本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株尖孢鐮刀菌及其在鐵皮石斛栽培中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

石斛屬(dendrobium)為蘭科第二大屬，多年生草本植物，全球共計(jì)1500種以上?！吨袊幍洹?010年版將收載的石斛分為兩類，即石斛和鐵皮石斛，后者鐵皮石斛(d.officinalekimuraetmigo)除有良好的藥用功效外，還有非常好的滋補(bǔ)和養(yǎng)身效果，是極為珍貴的中藥材，素有“藥中黃金”之美稱。

鐵皮石斛葉面積小，光合強(qiáng)度低，對(duì)生長環(huán)境要求苛刻，多附生于大樹干上和石壁、石縫間，因此生長十分緩慢。此外，由于過量采挖和生態(tài)環(huán)境破壞，石斛現(xiàn)已被我國列為瀕于滅絕的受保護(hù)的藥材品種之一。石斛的瀕危和需求狀況導(dǎo)致國內(nèi)眾多科研單位對(duì)石斛資源開展研究，這些研究在摸清石斛資源、生物學(xué)特性、組織培養(yǎng)及栽培馴化等方面已經(jīng)取得了不少成果。但目前石斛的栽培生產(chǎn)仍以大田種植模式為主，為了滿足市場需求，提高石斛產(chǎn)量，盲目施用化學(xué)肥料和農(nóng)藥，嚴(yán)重影響其產(chǎn)品品質(zhì)。如何有效發(fā)展有機(jī)栽培模式，提高產(chǎn)品品質(zhì)已成為該產(chǎn)業(yè)良性發(fā)展的瓶頸。

研究表明，鐵皮石斛種子缺乏胚乳組織，種胚的發(fā)育不能超過球形階段，其有性繁殖困難，需與真菌共生才能萌發(fā)。成年蘭科植物與真菌共生形成內(nèi)生菌根是自然界的一種普遍現(xiàn)象，菌根真菌為蘭科植物提供生長、繁殖所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)植株具有明顯的促生作用。合理利用菌根資源，提高鐵皮石斛的生長速度，在一定程度上減少化學(xué)肥料的施用量，這也符合農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略。因此，菌根相關(guān)研究已成為鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的一個(gè)重要方向。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一株尖孢鐮刀菌jsnl008-2，對(duì)鐵皮石斛促生作用效果顯著。本發(fā)明的另一目的是提供該菌株生產(chǎn)的菌劑，該菌株制備的固體微生物菌劑可以顯著促進(jìn)鐵皮石斛生長。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述目的，如本發(fā)明所述的一株尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)，菌株名為jsnl008－2，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101，保藏編號(hào)為cgmccno.13689，保藏日期為2017年3月10日。該菌株是2016年3月在江西省鷹潭市鐵皮石斛栽植區(qū)內(nèi)生長狀況較好的植株上分離獲得的。該菌株jsnl008-2主要生物學(xué)特性為：在pda平板上培養(yǎng)，菌絲為乳黃色，生長呈放射狀，附于基物表面；反面乳黃色，無色素沉積。

本發(fā)明所述的菌株jsnl008-2在鐵皮石斛栽培中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述菌株jsnl008-2生產(chǎn)的微生物菌劑。

本發(fā)明所述的菌株jsnl008-2生產(chǎn)微生物菌劑的制備方法，通過以下步驟所制成：

(1)以棉籽殼菌渣為培養(yǎng)基質(zhì)、硝酸銨為外源氮源、蔗糖為外源碳源，制備成固體培養(yǎng)基，滅菌，接種尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2；

(2)在28-30℃，每天8h光照16h黑暗、ph6.0條件下培養(yǎng)20～25天；

(3)將步驟(2)培養(yǎng)好的固體微生物菌劑切割成1cm³大小的塊狀物，備用。

其中，步驟(1)所述滅菌條件為121℃和101.3千帕的高壓條件下滅菌20分鐘。

本發(fā)明所述的菌株jsnl008-2生產(chǎn)的微生物菌劑在鐵在鐵皮石斛栽培中的應(yīng)用。

其中，所述應(yīng)用的具體步驟為：將固體微生物菌劑接種置于鐵皮石斛幼苗栽培基質(zhì)表面，每叢鐵皮石斛幼苗的固體菌劑接種量為5-6g。

進(jìn)一步地，所述鐵皮石斛幼苗栽培基質(zhì)相對(duì)含水量維持在60％以上至少10天。以確保菌絲在基質(zhì)內(nèi)成活。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：

(1)本發(fā)明的尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2對(duì)促進(jìn)鐵皮石斛生長效果顯著，對(duì)減少化學(xué)肥料的使用有一定作用，是保證食用安全的重要手段。

(2)尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2生產(chǎn)的微生物菌劑能顯著促進(jìn)鐵皮石斛生長，并且培養(yǎng)條件簡單、容易保存，易于工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明菌株jsnl008-2菌落照片；

圖2為本發(fā)明菌株jsnl008-2菌根化鐵皮石斛的促生能力分析圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

在江西省鷹潭市鐵皮石斛栽植區(qū)內(nèi)生長狀況較好的植株上分離篩選到一株促進(jìn)鐵皮石斛生長菌株jsnl008-2，該菌株在pda平板上培養(yǎng)，菌絲為乳黃色，生長呈放射狀，附于基物表面；反面乳黃色，無色素沉積，如圖1所示。擴(kuò)增該菌株jsnl008-2的its區(qū)全序列并進(jìn)行測序，pcr擴(kuò)增得到的rdnaits序列全序列如seqidno1所示，通過在genebank上進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)，結(jié)果表明菌株jsnl008-2與尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)菌株的同源性最近，與菌株fusariumoxysporumelrf7和fusariumoxysporumfjat-31103同源性最高，結(jié)合形態(tài)和生理生化特征，將菌株jsnl008-2初步鑒定為尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)，命名為尖孢鐮刀菌jsnl008-2(fusariumoxysporumjsnl008-2)，屬于半知菌亞門瘤座孢目鐮孢屬。將該菌株jsnl008-2送交位于中國北京，中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱cgmcc)保藏，保藏編號(hào)為cgmccno.13689，保藏日期為2017年3月10日。

實(shí)施例2

尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2生產(chǎn)的微生物菌劑：

(1)以棉籽殼菌渣為培養(yǎng)基質(zhì)、硝酸銨為外源氮源、蔗糖為外源碳源，制備成固體培養(yǎng)基質(zhì)裝入高壓滅菌袋內(nèi)，于121℃和101.3千帕的高壓條件下滅菌20分鐘，待培養(yǎng)基質(zhì)冷卻后在無菌條件下接種菌根真菌jsnl008-2，然后進(jìn)行人工培養(yǎng)；

(2)人工培養(yǎng)的具體培養(yǎng)條件為28-30℃、每天8h光照16h黑暗、ph6.0條件下培養(yǎng)20～25天，

(3)將步驟(2)培養(yǎng)好的固體微生物菌劑切割成1cm³大小的塊狀物，備用。

實(shí)施例3

尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2生產(chǎn)的微生物菌劑對(duì)促進(jìn)鐵皮石斛生長作用效果分析。

(1)將實(shí)施例2培養(yǎng)好的固體微生物菌劑，置于鐵皮石斛幼苗栽培基質(zhì)表面，栽培鐵皮石斛選用口徑15cm的營養(yǎng)缽，每個(gè)營養(yǎng)缽栽培1叢(5株)鐵皮石斛。接種時(shí)選擇長勢基本一致的鐵皮石斛植株，并進(jìn)行苗高和地徑的測定。每叢鐵皮石斛幼苗的固體菌劑接種量為5-6g，施用菌劑后，基質(zhì)相對(duì)含水量維持在60％以上至少10天，以確保菌絲在基質(zhì)內(nèi)成活。

(2)接種后6個(gè)月，進(jìn)行鐵皮石斛根系的菌根化程度檢測，確保接種的尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2已與鐵皮石斛根部結(jié)合，形成了菌根。接種后12個(gè)月，進(jìn)行鐵皮石斛菌根化植株的促生效果分析如表1和圖2所示。選取沒有接種尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2生產(chǎn)的微生物菌劑的供試植株，僅接種等量棉籽殼菌渣的鐵皮石斛植株為對(duì)照植株(ck)，并采用相同的培養(yǎng)方法。

表1jsnl008-2對(duì)鐵皮石斛植株的促生效果

由表1和圖2可以看出，在人工接種尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)jsnl008-2生產(chǎn)的固體菌劑12個(gè)月后，接種jsnl008-2菌劑的鐵皮石斛植株苗高、鮮重明顯高于未接種jsnl008-2菌劑的鐵皮石斛植株。

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<110>江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院

<120>一株尖孢鐮刀菌及其在鐵皮石斛栽培中的應(yīng)用

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<213>尖孢鐮刀菌（fusariumoxysporum）

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