護(hù)小鼠免受奧沙利鉑誘發(fā)的白細(xì)胞(wbc)總數(shù)降低方面比1mg/kg錳福地吡在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著更有效(圖8a)。12.5mg/kg的單次劑量奧沙利鉑導(dǎo)致wbc降低超過(guò)80％，而利用鈣錳福地吡治療的動(dòng)物中僅降低約25％。在利用1或10mg/kg錳福地吡治療的小鼠中的相應(yīng)降低為約50％。這些結(jié)果可能也表明mndpdp必須脫磷酸成為mnpled才能發(fā)揮其骨髓保護(hù)作用；與鈣錳福地吡一樣，1mg/kgmnpled比1和10mg/kg錳福地吡在保護(hù)wbc方面顯著更有效。在奧沙利鉑治療之后，在淋巴細(xì)胞(lym；圖8b)和中性粒細(xì)胞(neu；圖8c)中發(fā)現(xiàn)了類似的降低。當(dāng)分析中性粒細(xì)胞(neu)時(shí)，也觀察到了定性的類似結(jié)果。對(duì)于血小板(plc；圖7d和8d)，與wbc、lym和neu相比，其在對(duì)奧沙利鉑的敏感性和測(cè)試物質(zhì)的細(xì)胞保護(hù)作用二者方面都有差異。結(jié)論在等摩爾錳劑量下，鈣錳福地吡比錳福地吡在保護(hù)balb/c小鼠對(duì)抗抗癌藥物奧沙利鉑的骨髓抑制作用方面更強(qiáng)效。實(shí)施例6鈣錳福地吡與錳福地吡、福地吡、mnpled、znpled、zndpdp、鈣福地吡(cadpdp)、pled和cacl2相比在小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒活性。方法使用mtt測(cè)定測(cè)量細(xì)胞的生存力。簡(jiǎn)要地說(shuō)，將8,000個(gè)ct26(小鼠結(jié)腸癌)細(xì)胞接種在96孔板上的每個(gè)孔中并在具有5％co2的潮濕空氣中于37℃在rpmi(roswellparkmemorialinstitute)1640培養(yǎng)基中過(guò)夜生長(zhǎng)，所述培養(yǎng)基含有10％胎牛血清、2mml-谷氨酰胺、100ul/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。然后將細(xì)胞在37℃下暴露于1至1,000μm鈣錳福地吡(lot#11ak0105b)、福地吡(dpdp；lot#rdl02090206)、pled(lot#ker-ao-122(2))、鈣福地吡(cadpdp)、錳福地吡(lot#02090106)、mnpled、znpled、zndpmp和cacl248小時(shí)。然后通過(guò)添加5mg/ml噻唑藍(lán)(methylthiazoletetrazolium，mtt)至0.5mg/ml終濃度并將細(xì)胞在37℃下再孵育4小時(shí)來(lái)評(píng)估細(xì)胞的生存力。然后通過(guò)添加10％sds和10mmhcl至5％sds和5mmhcl的終濃度來(lái)將通過(guò)存活細(xì)胞的線粒體脫氫酶形成的藍(lán)色甲瓚在37℃下溶解過(guò)夜。最后，利用與applemacintosh計(jì)算機(jī)連接的酶標(biāo)儀spectramax340(moleculardevices，sunnyvale，ca，usa)以670nm為參照在570nm處閱讀溶液的吸光度，所述計(jì)算機(jī)運(yùn)行程序softmaxprov1.2.0(moleculardevices，sunnyvale，ca，usa)。結(jié)果福地吡、pled、鈣福地吡或鈣錳福地吡的細(xì)胞毒活性是錳福地吡的細(xì)胞毒活性的約20倍(圖9a和9b)。在其殺傷ct26癌細(xì)胞的能力方面，mnpled的效力幾乎是錳福地吡的10倍(圖9a)。在所有的使用濃度下，zndpdp、znpled或cacl2均未表現(xiàn)出任何細(xì)胞毒活性(圖9a和9b)。結(jié)論當(dāng)將鈣錳福地吡與錳福地吡進(jìn)行比較時(shí)，在殺傷ct26癌細(xì)胞方面，發(fā)現(xiàn)鈣錳福地吡的效力是錳福地吡的約20倍。錳在一定程度上從福地吡的離解可能解釋了錳福地吡的癌癥殺傷效力。另一方面，在錳等摩爾濃度下，如實(shí)施例1和3限定的鈣錳福地吡與單獨(dú)福地吡一樣有效，即鈣錳福地吡的殺傷效力比等摩爾錳濃度的錳福地吡高得多。該發(fā)現(xiàn)表明兩個(gè)重要性質(zhì)。首先，脫磷酸pled可能與其磷酸化對(duì)應(yīng)物福地吡在癌細(xì)胞殺傷能力方面一樣有效，其次，與錳福地吡相比mnpled更低的穩(wěn)定性(rocklage等，1989)可能解釋了mnpled更高的效力。zndpdp和znpled不具有任何細(xì)胞毒活性可能是由于這些配合物的穩(wěn)定性是其錳對(duì)應(yīng)物的1000倍(rocklage等，1989)。實(shí)施例7本實(shí)施例比較了在存在和不存在鈣錳福地吡的情況下，在具有小鼠結(jié)腸癌(ct26)的小鼠模型中奧沙利鉑的抗腫瘤活性。方法在具有5％co2的潮濕空氣中于37℃下在75cm2培養(yǎng)瓶中的rpmi(roswellparkmemorialinstitute)1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)ct26細(xì)胞，所述培養(yǎng)基含有10％胎牛血清、2mml-谷氨酰胺、100ul/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到～50％匯合(confluency)時(shí)，通過(guò)胰蛋白酶消化來(lái)收集細(xì)胞。簡(jiǎn)要地說(shuō)，將細(xì)胞用基于磷酸鹽的鹽水(pbs)(ph7.3)洗滌并在37℃下暴露于0.05％胰蛋白酶/0.53mmedta約5分鐘。通過(guò)添加rpmi1640培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化。對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)并在200×g下離心5分鐘。然后，將其在pbs中洗滌、再次離心并以2×106/350μl的濃度重懸在pbs中用于向小鼠注射。如laurent等，2005所述，使用6至8周齡的balb/c雌性小鼠。簡(jiǎn)要地說(shuō)，在第0天，對(duì)每只小鼠在后頸部皮下注射2×106的ct26細(xì)胞。7天后(第7天)，當(dāng)腫瘤可檢測(cè)時(shí)，利用卡尺測(cè)定腫瘤尺寸并將小鼠分組(每組5只)，從而使得每一組中腫瘤尺寸沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。注射奧沙利鉑±鈣錳福地吡(lot#11ak0105b)，一組小鼠接受單獨(dú)載劑(0.9％鹽水+5％葡萄糖)治療。在第一系列實(shí)驗(yàn)中，對(duì)小鼠i.v.注射鹽水或50mg/kg鈣錳福地吡，30分鐘之后i.p.施用20mg/kg奧沙利鉑(在5％葡萄糖中稀釋)或5％葡萄糖。在24小時(shí)后(第8天)，這些小鼠接受額外的鹽水或50mg/kg鈣錳福地吡。在另一系列實(shí)驗(yàn)中，對(duì)小鼠i.v.注射鹽水或5mg/kg鈣錳福地吡，30分鐘后10mg/kg奧沙利鉑(在5％葡萄糖中稀釋)或5％葡萄糖，24小時(shí)后(第8天)鹽水或5mg/kg鈣錳福地吡。在第10天處死小鼠，切下腫瘤并測(cè)定濕重。當(dāng)適當(dāng)時(shí)，通過(guò)未配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)檢驗(yàn)治療組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。低于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。結(jié)果結(jié)果在圖10a和10b中給出。在第一系列實(shí)驗(yàn)中，小鼠接受20mg/kg奧沙利鉑，其接近于最高耐受劑量。利用奧沙利鉑單次治療導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的腫瘤重量超過(guò)50％的降低。利用鈣錳福地吡(50mg/kg)的治療對(duì)高劑量的奧沙利鉑的抗腫瘤作用沒(méi)有任何不利影響(圖10a)。但是，在第二系列實(shí)驗(yàn)中，其中使用10mg/kg奧沙利鉑，利用相對(duì)低劑量鈣錳福地吡(5mg/kg)的治療導(dǎo)致在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著更好的抗腫瘤作用(圖10b)，10mg/kg奧沙利鉑加上5mg/kg鈣錳福地吡的組合作用幾乎與單獨(dú)的20mg/kg奧沙利鉑一樣有效。結(jié)論鈣錳福地吡不會(huì)不利地干擾奧沙利鉑的抗腫瘤活性，并且相反地，在相對(duì)低劑量的奧沙利鉑(10mg(kg)下，鈣錳福地吡實(shí)際上提高抗腫瘤效力。實(shí)施例8本實(shí)施例比較了在大鼠腦、胰腺和肝中重復(fù)地靜脈內(nèi)注射鈣錳福地吡和錳福地吡(33周內(nèi)39次)后錳的水平。方法利用0.9％nacl、72.0μmol/kg錳福地吡(lot#02090106；對(duì)應(yīng)于72μmol/kg錳)或374.4μmol/kg鈣錳福地吡(lot#11ak0105b；對(duì)應(yīng)于72μmol/kg錳)每周3次地靜脈內(nèi)注射wistar雄性和雌性大鼠，注射13周(每個(gè)治療組由9只雄性+9只雌性組成)。各鈣錳福地吡劑量相當(dāng)于假定臨床劑量(assumedclinicaldose，acd)的約36倍。在13周的施用時(shí)期之后，將所述大鼠處死并切下腦和胰腺，冷凍保存約0.5g樣品直到mn分析。通過(guò)icp-ms分析各樣品的mn含量。結(jié)果表示為μg/g濕重±s.e.m。對(duì)于mn含量，通過(guò)配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)檢驗(yàn)錳福地吡組和鈣錳福地吡組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。低于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。結(jié)果結(jié)果在圖11a至c中給出。在nacl治療的對(duì)照大鼠、錳福地吡治療的大鼠和鈣錳福地吡治療大鼠中腦mn含量分別為0.38±0.01、0.99±0.02和0.74±0.01μg/gw.w.。胰腺中相應(yīng)的mn含量分別為1.66±0.06、5.54±0.45和3.35±0.19μmol/kg。盡管肝的mn含量在錳福地吡組統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地提升(圖11c)，然而相對(duì)提升度比在腦和胰腺中可見(jiàn)的提升度低得多。結(jié)論向大鼠中施用高累積劑量的鈣錳福地吡導(dǎo)致與錳福地吡相比顯著更少的錳保留在腦和胰腺中(在這兩種情況下，總劑量相當(dāng)于約2800μmol/kg錳)。這些結(jié)果證明鈣錳福地吡比錳福地改進(jìn)的毒理學(xué)譜。實(shí)施例9本實(shí)施例示出了鈣錳福地吡在balb/c小鼠中卡鉑的骨髓抑制作用方面的細(xì)胞保護(hù)作用。方法在第一系列實(shí)驗(yàn)中，分別利用75、100和125mg/kg卡鉑對(duì)每組由5只雌性balb/c小鼠組成的3個(gè)組進(jìn)行一次腹膜內(nèi)卡鉑治療。在卡鉑治療前一天(基線)以及3天后和6天后，利用玻璃毛細(xì)管從眼窩靜脈叢采集50μledta血樣。使用自動(dòng)化系統(tǒng)emerald(abbottdiagnostics)分析血樣的白細(xì)胞(wbc)、淋巴細(xì)胞(lym)、中性粒細(xì)胞(neu)和血小板(plc)的含量。由結(jié)果(圖12a至12d)推斷，應(yīng)在125mg/kg卡鉑下進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，測(cè)試鈣錳福地吡的骨髓保護(hù)作用，并且在wbc、neu和lym的情況下，應(yīng)在卡鉑施用前一天和3天后進(jìn)行血細(xì)胞樣品分析，而在plc的情況下，應(yīng)在卡鉑施用前一天和6天后進(jìn)行血細(xì)胞樣品分析。在施用卡鉑(125mg/kg)30分鐘前和24小時(shí)后，小鼠接受鹽水或鈣錳福地吡(1、3、10或30mg/kg；lot#11ak0105b)。對(duì)照組接受載劑(鹽水)并用鹽水代替卡鉑。結(jié)果表示為多種治療從基線的相對(duì)變化的曲線(平均值±s.e.m.)。適當(dāng)時(shí)，通過(guò)非配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)檢驗(yàn)治療組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。低于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。結(jié)果結(jié)果在圖13a至13d中給出?？ㄣK(125mg/kg)導(dǎo)致wbc、neu和lym降低約50％。利用3mg/kg劑量之鈣錳福地吡的治療消除了這些降低。在每一種情況下，鈣錳福地吡的劑量-響應(yīng)表現(xiàn)出鐘形外觀，與之前所述錳福地吡在cd小鼠中對(duì)抗阿霉素的心臟保護(hù)作用的方式類似(kurz等，transloncol2012；5：252-259)。至于血小板(plc，圖12d和13d)，與wbc、lym和neu相比，其在對(duì)于卡鉑的敏感性方面不同。結(jié)論鈣錳福地吡對(duì)balb/c小鼠提供對(duì)抗癌藥物卡鉑的骨髓抑制作用的顯著保護(hù)。實(shí)施例10本實(shí)施例比較了在存在和不存在鈣錳福地吡的情況下，在具有結(jié)腸癌(ct26)的能夠免疫的balb/c小鼠和免疫缺陷裸balb/c小鼠(nu/nu)中奧沙利鉑的抗腫瘤活性。方法在具有5％co2的潮濕空氣中于37℃下在75cm2培養(yǎng)瓶中在rpmi1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)ct26細(xì)胞，所述培養(yǎng)基含有10％胎牛血清、2mml-谷氨酰胺、100ul/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到～50％匯合時(shí)，通過(guò)胰蛋白酶消化來(lái)收集細(xì)胞。簡(jiǎn)要地說(shuō)，將細(xì)胞用pbs(ph7.3)洗滌并在37℃下暴露于0.05％胰蛋白酶/0.53mmedta約5分鐘。通過(guò)添加rpmi1640培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化。對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)并在200×g下離心5分鐘。然后，將其在pbs中洗滌、再次離心并以2×106/350μl的濃度重懸在pbs中用于向小鼠注射。如laurent等，2005所述，使用6至8周齡的能夠免疫的balb/c雌性小鼠(balb/c)和不能免疫的裸雌性balb/c小鼠(balb/cnu/nu)。簡(jiǎn)要地說(shuō)，在第0天，對(duì)每只小鼠在后頸部皮下注射2×106的ct26細(xì)胞。7天后(第7天)，當(dāng)腫瘤可檢測(cè)時(shí)，利用卡尺測(cè)定腫瘤尺寸并將小鼠分組(每組5只)，從而使得每一組中腫瘤尺寸在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有差異。對(duì)各組小鼠(每組5只，如圖14所示)i.v.注射鹽水或5mg/kg鈣錳福地吡(lot#11ak0105b)，30分鐘之后i.p.施用10mg/kg奧沙利鉑(在5％葡萄糖中稀釋)或5％葡萄糖。小鼠在24小時(shí)后(第8天)接受額外的鹽水或5mg/kg鈣錳福地吡。在第10天處死小鼠，切下腫瘤并測(cè)定濕重。結(jié)果表示為針對(duì)多個(gè)治療的曲線(平均值±s.e.m.)。當(dāng)適當(dāng)時(shí)，通過(guò)未配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)檢驗(yàn)治療組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。低于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。結(jié)果結(jié)果在圖14中給出。在免疫缺陷balb/c小鼠中比在能夠免疫的balb/cnu/nu小鼠中腫瘤具有生長(zhǎng)得更大的明顯趨勢(shì)，但是這種差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著(p＝0.0870)。利用10mg/kg奧沙利鉑單次治療導(dǎo)致在能夠免疫的和免疫缺陷balb/c小鼠中腫瘤重量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著地降低20％至30％。在能夠免疫的或不能免疫的小鼠中，利用5mg/kg鈣錳福地吡的治療對(duì)于奧沙利鉑的抗腫瘤效果沒(méi)有任何不利影響。與對(duì)照相比，在利用5mg/kg鈣錳福地吡治療的能夠免疫的小鼠中，平均腫瘤重量實(shí)際上統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低。但是，在免疫缺陷小鼠中未看到這樣的降低。結(jié)論在能夠免疫或免疫缺陷的小鼠中，鈣錳福地吡不會(huì)不利地干擾奧沙利鉑的抗腫瘤活性，但是僅在能夠免疫的小鼠中，鈣錳福地吡實(shí)際上提高抗腫瘤效力。實(shí)施例11比較了鈣錳福地吡和錳福地吡對(duì)人非小細(xì)胞肺癌(nsclc)u1810細(xì)胞和小鼠非小細(xì)胞肺癌(llcl)的細(xì)胞毒活性。方法使用mtt測(cè)定測(cè)量細(xì)胞的生存力。簡(jiǎn)要地說(shuō)，將8,000個(gè)人u1810nsclc或llclnsclc細(xì)胞接種在96孔板上的每個(gè)孔中并在具有5％co2的潮濕空氣中于37℃在rpmi(roswellparkmemorialinstitute)1640培養(yǎng)基中過(guò)夜生長(zhǎng)，所述培養(yǎng)基含有10％胎牛血清、2mml-谷氨酰胺、100ul/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。然后將細(xì)胞暴露于1至1,000μm鈣錳福地吡(lot#11ak0105b)或錳福地吡(lot#02090106)48小時(shí)。然后通過(guò)添加5mg/ml噻唑藍(lán)(mtt)至0.5mg/ml終濃度并將細(xì)胞在37℃下再孵育4小時(shí)來(lái)評(píng)估細(xì)胞的生存力。然后通過(guò)添加10％sds和10mmhcl至5％sds和5mmhcl的終濃度來(lái)使通過(guò)存活細(xì)胞的線粒體脫氫酶形成的藍(lán)色甲瓚在37℃下溶解過(guò)夜。最后，利用與applemacintosh計(jì)算機(jī)連接的酶標(biāo)儀spectramax340(moleculardevices，sunnyvale，ca，usa)以670nm為參照在570nm處閱讀溶液的吸光度，所述計(jì)算機(jī)運(yùn)行程序softmaxprov1.2.0(moleculardevices，sunnyvale，ca，usa)。在升高的濃度的鈣錳福地吡或錳福地吡的存在下，u1810或llc1細(xì)胞的生存力表現(xiàn)為濃度響應(yīng)曲線(平均值±s.d.)。將單個(gè)曲線擬合為s形可變斜率響應(yīng)邏輯斯諦方程(logisticequation)(graphpadprism，版本5.02)。由該分析，計(jì)算測(cè)試物質(zhì)的導(dǎo)致50％抑制的濃度(ic50)。結(jié)果鈣錳福地吡和錳福地吡對(duì)nsclcu1810和llc1細(xì)胞的細(xì)胞毒活性在圖15a和15b中示出。計(jì)算出的錳福地吡和鈣錳福地吡的ic50比率(0.0006329/0.00002274)表明鈣錳福地吡在殺傷u1810細(xì)胞方面效力是錳福地吡的約28倍(圖15a)。盡管在殺傷llc1細(xì)胞方面鈣錳福地吡比錳福地吡顯著更強(qiáng)效，但是由于錳福地吡曲線的模糊外觀(圖15b)，計(jì)算錳福地吡和鈣錳福地吡之間的ic50比率是無(wú)意義的。結(jié)論結(jié)果表明了在殺傷非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞u1810和llc1方面，鈣錳福地吡比錳福地吡具有更優(yōu)異的效力。本文給出的實(shí)施例和具體實(shí)施方案在本質(zhì)上僅是說(shuō)明性的，而不應(yīng)被認(rèn)為限制由下面的權(quán)利要求限定的本發(fā)明的范圍。由本公開(kāi)內(nèi)容，本發(fā)明的另外的具體實(shí)施方案和優(yōu)點(diǎn)將是明顯的，并且其也在本發(fā)明要求保護(hù)的范圍內(nèi)。本發(fā)明還涉及以下實(shí)施方案：1.式i化合物或其鹽的混合金屬配合物，其中所述混合金屬包含第iii-xii族過(guò)渡金屬和第ii族金屬：式i其中，x表示ch或n，每一個(gè)r1獨(dú)立地表示氫或-ch2cor5；r5表示羥基，任選地羥基化的烷氧基、氨基或烷基酰氨基；每一個(gè)r2獨(dú)立地表示zyr6，其中z表示鍵或者任選地被r7取代的c1-3亞烷基或氧代亞烷基；y表示鍵、氧原子或nr6；r6是氫原子、coor8、烷基、烯基、環(huán)烷基、芳基或芳烷基，任選地被選自coor8、conr82、nr82、or8、＝nr8、＝o、op(o)(or8)r7和oso3m的一個(gè)或更多個(gè)基團(tuán)取代；r7是羥基，任選地羥基化、任選地烷氧基化的烷基或氨基烷基；r8是氫原子或任選地羥基化、任選地烷氧基化的烷基；m是氫原子或一當(dāng)量的生理可耐受陽(yáng)離子；r3表示任選地被r7取代的c1-8亞烷基、1，2-亞環(huán)烷基或1，2-亞芳基；并且每一個(gè)r4獨(dú)立地表示氫或c1-3烷基。2.根據(jù)實(shí)施方案1的混合金屬配合物，其中r5是羥基、c1-8烷氧基、乙二醇、甘油、氨基或c1-8烷基酰氨基；z是鍵或選自ch2、(ch2)2、co、ch2co、ch2ch2co和ch2coch2的基團(tuán)；y是鍵；r6是單或多(羥基或烷氧基化的)烷基或者具有式op(o)(or8)r7；并且r7是羥基，或者未經(jīng)取代的烷基或氨基烷基。3.根據(jù)實(shí)施方案1或2的混合金屬錳配合物，其中r3是亞乙基，并且每一個(gè)基團(tuán)r1表示-ch2cor5，其中r5是羥基。4.根據(jù)實(shí)施方案1的混合金屬配合物，其中所述式i化合物是n，n′-雙-(吡哆醛-5-磷酸)-乙二胺-n，n′-二乙酸(dpdp)或n，n′-二吡哆基乙二胺-n，n′-二乙酸(pled)，或其可藥用鹽。5.根據(jù)實(shí)施方案1至4中任一項(xiàng)的混合金屬配合物，其中所述第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn2+、cu2+、fe2+和/或ni2+，并且所述第ii族金屬是ca2+和/或mg2+。6.根據(jù)實(shí)施方案1至5中任一項(xiàng)的混合金屬配合物，其中所述第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn2+，并且所述第ii族金屬是ca2+或ca2+與mg2+的混合物。7.根據(jù)實(shí)施方案6的混合金屬配合物，其中所述第ii族金屬是ca2+與mg2+的混合物，ca2+/mg2+摩爾比為約0.1至50。8.根據(jù)實(shí)施方案1至7中任一項(xiàng)的混合金屬配合物，其中第ii族金屬與第iii-xii族過(guò)渡金屬的摩爾比為約1至10。9.根據(jù)實(shí)施方案1至5中任一項(xiàng)的混合金屬配合物，其中所述第iii-xii族過(guò)渡金屬是mn2+，所述第ii族金屬是ca2+，并且ca2+/mn2+摩爾比為約4。10.根據(jù)實(shí)施方案1至9中任一項(xiàng)的混合金屬配合物，其中所述配合物是凍干的。11.一種藥物組合物，其包含根據(jù)實(shí)施方案1至9中任一項(xiàng)的混合金屬配合物以及一種或更多種生理上可接受的載體和/或賦形劑。12.一種生產(chǎn)根據(jù)實(shí)施方案1至9中任一項(xiàng)的混合金屬配合物的方法，其包括從第iii-xii族過(guò)渡金屬、第ii族金屬和式i化合物或其鹽之溶液進(jìn)行一步式結(jié)晶。13.根據(jù)實(shí)施方案12的方法，其中通過(guò)從鈣、錳和式i化合物或其鹽的溶液進(jìn)行一步式結(jié)晶來(lái)生產(chǎn)鈣錳配合物。14.一種治療患者中病理學(xué)狀態(tài)的方法，其包括向所述患者施用根據(jù)實(shí)施方案1至10中任一項(xiàng)的混合金屬配合物，任選地與一種或更多種生理上可接受的載體和/或賦形劑一起。15.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是由氧衍生自由基的存在導(dǎo)致的。16.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是由超氧化物導(dǎo)致的，所述超氧化物導(dǎo)致隨后的脂質(zhì)過(guò)氧化和/或蛋白質(zhì)硝化。17.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是細(xì)胞毒或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物損傷。18.根據(jù)實(shí)施方案17的方法，其中所述細(xì)胞毒或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物是癌癥治療藥物。19.根據(jù)實(shí)施方案17的方法，其中所述細(xì)胞毒或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制藥物包含阿霉素、表柔比星、奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、5-氟尿嘧啶、多西他賽或紫杉醇中的至少一種。20.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是骨髓抑制或神經(jīng)毒性，或者骨髓抑制和神經(jīng)毒性二者。21.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是局部缺血-再灌注誘發(fā)的損傷。22.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)與動(dòng)脈粥樣硬化和/或糖尿病有關(guān)。23.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)與溶解血栓治療、心肺分流術(shù)或經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)有關(guān)，或者為心臟或器官移植手術(shù)或中風(fēng)的結(jié)果。24.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是對(duì)乙酰氨基酚誘發(fā)的急性肝功能衰竭。25.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是鐵或銅的病理學(xué)狀態(tài)。26.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是地中海貧血、鐮狀細(xì)胞性貧血、輸血性含鐵血黃素沉著或威爾遜氏病。27.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是肝炎誘發(fā)的肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎(nash)或病毒誘發(fā)的慢性肝炎。28.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是輻射誘發(fā)的損傷。29.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是低錳超氧化物歧化酶(mnsod)活性。30.根據(jù)實(shí)施方案14的方法，其中所述病理學(xué)狀態(tài)是非小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌或惡性黑色素瘤。31.根據(jù)實(shí)施方案14至31中任一項(xiàng)的方法，其包括施用約0.01至50μmol/kg體重的所述混合金屬配合物。當(dāng)前第1頁(yè)12