本發(fā)明涉及強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉優(yōu)異親本檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

雜種優(yōu)勢(shì)是自然界普遍存在的一種現(xiàn)象。自shull首次提出“雜種優(yōu)勢(shì)”的概念以來(lái)，各國(guó)科學(xué)家先后對(duì)作物雜種優(yōu)勢(shì)進(jìn)行了研究和探討。現(xiàn)在，雜種優(yōu)勢(shì)已在許多作物上得到了廣泛利用，雜種優(yōu)勢(shì)利用是作物遺傳育種中大幅度提高產(chǎn)量的核心技術(shù)之一。

棉花是一種意義重大的經(jīng)濟(jì)作物。實(shí)踐證明，持續(xù)創(chuàng)制并推廣強(qiáng)優(yōu)勢(shì)棉花雜交種是大幅度提高棉花產(chǎn)量、改善纖維品質(zhì)和增強(qiáng)棉花品種適應(yīng)性的主要途徑之一。強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉新品種育成的關(guān)鍵是培育出配合力高、綜合性狀好的優(yōu)異親本。但是，近年來(lái)由于育種技術(shù)和方法創(chuàng)新不足等原因，優(yōu)異親本培育和改良越來(lái)越難，導(dǎo)致雜種優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)強(qiáng)的品種越來(lái)越少。研究發(fā)現(xiàn)，優(yōu)異親本具有優(yōu)良的遺傳背景，能夠通過(guò)雜交和回交等技術(shù)進(jìn)行持續(xù)改良，可以衍生出一系列的新優(yōu)異親本，進(jìn)而高效率的培育出一系列強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉品種。但是在改良過(guò)程中，由于目前只能利用繁瑣的田間性狀觀察鑒定，選擇優(yōu)異親本的遺傳背景的效率低、育種年限長(zhǎng)、費(fèi)時(shí)費(fèi)工，而且性狀受環(huán)境影響較大，容易造成判斷錯(cuò)誤，從而導(dǎo)致培育失敗。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記，該標(biāo)記通過(guò)高通量測(cè)序分析得到，為穩(wěn)定有效地鑒別棉花優(yōu)異親本提供基礎(chǔ)。

本發(fā)明的第二目的在于提供用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的引物對(duì)，該引物對(duì)通過(guò)高通量測(cè)序分析、設(shè)計(jì)后篩選得到，特異性強(qiáng)，能穩(wěn)定有效地鑒別棉花優(yōu)異親本。

本發(fā)明的第三目的在于提供用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的試劑盒，該試劑盒為棉花優(yōu)異親本的鑒定提供便利。

本發(fā)明的第四目的在于提供用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的檢測(cè)方法，該方法通過(guò)分子水平進(jìn)行鑒定，方法簡(jiǎn)便快捷，鑒定結(jié)果穩(wěn)定可靠。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記，所述snp標(biāo)記為以下中的任一種或多種：a06染色體上的1824659bp位置的gg、a12染色體上的81174157bp位置的aa、d03染色體上的35924124bp位置的tt、d05染色體上的30704984bp位置的tt、d11染色體上的4947923bp位置的cc。

本發(fā)明提供的用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記，通過(guò)高通量測(cè)序分析得到，為穩(wěn)定有效地輔助鑒別棉花優(yōu)異親本提供基礎(chǔ)。

需要說(shuō)明的是，snp指單堿基突變，指一個(gè)位點(diǎn)，而本發(fā)明中的gg、aa、tt、cc均表示兩條同源染色體的某一位點(diǎn)，表示該位點(diǎn)是純合位點(diǎn)；即本發(fā)明中的這五個(gè)位點(diǎn)均為純合位點(diǎn)。

本發(fā)明還提供了用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的引物對(duì)，包括以下引物對(duì)中的任一種或多種；

gh_a06g0169_snp引物對(duì)的上下游核酸序列如seqidno.1和seqidno.2所示，gh_a12g1857_snp引物對(duì)的上下游核酸序列如seqidno.3和seqidno.4所示，gh_d03g1074_snp引物對(duì)的上下游核酸序列如seqidno.5和seqidno.6所示，gh_d05g2790_snp引物對(duì)的上下游核酸序列如seqidno.7和seqidno.8所示，gh_d11g0580_snp引物對(duì)的上下游核酸序列如seqidno.9和seqidno.10所示。

本發(fā)明通過(guò)分析強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉中棉所63等優(yōu)異親本選育系譜中已經(jīng)衍生的多個(gè)優(yōu)異親本材料基因組重測(cè)序數(shù)據(jù)，開(kāi)發(fā)了用于輔助選擇中棉所63等優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記，可以大幅度提高遺傳背景的選擇效率和準(zhǔn)確性，顯著縮短優(yōu)異親本的培育年限。

本發(fā)明提供的用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的引物對(duì)，可以為上述引物對(duì)中的任意一種，也可以為任意兩種、任意三種、任意四種，或者為全部，當(dāng)然，鑒定的時(shí)候采用的引物越多，則鑒定結(jié)果越為確切。

進(jìn)一步地，所述棉花優(yōu)異親本包括鄂抗棉9號(hào)、中309、9053、中9018、1638。

本發(fā)明還提供了用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的試劑盒，含有上述的引物對(duì)。即該試劑盒中，可以含有上述引物對(duì)中的任意一種，也可以為任意兩種、任意三種、任意四種，或者為全部。

該試劑盒為用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的進(jìn)行提供便利。

本發(fā)明還提供了用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的檢測(cè)方法，采用上述的引物對(duì)，對(duì)待檢測(cè)棉花的基因組進(jìn)行分子水平的檢測(cè)。

該處的上述的引物對(duì)為上述引物對(duì)中的任一種或幾種。

進(jìn)一步地，所述分子水平的檢測(cè)為：先將待檢測(cè)品種的基因組進(jìn)行pcr擴(kuò)增，然后進(jìn)行hrm檢測(cè)。

進(jìn)一步地，所述pcr擴(kuò)增所用的退火溫度為59±1℃。該退火溫度，擴(kuò)增得到的產(chǎn)物特異性強(qiáng)，雜帶少。pcr擴(kuò)增程序采用常規(guī)的程序即可。

如pcr擴(kuò)增程序?yàn)椋?4-95℃預(yù)變性3-5分鐘；94℃變性30秒；60℃退火30秒；72℃延伸30秒；35-45個(gè)循環(huán)；72℃延伸5-10分鐘；產(chǎn)物4℃保存。

進(jìn)一步地，所述pcr擴(kuò)增所用的pcr反應(yīng)體系為10-25μl，優(yōu)選為20μl。如本發(fā)明pcr擴(kuò)增所用的pcr反應(yīng)體系可以為10μl、15μl、20μl、25μl等等。

如pcr反應(yīng)體系為20μl，具體成分如下：

10μlmastermix，5μl10μg/mldna，上下游引物各0.5μl，1.6-2.4μlmgcl2，加pcr-gradeh2o，補(bǔ)足到20μl。

其他反應(yīng)體系的體積，各成分進(jìn)行相應(yīng)的擴(kuò)大或縮小或按照常規(guī)的體系添加即可。

進(jìn)一步地，所述pcr反應(yīng)體系中的模板dna的含量不小于5ng,優(yōu)選為5-30ng。如本發(fā)明pcr反應(yīng)體系中的模板dna的含量可以為5ng、10ng、20ng、25ng、30ng等等。

進(jìn)一步地，所述pcr擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)為30-45，優(yōu)選為35-45。如本發(fā)明pcr擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)可以為30、35、38、40、42、45等等。

通過(guò)一定的pcr擴(kuò)增放大樣品dna，便于后續(xù)的高分辨率熔解試驗(yàn)。

進(jìn)一步地，待檢測(cè)棉花的基因組所用的提取材料為待檢測(cè)棉花的種仁。是將該棉花材料的種子去殼得到。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

(1)本發(fā)明提供的用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記，通過(guò)高通量測(cè)序分析得到，為穩(wěn)定有效地鑒別棉花優(yōu)異親本提供基礎(chǔ)。

(2)本發(fā)明提供的用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的引物對(duì)，通過(guò)高通量測(cè)序分析、設(shè)計(jì)后篩選得到，特異性強(qiáng)，能穩(wěn)定有效地鑒別棉花優(yōu)異親本。

(3)本發(fā)明提供的用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的試劑盒，為棉花優(yōu)異親本的鑒定提供便利。

(4)本發(fā)明提供的用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記的檢測(cè)方法，該方法通過(guò)分子水平進(jìn)行鑒定，方法簡(jiǎn)便快捷，鑒定結(jié)果穩(wěn)定可靠，大幅度提高遺傳背景的選擇效率和準(zhǔn)確性，顯著縮短優(yōu)異親本的培育年限。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中提供的優(yōu)異親本的選育系譜圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中提供的5個(gè)優(yōu)異親本測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)散點(diǎn)圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中提供的5個(gè)優(yōu)異親本測(cè)序得到的有效數(shù)據(jù)散點(diǎn)圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例2中提供的5個(gè)優(yōu)異親本測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)到參考基因組上的比率散點(diǎn)圖；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例2中提供的5個(gè)優(yōu)異親本測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)到參考基因組上的覆蓋深度散點(diǎn)圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例2中提供的5個(gè)優(yōu)異親本中檢測(cè)出的snp位點(diǎn)比例餅形圖；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例3中提供的5個(gè)優(yōu)異親本與tm-1以gh_a06g0169_snp引物對(duì)進(jìn)行的hrm曲線圖；

圖8為本發(fā)明實(shí)施例3中提供的5個(gè)優(yōu)異親本與tm-1以gh_a12g1857_snp引物對(duì)進(jìn)行的hrm曲線圖；

圖9為本發(fā)明實(shí)施例3中提供的5個(gè)優(yōu)異親本與tm-1以gh_d03g1074_snp引物對(duì)進(jìn)行的hrm曲線圖；

圖10為本發(fā)明實(shí)施例3中提供的5個(gè)優(yōu)異親本與tm-1以gh_d05g2790_snp引物對(duì)進(jìn)行的hrm曲線圖；

圖11為本發(fā)明實(shí)施例3中提供的5個(gè)優(yōu)異親本與tm-1以gh_d11g0580_snp引物對(duì)進(jìn)行的hrm曲線圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

實(shí)施例1

中棉所63等系列強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉品種的選育系譜

鄂抗棉9號(hào)(原代號(hào)：荊55173)，來(lái)源于【鄂荊1號(hào)×(中7263+mo-3)】，于1999和2001年先后通過(guò)湖北和湖南兩省審定，2001年通過(guò)國(guó)家審定(長(zhǎng)江流域棉區(qū))，在長(zhǎng)江流域棉區(qū)表現(xiàn)高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)(結(jié)鈴性強(qiáng)且均勻、衣分高)、優(yōu)質(zhì)、多抗(抗枯萎病、耐黃萎病、抗棉蚜等)。以鄂抗棉9號(hào)為基礎(chǔ)育種材料，利用系統(tǒng)選育或雜交育種等方法，建立了優(yōu)異親本選育系譜，持續(xù)創(chuàng)制了中309、9053、中9018和1638等一系列優(yōu)異親本，對(duì)鈴重、鈴數(shù)、衣分和子指等產(chǎn)量相關(guān)性狀分別進(jìn)行了不同程度的改良，并且繼承了鄂抗棉9號(hào)的遺傳背景。進(jìn)一步通過(guò)配置雜交組合，這些優(yōu)異親本分別作為母本，培育出中棉所62、中棉所63、中棉所65、中棉所66和中棉所71等系列強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉品種，已經(jīng)分別通過(guò)國(guó)家或省級(jí)審定。具體的選育系譜如圖1所示。

實(shí)施例2

中棉所63等系列強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉品種遺傳背景評(píng)價(jià)

1、優(yōu)異親本的基因組重測(cè)序

篩選出鄂抗棉9號(hào)、中309、9053、中9018和1638等同一系譜來(lái)源的5個(gè)優(yōu)異親本，在光照培養(yǎng)箱中種植棉花材料，取棉苗幼嫩葉片，提取基因組dna，利用covaris超聲波dna破碎儀隨機(jī)打斷成350bp片段，采用truseqlibraryconstructionkit試劑盒構(gòu)建測(cè)序dna文庫(kù)，通過(guò)illuminahiseq4000測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行雙末端各150bp的測(cè)序。9053(中棉所63母本)計(jì)劃產(chǎn)出150g數(shù)據(jù)(測(cè)序覆蓋基因組深度為60×)，其它材料各自計(jì)劃產(chǎn)出75g數(shù)據(jù)(測(cè)序覆蓋基因組深度為30×)。最終，9053(中棉所63母本)獲得180.25g原始數(shù)據(jù)(rawdata)，如圖2所示；去除帶接頭和低質(zhì)量的數(shù)據(jù)后，得到179.58g的有效數(shù)據(jù)(cleandata)；其它材料獲得75.11～94.25g原始數(shù)據(jù)，如圖2所示；去除帶接頭和低質(zhì)量的數(shù)據(jù)后，得到74.93～93.92g的有效數(shù)據(jù)，具體結(jié)果如圖3所示。

以已經(jīng)發(fā)布的陸地棉遺傳標(biāo)準(zhǔn)系(tm-1)的基因組序列為參考基因組，利用bwa軟件將測(cè)序獲得數(shù)據(jù)(cleandata)比對(duì)到參考基因組上，結(jié)果表明5個(gè)材料測(cè)序獲得數(shù)據(jù)比對(duì)到基因組上的比率均超過(guò)99％(圖4)，9053(中棉所63母本)基因組覆蓋深度達(dá)到59.9倍，其它材料最低也達(dá)到30倍以上(圖5)，說(shuō)明基因組重測(cè)序數(shù)據(jù)已經(jīng)基本上覆蓋材料的全基因組，而且覆蓋倍數(shù)比較高，能夠進(jìn)行全基因組遺傳背景的評(píng)價(jià)。

2、優(yōu)異親本的遺傳背景評(píng)價(jià)

以tm-1為參考基因組，利用samtools軟件在5個(gè)優(yōu)異親本中共檢測(cè)出1,395,011個(gè)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphic,snp)位點(diǎn)。其中，816,096個(gè)在5個(gè)優(yōu)異親本中具有多態(tài)性，578,915個(gè)在5個(gè)優(yōu)異親本之間不具有多態(tài)性，占總檢測(cè)snp位點(diǎn)數(shù)的大約41％(圖6)，說(shuō)明5個(gè)優(yōu)異親本具有相似的遺傳背景。

實(shí)施例3

基于hrm技術(shù)開(kāi)發(fā)應(yīng)用于優(yōu)異親本遺傳背景選擇的snp標(biāo)記

高分辨率熔解曲線(highresolutionmelting,hrm)技術(shù)是近幾年興起的檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性的工具。它通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中雙鏈dna熒光染料與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,pcr)產(chǎn)物結(jié)合的情況，來(lái)判斷是否存在snp。熒光染料不與單鏈dna起反應(yīng)，但是可與雙鏈dna結(jié)合發(fā)生熒光。在pcr過(guò)程中，隨著雙鏈dna濃度的升高，熒光不斷增強(qiáng)，而在高分辨率熔解過(guò)程中隨著溫度升高，dna從雙鏈解旋為單鏈，熒光染料不斷被釋放從而熒光強(qiáng)度減弱。由于熔解過(guò)程中不同堿基穩(wěn)定性不同，故解鏈的速度不同，所以根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化可有效的區(qū)分不同的snp位點(diǎn)。

1、dna提取

取鄂抗棉9號(hào)、中309、9053、中9018和1638等5個(gè)優(yōu)異親本以及tm-1的種子，采用sds法(匡猛等,2010)提取基因組dna，具體提取步驟如下所述：

(1)剝?nèi)ッ薹N種皮外殼，并盡量保證種仁的完整性。

(2)置于放入鋼珠的2ml離心管中，在組織研磨儀上粉碎。

(3)加入800μlsds提取液(組成成分:1％sds,0.01mol/ledta,0.705mol/lnacl,0.05mol/ltris,0.5％山梨醇,1％pvp,1％β-巰基乙醇)，漩渦充分后，65℃水浴30min，間隔10min左右輕搖一次。

(4)加入等體積800μl酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，混勻至不分層，12000r/min離心10min。

(5)取上清，加入1μlrnasea(10mg/ml)，37℃水浴30min。

(6)重復(fù)抽提一次后離心取上清，加入0.7倍體積異丙醇，緩慢混勻至dna成團(tuán)析出，室溫靜置30min。

(7)70％乙醇洗滌dna沉淀2次，無(wú)水乙醇洗滌1次。

(8)倒置晾干，加入200μlddh2o充分溶解dna，備用。

2、hrm引物的設(shè)計(jì)

根據(jù)測(cè)序分析的結(jié)果，隨機(jī)挑選出20個(gè)測(cè)序深度較高，而且在基因上的snp位點(diǎn)(表1)，利用primer3.0軟件設(shè)計(jì)引物(表2)。

表1挑選的20個(gè)snp位點(diǎn)的信息

表2設(shè)計(jì)的引物

3、多態(tài)性驗(yàn)證

hrm試驗(yàn)采用light480highresolutionmeltingmaster試劑盒，首先在存在light480高分辨率熔解染料的情況下通過(guò)實(shí)時(shí)pcr放大樣品dna。dna擴(kuò)增后，立即進(jìn)行高分辨率熔解試驗(yàn)，最后用light480基因掃描軟件進(jìn)行分析以確定序列變異。所有的試驗(yàn)均在light480分析儀上進(jìn)行，采用20μlpcr反應(yīng)體系：10μlmastermix，5μl10μg/mldna，上下游引物各0.5μl，1.6-2.4μlmgcl2，加pcr-gradeh2o補(bǔ)足到20μl。pcr過(guò)程中退火溫度設(shè)置在60℃，其它參數(shù)設(shè)置采用hrm默認(rèn)參數(shù)。

具體結(jié)果如圖7-圖11所示。

本發(fā)明根據(jù)經(jīng)驗(yàn)隨機(jī)選取了20個(gè)測(cè)序深度較高，且在這些基因上的snp位點(diǎn)設(shè)計(jì)了引物，進(jìn)一步以鄂抗棉9號(hào)、中309、9053、中9018和1638等5個(gè)優(yōu)異親本以及tm-1作為材料，通過(guò)hrm技術(shù)檢測(cè)這20個(gè)snp位點(diǎn)鑒定棉花優(yōu)異親本遺傳背景的效率，結(jié)果表明5個(gè)引物能夠準(zhǔn)確區(qū)分優(yōu)異親本和tm-1，而且優(yōu)異親本聚為一類，所以這5個(gè)引物可以用于輔助選擇優(yōu)異親本的遺傳背景。

實(shí)施例4

分別對(duì)待檢測(cè)鄂抗棉9號(hào)、中309、9053、中9018和1638的雜交后代各50個(gè)棉株的棉花籽，采用實(shí)施例3中的dna提取方法提取待測(cè)樣本的基因組。

分別采用gh_a06g0169_snp引物對(duì)、gh_a12g1857_snp引物對(duì)、gh_d03g1074_snp引物對(duì)、gh_d05g2790_snp引物對(duì)、gh_d11g0580_snp引物對(duì)與實(shí)施例3相同的方式進(jìn)行hrm檢測(cè)，得到的結(jié)果如下：

鄂抗棉9號(hào)的雜交后代：20個(gè)與tm-1無(wú)明顯差別，30個(gè)為優(yōu)異親本；

中309的雜交后代：20個(gè)與tm-1無(wú)明顯差別，30個(gè)為優(yōu)異親本；

9053的雜交后代：19個(gè)與tm-1無(wú)明顯差別，31個(gè)為優(yōu)異親本；

中9018的雜交后代：25個(gè)與tm-1無(wú)明顯差別，25個(gè)為優(yōu)異親本；

1638的雜交后代：28個(gè)與tm-1無(wú)明顯差別，22個(gè)為優(yōu)異親本。

每個(gè)材料的雜交后代各隨機(jī)選擇5個(gè)非優(yōu)異親本和5個(gè)優(yōu)異親本進(jìn)行田間性狀觀察鑒定，結(jié)果與上述檢測(cè)的結(jié)果相符。

本發(fā)明提供的鑒定棉花優(yōu)異親本的引物對(duì)，通過(guò)hrm檢測(cè)，如果結(jié)果與優(yōu)異親本聚為一類，則待測(cè)樣品具有強(qiáng)優(yōu)勢(shì)雜交棉優(yōu)異親本的遺傳背景，可以繼續(xù)培育，這種方法大幅度提高遺傳背景的選擇效率和準(zhǔn)確性，顯著縮短優(yōu)異親本的培育年限。

盡管已用具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識(shí)到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。

<110>中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所

<120>用于輔助選擇棉花優(yōu)異親本遺傳背景的snp標(biāo)記及其檢測(cè)方法

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