本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)。
背景技術(shù)：
分子標(biāo)記的概念有廣義和狹義之分。廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的并可檢測的dna序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標(biāo)記是指能反映生物個體或種群間基因組中某種差異的特異性dna片段。分子標(biāo)記(molecularmarkers)，是以個體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核苷酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，是dna水平遺傳多態(tài)性的直接的反映。與其他幾種遺傳標(biāo)記--形態(tài)學(xué)標(biāo)記、生物化學(xué)標(biāo)記、細胞學(xué)標(biāo)記相比，dna分子標(biāo)記具有的優(yōu)越性有：大多數(shù)分子標(biāo)記為共顯性，對隱性的性狀的選擇十分便利；基因組變異極其豐富，分子標(biāo)記的數(shù)量幾乎是無限的；在生物發(fā)育的不同階段，不同組織的dna都可用于標(biāo)記分析；分子標(biāo)記揭示來自dna的變異；表現(xiàn)為中性，不影響目標(biāo)性狀的表達，與不良性狀無連鎖；檢測手段簡單、迅速。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，dna分子ssr標(biāo)記技術(shù)已有數(shù)十種，廣泛應(yīng)用于遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關(guān)系鑒別、基因庫構(gòu)建、基因克隆等方面。開發(fā)具有我國特色的重要性狀基因的分子標(biāo)記，將對提高我國分子標(biāo)記水平起到促進作用。為此，我們提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
本發(fā)明提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)，包括如下步驟：
a、對所需標(biāo)記的分子進行基因組dna提取，且基因組dna提取在35-50攝氏度的密封條件下進行；
b、選取分子標(biāo)記所需要的多種引物，并將多種引物放置到透明反應(yīng)器中，在45-60攝氏度的條件下滴加催化劑，且邊滴加邊對其進行攪拌，從而分子標(biāo)記所需的引物進行合成；
c、將a中處理后的基因組dna提取置于35-50攝氏度的條件下，然后通入合成的引物，且引物在30-45s內(nèi)完成，從而對片段pcr進行擴增，pcr反應(yīng)分為兩個階段，首先寡核苷酸引物在低嚴謹條件下與模板dna退火，此時發(fā)生了一些合成，以便穩(wěn)定模板與引物之間相互作用，然后進行高嚴謹退火條件的循環(huán)，兩個位點間那些序列在低嚴謹度退火條件下發(fā)生的引物延伸可繼續(xù)在高嚴謹條件下擴增；
d、將上述處理完成的pcr擴增產(chǎn)物進行純化，pcr產(chǎn)物加入2倍體積的乙醇中，在20-30攝氏度的條件下沉淀過夜后低速短暫離心，棄掉上清，然后用65-75％乙醇洗滌一次后，棄掉乙醇，放干后再用無菌水或者te溶解；
e、然后將pcr擴增產(chǎn)物片段掃描準(zhǔn)備；
f、pcr擴增產(chǎn)物上機基因掃描；
g、生物信息學(xué)分析。
優(yōu)選的，在d中的低速短暫離心的速率為2500-3500轉(zhuǎn)/min,且離心1-2min。
優(yōu)選的，所述的透明反應(yīng)器在使用前，均經(jīng)過多次的消毒殺菌處理，并對其烘干后再使用。
優(yōu)選的，催化劑具為異戊醇或者是乙醇中的一種或者是兩種混合物。
優(yōu)選的，催化劑的用量為8-12ml。
本發(fā)明還提供了一種基因組dna提取的方法，具體步驟如下：
a1、將dna提取材料用不同濃度乙醇逐級脫水,沉淀分離，并向其中加入dna提取緩沖液，蛋白酶k和催化劑，振蕩混勻，從而形成混合溶液；
a2、將上述混合溶液系置于35-40℃的條件下反應(yīng)30-45min，然后于2-6℃的環(huán)境下保存；
a3、將a2中形成的溶液進行離心，得上清，即為所需要的基因組dna。
優(yōu)選的，在上述中的催化劑蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的混合物，且蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的重量比為1：1：0.5。
本發(fā)明的有益效果：能夠改變傳統(tǒng)的分子標(biāo)記方法，建立完善的分子標(biāo)記研究體系，加快分子標(biāo)記的進步進程，推動科技成果的轉(zhuǎn)化，促進種子創(chuàng)新工程的發(fā)展，還能夠有效的提取基因組dna。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例來對本發(fā)明做進一步說明。
實施例1
本發(fā)明提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)，包括如下步驟：
a、對所需標(biāo)記的分子進行基因組dna提取，且基因組dna提取在35攝氏度的密封條件下進行；
b、選取分子標(biāo)記所需要的多種引物，并將多種引物放置到透明反應(yīng)器中，在45攝氏度的條件下滴加催化劑，且邊滴加邊對其進行攪拌，從而分子標(biāo)記所需的引物進行合成；
c、將a中處理后的基因組dna提取置于35攝氏度的條件下，然后通入合成的引物，且引物在30s內(nèi)完成，從而對片段pcr進行擴增，pcr反應(yīng)分為兩個階段，首先寡核苷酸引物在低嚴謹條件下與模板dna退火，此時發(fā)生了一些合成，以便穩(wěn)定模板與引物之間相互作用，然后進行高嚴謹退火條件的循環(huán)，兩個位點間那些序列在低嚴謹度退火條件下發(fā)生的引物延伸可繼續(xù)在高嚴謹條件下擴增；
d、將上述處理完成的pcr擴增產(chǎn)物進行純化，pcr產(chǎn)物加入2倍體積的乙醇中，在20攝氏度的條件下沉淀過夜后低速短暫離心，棄掉上清，然后用65％乙醇洗滌一次后，棄掉乙醇，放干后再用無菌水或者te溶解；
e、然后將pcr擴增產(chǎn)物片段掃描準(zhǔn)備；
f、pcr擴增產(chǎn)物上機基因掃描；
g、生物信息學(xué)分析。
在d中的低速短暫離心的速率為2500轉(zhuǎn)/min,且離心1min。
所述的透明反應(yīng)器在使用前，均經(jīng)過多次的消毒殺菌處理，并對其烘干后再使用。
催化劑具為異戊醇或者是乙醇中的一種或者是兩種混合物。
催化劑的用量為8ml。
本發(fā)明還提供了一種基因組dna提取的方法，具體步驟如下：
a1、將dna提取材料用不同濃度乙醇逐級脫水,沉淀分離，并向其中加入dna提取緩沖液，蛋白酶k和催化劑，振蕩混勻，從而形成混合溶液；
a2、將上述混合溶液系置于35℃的條件下反應(yīng)30min，然后于2℃的環(huán)境下保存；
a3、將a2中形成的溶液進行離心，得上清，即為所需要的基因組dna。
在上述中的催化劑蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的混合物，且蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的重量比為1：1：0.5。
實施例2
本發(fā)明提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)，包括如下步驟：
a、對所需標(biāo)記的分子進行基因組dna提取，且基因組dna提取在40攝氏度的密封條件下進行；
b、選取分子標(biāo)記所需要的多種引物，并將多種引物放置到透明反應(yīng)器中，在50攝氏度的條件下滴加催化劑，且邊滴加邊對其進行攪拌，從而分子標(biāo)記所需的引物進行合成；
c、將a中處理后的基因組dna提取置于40攝氏度的條件下，然后通入合成的引物，且引物在35s內(nèi)完成，從而對片段pcr進行擴增，pcr反應(yīng)分為兩個階段，首先寡核苷酸引物在低嚴謹條件下與模板dna退火，此時發(fā)生了一些合成，以便穩(wěn)定模板與引物之間相互作用，然后進行高嚴謹退火條件的循環(huán)，兩個位點間那些序列在低嚴謹度退火條件下發(fā)生的引物延伸可繼續(xù)在高嚴謹條件下擴增；
d、將上述處理完成的pcr擴增產(chǎn)物進行純化，pcr產(chǎn)物加入2倍體積的乙醇中，在23攝氏度的條件下沉淀過夜后低速短暫離心，棄掉上清，然后用66％乙醇洗滌一次后，棄掉乙醇，放干后再用無菌水或者te溶解；
e、然后將pcr擴增產(chǎn)物片段掃描準(zhǔn)備；
f、pcr擴增產(chǎn)物上機基因掃描；
g、生物信息學(xué)分析。
在d中的低速短暫離心的速率為2800轉(zhuǎn)/min,且離心1.5min。
所述的透明反應(yīng)器在使用前，均經(jīng)過多次的消毒殺菌處理，并對其烘干后再使用。
催化劑具為異戊醇或者是乙醇中的一種或者是兩種混合物。
催化劑的用量為9ml。
本發(fā)明還提供了一種基因組dna提取的方法，具體步驟如下：
a1、將dna提取材料用不同濃度乙醇逐級脫水,沉淀分離，并向其中加入dna提取緩沖液，蛋白酶k和催化劑，振蕩混勻，從而形成混合溶液；
a2、將上述混合溶液系置于36℃的條件下反應(yīng)35min，然后于3℃的環(huán)境下保存；
a3、將a2中形成的溶液進行離心，得上清，即為所需要的基因組dna。
在上述中的催化劑蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的混合物，且蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的重量比為1：1：0.5。
實施例3
本發(fā)明提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)，包括如下步驟：
a、對所需標(biāo)記的分子進行基因組dna提取，且基因組dna提取在45攝氏度的密封條件下進行；
b、選取分子標(biāo)記所需要的多種引物，并將多種引物放置到透明反應(yīng)器中，在55攝氏度的條件下滴加催化劑，且邊滴加邊對其進行攪拌，從而分子標(biāo)記所需的引物進行合成；
c、將a中處理后的基因組dna提取置于45攝氏度的條件下，然后通入合成的引物，且引物在40s內(nèi)完成，從而對片段pcr進行擴增，pcr反應(yīng)分為兩個階段，首先寡核苷酸引物在低嚴謹條件下與模板dna退火，此時發(fā)生了一些合成，以便穩(wěn)定模板與引物之間相互作用，然后進行高嚴謹退火條件的循環(huán)，兩個位點間那些序列在低嚴謹度退火條件下發(fā)生的引物延伸可繼續(xù)在高嚴謹條件下擴增；
d、將上述處理完成的pcr擴增產(chǎn)物進行純化，pcr產(chǎn)物加入2倍體積的乙醇中，在27攝氏度的條件下沉淀過夜后低速短暫離心，棄掉上清，然后用72％乙醇洗滌一次后，棄掉乙醇，放干后再用無菌水或者te溶解；
e、然后將pcr擴增產(chǎn)物片段掃描準(zhǔn)備；
f、pcr擴增產(chǎn)物上機基因掃描；
g、生物信息學(xué)分析。
在d中的低速短暫離心的速率為3200轉(zhuǎn)/min,且離心1.8min。
所述的透明反應(yīng)器在使用前，均經(jīng)過多次的消毒殺菌處理，并對其烘干后再使用。
催化劑具為異戊醇或者是乙醇中的一種或者是兩種混合物。
催化劑的用量為10ml。
本發(fā)明還提供了一種基因組dna提取的方法，具體步驟如下：
a1、將dna提取材料用不同濃度乙醇逐級脫水,沉淀分離，并向其中加入dna提取緩沖液，蛋白酶k和催化劑，振蕩混勻，從而形成混合溶液；
a2、將上述混合溶液系置于38℃的條件下反應(yīng)40min，然后于5℃的環(huán)境下保存；
a3、將a2中形成的溶液進行離心，得上清，即為所需要的基因組dna。
在上述中的催化劑蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的混合物，且蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的重量比為1：1：0.5。
實施例4
本發(fā)明提出了一種分子ssr標(biāo)記技術(shù)，包括如下步驟：
a、對所需標(biāo)記的分子進行基因組dna提取，且基因組dna提取在50攝氏度的密封條件下進行；
b、選取分子標(biāo)記所需要的多種引物，并將多種引物放置到透明反應(yīng)器中，在60攝氏度的條件下滴加催化劑，且邊滴加邊對其進行攪拌，從而分子標(biāo)記所需的引物進行合成；
c、將a中處理后的基因組dna提取置于50攝氏度的條件下，然后通入合成的引物，且引物在45s內(nèi)完成，從而對片段pcr進行擴增，pcr反應(yīng)分為兩個階段，首先寡核苷酸引物在低嚴謹條件下與模板dna退火，此時發(fā)生了一些合成，以便穩(wěn)定模板與引物之間相互作用，然后進行高嚴謹退火條件的循環(huán)，兩個位點間那些序列在低嚴謹度退火條件下發(fā)生的引物延伸可繼續(xù)在高嚴謹條件下擴增；
d、將上述處理完成的pcr擴增產(chǎn)物進行純化，pcr產(chǎn)物加入2倍體積的乙醇中，在30攝氏度的條件下沉淀過夜后低速短暫離心，棄掉上清，然后用75％乙醇洗滌一次后，棄掉乙醇，放干后再用無菌水或者te溶解；
e、然后將pcr擴增產(chǎn)物片段掃描準(zhǔn)備；
f、pcr擴增產(chǎn)物上機基因掃描；
g、生物信息學(xué)分析。
在d中的低速短暫離心的速率為3500轉(zhuǎn)/min,且離心2min。
所述的透明反應(yīng)器在使用前，均經(jīng)過多次的消毒殺菌處理，并對其烘干后再使用。
催化劑具為異戊醇或者是乙醇中的一種或者是兩種混合物。
催化劑的用量為12ml。
本發(fā)明還提供了一種基因組dna提取的方法，具體步驟如下：
a1、將dna提取材料用不同濃度乙醇逐級脫水,沉淀分離，并向其中加入dna提取緩沖液，蛋白酶k和催化劑，振蕩混勻，從而形成混合溶液；
a2、將上述混合溶液系置于40℃的條件下反應(yīng)45min，然后于6℃的環(huán)境下保存；
a3、將a2中形成的溶液進行離心，得上清，即為所需要的基因組dna。
在上述中的催化劑蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的混合物，且蛋白酶、核糖核酸酶與緩沖液atl的重量比為1：1：0.5。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。