本發(fā)明屬于微生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是現(xiàn)場(chǎng)致病微生物的檢測(cè)，具體涉及一種旋轉(zhuǎn)式核酸檢測(cè)卡盒。本發(fā)明將磁珠法核酸提取技術(shù)和核酸檢測(cè)技術(shù)（如lamp濁度檢測(cè)技術(shù)）相結(jié)合，在封閉卡盒內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化核酸提取/純化、擴(kuò)增、檢測(cè)過程。

背景技術(shù)：

傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法是將具有特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等加入培養(yǎng)基中，對(duì)檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行選擇、分離、鑒定。其操作過程繁瑣耗時(shí)，且有被感染的風(fēng)險(xiǎn)；不同的細(xì)菌需要不同的培養(yǎng)基，大多非可培養(yǎng)狀態(tài)菌無法通過培養(yǎng)被檢測(cè)；不同菌體可能產(chǎn)生相同的特異性物質(zhì)，產(chǎn)生假陽(yáng)性菌落。采用磁分離技術(shù)和lamp技術(shù)的核酸檢測(cè)方法，可以避免選擇性增菌培養(yǎng)，減少了檢測(cè)時(shí)間，且容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。此外，lamp與傳統(tǒng)的核酸擴(kuò)增方法相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、高效快速，、高特異性、高靈敏度。當(dāng)然lamp缺點(diǎn)是容易污染、不方便產(chǎn)物回收及鑒定、設(shè)計(jì)空間較受限、擴(kuò)增長(zhǎng)度＜500bp時(shí)不能進(jìn)行長(zhǎng)鏈擴(kuò)增。

在疫區(qū)查找致病源需要將樣本進(jìn)行遠(yuǎn)程運(yùn)輸隔離后在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，這樣需要花費(fèi)幾天的時(shí)間甚至更久，然而對(duì)于傳染性強(qiáng)的病毒，會(huì)在非常短的時(shí)間里讓大面積的人和動(dòng)物感染，甚至死亡。為挽救生命，必須在現(xiàn)場(chǎng)幾個(gè)小時(shí)內(nèi)確定致病源。與此同時(shí)還要避免在取樣、操作過程中出現(xiàn)的交叉污染導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤。傳統(tǒng)的核酸檢測(cè)需要使用多臺(tái)儀器，如核酸提取儀、核酸擴(kuò)增儀、熒光檢測(cè)儀/凝膠電泳儀等檢測(cè)設(shè)備。工作人員操作過程繁瑣且容易感染，實(shí)驗(yàn)過程是開放的容易產(chǎn)生交叉污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性等缺點(diǎn)。

在農(nóng)產(chǎn)品的前后期加工與流通中，容易造成食品的微生物污染。致微生物的檢測(cè)是食源性疾病預(yù)防和控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對(duì)維護(hù)消費(fèi)者的健康具有重要意義。食品安全事件具有突發(fā)性和緊迫性，食品污染源檢測(cè)結(jié)果也需要有時(shí)效性，而現(xiàn)行使用的致病菌檢測(cè)方法或設(shè)備具有操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)等局限性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種新的旋轉(zhuǎn)式核酸檢測(cè)卡盒，將核酸檢測(cè)所需試劑封存在卡盒內(nèi)，在封閉卡盒內(nèi)自動(dòng)完成復(fù)雜的核酸提取、擴(kuò)增和檢測(cè)過程，不僅減少了繁瑣耗時(shí)的手動(dòng)/半自動(dòng)核酸檢測(cè)流程和工作人員的感染機(jī)會(huì)，而且能有效解決操作環(huán)境對(duì)試劑或樣品的污染和生化反應(yīng)對(duì)外界環(huán)境的氣溶膠污染等；內(nèi)置獨(dú)特的移液/分液器；集成陽(yáng)性和陰性對(duì)照組，確保檢測(cè)的可靠性。

為了實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，一種旋轉(zhuǎn)式核酸檢測(cè)卡盒包括：移液器、垂直導(dǎo)桿、外殼、密封蓋、底座、至少2個(gè)密封圈、至少2個(gè)彈簧等組成，外殼上具有至少3個(gè)定位孔、至少1個(gè)加樣孔、至少1個(gè)外殼檢測(cè)孔、至少1個(gè)底座檢測(cè)孔。

所述移液器是可旋轉(zhuǎn)的，位于卡盒內(nèi)部，由注射推桿、彈簧1、定位孔2、空氣置換腔體、可旋轉(zhuǎn)移液臂、導(dǎo)氣管、移液吸頭、密封圈等組成。

所述定位孔2位于注射推桿上方，注射推桿和彈簧1位于空氣置換腔體內(nèi)，空氣置換腔體與可旋轉(zhuǎn)移液臂由導(dǎo)氣管密封連接，移液吸頭與可旋轉(zhuǎn)移液臂密封連接。通過外部動(dòng)力和彈簧1，驅(qū)動(dòng)注射推桿往復(fù)運(yùn)動(dòng)，實(shí)現(xiàn)精確定量、定速的吸液和分液功能。

所述底座包含多個(gè)試劑室和外螺紋特征，試劑室中至少1個(gè)檢測(cè)室，至少1個(gè)加熱/制冷室，1個(gè)樣本室，至少1個(gè)對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)過程中所有試劑以液態(tài)或固態(tài)方式存儲(chǔ)于試劑室中。檢測(cè)室可以采用對(duì)射式、散射式、反射式等方式的光電檢測(cè)。

所述底座的材料采用高透明、低試劑/樣本吸附率、壁厚薄、不與任何化學(xué)試劑反應(yīng)、具有生物兼容性的高分子聚合物。

所述旋轉(zhuǎn)移液臂下面有十字定位孔。通過外部動(dòng)力可以實(shí)現(xiàn)移液吸頭精確旋轉(zhuǎn)至每個(gè)試劑室上方。

所述定位孔1和定位孔3位于垂直導(dǎo)桿上方，垂直導(dǎo)桿與可旋轉(zhuǎn)移液臂連接，彈簧2位于可旋轉(zhuǎn)移液臂外部。通過外部動(dòng)力和彈簧2，作用于垂直導(dǎo)桿，帶動(dòng)移液吸頭精確定位到試劑室底部。

所述檢測(cè)室與外殼檢測(cè)孔和底座檢測(cè)孔在統(tǒng)一中心軸上。

所述試劑室的中心與移液吸頭垂直，置于移液吸頭移動(dòng)范圍內(nèi)。

所述底座與外殼通過螺紋旋轉(zhuǎn)密封連接。

所述密封蓋通過加樣孔與外殼密封連接。

所述密封連接方式有密封圈、螺紋方式等。

所述外部動(dòng)力可以是電機(jī)、氣泵、液泵等各種提供扭矩、氣壓、液壓動(dòng)力的部件。并且由微處理器控制，在卡盒內(nèi)部自動(dòng)完成試驗(yàn)流程。

所述卡盒，通過可用吸頭刺穿的鋁膜，預(yù)先將核酸檢測(cè)所需試劑封存。

本發(fā)明的一種旋轉(zhuǎn)式核酸檢測(cè)卡盒，將核酸檢測(cè)所需試劑封存在卡盒內(nèi)，在封閉卡盒內(nèi)自動(dòng)完成復(fù)雜的核酸提取、擴(kuò)增和檢測(cè)過程。具有以下優(yōu)點(diǎn)。

（1）全自動(dòng)?？ê型ㄟ^外部動(dòng)力部件實(shí)現(xiàn)核酸檢測(cè)全自動(dòng)，包括核酸提取、擴(kuò)增和檢測(cè)。手動(dòng)把樣本加入卡盒，將卡盒放入儀器內(nèi)可全自動(dòng)運(yùn)行。

（2）封閉。卡盒是一個(gè)全封閉的體系，底座的試劑室事先封存，保證樣本不會(huì)混淆，不會(huì)對(duì)環(huán)境造成氣溶膠等污染，也減少工作人員的感染。

（3）快速?？ê锌删C合基于磁分離的核酸提取技術(shù)和基于lamp的濁度檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，相比傳統(tǒng)檢測(cè)方法加快了檢測(cè)速度。

（4）可擴(kuò)展。由于卡盒底座是可拆卸的，用戶可以實(shí)際需要設(shè)計(jì)不同的卡盒底座，也可以通過微處理器控制完成不同的試驗(yàn)流程。

（5）可靠性?？ê袃?nèi)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照組，避免試劑失效出現(xiàn)假陰性和試劑污染導(dǎo)致假陽(yáng)性。

附圖說明

圖1旋轉(zhuǎn)式核酸檢測(cè)卡盒正視圖。

圖2旋轉(zhuǎn)式核酸檢測(cè)卡盒裝配模型圖。

圖3卡盒底座俯視圖。

其中：注射推桿-101、彈簧1-102、垂直導(dǎo)桿-103、空氣置換腔體-104、可旋轉(zhuǎn)移液臂-105、移液吸頭-106、彈簧2-107、密封圈-108、試劑室-109、螺紋-110、底座-111、密封塞-112、定位孔1-113、定位孔2-114、定位孔3-115、加樣孔-116、外殼-117、外殼檢測(cè)孔-118、底座檢測(cè)孔-119。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及對(duì)樣本中微生物進(jìn)行核酸檢測(cè)。微生物可以是細(xì)菌、病毒和真菌等。底座的試劑槽內(nèi)預(yù)裝了包括結(jié)合液、裂解液、清洗液、洗脫液、礦物油、lamp反應(yīng)液，在卡盒試劑室包含一個(gè)檢測(cè)室，該檢測(cè)室采用對(duì)射式光電檢測(cè)，用于目標(biāo)dna或者rna的檢測(cè)。

首先將前處理好的樣本用手動(dòng)移液器加注到卡盒試劑室里面的樣本室，然后將卡盒按照要求放置于一體化檢測(cè)儀里面。該檢測(cè)儀是配套卡盒的設(shè)備。在外部設(shè)備的驅(qū)動(dòng)下反應(yīng)盒內(nèi)部移液組件開始按照預(yù)設(shè)程序?qū)颖疽后w進(jìn)行處理，依次經(jīng)過結(jié)合液、裂解液、清洗液等過程，然后再將提取的核酸液移至檢測(cè)室，最后將礦物油加入檢測(cè)室。整個(gè)檢測(cè)過程在恒溫條件下進(jìn)行，溫度大約在60℃-65℃由外圍設(shè)備提供。此時(shí)650nm波長(zhǎng)的光線聚焦于檢測(cè)室內(nèi)的樣本液體內(nèi)，隨著lamp反應(yīng)的進(jìn)行檢測(cè)室內(nèi)液體會(huì)變渾濁，對(duì)射面的光電探測(cè)器采集到的光電信號(hào)會(huì)發(fā)生變化。通過光電信號(hào)的變化來確定樣本中是否含有某種微生物。不同的lamp反應(yīng)液檢測(cè)不同的微生物。

以上描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種等同變換，這些等同變換均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。