技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種無(wú)外源標(biāo)記基因的抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬制備方法。該無(wú)外源標(biāo)記基因的抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬是通過(guò)將目的基因(抗PCV2?siRNA序列)與外源標(biāo)記基因(Neo/EGFP融合表達(dá)基因)構(gòu)建共表達(dá)載體，并通過(guò)轉(zhuǎn)染、體細(xì)胞克隆等技術(shù)獲得F0代抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬，并將獲得的F0代轉(zhuǎn)基因豬進(jìn)行配種獲得F1抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬，對(duì)F1代抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬進(jìn)行鑒定，篩選出合適的F1轉(zhuǎn)基因豬提取耳皮成纖維細(xì)胞，進(jìn)行建系，并用HTNCre重組酶篩選出刪除了Neo/EGFP外源標(biāo)記基因的細(xì)胞系，并利用該細(xì)胞系進(jìn)行體細(xì)胞克隆，最終獲得無(wú)外源標(biāo)記基因的抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬。該轉(zhuǎn)基因豬刪除了外源標(biāo)記基因，減少了外源基因?qū)D(zhuǎn)基因豬個(gè)體健康的影響，同時(shí)也可以簡(jiǎn)化轉(zhuǎn)基因豬安全評(píng)價(jià)程序，有利于該轉(zhuǎn)基因豬的產(chǎn)業(yè)化推廣及應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員：李紫聰;黃曉靈;吳珍芳;劉德武;蔡更元;鄭恩琴
受保護(hù)的技術(shù)使用者：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.05.09
技術(shù)公布日：2017.09.19