本發(fā)明屬于藥物提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說是一種丹參提取液的制備方法。
背景技術(shù)：
：丹參素是從唇形科植物丹參中分離出的一種活性成分，具有擴(kuò)張冠狀動脈，控制血小板聚集、提高微循環(huán)等藥理作用，在臨床上以丹參素為主成分的注射液治療冠心病、心絞痛等缺血性心臟疾病，起效快、生物利用度高，具有極高臨床價值。目前丹參素主要來源于植物藥丹參，游離丹參素在丹參藥材中含量低，提取轉(zhuǎn)化率較低，簡單水提工藝得到的丹參提取物成分復(fù)雜，水溶物有丹參酸a、b、c，丹參酸a又稱丹參素，丹參酸b是由3分子的丹參素和1分子的咖啡酸縮合形成的，就是丹參酚酸b；丹參酸c是2分子丹參素的縮合物；迷迭香酸，原兒茶醛，咖啡酸等。其中丹酚酸b以不同鹽形式存在(k+、ca+、na+、nh4+等復(fù)合形式)，煎煮、濃縮過程少部分水解生成紫草酸和丹參素。自然存在丹參藥材中丹參素含量很低，無法直接從丹參中提取分離得到大量丹參素，不利于丹參素類制劑生產(chǎn)和開發(fā)，丹參藥材中含量較高的水溶性成分丹酚酸類物質(zhì)(迷迭香酸、丹酚酸b)具有較強(qiáng)的刺激性，在臨床中會刺激用藥部，使病患產(chǎn)生刺激感。在丹參提取液制備中將迷迭香酸、丹酚酸b采用適當(dāng)?shù)墓に嚰夹g(shù)轉(zhuǎn)化為刺激性很小的丹參素，能有效降低丹參川芎嗪注射液臨床使用的刺激性，提高本品臨床使用的順應(yīng)性和安全性?，F(xiàn)有丹參藥材提取過程中轉(zhuǎn)化丹參素方法較復(fù)雜，提取時間長，有機(jī)溶劑利用多，設(shè)備要求高，轉(zhuǎn)化時間長，轉(zhuǎn)化的丹參素收率低，丹酚酸類物質(zhì)轉(zhuǎn)化不徹底，且有機(jī)溶劑殘留多，制備丹參素類制劑穩(wěn)定性和安全性不高。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種以丹參素為目標(biāo)物的丹參提取液的制備方法，以解決現(xiàn)有丹參藥材提取過程中轉(zhuǎn)化丹參素方法較復(fù)雜，提取時間長，有機(jī)溶劑利用多，設(shè)備要求高，轉(zhuǎn)化時間長，轉(zhuǎn)化的丹參素收率低，丹酚酸類物質(zhì)轉(zhuǎn)化不徹底，且有機(jī)溶劑殘留多，制備丹參素類制劑穩(wěn)定性和安全性不高的問題。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，包括下列步驟：(一)、取經(jīng)前處理過的丹參藥材，加入8～10倍量體積水煎煮2～3次，每次1.5h～2h，合并煎煮液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.03，加入20％石灰液調(diào)節(jié)ph值11，靜置1～2小時，加入20％硫酸溶液調(diào)節(jié)ph值5.0，靜置24小時，離心，收集離心上清液，加熱濃縮至相對密度1.20，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)55～65％，攪拌15～25分鐘后冷藏靜置24小時，醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.15，繼續(xù)加乙醇使含醇量達(dá)65～75％，攪拌15～25分鐘后冷藏靜置24小時；(二)、二次醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.05，加入濃縮液10倍量體積水，攪拌15～25分鐘冷藏靜置24小時，水沉液過濾；(三)、過濾液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值2～4，靜置1～2小時，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值8～10，得到堿性提取液，(四)、取堿性提取液在60～100度條件下加熱水解30min-105min后，得到水解后溶液，水解后溶液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值至4.5-6.5，得最終丹參提取液。本發(fā)明步驟(四)中取堿性提取液在100度條件下加熱水解60min后，得到水解后溶液，水解后溶液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值至5.5，得最終丹參提取液。本發(fā)明利用水提石硫法處理后，加以醇沉水沉處理等手段，除去提取液中大量蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)，后續(xù)在堿性條件下于適當(dāng)溫度下水解，制得含高濃度丹參素的丹參提取物，用于制備含丹參素的注射液或其他劑型藥品。本發(fā)明制備丹參提取液的方法，可以大幅度地提高丹酚酸類物質(zhì)到丹參素的轉(zhuǎn)化率，實現(xiàn)提取物中以丹參素為主要成分的目標(biāo)物，且提取過程簡單易操作，有機(jī)溶劑用量少，設(shè)備要求簡單，同時去除提取液中大量蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)，制備的丹參提取物丹參素含量高，且易于存儲，存儲過程中丹參素含量穩(wěn)定，為制備丹參素類制劑提供有效的原材料。具體實施方式實施例1(一)、取經(jīng)前處理過的丹參藥材，加入8倍量、10倍量體積水煎煮2次，每次1.5h、2h，合并煎煮液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.03，加入20％石灰液調(diào)節(jié)ph值11，靜置1小時，加入20％硫酸溶液調(diào)節(jié)ph值5.0，靜置24小時，離心，收集離心上清液，加熱濃縮至相對密度1.20，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)55％，攪拌15分鐘后冷藏靜置24小時，醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.15，繼續(xù)加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌15分鐘后冷藏靜置24小時；(二)、二次醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.05，加入濃縮液10倍量體積水，攪拌15分鐘冷藏靜置24小時，水沉液過濾；(三)、過濾液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值2，靜置1小時，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值8，得到堿性提取液；(四)、取堿性提取液在60度條件下加熱水解30min后，得到水解后溶液，水解后溶液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值至4.5，得最終丹參提取液。實施例2(一)、取經(jīng)前處理過的丹參藥材，加入8倍量、9倍量、10倍量體積水煎煮3次，每次1.5h、1.5h、2h，合并煎煮液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.03，加入20％石灰液調(diào)節(jié)ph值11，靜置1.5小時，加入20％硫酸溶液調(diào)節(jié)ph值5.0，靜置24小時，離心，收集離心上清液，加熱濃縮至相對密度1.20，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)60％，攪拌20分鐘后冷藏靜置24小時，醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.15，繼續(xù)加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪拌20分鐘后冷藏靜置24小時；(二)、二次醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.05，加入濃縮液10倍量體積水，攪拌20分鐘冷藏靜置24小時，水沉液過濾；(三)、過濾液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值3，靜置1.5小時，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值9，得到堿性提取液，(四)、取堿性提取液在75度條件下加熱水解75min后，得到水解后溶液，水解后溶液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值至5.5，得最終丹參提取液。實施例3(一)、取經(jīng)前處理過的丹參藥材，加入8倍量、10倍量、10倍量體積水煎煮3次，每次1.5h、2h、2h，合并煎煮液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.03，加入20％石灰液調(diào)節(jié)ph值11，靜置2小時，加入20％硫酸溶液調(diào)節(jié)ph值5.0，靜置24小時，離心，收集離心上清液，加熱濃縮至相對密度1.20，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)65％，攪拌25分鐘后冷藏靜置24小時，醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.15，繼續(xù)加乙醇使含醇量達(dá)75％，攪拌25分鐘后冷藏靜置24小時；(二)、二次醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.05，加入濃縮液10倍量體積水，攪拌25分鐘冷藏靜置24小時，水沉液過濾；(三)、過濾液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值4，靜置2小時，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值10，得到堿性提取液，(四)、取堿性提取液在100度條件下加熱水解105min后，得到水解后溶液，水解后溶液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值至6.5，得最終丹參提取液。經(jīng)hplc法測定表明，制備的丹參提取液中丹參素含量大于8mg/ml。實施例4(一)、取經(jīng)前處理過的丹參藥材，加入8倍量、9倍量、10倍量體積水煎煮3次，每次1.5h、1.5h、2h，合并煎煮液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.03，加入20％石灰液調(diào)節(jié)ph值11，靜置1.5小時，加入20％硫酸溶液調(diào)節(jié)ph值5.0，靜置24小時，離心，收集離心上清液，加熱濃縮至相對密度1.20，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)60％，攪拌20分鐘后冷藏靜置24小時，醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.15，繼續(xù)加乙醇使含醇量達(dá)70％，攪拌20分鐘后冷藏靜置24小時；(二)、二次醇沉液過濾后加熱濃縮至相對密度1.05，加入濃縮液10倍量體積水，攪拌20分鐘冷藏靜置24小時，水沉液過濾；(三)、過濾液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值3，靜置1.5小時，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值9，得到堿性提取液，(四)、取堿性提取液在100度條件下加熱水解60min后，得到水解后溶液，水解后溶液用10％鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph值至5.5，得最終丹參提取液。下面通過實驗例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。實驗例1堿性提取液在轉(zhuǎn)化過程中丹參素含量隨著溫度和時間的增加的變化情況，以下為步驟(三)得到的堿性提取液。1、取堿性提取液100ml在60度條件下加熱水解30min-105min后，補(bǔ)水至100ml，經(jīng)hplc法檢測溶液中丹參素和酚酸物含量，結(jié)果見表1：2、取堿性提取液100ml在75度條件下加熱水解30min-105min后，補(bǔ)水至100ml，經(jīng)hplc法檢測溶液中丹參素和酚酸物含量，結(jié)果見表2：3、取堿性提取液100ml在90度條件下加熱水解30min-105min后，補(bǔ)水至100ml，經(jīng)hplc法檢測溶液中丹參素和酚酸物含量結(jié)果見表3：4、取堿性提取液100ml在100度條件下加熱水解30min-105min后，補(bǔ)水至100ml，經(jīng)hplc法檢測溶液中丹參素和酚酸物含量，結(jié)果見表4：通過以上數(shù)據(jù)表明，堿性提取液在轉(zhuǎn)化過程中隨著溫度和時間的增加，丹參素轉(zhuǎn)化率不斷提高，在60度-90度條件下，轉(zhuǎn)化最快，90度-100度也在繼續(xù)轉(zhuǎn)化，但是轉(zhuǎn)化速度明顯下降，丹參素、丹酚酸類物質(zhì)含量趨于穩(wěn)定，而從時間角度考慮，在30min-60min時間段，是快速轉(zhuǎn)化階段，60min-105min時間段，轉(zhuǎn)化趨于平穩(wěn)，從設(shè)備利用消耗方面考慮，本發(fā)明轉(zhuǎn)化溫度優(yōu)選100度，轉(zhuǎn)化時間為60min，轉(zhuǎn)化后的丹參提取物用10％鹽酸調(diào)節(jié)ph值5.5，制得最終丹參提取液。實驗例2存儲過程中丹參素含量測定，上述實施例制備的丹參提取液在2-8度條件下放置3個月，提取液外觀性狀好，丹參素含量穩(wěn)定，結(jié)果見下表5：時間以0月丹參素含量為100％計，測定各時間丹參素含量0月100％1月101％2月100.8％3月100.3％當(dāng)前第1頁12