本發(fā)明涉及一種用于治療腦梗塞的新型化合物，以及其制備方法和包含其的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：腦梗塞是中老年人隨著年齡的增長(zhǎng)、身體抵抗力差、工作、生活壓力大、人體機(jī)能減退和老化所致常見疾病，受到風(fēng)寒熱濕，疲勞過度的影響，出現(xiàn)腦血管萎縮、硬化，血液中血脂及有害成分累積，產(chǎn)生血脈受阻，表現(xiàn)出頭暈頭痛，頭部有時(shí)表現(xiàn)間歇性絞痛，精神不振、難受，嚴(yán)重的患者后期可能帶來中風(fēng)癡呆，難以治愈。腦梗塞的臨床常見類型有腦血栓形成、腔隙性梗死和腦栓塞等，腦梗塞占全部腦卒中的80％。與其相關(guān)性較大的幾個(gè)疾病是：糖尿病、肥胖、高血壓、風(fēng)濕性心臟病、心律失常、各種原因的脫水、各種動(dòng)脈炎、休克、血壓下降過快過大等。腦梗塞的病理學(xué)被分成極急性階段(從發(fā)作后大約3小時(shí))和急性階段(從發(fā)作后大約2周)。已知腦梗塞神經(jīng)元死亡與興奮性氨基酸毒性和自由基有關(guān)。在興奮性氨基酸毒性中，與由能量紊亂和酸與其受體的結(jié)合引起的谷氨酸的釋放有關(guān)的鈣內(nèi)流，導(dǎo)致在極急性階段中發(fā)生細(xì)胞內(nèi)紊亂，在急性階段中發(fā)生炎性反應(yīng)。對(duì)于自由基來說，它的增加或缺氧條件，通過產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄因子例如轉(zhuǎn)錄核因子κb(nf-κb)、缺氧誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子1(hif-1)、轉(zhuǎn)錄的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)物和活化蛋白3(stat3)等，誘導(dǎo)了炎性基因的表達(dá)。通過這些機(jī)制，產(chǎn)生了炎性細(xì)胞因子例如腫瘤壞死因子-α(tnf-α)、白細(xì)胞介素-1β(il-1β)、白細(xì)胞介素-6(il-6)等。這些細(xì)胞因子被認(rèn)為推進(jìn)了例如腦水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的癥狀，并促進(jìn)了神經(jīng)功能缺損。對(duì)于已報(bào)道在腦梗塞病理學(xué)中有神經(jīng)毒性作用的炎性細(xì)胞因子的抑制來說，可以通過腦室內(nèi)給藥tnf-α抗體來緩解腦局部缺血病癥。此外，已報(bào)道dph-067517、一種tnf-α轉(zhuǎn)化酶的抑制劑，在大鼠腦梗塞模型中抑制腦梗塞側(cè)tnf-α的表達(dá)，并減少了神經(jīng)功能缺損和腦梗塞體積。還有報(bào)道記錄，在大鼠腦室中注射重組il-1β增加了腦梗塞，而通過給藥il-1β受體拮抗劑對(duì)腦局部缺血病癥有緩解作用。但是，還沒有在腦梗塞中對(duì)il-1β分子本身有直接作用的藥物上市，dph-067517不能抑制il-1β在腦梗塞側(cè)的表達(dá)。盡管已有許多涉及單個(gè)炎性細(xì)胞因子和腦梗塞的報(bào)道，但其效果是不足的，有必要開發(fā)更多的能夠用于治療腦梗塞的藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在本發(fā)明的眾多實(shí)施方式中，本發(fā)明提供：用于治療腦梗塞的新型化合物，該化合物的制備方法，包含至少一種該化合物的藥用組合物，包含至少一種該化合物的藥用組合物的制備方法，和使用該化合物或藥用組合物來治療腦梗塞的用途和方法。一方面，本申請(qǐng)公開具有式i的共同結(jié)構(gòu)的化合物或其可藥用鹽、酯、酰胺：其中，r1、r2各自獨(dú)立地為h、c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、c3-7環(huán)烷基、硝基、-cho、-or11、-coor12、-so2r13或-(ch2)r-n(r14)(r15)，其中r11、r12、r13各自獨(dú)立地為h、c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、c3-7環(huán)烷基；r14、r15各自獨(dú)立地為h、c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、c3-7環(huán)烷基，或者r14、r15可以與其所連接的氮原子一起形成5-7元雜環(huán)烷基；r為0、1、2、3或4；r3為h、c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、硝基、氰基、-or21、-coor22、-so2r23、-n(r24)(r25)、c6-10芳基或5-7元雜芳基，其中r21、r22、r24、r25各自獨(dú)立地為h或c1-4烷基，r23為h、c1-4烷基或氨基，所述c6-10芳基或5-7元雜芳基任選被1-3個(gè)選自鹵素、羥基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4鹵代烷基的基團(tuán)所取代；n為0、1、2、3、4或5。本發(fā)明的特征還在于包含可藥用載體和任何上述式i化合物的藥用組合物，和通過將至少一種的式i化合物與可藥用載體混合而制備的藥用組合物。本發(fā)明的特征還在于用于制備藥用組合物的方法，該方法包括將任何上述化合物與可藥用載體混合。本發(fā)明還提供使用本發(fā)明的化合物或組合物的用途和方法。例如，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式為用于治療需要治療的受試者的腦梗塞的用途和方法，包括給予所述受試者治療有效量的任何的式i化合物或其藥用組合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式為本發(fā)明的化合物或組合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療腦梗塞。術(shù)語(yǔ)下述術(shù)語(yǔ)通過下文以及它們?cè)诒竟_中的使用而定義。“烷基”包括脂族烴，其可為直鏈或支鏈，并在鏈中包含1個(gè)至20個(gè)碳原子。優(yōu)選的烷基在鏈中含有1個(gè)至12個(gè)碳原子。更優(yōu)選的烷基在鏈中含有1個(gè)至4個(gè)碳原子。支鏈?zhǔn)侵?個(gè)以上諸如甲基、乙基或丙基的低級(jí)烷基連接至線性烷基鏈。烷基的非限制性實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、1-甲基丙基、正戊基、異戊基、仲戊基、己基、庚基、壬基、癸基、辛基。例如，c4烷基包括但不限于正丁基、異丁基和叔丁基。在一些實(shí)施方式中，烷基被1-5個(gè)、優(yōu)選1-3個(gè)基團(tuán)獨(dú)立取代，所述基團(tuán)包括但不限于氧代、氨基、烷氧基、羧基、環(huán)烷基、硝基、羥基和鹵素(氟、氯、溴或碘)?！碍h(huán)烷基”包括含有3個(gè)至7個(gè)碳原子的非芳族單環(huán)體系。合適的單環(huán)環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等。在一些實(shí)施方式中，環(huán)烷基被1-5個(gè)、優(yōu)選1-3個(gè)基團(tuán)獨(dú)立取代，所述基團(tuán)包括但不限于氧代、氨基、烷氧基、羧基、環(huán)烷基、硝基、羥基和鹵素(氟、氯、溴或碘)。“鹵素”包括氟、氯、溴和碘?！胺蓟卑ㄖT如苯基和萘基的芳族基團(tuán)。當(dāng)芳基被取代時(shí)，其可具有1-3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、羥基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4鹵代烷基?！半s芳基”包括具有5-7個(gè)環(huán)原子的穩(wěn)定的芳族單環(huán)體系，其中所述環(huán)原子中的至少一個(gè)為單獨(dú)的或組合的、不是碳的元素，例如氮、氧或硫。雜芳基可在任何雜原子或碳原子上被連接，這導(dǎo)致穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生。雜芳基的實(shí)例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、四唑基、三唑基。當(dāng)雜芳基被取代時(shí)，其可具有1-3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、羥基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4鹵代烷基?！半s環(huán)烷基”包括具有5-7個(gè)環(huán)原子的飽和環(huán)基，該體系由碳原子和1-3個(gè)選自n、o和s的雜原子構(gòu)成。雜環(huán)烷基可在任何雜原子或碳原子上被連接，這導(dǎo)致穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生。雜環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌啶基、高哌嗪基。當(dāng)雜環(huán)烷基被取代時(shí)，其可具有1-3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、羥基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4鹵代烷基、酯基、醛基、磺?；??！翱伤幱名}、酯和酰胺”包括羧酸鹽、氨基酸加成鹽、酯和酰胺，其在合理利益/風(fēng)險(xiǎn)比的范圍內(nèi)，藥理學(xué)上有效地、合適地接觸患者組織而無異常的毒性、刺激性或過敏反應(yīng)。這些鹽、酯和酰胺可為例如c1-4烷基、c3-7環(huán)烷基、c6-10芳基的鹽、酯和酰胺。本發(fā)明的代表性的可藥用酯包括c1-4烷基酯、c3-7環(huán)烷基酯、苯基酯和苯基(c1-4)烷基酯。優(yōu)選的酯包括甲基酯和乙基酯。代表性的鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、醋酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘甲酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、甲磺酸鹽、水楊酸鹽和月桂基磺酸鹽。這些鹽可包含堿金屬和堿土金屬陽(yáng)離子，諸如鈉、鉀、鈣和鎂、鋅；以及無毒的銨、季銨和胺陽(yáng)離子，諸如四甲基銨、甲胺、三甲胺和乙胺。代表性的本發(fā)明的可藥用酰胺包括衍生自氨、c1-4烷基伯胺和二(c1-4烷基)仲胺的那些酰胺。二烷基酰胺具有2個(gè)可獨(dú)立選擇的烷基(例如甲基丙基酰胺)。仲胺包括諸如嗎啉基的5元或6元雜環(huán)烷基或雜芳基部分，所述部分含有至少一個(gè)氮原子和任選的1-2個(gè)額外的雜原子。優(yōu)選的酰胺衍生自氨、c1-4烷基伯胺和二(c1-4烷基)胺?！敖M合物”包括包含規(guī)定量的規(guī)定成分的產(chǎn)品、以及通過將規(guī)定量的規(guī)定成分組合而獲得的任何產(chǎn)品。就化合物中的部分(非限制性的一個(gè)或多個(gè)實(shí)例包括取代基、基團(tuán)或環(huán))的數(shù)目而言，除非另行定義，短語(yǔ)“至少一個(gè)”是指存在的部分可與化學(xué)上允許的部分一樣多，且對(duì)這種部分的最大數(shù)目的確定為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。優(yōu)選存在1-3個(gè)取代基，或更優(yōu)選1-2個(gè)取代基，其中至少1個(gè)取代基在對(duì)位。本發(fā)明化合物的前藥和溶劑合物亦包含于本文中。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“前藥”表示作為藥物前體的化合物，所述前體被給予受試者后經(jīng)受通過代謝或化學(xué)過程的化學(xué)轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生式i化合物或其鹽和/或溶劑合物。若本發(fā)明化合物具有至少一個(gè)手性中心，它們可相應(yīng)地作為對(duì)映異構(gòu)體存在。若所述化合物具有二個(gè)以上手性中心，它們還可作為非對(duì)映異構(gòu)體存在。應(yīng)理解所有這種異構(gòu)體及其混合物均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明化合物的一個(gè)實(shí)施方式中，r1為oh、c1-4烷氧基或-(ch2)r-n(r14)(r15)。在本發(fā)明化合物的一個(gè)實(shí)施方式中，r2為oh或c1-4烷氧基。在本發(fā)明化合物的一個(gè)實(shí)施方式中，r3為c1-4烷基、c1-4鹵代烷基、c1-4烷氧基、-so2r23或5-7元雜芳基。在本發(fā)明化合物的一個(gè)實(shí)施方式中，r3為吡啶基。在本發(fā)明化合物的一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物選自：合成方法本發(fā)明提供按照傳統(tǒng)有機(jī)合成方法、以及矩陣合成方法或組合合成方法制備已公開的化合物的方法。方案1描述了所提出的合成路線。使用這些方案、下述指導(dǎo)原則和實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員可開發(fā)出類似或相近的用于制備本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解本發(fā)明化合物的合成可通過購(gòu)買描述于本文所公開的任何方案中的中間體或經(jīng)保護(hù)的中間體化合物而加快進(jìn)度。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)理解在任何本發(fā)明化合物的制備過程中，需要和/或期望保護(hù)任何所關(guān)心的分子上的敏感性或反應(yīng)性基團(tuán)。這可通過常規(guī)保護(hù)基團(tuán)的手段達(dá)成，所述保護(hù)基團(tuán)為諸如那些描述于“protectivegroupsinorganicsynthesis”，johnwiley&sons出版社，1999。這些保護(hù)基團(tuán)可使用本領(lǐng)域的已知方法在合適的階段移除。所描述的合成路線的實(shí)例包括方案1和合成實(shí)施例1-6。在所述方案和實(shí)施例中，r1、r2、r3和n在上文中描述和定義，x表示鹵素，優(yōu)選氯或溴。類似于這些實(shí)施例的目標(biāo)化合物的化合物可以根據(jù)類似路線制備，并且在許多情況下已經(jīng)根據(jù)類似路線制備。方案1本發(fā)明化合物能夠通過方案1所示化學(xué)方法制備。式ii所示的化合物與式iii所示的格氏試劑在ni配合物的存在下反應(yīng)得到式i化合物，所述ni配合物包括nicl2、ni(oac)2與配體形成的配合物，所述配體包括三苯基膦(pph)、三甲基膦、1,3-雙二苯基膦丙烷(dppp)，所述ni配合物例如為nicl2(dppp)。制劑本發(fā)明還提供包含至少一種本發(fā)明化合物以及可藥用載體的藥用組合物。為制備本發(fā)明藥用組合物，按照傳統(tǒng)的制藥技術(shù)，將作為活性成分的至少一種式i化合物或例如它的鹽與可藥用載體均勻地?fù)交?。所述載體的形式取決于給藥方式的類型，例如口服給藥、或諸如肌內(nèi)給藥的胃腸外給藥。在制備口服劑型的組合物時(shí)，可使用任何常規(guī)的藥用介質(zhì)。因此，對(duì)于諸如混懸液、酏劑和溶液劑的液體口服制劑，合適的載體和添加劑包括水、二醇、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑等；對(duì)于諸如散劑、膠囊劑、膠囊形片劑、軟膠囊劑和片劑的固體口服制劑，合適的載體和添加劑包括淀粉、糖、稀釋劑、造粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于易于給藥，片劑和膠囊劑代表最便利的口服劑量單位形式，在此情況下通常使用固體藥用載體。如有需要，可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將片劑包糖衣或包腸溶衣。對(duì)于胃腸外給藥，載體通常應(yīng)包括無菌水，但是還可包含其它成分，所述成分例如用于諸如助溶的目的、或用于防腐。還可制備可注射的混懸液，在此情況下可使用合適的液體載體、懸浮劑等。本文的藥用組合物在每劑量單位中，可包含遞送上述有效劑量所需活性成分的量。本文的藥用組合物在每單位劑量單位中，可包含約0.1mg～1g活性劑。然而，所述劑量可根據(jù)患者的要求、待治療的疾病的嚴(yán)重程度以及所使用的化合物而變化。既可采用每日給藥，又可采用周期性給藥。優(yōu)選這些組合物為諸如片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、無菌胃腸外溶液劑或混懸液、計(jì)量氣霧劑或液體噴霧劑、滴劑、針劑、自動(dòng)注射裝置或栓劑的單位劑量形式；所述組合物用于口服、胃腸外、鼻內(nèi)、舌下或直腸給予，或用于通過吸入或吹入的方式給予。或者，所述組合物可作為適于每周一次或每月一次給予的形式存在；例如，活性化合物不溶性鹽可適于為肌內(nèi)注射提供長(zhǎng)效制劑?？蓪⒈景l(fā)明新型組合物摻混為液體形式以用于口服給藥或注射給藥，所述形式包括水溶液劑、經(jīng)適當(dāng)矯味的糖漿劑、水混懸液或油混懸液、和使用食用油(諸如棉花籽油、芝麻油或花生油)的矯味乳劑、以及類似的藥用載體。適用于水混懸液的分散劑或懸浮劑包括合成和天然樹膠，諸如阿拉伯膠、海藻酸鹽、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。本發(fā)明化合物可通過單個(gè)日劑量給予，或總劑量可通過每天2、3或4次、每周1次、每?jī)芍?次、每月1次的分劑量給予。所給予的理想劑量可易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，并隨所使用的特定化合物、給藥方式、制劑的規(guī)格、給藥方式和疾病狀況的進(jìn)展而改變。另外，與所治療的具體患者相關(guān)的因素可導(dǎo)致調(diào)整劑量的需要，所述因素包括患者年齡、體重、飲食和給藥時(shí)間。有益效果本發(fā)明式i化合物能夠明顯減少腦梗塞模型大鼠的腦梗塞體積，能夠顯著抑制腦梗塞模型大鼠腦內(nèi)炎性細(xì)胞因子tnf-α、il-1β、il-6以及趨化因子mcp-1的產(chǎn)生，減少了其濃度的增加，因此其對(duì)于腦梗塞具有顯著的治療作用，能夠用作腦梗塞的新型治療藥物。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例意欲舉例說明本發(fā)明而非限制本發(fā)明。除非另外定義，本申請(qǐng)使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解相同的含義。將本申請(qǐng)?zhí)峒暗乃袑＠统霭嫖锿ㄟ^引用的方式并入本文。合成實(shí)施例1：4-(5,7-二羥基-4-氧代-2-((3,5,6-三甲基吡嗪-2-基)甲基)-4h-色烯-3-基)苯磺酰胺(化合物1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下向三頸燒瓶中裝入mg(0.29g，12mmol)，乙醚10ml和少量碘，然后再緩慢滴加2-溴甲基-3,5,6-三甲基吡嗪(2.14g，10mmol)的乙醚(100ml)溶液，在40℃下攪拌12h以獲得((3,5,6-三甲基吡嗪-2-基)甲基)鎂溴化物的乙醚溶液。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下在另一三頸燒瓶中裝入4-(2-氯-5,7-二羥基-4-氧代-4h-色烯-3-基)苯磺酰胺(0.73g，2mmol)，nicl2(dppp)(0.37g，2mmol)和乙醚50ml，滴加上一步驟所獲得的乙醚溶液，然后在室溫下攪拌32h。反應(yīng)混合物用1m鹽酸水溶液處理然后用乙醚萃取3次，合并的有機(jī)層用硅藻土過濾，減壓下濃縮后用硅膠柱層析分離，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(10:1-1:10)梯度洗脫，減壓除去溶劑干燥得到白色固體的標(biāo)題化合物0.48g，收率51.3％。esi-ms：468.12[m+h]+元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，c(59.09/59.17),h(4.53/4.62),n(8.99/8.84),o(20.53/20.47),s(6.86/6.84)1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.74(s,1h),10.24(s,1h),7.64-7.71(m,4h),7.32(s,2h),6.16(s,1h),5.97(s,1h),3.24(s,2h),2.73(s,6h),2.70(s,3h)。合成實(shí)施例2：3-(3-乙基苯基)-5,7-二甲氧基-2-((3,5,6-三甲基吡嗪-2-基)甲基)-4h-色烯-4-酮(化合物2)按照實(shí)施例1的方法，用2-氯-3-(3-乙基苯基)-5,7-二甲氧基-4h-色烯-4-酮代替4-(2-氯-5,7-二羥基-4-氧代-4h-色烯-3-基)苯磺酰胺，得到淡黃色固體的標(biāo)題化合物，產(chǎn)率47.6％。esi-ms：445.20[m+h]+元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，c(72.95/72.84),h(6.35/6.43),n(6.30/6.38),o(14.40/14.35)1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.14-7.21(m,3h),6.98(d,1h),6.78(s,1h),6.36(s,1h),3.84(s,6h),3.24(s,2h),2.73(s,6h),2.70(s,3h),2.61(q,2h),1.20(t,3h)。合成實(shí)施例3：3-(4-二氟甲基苯基-5-甲氧基-7-(吡咯烷-1-基甲基)-2-((3,5,6-三甲基吡嗪-2-基)甲基)-4h-色烯-4-酮(化合物3)按照實(shí)施例1的方法，用2-溴-3-(4-二氟甲基苯基-5-甲氧基-7-(吡咯烷-1-基甲基)-4h-色烯-4-酮代替4-(2-氯-5,7-二羥基-4-氧代-4h-色烯-3-基)苯磺酰胺，得到白色固體的標(biāo)題化合物，產(chǎn)率39.7％。esi-ms：520.23[m+h]+元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，c(69.35/69.47),h(6.01/6.12),f(7.31/7.14),n(8.09/8.11),o(9.24/9.16)1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.17-7.29(m,4h),6.78(s,1h),6.72(s,1h),6.46(s,1h),3.85(s,3h),3.64(s,2h),3.24(s,2h),2.73(s,6h),2.70(s,3h),2.51(t,4h),1.71(m,4h)。按照類似的方法，合成以下化合物：接下來，通過實(shí)驗(yàn)例具體解釋代表性化合物對(duì)腦梗塞模型的效果。測(cè)試實(shí)施例1：測(cè)試化合物在大鼠中腦動(dòng)脈閉塞-再灌注模型中對(duì)腦內(nèi)產(chǎn)生tnf-α、il-1β、il-6和mcp-1的作用1、動(dòng)物wistar大鼠，雄性，體重180～220g。每組2只，共分8組，假手術(shù)組：給予與藥物實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水進(jìn)行假手術(shù)；模型組：給予與藥物實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水進(jìn)行腦缺血再灌注手術(shù)；測(cè)試化合物1-6組，分別給予化合物1-6，劑量10mg/kg。2、方法使用縫合(硅涂層的尼龍線)閉塞了雄性wistar大鼠的中腦動(dòng)脈，在閉塞后30分鐘，靜脈內(nèi)給藥溶解在鹽水中的測(cè)試化合物10mg/kg，在給藥后60分鐘，對(duì)中腦動(dòng)脈進(jìn)行再灌注。每組取10只大鼠，在閉塞后12小時(shí)，將腦分離(參見koizumi,j.等，jpn.j.stroke，8，1-8，1986)。將腦組織勻漿，收集離心的上清液，通過elisa測(cè)量細(xì)胞因子和趨化因子。腦內(nèi)tnf-α、il-1β和il-6使用免疫分析試劑盒按照制造商的方案進(jìn)行測(cè)量；mcp-1使用mcp-1即時(shí)elisa試劑盒按照制造商的方案進(jìn)行測(cè)量。3、結(jié)果按照以下公式計(jì)算每種腦內(nèi)細(xì)胞因子的抑制率，以此來評(píng)估測(cè)試化合物的效應(yīng)：結(jié)果列于以下表1中：表1：測(cè)試化合物對(duì)于tnf-α、il-1β、il-6和mcp-1的抑制率(％)組別tnf-αil-1βil-6mcp-1化合物1組79.2±8.483.3±9.255.9±4.647.2±3.7化合物2組76.3±5.179.4±6.448.7±3.144.1±2.9化合物3組77.4±7.276.4±8.650.1±4.545.7±4.3化合物4組81.5±8.984.9±10.359.3±3.255.6±6.1化合物5組70.1±6.375.8±8.543.1±3.846.9±3.0化合物6組74.6±8.176.4±10.247.4±5.645.8±4.4上述試驗(yàn)結(jié)果表明：模型組大鼠腦內(nèi)炎性細(xì)胞因子tnf-α、il-1β、il-6以及趨化因子mcp-1的濃度顯著增加，表明了腦梗塞大鼠大腦內(nèi)炎性的產(chǎn)生。而本發(fā)明化合物1-6能夠明顯抑制了上述腦梗塞模型大鼠腦內(nèi)炎性細(xì)胞因子tnf-α、il-1β、il-6以及趨化因子mcp-1的產(chǎn)生，減少了其濃度的增加。測(cè)試實(shí)施例2：測(cè)試化合物在大鼠中腦動(dòng)脈閉塞-再灌注模型中對(duì)腦梗塞體積的作用測(cè)試實(shí)施例1中的大鼠每組取10只小鼠，處死取大腦，切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2％ttc溶液中，37℃孵育30分鐘。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。數(shù)碼相機(jī)拍攝記錄，用計(jì)算機(jī)圖像處理測(cè)出各區(qū)面積，并計(jì)算梗塞區(qū)占整個(gè)腦組織的百分比(％)。結(jié)果示于以下表2中：表2：試驗(yàn)組大鼠中腦動(dòng)脈閉塞-再灌注后的腦梗塞體積注：與模型組相比，**p<0.01上述試驗(yàn)結(jié)果表明：假手術(shù)組小鼠腦組織無梗塞，模型組大鼠腦組織有明顯梗塞現(xiàn)象，表明腦梗塞大鼠建模成功。而本發(fā)明化合物1-6均能夠顯著減少腦梗塞的體積，證明其對(duì)腦梗塞具有很好的治療作用。以上描述了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，然其并非用以限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)在此公開的實(shí)施方案可進(jìn)行并不偏離本發(fā)明范疇和精神的改進(jìn)和變化。當(dāng)前第1頁(yè)12