(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從莪術(shù)油中分離β-欖香烯的方法，具體涉及一種利用高速逆流色譜(hsccc)從莪術(shù)油中分離β-欖香烯的方法。

(二)技術(shù)背景

β-欖香烯是存在于莪術(shù)油中的一種倍半萜類物質(zhì)，是我國(guó)首先從姜科植物溫莪術(shù)(拉丁學(xué)名：curcumaerhizoma)中提取的具有抗癌活性的天然抗癌藥物。與傳統(tǒng)抗癌藥物比具有抗癌譜廣、毒副作用小、療效確切等優(yōu)點(diǎn)。目前已廣泛用于肝癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、消化道腫瘤、膀胱癌、腦腫瘤以及其它淺表性腫瘤的臨床治療。β-欖香烯，英文名β-elemene，分子式c15h24，分子量204.355，分子結(jié)構(gòu)如下：

莪術(shù)油作為中藥莪術(shù)的主要活性成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎、抗早孕、降酶等作用。β-欖香烯的分離一般采用減壓精餾、硅膠層析，但這個(gè)方法需經(jīng)過兩次精餾以及后續(xù)經(jīng)過柱層析除去雜質(zhì)才能得到高純度的β-欖香烯。逆流色譜是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)，該技術(shù)可避免因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性，與普通液相色譜相比其樣品的制備量大、維護(hù)費(fèi)用低，從而成為一種理想的制備分離手段。利用倍半萜類化合物可以和硝酸銀形成π配位化合物的特性，通過在高速逆流色譜的流動(dòng)相中加入銀離子，經(jīng)過一次逆流分離得到高純度的β-欖香烯。

(三)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種快速分離β-欖香烯的方法，本發(fā)明根據(jù)硝酸銀與含有3個(gè)不飽和雙鍵的β-欖香烯可以形成π配位化合物的特性，利用高速逆流色譜法快速地將β-欖香烯從莪術(shù)油中分離出來(lái)，具有更強(qiáng)的目的性，快捷高效。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種從莪術(shù)油中分離β-欖香烯的方法，所述方法為：

將正己烷、甲醇、水按體積比2：0.3～1.7：1.7～0.3充分混合后靜置，液體分層分別得到上相和下相；取下相添加硝酸銀作為高速逆流色譜的固定相，上相作為流動(dòng)相；稱取莪術(shù)油，用上相和下相體積比1：1的混合液溶解后進(jìn)樣，經(jīng)高速逆流色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，收集含β-欖香烯的流出液(tlc檢測(cè)收集)，蒸除溶劑并干燥，即得β-欖香烯產(chǎn)品(純度在80％～99％)。

所述正己烷、甲醇、水的體積比優(yōu)選2：1.5：0.5。

所述硝酸銀的添加量以下相的體積計(jì)為0.05～0.3mol/l，優(yōu)選0.1～0.25mol/l。

所述上相和下相體積比1：1的混合液的體積用量以莪術(shù)油的質(zhì)量計(jì)為10～200ml/g，優(yōu)選15～25ml/g。

具體的，所述高速逆流色譜分離的操作方法為：

先將固定相充滿高速逆流色譜儀的多層線圈分離柱，設(shè)定高速逆流色譜儀柱溫15～30℃(優(yōu)選20℃)，在500～1000r/min(優(yōu)選800r/min)轉(zhuǎn)速下，以0.5～5ml/min(優(yōu)選2ml/min)的流速注入流動(dòng)相，以波長(zhǎng)200～300nm(優(yōu)選210～280nm)的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，當(dāng)柱尾端有流動(dòng)相流出時(shí)進(jìn)樣，收集含β-欖香烯的流出液(tlc檢測(cè)收集)，蒸除溶劑并干燥，即得β-欖香烯產(chǎn)品。

與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于：本發(fā)明分離方法操作簡(jiǎn)便，高效快捷，溶劑消耗少；硝酸銀對(duì)β-欖香烯具有π配位作用，可以選擇性地從莪術(shù)油中分離出來(lái)，分離效果優(yōu)異。

(四)附圖說明

圖1：實(shí)施例1的高速逆流色譜圖；

圖2：實(shí)施例2的高速逆流色譜圖；

圖3：實(shí)施例3的高速逆流色譜圖；

圖4：逆流色譜2號(hào)峰的gc-ms圖譜；

圖5：逆流色譜2號(hào)峰的質(zhì)譜圖。

(五)具體實(shí)施方式

下面以具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。

下述實(shí)施例中，采用的高速逆流色譜型號(hào)為：hsccc-tbe200v

實(shí)施例1：

按照溶劑體系正己烷-甲醇-水(2:1.5:0.5,v/v/v)在分液漏斗中混合，充分振蕩，靜止，臨用前分層，在下相中加入0.2mol/l硝酸銀選為固定相，上相選為流動(dòng)相；柱溫設(shè)定為20℃，先用恒流泵將溶劑體系的下相打入hsccc的聚四氟乙烯螺旋管，直至注滿整個(gè)管子，然后開啟hsccc，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為802.5prm，同時(shí)將流動(dòng)相以2.0ml/min流速?gòu)闹氖锥吮萌雋sccc分離柱；等到柱尾端流出流動(dòng)相時(shí)，表明hsccc中兩相已達(dá)到平衡，通過六通閥將樣品注入hsccc(502.3mg莪術(shù)油樣品溶解于8ml等體積混合的上下相溶劑中)；以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出液，見圖1，圖1中陰影部分為β-欖香烯，收集含β-欖香烯的流出液(tlc檢測(cè)收集)，蒸除溶劑并干燥，得β-欖香烯28.3mg，純度為95％。

實(shí)施例2：

按照溶劑體系正己烷-甲醇-水(2:1.5:0.5,v/v/v)在分液漏斗中混合，充分振蕩，靜止，臨用前分層，在下相中加入0.15mol/l硝酸銀選為固定相，上相選為流動(dòng)相；柱溫設(shè)定為20℃，先用恒流泵將溶劑體系的下相打入hsccc的聚四氟乙烯螺旋管，直至注滿整個(gè)管子，然后開啟hsccc，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800.4prm，同時(shí)將流動(dòng)相以2.0ml/min流速?gòu)闹氖锥吮萌雋sccc分離柱；等到柱尾端流出流動(dòng)相時(shí)，表明hsccc中兩相已達(dá)到平衡，通過六通閥將樣品注入hsccc(440.3mg莪術(shù)油樣品溶解于8ml等體積混合的上下相溶劑中)；以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出液，見圖2，圖2中陰影部分為β-欖香烯，收集含β-欖香烯的流出液(tlc檢測(cè)收集)，蒸除溶劑并干燥，將對(duì)應(yīng)峰的洗脫液的溶劑揮干，得β-欖香烯21.5mg，純度為96％。

實(shí)施例3：

按照溶劑體系正己烷-甲醇-水(2:1.5:0.5,v/v/v)在分液漏斗中混合，充分振蕩，靜止，臨用前分層，在下相中加入0.15mol/l硝酸銀選為固定相，上相選為流動(dòng)相；柱溫設(shè)定為20℃，先用恒流泵將溶劑體系的下相打入hsccc的聚四氟乙烯螺旋管，直至注滿整個(gè)管子，然后開啟hsccc，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800.4prm，同時(shí)將流動(dòng)相以2.0ml/min流速?gòu)闹氖锥吮萌雋sccc分離柱；等到柱尾端流出流動(dòng)相時(shí)，表明hsccc中兩相已達(dá)到平衡，通過六通閥將樣品注入hsccc(545.4mg過柱后莪術(shù)油樣品溶解于8ml等體積混合的上下相溶劑中)；以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出液，見圖3，圖3中陰影部分為β-欖香烯，收集含β-欖香烯的流出液(tlc檢測(cè)收集)，蒸除溶劑并干燥，得β-欖香烯147.6mg，純度為99％。所得β-欖香烯產(chǎn)品的gc-ms圖見圖4、圖5，圖4為β-欖香烯的總離子流圖，圖5為質(zhì)譜圖。

對(duì)比例

采用真空間歇精餾方法對(duì)從莪術(shù)精油提取欖香烯的精制過程進(jìn)行了研究，得到適宜的工藝條件。需采用二次精餾，一次精餾回流比1.0～3.0，收集53～63℃餾分，作為二次精餾原料。二次精餾回流比3.0～7.0，收集55～58℃餾分。產(chǎn)品欖香烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為88.0％，收率為66.0％。

通過對(duì)比可知，以硝酸銀作為選擇性試劑采用高速逆流色譜法從莪術(shù)油中分離得到的β-欖香烯純度更高，操作時(shí)間更短。