本發(fā)明涉及植物固氮
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，涉及固氮菌種資源，更具體地，涉及一株植物固氮細(xì)菌djg211及其在提高土壤和植物活力中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：土壤污染可大致歸納為有機污染物和無機污染物兩大類。無機物污染主要為鹽類、酸、堿、重金屬、放射性元素化合物等；有機物污染主要包含合成洗滌劑、有機農(nóng)藥、氰化物、酚類、城市污水、石油、污泥及廄肥帶來的有害物等。當(dāng)土壤中積累有害物質(zhì)較多，超過土壤的自身凈能力，就會導(dǎo)致土壤的結(jié)構(gòu)、組成和功能發(fā)生變化，有益微生物活動被抑制，有害物質(zhì)或其分解產(chǎn)物在土壤中逐漸累積。經(jīng)過“土壤→植物→人體”，或經(jīng)過“土壤→水→人體”間接進(jìn)入人體吸收，造成人體健康危害?，F(xiàn)在農(nóng)民普遍感覺土壤板結(jié)，莊稼比過去難種了。居民普遍感覺水果不如昔日香、瓜不不如過去甜、菜無味道，蔬菜雖然數(shù)量增多了，但比小時候的味道差多了。事實上，由于我們過去片面追求增加糧食產(chǎn)量，使得土壤及其生產(chǎn)環(huán)境受到了嚴(yán)重的破壞。中國化肥的使用量全球第一，過量的化肥使用導(dǎo)致農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的生態(tài)要素品質(zhì)下降，這就是癥結(jié)所在。我國農(nóng)藥施用量達(dá)130萬噸，是世界平均水平的2.5倍。在中國，農(nóng)藥和化肥的實際利用率不到30%，其余70%以上都污染環(huán)境了。污染物的施用增加，導(dǎo)致土壤中的有益菌大量減少，土壤質(zhì)量下降，土壤自凈能力減弱，從而影響農(nóng)作物的產(chǎn)量與品質(zhì)，危害人類的身體健康，甚至出現(xiàn)環(huán)境報復(fù)風(fēng)險。固氮植物細(xì)菌可以內(nèi)生于作物組織體內(nèi)，也存在于自然環(huán)境中，具有較快的繁殖速度和代謝過程。該屬細(xì)菌為我們分離和描述的一個新屬，與腸桿菌屬的細(xì)菌親緣關(guān)系較近。它來源于普通野生稻組織中，能水解淀粉，分解蛋白質(zhì)、降解纖微素等。它們也存在于土壤、水、植物根際及其組織內(nèi)，與自然界的物質(zhì)循環(huán)轉(zhuǎn)化、土壤肥力轉(zhuǎn)換、環(huán)境物質(zhì)代謝均密切相關(guān)。同時它們對有機質(zhì)的分解力強，增殖的同時，會釋出活性的分解物質(zhì)，促進(jìn)作物生長。隨著土壤中固氮植物細(xì)菌數(shù)量的增多，他能夠為土壤提供各種酶類、清除土壤的污染物等有害物質(zhì)和增加土壤微生物多樣性。利用特定能夠降解土壤中污染物的固氮植物細(xì)菌，配制成生物肥料，應(yīng)用于土壤恢復(fù)，促進(jìn)作物生長、提供植物活力方面具有重要的意義。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一株植物固氮細(xì)菌djg211。本發(fā)明的另一個目的是提供一株植物固氮細(xì)菌djg211在提高土壤和植物活力中的應(yīng)用。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)的：一株植物固氮細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211，所述菌株于2017年6月5日保藏在廣東省微生物菌種保藏中心（gdmcc），保藏編號為gdmccno：60195。廣東省微生物菌種保藏中心的保藏地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓。固氮植物細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）能夠產(chǎn)生淀粉酶、過氧化氫酶、色氨酸脫氨酶、賴氨酸脫羧酶等，因而能水解淀粉、蛋白質(zhì)和纖微素等，從而清潔土壤、增加土壤中微生物多樣性和提高土壤活力。該固氮植物細(xì)菌同時能內(nèi)生于植物組織內(nèi)，產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，具有生物固氮功能，能夠清潔土壤中的污染物和抑制土壤中致病菌的生長繁殖，提高植物活力，延緩作物衰老。使用固氮植物細(xì)菌制品能夠提高土壤活力和土壤微生物的多樣性，從而改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，有效提高農(nóng)作物的產(chǎn)量。本發(fā)明提供了一株來源于健康普通野生稻（oryzarufipogon）植物組織內(nèi)生的固氮植物細(xì)菌，在nfb和pda培養(yǎng)基上生長勢好，能夠利用空氣中氮氣進(jìn)行固氮生長。能在植物根際和植物組織內(nèi)生存，提高植物對病原菌和植物活力，延緩作物衰老。16srrna基因序列分析該菌株djg211與固氮植物細(xì)菌的模式菌株ls8t同源性為99.6%。所述的固氮植物細(xì)菌能夠降解土壤中的纖維素和腐敗物質(zhì)，清潔土壤和提高土壤活力，顯著地促進(jìn)水稻、油麥菜等作物的生長和提高產(chǎn)量，可應(yīng)用于各種農(nóng)作物種植應(yīng)用。在經(jīng)本發(fā)明的固氮植物菌處理后，顯著促進(jìn)水稻、油麥菜等作物的生長和延緩作物衰老。本發(fā)明所述的植物固氮細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211具有如下形態(tài)和生理、生化特性：a、菌體形態(tài)特性：固氮植物細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，長桿狀，兼性厭氧；菌落呈乳白色，不透明，邊緣圓整，表面光滑，細(xì)胞大?。ㄩL×寬）0.9～1.2×0.6～0.9mm。b、菌落形態(tài)特性：菌落在nfb培養(yǎng)基平板上生長速度較快，菌落圓形，不透明。30℃，生長24小時，菌落直徑1-3毫米。生長溫度范圍5℃～40℃及ph生長范圍為4.0～10.0，可以生長的最佳ph值生長范圍5.0～7.0，高于5%的nacl抑制生長。c、生理生化特性：革蘭氏陰性，菌株在改良pda液體培養(yǎng)基上生長產(chǎn)酸。淀粉水解、脲酶、甲基紅試驗、vp(vogesproskauer)試驗、吲哚試驗、酪蛋白水解、過氧化氫酶均為陽性、硝酸還原酶、明膠液化陰性。能以d-甘露醇、乳果糖、麥芽糖、甘露糖胺、杏苷、熊果苷、α-環(huán)式糊精、d-蜜二糖、n-已?；?d-葡萄糖胺、n-已?；?β-d-甘露糖胺、d-甘露醇、水苷楊、β-環(huán)式糊精、i-赤藻糖醇、l-海藻糖、d-半乳糖、d-半乳糖醛酸、α-d-葡萄糖、葡萄糖-1-磷酸鹽、葡萄糖-6-磷酸鹽、l-乳酸、醋乳酸、d，l-α-丙三醇磷酸鹽、β-甲基-d-葡萄糖、m-酒石酸、l-尿刊酸、α-甲基-d-葡萄糖苷、m-纖維醇、麥芽三糖、3-甲基-d-葡萄糖、β-甲基-d-葡萄糖苷、6-o-d-吡喃葡萄糖酰-d-呋喃果糖、d-蜜三糖、d-山梨醇、水蘇四糖、蔗糖、α-羥基丁酸、β-羥基丁酸、α-酮戊二酸、l-蘋果酸、甲脂丙酮酸、d-葡糖二酸、琥珀酰胺酸、α-琥珀酸、琥珀酸甲脂、l-苯基丙氨酸、l-絲氨酸、l-天冬酰胺酸、甘氨酰-l-谷氨酸、l-蘇氨酸、胸苷、尿苷、胸苷-5￠-一磷酸鹽、尿苷-5￠-一磷酸鹽為碳源的培養(yǎng)基上生長。不能夠利用甘油、d-甘露糖、龍膽二糖、丙酮腈酸、α-甲基-d-半乳糖苷、丙胺酸胺、l-丙氨基-組氨酸、l-谷氨酸鹽、甘甘氨酰脯氨酸、氨酰-l-胺、l-甲硫氨酸為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長。ph生長范圍ph4.0～ph10.0；對nacl有輕度耐受性，在低于5.0%nacl濃度下可生長。所述djg211菌株的16srdna序列如seqidno：1所示。本發(fā)明要求保護(hù)所述的植物固氮細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211在降解對硫磷中的應(yīng)用。本發(fā)明要求保護(hù)所述的植物固氮細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211在將乙炔還原為乙烯，將空氣中的氮氣轉(zhuǎn)化為氨，供植物利用中的應(yīng)用。本發(fā)明要求保護(hù)所述的植物固氮細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211在促進(jìn)水稻或/和油麥菜生長中的應(yīng)用。一種促進(jìn)水稻或油麥菜生長的方法，將本發(fā)明所述的植物固氮細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211制備成液體或固體菌肥，將液體或固體菌肥施用于水稻或油麥菜。一種促進(jìn)水稻或油麥菜生長的菌劑，其制備方法為，將本發(fā)明所述的植物固氮細(xì)菌djg211采用液體培養(yǎng)基于28℃培養(yǎng)48小時，得到菌數(shù)達(dá)4′109cfu.ml-1的發(fā)酵液，用蛭石作載體，將發(fā)酵液與蛭石按2：1的質(zhì)量比混合，制備成菌數(shù)達(dá)1.1～2.8′109cfu.g-1的菌劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明為一株能夠降解土壤污染物、清潔土壤、提高土壤微生物多樣性，從而活化土壤和內(nèi)生作物組織內(nèi)促進(jìn)作物生長功能的固氮植物細(xì)菌。它來源于健康的普通野生稻植物組織中，能夠明顯促進(jìn)水稻、油麥菜等作物生長。附圖說明圖1為固氮植物細(xì)菌djg211菌株對20mg/l對硫磷的降解率。圖2為接種固氮植物細(xì)菌djg211菌株對含對硫磷土壤好氧細(xì)菌影響，接種量0.2g/kg土壤。圖3為接種固氮植物細(xì)菌djg211菌株對含對硫磷土壤放線菌影響，接種量0.2g/kg土壤。圖4為固氮植物細(xì)菌促進(jìn)油麥菜生長。具體實施方式下面結(jié)合說明書附圖和具體實施例對本發(fā)明作出進(jìn)一步地詳細(xì)闡述，所述實施例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。下述實施例中所使用的試驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，為可從商業(yè)途徑得到的試劑和材料。實施例1本發(fā)明菌株的分離純化方法如下：將采集的新鮮普通野生稻根樣本用蒸餾水沖洗凈，然后剪下根部樣品置于已滅菌的培養(yǎng)皿中，用3%的雙氧水(h2o2)處理4分鐘（以除去根表面的腐爛物質(zhì)），無菌水洗滌一次，再用0.1%的升汞(hgcl2)處理5分鐘，無菌水中振動洗滌5～7次，每次5～10分鐘，并將最后一次洗滌液涂布于無氮或少氮的nfb和pda固體培養(yǎng)基上，以檢測消毒是否徹底。將表面消毒完全的普通野生稻根樣品用已滅菌手術(shù)刀切碎，制成10-3，10-4，10-5菌懸液分別涂布到nfb、pda固體培養(yǎng)基表面，在30℃的人工培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，整個操作過程均在無菌條件下完成。待長出菌落后，挑取單菌落再涂布平板，直至菌落的顏色、形狀、透明度、質(zhì)地一致。最后通過簡單鏡檢和染色，進(jìn)一步觀察其形態(tài)，以寬度一致、長度均一、染色情況均一為菌株純化標(biāo)準(zhǔn)。保存：將分離純化后的菌株在nfb培養(yǎng)基平板及斜面上培養(yǎng)2～3d后，收集平板上的菌體。部分保存于15%滅菌甘油(-20℃日常保存)和(-80℃長期保存)。本發(fā)明的固氮植物細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）djg211具有如下形態(tài)和生理、生化特性：a、菌體形態(tài)特性：固氮植物細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，長桿狀，兼性厭氧；菌落呈乳白色，不透明，邊緣圓整，表面光滑，細(xì)胞大?。ㄩL×寬）0.9～1.2×0.6～0.9mm。b、菌落形態(tài)特性：菌落在nfb培養(yǎng)基平板上生長速度較快，菌落圓形，不透明。30℃，生長24小時，菌落直徑1-3毫米。生長溫度范圍5℃～40℃及ph生長范圍為4.0～10.0，可以生長的最佳ph值生長范圍5.0～7.0，高于5%的nacl抑制生長。c、生理生化特性：革蘭氏陰性，菌株在改良pda液體培養(yǎng)基上生長產(chǎn)酸。淀粉水解、脲酶、甲基紅試驗、vp(vogesproskauer)試驗、吲哚試驗、酪蛋白水解、過氧化氫酶均為陽性、硝酸還原酶、明膠液化陰性。能以d-甘露醇、乳果糖、麥芽糖、甘露糖胺、杏苷、熊果苷、α-環(huán)式糊精、d-蜜二糖、n-已?；?d-葡萄糖胺、n-已?；?β-d-甘露糖胺、d-甘露醇、水苷楊、β-環(huán)式糊精、i-赤藻糖醇、l-海藻糖、d-半乳糖、d-半乳糖醛酸、α-d-葡萄糖、葡萄糖-1-磷酸鹽、葡萄糖-6-磷酸鹽、l-乳酸、醋乳酸、d，l-α-丙三醇磷酸鹽、β-甲基-d-葡萄糖、m-酒石酸、l-尿刊酸、α-甲基-d-葡萄糖苷、m-纖維醇、麥芽三糖、3-甲基-d-葡萄糖、β-甲基-d-葡萄糖苷、6-o-d-吡喃葡萄糖酰-d-呋喃果糖、d-蜜三糖、d-山梨醇、水蘇四糖、蔗糖、α-羥基丁酸、β-羥基丁酸、α-酮戊二酸、l-蘋果酸、甲脂丙酮酸、d-葡糖二酸、琥珀酰胺酸、α-琥珀酸、琥珀酸甲脂、l-苯基丙氨酸、l-絲氨酸、l-天冬酰胺酸、甘氨酰-l-谷氨酸、l-蘇氨酸、胸苷、尿苷、胸苷-5￠-一磷酸鹽、尿苷-5￠-一磷酸鹽為碳源的培養(yǎng)基上生長。不能夠利用甘油、d-甘露糖、龍膽二糖、丙酮腈酸、α-甲基-d-半乳糖苷、丙胺酸胺、l-丙氨基-組氨酸、l-谷氨酸鹽、甘甘氨酰脯氨酸、氨酰-l-胺、l-甲硫氨酸為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長。ph生長范圍ph4.0～ph10.0；對nacl有輕度耐受性，在低于5.0%nacl濃度下可生長。所述djg211菌株的16srdna序列如seqidno：1所示。本發(fā)明djg211菌株的分子分類地位的確定：采用細(xì)菌16srrna基因通用引物25f和1492r進(jìn)行dna的體外擴(kuò)增，將pcr產(chǎn)物直接進(jìn)行序列測定。將測序獲得的16srdna序列輸入genbank進(jìn)行序列blast比對，初步確定本發(fā)明的固氮植物細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）菌株在分類學(xué)中的屬、種的位置。結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的固氮植物細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）屬于植物細(xì)菌屬（phytobacter），與與固氮植物細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）的模式菌株ls8t同源性為99.6%，但二者的序列不完全一致，有0.4%的差異，表明二者是同種內(nèi)不同的菌株。結(jié)合上述的生理生化特性、16srdna序列分析，本發(fā)明的固氮植物細(xì)菌（phytobacterdiazotrophicus）應(yīng)歸屬于植物細(xì)菌屬（phytobacter）。因此，將本發(fā)明的djg211菌株于2017年6月5日保藏在廣東省微生物菌種保藏中心（gdmcc），保藏編號為gdmccno：60195。廣東省微生物菌種保藏中心的保藏地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓。實施例2pda培養(yǎng)基：稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1000ml煮沸半個小時，紗布過濾，再加10-20g葡萄糖，充分溶解，ph自然，121°c，蒸汽滅菌30min。以對硫磷為唯一碳源的培養(yǎng)基：k2hpo4×3h2o1.30g，mgso4×7h2o0.50g，feso4×7h2o0.02g，nano33.0g，kcl0.45g，對硫磷20mg/l，h2o1000ml，ph值自然（約為6.5-7.2），121°c，蒸汽滅菌30min。djg211菌株降解對硫磷的應(yīng)用：將固氮植物細(xì)菌djg211菌株在pda中預(yù)培養(yǎng)到對數(shù)生長期，再以2%的接種量接種到5mg/l的對硫磷培養(yǎng)基中適應(yīng)培養(yǎng)24h，再將適應(yīng)培養(yǎng)液以2%接種量接種到20mg/l的對硫磷培養(yǎng)液中，培養(yǎng)8小時后，測定對硫磷的降解率為18.2%，以后每隔6小時測定一次降解率，直至測定到培養(yǎng)50小時后，降解率達(dá)到了80.5%，測定結(jié)果如圖1。實施例3djg211菌株提高土壤微生物多樣性和土壤活性：將固氮植物細(xì)菌djg211菌株在pda中預(yù)培養(yǎng)到對數(shù)生長期，離心收集菌體，以葡萄糖為載體，制備含菌量約為2x109/g的菌劑。使用50%對硫磷120ml兌水3l，取其中1l對硫磷溶液噴施到含10kg土壤的塑料盆中，置于自然條件下。不接固氮植物細(xì)菌菌劑的為對照，接種上述制備的固氮植物細(xì)菌菌劑0.2g/kg土壤的為菌劑處理。每處理三個重復(fù)，每隔15天取樣測定土壤中的好氧細(xì)菌和放線菌總數(shù)，結(jié)果見圖2和圖3。接種15天后，對照和處理土壤好氧菌數(shù)量和放線菌數(shù)量都有不同程度的提高。由于固氮植物細(xì)菌djg211菌株對對硫磷有降解作用，解除了對硫磷對土壤微生物的抑制作用，促進(jìn)了土壤好氧菌和放線菌的繁殖，提高了土壤微生物的多樣性和土壤活性。實施例4djg211菌株促水稻生長效果：采用盆栽法試驗固氮植物細(xì)菌接菌水稻中嘉早的效果。將固氮植物細(xì)菌菌株活化后，在對數(shù)生長期內(nèi)，制成菌懸液108細(xì)胞.ml-1濃度處理有10天苗齡的水稻苗根部40小時，對照用無菌水處理。然后轉(zhuǎn)接到裝有500克水稻土的塑料杯中，每個塑料杯中再加入50ml植物少氮營養(yǎng)液，3個重復(fù)處理，室溫下培養(yǎng)。每天及時觀察、加水。培養(yǎng)觀察至25天后，試驗組加入相應(yīng)的濃度為108細(xì)胞.ml-1的菌液40ml及50ml植物少氮營養(yǎng)液，對照組加入等量無菌水及50ml植物無氮營養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)觀察至20天后拍照并記錄，測定水稻的根長、葉長、鮮重、分蘗數(shù)、根重及干重。植物少氮營養(yǎng)液組成：硫酸鈣0.046%；硝酸鈣0.003%；氯化鉀0.0075%；磷酸氫二鉀0.0136%；檸檬酸鐵0.0075%；硫酸鎂0.0046%；微量元素液1ml。微量元素液配比：znso40.22g；h3bo32.86g；mnso41.81g；h2moo40.02g；cuso40.8g；h2o1000ml〗。固氮植物細(xì)菌djg211接種水稻經(jīng)盆栽培養(yǎng)45天后，拍照并測量水稻的根長、葉長、鮮重、分蘗數(shù)、根重及干重。結(jié)果見表1。由表1可以看出，固氮植物細(xì)菌djg211接種水稻之后，與沒有接種菌株的對照相比水稻的根長、葉長、根重、鮮重都達(dá)到了顯著差異，對水稻有明顯的促進(jìn)生作用。其中根增長了52.7%，葉長增加了44.9%，鮮重增加了73.2%，根重增加了52.3%，干重增加了53.1%。表1固氮植物細(xì)菌djg211接種水稻后的促生效果菌株葉長(cm)根長(cm)鮮重(g)干重(g)根重(g)ck35.07±1.02e9.45±0.73c1.31±0.09d0.52±0.02c0.1±0.02ddjg21150.82±0.81abc14.43±0.42a4.89±0.26bc1.11±0.05ab0.21±0.02abc注：同列不同小寫字母表示處理間差異顯著（p<0.05）實施例5固氮植物細(xì)菌djg211促油麥菜生長效果：將固氮植物細(xì)菌菌株活化后，在對數(shù)生長期內(nèi)，離心收集菌體，用無菌蒸餾水配制成菌懸液2x108細(xì)胞.ml-1濃度噴施有7天苗齡的油麥菜，對照用無菌水噴施處理。每10平方米菜地去菌懸液10ml稀釋到100ml噴施，對照用100ml無菌水噴施，15天后，效果如圖4。噴施固氮植物細(xì)菌的油麥菜葉綠素含量比噴施清水對照增加15.2%，vc含量比噴施清水對照增加11.2%，可溶性糖比噴施清水的對照增加8.2%，收獲后鮮重比對照增加20.2%。sequencelisting<110>廣東杰士農(nóng)業(yè)科技有限公司<120>一株植物固氮細(xì)菌djg211及其在提高土壤和植物活力中的應(yīng)用<130><160>1<170>patentinversion3.3<210>1<211>1345<212>dna<213>16srdna序列<400>1ggtagcacagggagcttgctctcgggtgacgagtgggggacgggtgagtaatgtctggga60aactgcccgatggagggggataactactggaaacggtagctaataccgcataatgtggca120agaccaaagagggggaccttcgggcctcttgccatcggatgtgcccagatgggattagct180tgttggtgaggtaatggctcaccaaggcgacaatccctagctggtctgagaggatgacca240gccacactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattg300cacaatgggcgcaagcctgatgcagccatgccgcgtgtgtgaagaaggccttcgggttgt360aaagcactttcagcggggaggaaggtgttaaggttaataaccttgtcgattgacgttacc420cgcagaagaagcaccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggtgcaagc480gttaatcggaattactgggcgtaaagcgcacgcaggcggtctgtcaagtcggatgtgaaa540tccccgggctcaacctgggaactgcattcgaaactggcaggcttgagtcttgtagagggg600ggtagaattccaggtgtagcggtgaaatgcgtaaagatctggaggaataccggtggcgaa660ggcggccccctggacaaagactgacgctcaggtgcgaaagcgtggggagcaaacaggatt720agataccctggtagtccacgccgtaaacgatgtcgacttggaggttgtgcccttgaggcg780tggcttccggagctaacgcgttaagtcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttaaaa840ctcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgatgcaa900cgcgaagaaccttacctggtcttgacatccacggaatttggcagagatgccttagtgcct960tcgggaaccgtgagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgttgtgaaatgttggg1020ttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcctttgttgccagcggtccggccgggaactc1080aaaggasactgccagtgataaactggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatggcc1140cttacgactagggctacacacgtgctacaatggcatatacaaagagaagcgacctcgcga1200gagcaagcggacctcataa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