本發(fā)明涉及天然化合物提取分離領(lǐng)域，且特別涉及炔苷類化合物及其提取分離方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

聚炔類成分是一種較為特殊的天然化合物，主要分布在菊科、桔梗科、五加科、傘形科和海桐花科等植物組織中，其在抗微生物、細(xì)胞毒及抗腫瘤活性等方面具有良好的生物活性。現(xiàn)有的炔苷類化合物的種類有限，含量很低；并且現(xiàn)有的萃取方法耗時(shí)，溶劑消耗大，回收溶劑繁瑣。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種炔苷類化合物，其在抗微生物、細(xì)胞毒以及抗腫瘤活性等方面具有良好的生物活性，能夠被應(yīng)用于制備相關(guān)的藥物等。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種炔苷類化合物在制備抗生物毒性藥物中的應(yīng)用，其能夠發(fā)揮出突出的抗微生物、抗細(xì)胞毒以及抗腫瘤等作用。

本發(fā)明還有一目的在于提供一種炔苷類化合物的提取分離方法，此提取分離方法能夠簡單、高效、快速提純桔梗中的炔苷類化合物，以便提取分離出更多的炔苷類化合物，滿足市場對(duì)炔苷類化合物的需求量。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。

本發(fā)明提出一種炔苷類化合物，結(jié)構(gòu)通式為

其中r為cis-丙烯基或1-丙炔基。

本發(fā)明提出一種炔苷類化合物在制備抗生物毒性藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提出一種上述炔苷類化合物的提取分離方法，包括：

將桔梗的粉末，用甲醇超聲提取后，將提取液第一次濃縮得第一浸膏；

將第一浸膏加水溶解并加入到吸附樹脂用乙醇進(jìn)行梯度洗脫，將梯度洗脫后的洗脫液第二次濃縮得第二浸膏；

將第二浸膏用體積比為1:28-32:1:28-32的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的溶劑系統(tǒng)進(jìn)行逆流色譜分離純化，收集聚炔類成分流出液；

將聚炔類成分流出液第三次濃縮后用乙腈-水作流動(dòng)相，應(yīng)用高效液相色譜進(jìn)行制備。

本發(fā)明實(shí)施例的炔苷類化合物及其提取分離方法和應(yīng)用的有益效果是：該炔苷類化合物具有抗微生物、細(xì)胞毒以及抗腫瘤等良好生物活性，并能夠被應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物；炔苷類化合物的提取分離方法能夠簡單、高效、快速提純桔梗中的炔苷類化合物，以便提取分離出更多的炔苷類化合物，滿足市場對(duì)炔苷類化合物的需求量。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的炔苷類化合物及其提取分離方法和應(yīng)用進(jìn)行具體說明。

本發(fā)明的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)通式為：

上式r為cis-丙烯基或1-丙炔基。

該化合物能夠被應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物當(dāng)中，其中，抗生物毒性藥物可以是抗細(xì)胞毒性藥物，上述細(xì)胞可以是細(xì)菌、常態(tài)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等；進(jìn)一步地，上述抗細(xì)胞毒性藥物可以是抗微生物藥物和抗腫瘤等藥物，即上述炔苷類化合物具有良好的抗微生物、細(xì)胞毒、抗腫瘤等生物活性。

具體地，上述炔苷類化合物可以從桔梗中分離純化而得，其具體提取分離方法如下：

將桔梗粉碎為粉末，準(zhǔn)備進(jìn)行提取步驟。作為優(yōu)選，可以對(duì)桔梗粉末進(jìn)行過篩處理，過篩后的桔梗粉末的粒度為200-300目，在進(jìn)行提取時(shí)，桔梗粉末越細(xì)膩，對(duì)有效物質(zhì)的提取越多，即提高提取時(shí)對(duì)桔梗的利用率。

將桔梗的粉末用甲醇進(jìn)行超聲提取，并對(duì)提取液進(jìn)行第一次濃縮，得到第一浸膏。

具體地，上述超聲提取是指利用超聲波振動(dòng)的方法進(jìn)行提取的新工藝，使溶劑快速地進(jìn)入固體物質(zhì)中，將固體物質(zhì)中所含的有機(jī)成分盡可能完全地溶于溶劑之中。超聲提取可以強(qiáng)化提取分離過程，可以有效地提高提取分離率，縮短提取時(shí)間、節(jié)約成本，還可以提高產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量。

進(jìn)一步地，用6-10倍量的甲醇對(duì)上述桔梗粉末進(jìn)行提取。采用6-10倍量的甲醇進(jìn)行提取，能夠盡可能的提高桔梗中炔苷類化合物的提取率。

更進(jìn)一步地，先用10倍量的甲醇對(duì)桔梗粉末提取第一次，提取的時(shí)間為0.3-0.7h，提取后過濾，收集濾液；再用8倍量的甲醇對(duì)經(jīng)過一次提取的桔梗粉末提取第二次，提取時(shí)間為0.3-0.7h，提取后過濾收集濾液；最后，用6倍量的甲醇對(duì)經(jīng)過二次提取的桔梗粉末提取第三次，提取時(shí)間為0.3-0.7h，提取后過濾，收集濾液。

用不同倍量的甲醇對(duì)桔梗粉末進(jìn)行分次提取，能夠使桔梗中的炔苷類化合物更加充分的被提取出來，即充分提高桔梗中有機(jī)物的提取率，以增加炔苷類化合物的提取分離量。

具體地，前述的第一次濃縮例如可以采用減壓濃縮。減壓濃縮通常是在較低的溫度下進(jìn)行，可以有效地避免濾液中的有效成分不耐高溫，避免了不穩(wěn)定成分被破壞和損失。而且，減壓濃縮雖然濃縮溫度低，但其蒸發(fā)的速率快，可以加快炔苷類化合物提純分離的速率。

將前述第一浸膏加水溶解后加入吸附樹脂用乙醇進(jìn)行梯度洗脫，具體地，先以水和體積分?jǐn)?shù)為20％-40％的乙醇作為洗脫液進(jìn)行第一次洗脫，再以體積分?jǐn)?shù)為50％-60％的乙醇作為洗脫液進(jìn)行第二次洗脫，最后對(duì)第二次洗脫后的洗脫液進(jìn)行第二次濃縮，得到第二浸膏。

上述第一次洗脫的目的在于將第一浸膏中的糖、無機(jī)鹽等物質(zhì)除去，以提高炔苷類提取分離物的純度；第二次洗脫的目的在于將第一浸膏中的聚炔類成分富集于洗脫液中，以便于后續(xù)步驟中進(jìn)一步的分離純化。

作為優(yōu)選，第一次洗脫時(shí)的乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，乙醇在此體積分?jǐn)?shù)下，能夠?qū)⒌谝唤嘀械奶?、無機(jī)鹽等雜質(zhì)充分除去，同時(shí)又能夠減少提純分離的溶劑消耗；第二次洗脫時(shí)的乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％，乙醇在此體積分?jǐn)?shù)下，能夠?qū)⒌谝唤嘀械木廴差惓煞殖浞值母患诘诙蜗疵摰南疵撘寒?dāng)中，進(jìn)一步提高聚炔類成分的富集量，同時(shí)進(jìn)一步減少了提純分離時(shí)溶劑的消耗。

進(jìn)一步優(yōu)選地，上述的吸附樹脂為ab-8弱極性大孔樹脂，且以8倍柱體積的水和體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇進(jìn)行洗脫。ab-8弱極性大孔樹脂對(duì)于雜質(zhì)的吸附效果突出，能夠快速、準(zhǔn)確的吸附第一浸膏中的雜質(zhì)，提高聚炔類成分的純度。

進(jìn)一步地，上述的第二次濃縮可以采用和第一次濃縮相同的減壓濃縮，有利于避免洗脫液中的聚炔類成分在高溫中分解和損失。

將第二浸膏分離純化后收集聚炔類成分流出液。

具體地，第二浸膏的分離純化采用逆流色譜進(jìn)行；優(yōu)選地，逆流色譜分離純化按照以下方式進(jìn)行為：用體積比為1:28-32:1:28-32的正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的溶劑系統(tǒng)，在流速為4-6ml/min，轉(zhuǎn)速為800r/s條件下進(jìn)行分離。經(jīng)過逆流色譜分離純化后能夠進(jìn)一步的去除第二浸膏中的雜質(zhì)，并可以按照色譜圖接取所需的聚炔類成分。采用逆流色譜對(duì)炔苷類化合物進(jìn)行分離純化，消除了樣品在固相載體上的不可逆吸附和降解造成的損失，故具有高回收率；多次進(jìn)樣，其分離過程都保持很穩(wěn)定，而且重現(xiàn)性好；逆流色譜能夠?qū)崿F(xiàn)梯度洗脫和反相洗脫，亦能進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣，提純產(chǎn)品的純度大，制備量大。

將經(jīng)過逆流色譜分離提純的聚炔類成分流出液第三次濃縮后，進(jìn)行液相制備，用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫(制備分離)，根據(jù)液相色譜圖接取目標(biāo)組分后，待洗脫液揮發(fā)后，即得本發(fā)明的炔苷類化合物。

利用高效液相色譜進(jìn)行上述制備分離的具體條件如下：以水為流動(dòng)相a，以乙腈為流動(dòng)相b；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；進(jìn)一步地，高效液相色譜制備分離的檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl。在此梯度洗脫條件下，能夠進(jìn)一步除去目標(biāo)組分中的雜質(zhì)，并且提高目標(biāo)組分的提出率。需要說明的是，本發(fā)明中涉及的水可以為蒸餾水，也可以是去離子水、雙蒸水等。需要說明的是，例如：0-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％，具體是指，在梯度洗脫進(jìn)行0-5min時(shí)，乙腈的體積分?jǐn)?shù)從0％增加到5％，梯度洗脫進(jìn)行到5-15min時(shí)，乙腈的體積分?jǐn)?shù)從5％增加到20％，后續(xù)梯度洗脫程序以此類推。

將聚炔類成分洗脫液進(jìn)行濃縮干燥，對(duì)得到的炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁的鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。表1為在400mhz，以氘代甲醇所得的核磁氫譜數(shù)據(jù)，表2為在100mhz，以氘代甲醇為溶劑所得的核磁碳譜數(shù)據(jù)，經(jīng)分析表明，由本發(fā)明的提取分離方法制備出的化合物是前述的炔苷類化合物，如下所示：

桔梗炔苷a的分子式為c20h26o8，分子量為394

桔梗炔苷b的分子式為c20h28o8，分子量為396

黨參炔苷的分子式為c20h28o8，分子量為396

表1三種化合物的氫譜數(shù)據(jù)

表2三種化合物的氫譜數(shù)據(jù)

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明炔苷類化合物及其提取分離方法和應(yīng)用作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

取過200目篩的桔梗粉末，依次以10、8、6倍量的甲醇超聲提取，每次提取的時(shí)間均為0.5h，將每次提取的液體過濾后合并得提取液，減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以8倍柱體積的水和體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為50％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:31:1:31,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速5ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

實(shí)施例2

取過300目篩的桔梗粉末，依次以9、7倍量的甲醇超聲提取，每次提取的時(shí)間均為0.7h，將每次提取的液體過濾后合并得提取液，減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以體積分?jǐn)?shù)為40％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:28:1:32,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速4ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

實(shí)施例3

取過250目篩的桔梗粉末，依次以10、8倍量的甲醇超聲提取，每次提取的時(shí)間均為0.3h，將每次提取的液體過濾后合并得提取液，減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以體積分?jǐn)?shù)為20％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為55％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:32:1:28,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速6ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

實(shí)施例4

取過220目篩的桔梗粉末，以甲醇超聲提取，提取的時(shí)間為0.6h，將提取液過濾、減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以8倍柱體積的水和體積分?jǐn)?shù)為32％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為52％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:30:1:30,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速5ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

實(shí)施例5

取過270目篩的桔梗粉末，分別以10、9、8倍量的甲醇超聲提取，提取的時(shí)間依次為0.7h、0.5h、0.3h，將每次提取的液體過濾后合并得提取液，減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以6倍柱體積的水和體積分?jǐn)?shù)為28％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為56％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:29:1:29,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速5ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

實(shí)施例6

取過230目篩的桔梗粉末，依次以10、8、6倍量的甲醇超聲提取，每次提取的時(shí)間均為0.5h，將每次提取的液體過濾后合并的提取液，減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以8倍柱體積的水和體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為50％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:30:1:30,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速5ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

實(shí)施例7

取過270目篩的桔梗粉末，依次以10、8、6倍量的甲醇超聲提取，每次提取的時(shí)間均為0.6h，將每次提取的液體過濾后合并得提取液，減壓濃縮得第一浸膏；用蒸餾水溶解第一浸膏，將得到的溶液用ab-8弱極性大孔樹脂進(jìn)行吸附，先以體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇進(jìn)行第一次洗脫除去溶液當(dāng)中的部分糖和無機(jī)鹽等物質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為50％的乙醇進(jìn)行第二次洗脫富集聚炔類成分，將第二次洗脫后的洗脫液第二次濃縮，得第二浸膏；用逆流色譜以正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1:31:1:31,v/v/v/v)為溶劑系統(tǒng)，流速5ml/min，轉(zhuǎn)速800r/s，分離純化第二浸膏，并根據(jù)逆流色譜圖接取聚炔類成分流出液；將該聚炔類成分流出液減壓濃縮后，上液相用乙腈-水作流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的條件為：流動(dòng)相a為水，流動(dòng)相b為乙腈，檢測波長為254nm，流速1ml/min，進(jìn)樣體積20μl；梯度洗脫程序?yàn)椋?-5min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為0％→5％；5-15min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5％→20％；15-30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為20→30％；30-35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30→100％；35-40min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為100％；根據(jù)色譜接取目標(biāo)組分，待其中的洗脫液揮發(fā)，即得炔苷類化合物，對(duì)上述炔苷類化合物進(jìn)行質(zhì)譜和核磁鑒定，即通過質(zhì)譜確定得到的炔苷類化合物的分子量，通過核磁確定得到的炔苷類化合物的結(jié)構(gòu)。經(jīng)分析，制得的炔苷類化合物分別為：桔梗炔苷a，桔梗炔苷b和黨參炔苷，具體的分子量和分子式如前述具體實(shí)施方式所示。上述炔苷類化合物均可應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物。

綜上所述，本發(fā)明實(shí)施例的炔苷類化合物的提取分離方法，能夠簡單、高效、快速地制備出炔苷類化合物，其中桔梗炔苷a和桔梗炔苷b為首次分離得到的新化合物；本發(fā)明的提取分離方法分離提純出的炔苷類化合物具有良好的抗微生物、細(xì)胞毒及抗腫瘤活性等生物活性，可以將該炔苷類化合物應(yīng)用于制備抗生物毒性藥物，例如：抗細(xì)胞毒性藥物，具體地，細(xì)胞又包括細(xì)菌、常態(tài)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等，進(jìn)而，該炔苷類化合物可以應(yīng)用于制備抗微生物藥物、抗細(xì)胞毒藥物以及抗腫瘤藥物等。

以上所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。