本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體涉及一種內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌固體菌劑的生產(chǎn)方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：進(jìn)入21世紀(jì)后，基于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染和農(nóng)藥殘留等問(wèn)題，隨著“公共植保，綠色植?！崩砟畹奶岢龊蛯?shí)踐，生物農(nóng)藥研發(fā)成為我國(guó)生物產(chǎn)業(yè)、農(nóng)業(yè)科研與應(yīng)用的熱點(diǎn)，被列為國(guó)家中長(zhǎng)期科技發(fā)展規(guī)劃的重大研究領(lǐng)域與方向，綠色植保已經(jīng)成為國(guó)家發(fā)展的重要需求與必然趨勢(shì)。其中尤以植物內(nèi)生細(xì)菌作為拮抗菌的研究得到眾多學(xué)者的關(guān)注。植物內(nèi)生細(xì)菌是指生活在植物體內(nèi)，但對(duì)植物沒(méi)有任何實(shí)質(zhì)性傷害的細(xì)菌，其通過(guò)固氮、溶磷和產(chǎn)IAA等生物學(xué)功能提高宿主的抗旱和抗寒等抗逆能力，特別是抑菌功能是其成為生防菌資源的有力支撐。植物內(nèi)生細(xì)菌也可以通過(guò)分泌抑菌物質(zhì)、與病原菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)空間及誘導(dǎo)植物獲得抗病性阻止或降低病原菌對(duì)植物的侵染或造成的危害。以?xún)?nèi)生細(xì)菌為菌種資源研制的微生物農(nóng)藥不易產(chǎn)生抗藥性，不傷害天敵，且能利用農(nóng)副產(chǎn)品等廣泛生產(chǎn)，更重要的是內(nèi)生細(xì)菌可以定殖于作物體內(nèi)，甚至可以通過(guò)種子(苗木)傳播于下一代，長(zhǎng)期起作用，省時(shí)省力，高效，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)后為生產(chǎn)綠色或無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品提供了一個(gè)新的途徑。特別是生物農(nóng)藥多利用農(nóng)副產(chǎn)品或農(nóng)業(yè)廢棄物等發(fā)酵生產(chǎn)，一方面生產(chǎn)的生物農(nóng)藥應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，減少化學(xué)農(nóng)藥的負(fù)面問(wèn)題，提高農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量和品質(zhì)，另一方面綜合利用農(nóng)副產(chǎn)品及農(nóng)業(yè)廢棄物，提高其附加值。微生物肥料作為一種新型肥料，施入土壤后，通過(guò)其特定菌株的快速繁殖，能固定大氣中的氮素、釋放土壤中固定態(tài)的磷、鉀元素，使得環(huán)境的養(yǎng)分潛力得以充分發(fā)揮，并為作物生長(zhǎng)營(yíng)造一個(gè)良好的土壤微生物環(huán)境，在減少化肥用量、降低環(huán)境污染、提高農(nóng)作物品質(zhì)等方面具有重要意義。尤其是集抑菌、固氮、解磷、解鉀和作物生長(zhǎng)素于一身的復(fù)合微生物肥料的研發(fā)，在農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展中有舉足輕重的作用。黃瓜、西瓜、甜瓜和辣椒等植物的枯萎病發(fā)生普遍，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中帶大巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且該病的病原菌在土壤中可以長(zhǎng)期存活，一般化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)入土壤后受土壤理化性質(zhì)影響效果較差，而效果較好的農(nóng)藥又殘效期長(zhǎng)，影響農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留量和質(zhì)量安全，在目前國(guó)家提出“減藥減肥”的大方針下，尋找化學(xué)農(nóng)藥的替代品是當(dāng)務(wù)之急，而微生物農(nóng)藥和微生物肥料則是可選項(xiàng)之一。CN104152385A公開(kāi)了一株莫哈韋芽孢桿菌菌株、微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用，公開(kāi)了莫哈韋芽孢桿菌對(duì)馬鈴薯壞疽病菌等的抑制率及對(duì)馬鈴薯的促生效果，特別是報(bào)道了莫哈韋芽孢桿菌的液體發(fā)酵條件。但液體發(fā)酵菌液存在貯存困難、不易運(yùn)輸和二次發(fā)酵等問(wèn)題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌固體菌劑的生產(chǎn)方法，以解決現(xiàn)有液體發(fā)酵菌液存在貯存困難、不易運(yùn)輸和二次發(fā)酵的問(wèn)題。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌固體菌劑的應(yīng)用。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌固體菌劑的生產(chǎn)方法，包括如下步驟：將內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)菌株接入至固體基質(zhì)中發(fā)酵,接入量為4-12％，pH值為7.0-8.0,發(fā)酵時(shí)間為30-42h，發(fā)酵溫度為34-42℃。優(yōu)選地，內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)菌株的接入量為8％，pH值為7.5,發(fā)酵時(shí)間為36h，發(fā)酵溫度為38℃。優(yōu)選地，麩皮占26.9％、玉米秸稈粉20.9％、稻殼粉20.9％、玉米面17.9％、豆粕13.4％、葡萄糖20g/kg、脲10g/kg、硫酸亞鐵15g/kg，料:水＝1:1.2。優(yōu)選地，內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)菌體的活菌數(shù)為3.61×1012CFU/mL-3.43×1013CFU/mL。優(yōu)選地，內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)菌體的活菌數(shù)為3.43×1013CFU/mL。上述內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌固體菌劑在防治黃瓜枯萎病和辣椒枯萎病中的應(yīng)用。本發(fā)明高寒草地牧草內(nèi)生細(xì)菌莫哈韋芽孢桿菌采用CN104152385A公開(kāi)的莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905。本發(fā)明利用農(nóng)業(yè)廢棄物固體發(fā)酵的微生物菌劑易于貯存和運(yùn)輸，且使用方便，優(yōu)點(diǎn)明顯。本發(fā)明內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌特點(diǎn)是，一方面由于內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌可定殖于植物體內(nèi)，受外界環(huán)境影響小，生防作用穩(wěn)定持久，甚至通過(guò)種子等途徑傳播于下一代，另一方面莫哈韋芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)微生物農(nóng)藥的條件及該微生物農(nóng)藥對(duì)黃瓜枯萎病和辣椒枯萎病防治效果未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明內(nèi)生莫哈韋芽孢桿菌防治黃瓜枯萎病和辣椒枯萎病的防效在61％以上，從而克服現(xiàn)有化學(xué)農(nóng)藥環(huán)保性差、易產(chǎn)生抗藥性和安全性差的缺陷，具有環(huán)保性好、不易產(chǎn)生抗藥性和安全性好、促生(肥料)功能，符合“減藥減肥”的國(guó)家要求，也有利于保護(hù)環(huán)境。具體實(shí)施方式下面的實(shí)施例可以進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1：微生物菌劑其活性成分為莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905的菌體，其中，含有按重量百分比計(jì)的莫哈韋芽孢桿菌4％，基質(zhì)余量，基質(zhì)由以下物質(zhì)組成：麩皮占26.9％、玉米秸稈粉20.9％、稻殼粉20.9％、玉米面17.9％、豆粕13.4％、葡萄糖20g/kg、脲10g/kg、硫酸亞鐵15g/kg。莫哈韋芽孢桿菌的活菌數(shù)為3.61×1012CFU/mL。實(shí)施例2：微生物菌劑的制備方法，將莫哈韋芽孢桿菌接入至基質(zhì)中發(fā)酵，料水比為1：1.2，接入量為4％，pH7.0，發(fā)酵時(shí)間為30h，發(fā)酵溫度為34℃，制得微生物菌劑用作農(nóng)藥或肥料。實(shí)施例3：微生物菌劑，其活性成分為莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905的菌體，其中，含有按重量百分比計(jì)的莫哈韋芽孢桿菌8％，基質(zhì)余量，基質(zhì)由以下物質(zhì)組成：麩皮占26.9％、玉米秸稈粉20.9％、稻殼粉20.9％、玉米面17.9％、豆粕13.4％、葡萄糖20g/kg、脲10g/kg、硫酸亞鐵15g/kg。莫哈韋芽孢桿菌的活菌數(shù)為3.43×1013CFU/mL。實(shí)施例4：微生物菌劑的制備方法，將莫哈韋芽孢桿菌菌體接入至基質(zhì)中發(fā)酵，接入量為8％，pH7.5，發(fā)酵時(shí)間為36h，發(fā)酵溫度為38℃，制得微生物菌劑用作農(nóng)藥或肥料。實(shí)施例5：微生物菌劑，其活性成分為上述莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905的菌體，其中，含有按重量百分比計(jì)的莫哈韋芽孢桿菌12％，基質(zhì)余量，基質(zhì)由以下物質(zhì)組成：麩皮占26.9％、玉米秸稈粉20.9％、稻殼粉20.9％、玉米面17.9％、豆粕13.4％、葡萄糖20g/kg、脲10g/kg、硫酸亞鐵15g/kg。莫哈韋芽孢桿菌的活菌數(shù)為1.0×1013CFU/mL。實(shí)施例6：微生物菌劑的制備方法，將莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905菌體接入至基質(zhì)中發(fā)酵，接入量為12％，發(fā)酵時(shí)間為42h，發(fā)酵溫度為42℃，制得微生物菌劑可用作農(nóng)藥或肥料。下面通過(guò)試驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二對(duì)莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905菌株的固體發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行優(yōu)化。試驗(yàn)一：莫哈韋芽孢桿菌BacillusmojavensisQLY002(CGMCCNo.8905)的最適固體發(fā)酵基質(zhì)：1、單一基質(zhì)篩選以麩皮、玉米秸稈粉、玉米淀粉、玉米面、豆粉、豆粕、油渣、米糠和玉米粒9種單一基質(zhì)為營(yíng)養(yǎng)的唯一來(lái)源，通過(guò)固體發(fā)酵36小時(shí)，以豆粕為基質(zhì)時(shí)莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002的活菌數(shù)最高為2.85×109cfu/g，以米糠和玉米粒為基質(zhì)的活菌數(shù)最低，分別是0.47×109cfu/g和0.48×109cfu/g，均低于國(guó)標(biāo)中對(duì)微生物藥肥活菌數(shù)(≧0.5×109cfu/g)的要求，以麩皮、玉米秸稈粉、玉米淀粉、玉米面、豆粉、豆粕和油渣為唯一基質(zhì)時(shí)活菌數(shù)高于國(guó)標(biāo)，因此選擇麩皮、玉米秸稈粉、玉米淀粉、玉米面、豆粉、豆粕、油渣為莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002藥肥固體發(fā)酵的單一基質(zhì)。2、復(fù)合基質(zhì)組分篩選在篩選得到的單一基質(zhì)中，玉米淀粉和玉米面主要為菌體生長(zhǎng)提供碳源，豆粉和豆粕主要提供氮源，而麩皮和玉米秸稈粉不僅為菌體生長(zhǎng)提供碳源，而且還是菌體生長(zhǎng)的載體，因此在此次試驗(yàn)設(shè)計(jì)中按發(fā)酵載體與碳氮源將基質(zhì)相互組合，即為以下12個(gè)組合：(1)麩皮+稻殼粉+玉米淀粉+豆粉、(2)麩皮+稻殼粉+玉米淀粉+豆粕、(3)麩皮+稻殼粉+玉米面+豆粉、(4)麩皮+稻殼粉+玉米面+豆粕、(5)玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米淀粉+豆粉、(6)玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米淀粉+豆粕、(7)玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米面+豆粉、(8)玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米面+豆粕、(9)麩皮+玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米淀粉+豆粉(10)麩皮+玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米淀粉+豆粕、(11)麩皮+玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米面+豆粉和(12)麩皮+玉米秸稈粉+稻殼粉+玉米面+豆粕，經(jīng)固體發(fā)酵36小時(shí)，組合12，即麩皮+玉米秸稈粉+稻殼粉粉+玉米面+豆粕發(fā)酵產(chǎn)物的活菌數(shù)最高，達(dá)到7.05×109cfu/g，顯著高于其它組合，即該組合為最優(yōu)組合。3、復(fù)合基質(zhì)配方正交試驗(yàn)正交試驗(yàn)組合見(jiàn)表1。通過(guò)表1和表2可以得出莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)菌株QLY002固體發(fā)酵36小時(shí)，在處理8(A1B3C3D4E3)中的活菌數(shù)最高，達(dá)到5.57×1010cfu/g，此時(shí)發(fā)酵基質(zhì)含量為麩皮300g、玉米秸稈粉233g、稻殼粉233g、玉米面200g、豆粕150g，將其換算成體積即麩皮占26.9％、玉米秸稈粉占20.9％、稻殼粉占20.9％、玉米面占17.9％、豆粕占13.4％。表1正交試驗(yàn)(L25(45))結(jié)果分析4、碳源優(yōu)化在最佳基質(zhì)培養(yǎng)基中按添加15g/kg加入葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、紅糖、白砂糖5種不同的碳源發(fā)酵36小時(shí)，以葡萄糖為碳源時(shí)，活菌數(shù)顯著高于其它碳源，達(dá)到7.68×1011cfu/g，即葡萄糖為莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)菌株QLY002進(jìn)行固體發(fā)酵的最優(yōu)碳源。5、氮源優(yōu)化在最佳基質(zhì)培養(yǎng)基中添加牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、脲和硝酸銨5種不同氮源10g/kg進(jìn)行發(fā)酵36小時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果表明，以脲為氮源時(shí)，活菌數(shù)為7.15×1011cfu/g，菌株生長(zhǎng)量明顯高于其他氮源培養(yǎng)基，說(shuō)明莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002生長(zhǎng)的最適氮源為脲。6、無(wú)機(jī)鹽優(yōu)化在最佳基質(zhì)培養(yǎng)基中按10g/kg添加氯化鈉、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸亞鐵、磷酸二氫鉀5種無(wú)機(jī)鹽發(fā)酵36小時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果表明，以硫酸亞鐵為無(wú)機(jī)鹽發(fā)酵36小時(shí)后的活菌數(shù)顯著高于其它無(wú)機(jī)鹽，達(dá)7.43×1011cfu/g。說(shuō)明莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002生長(zhǎng)的最適無(wú)機(jī)鹽為硫酸亞鐵。7、最適C源、N源、無(wú)機(jī)鹽最佳質(zhì)量配比的確定對(duì)最適C源(葡萄糖)、最適N源(脲)和最適無(wú)機(jī)鹽(硫酸亞鐵)3個(gè)因素采用表2正交設(shè)計(jì)表L9(33)進(jìn)行正交試驗(yàn)，當(dāng)組合為G3U1F3時(shí)，即葡萄糖20g/kg、脲10g/kg和硫酸亞鐵15g/kg，固體發(fā)酵36小時(shí)活菌數(shù)顯著高于其它組合，達(dá)到3.55×1012cfu/g，即最適C源、N源、無(wú)機(jī)鹽最佳質(zhì)量配比分別為葡萄糖20g/kg、脲10g/kg和硫酸亞鐵15g/kg。表2正交試驗(yàn)(L16(43))結(jié)果分析試驗(yàn)二：確定莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905的固體發(fā)酵條件：1.接種量、含水量和溫度正交試驗(yàn)以試驗(yàn)一得到的最佳優(yōu)化培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，將固體發(fā)酵涉及到的接種量、含水量、溫度等條件分別按不同的水平做三因素五水平的正交試驗(yàn)(表3)，每個(gè)處理4次重復(fù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，固體發(fā)酵條件的組合為A3B4C4D3時(shí)，活菌數(shù)顯著高于其它組合，達(dá)到2.84×1013cfu/g,即最佳條件是接種量8％、含水量1:1.2、溫度38℃。表3正交試驗(yàn)(L25(54))因素水平表2.最佳初始pH值優(yōu)化用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值至6.0、6.5、7.0、7.5、8.0這5個(gè)水平，在試驗(yàn)一及試驗(yàn)二第一步基礎(chǔ)上按不同初始pH值進(jìn)行發(fā)酵，每個(gè)處理4次重復(fù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)初始pH值為7.5時(shí)活菌數(shù)最高，為3.4×1013cfu/g，而pH為7.0、8.0時(shí)，活菌數(shù)差異不顯著，但均低于7.5時(shí)的活菌數(shù)，pH為6.0、6.5時(shí)活菌數(shù)明顯降低。因此，確定該菌的最適pH值為7.5。3.最佳發(fā)酵時(shí)間的確定在試驗(yàn)一及試驗(yàn)二第一/二步基礎(chǔ)上，每隔6h取適量的發(fā)酵物測(cè)定活菌數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，從6h至36h時(shí)，活菌數(shù)顯著增加，當(dāng)發(fā)酵36h時(shí)，活菌數(shù)最大為3.43×1013cfu/g，而從36h后活菌數(shù)顯著降低。因此最適發(fā)酵時(shí)間最終選擇36h。試驗(yàn)三：對(duì)莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905微生物菌劑的活性進(jìn)行檢測(cè)：在上述試驗(yàn)一和二中已確定莫哈韋芽孢桿菌QLY002的最適固體基質(zhì)及發(fā)酵條件的基礎(chǔ)上，將保存在斜面培養(yǎng)基中的莫哈韋芽孢桿菌BacillusmojavensisQLY002(CGMCCNo.8905)，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NutrientAgar，簡(jiǎn)稱(chēng)NA)培養(yǎng)基的平皿上培養(yǎng)活化24h后，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯(NutrientBroth，簡(jiǎn)稱(chēng)NB)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)24h之后，以4％-12％的接種量接入固體基質(zhì)中，發(fā)酵料水比為1:1.2，34℃-42℃發(fā)酵培養(yǎng)30h-42h之后，發(fā)酵物中活菌數(shù)為3.61×1012CFU/mL-3.43×1013CFU/mL。將莫哈韋芽孢桿菌QLY002在上述發(fā)酵條件下固體發(fā)酵，即可制得到具有良好促生能力和防病能力的微生物菌劑。其中，在溫度為38℃，接種量為8％，發(fā)酵料水比為1:1.2，發(fā)酵時(shí)間為36h的發(fā)酵條件下，發(fā)酵物中活菌數(shù)可以達(dá)到3.43×1013CFU/mL。下面通過(guò)試驗(yàn)四和試驗(yàn)五分別對(duì)莫哈韋芽孢桿菌BacillusmojavensisQLY002(CGMCCNo.8905)菌劑對(duì)黃瓜和辣椒的促生能力和防治枯萎病能力進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)四：莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905固體菌劑對(duì)黃瓜和辣椒的促生效果測(cè)定：將所用營(yíng)養(yǎng)土121℃高壓滅菌2h后，按質(zhì)量比加入莫哈韋芽孢桿菌QLY002藥肥，濃度分別為0％、0.5％、1％、5％、10％，攪拌混勻后分裝于直徑為12cm的塑料花盆里，其中0％為對(duì)照，將黃瓜和辣椒種子按每盆10顆進(jìn)行播種。第12d統(tǒng)計(jì)各植株的出苗率，每個(gè)處理4次重復(fù)。結(jié)果表明，1％藥肥對(duì)黃瓜和辣椒種子出苗有促進(jìn)作用(表4)；不同濃度藥肥處理后對(duì)40d苗齡的黃瓜，測(cè)定株高、根長(zhǎng)、莖粗、鮮重和干重，辣椒為55d苗齡，測(cè)定株高、根長(zhǎng)、莖粗、鮮重和干重。結(jié)果表明，1％的藥肥促生效果顯著(表5和表6)。表4不同藥肥濃度對(duì)出苗率的影響(％)表5不同藥肥濃度對(duì)黃瓜生長(zhǎng)指標(biāo)的影響(％)處理株高/cm根長(zhǎng)/cm莖粗/cm地上部鮮重/g地下部鮮重/g地上部干重/g地下部干重/g％44.66±0.71b24.20±0.65c0.326±0.014d6.36±0.03c0.84±0.04c0.42±0.01c0.09±0.01bc0.5％46.38±0.81b26.62±0.91b0.420±0.009b7.94±0.12b1.18±0.02b0.70±0.05b0.10±0.01b1.0％54.04±0.59a30.10±0.87a0.522±0.012a11.17±0.08a1.47±0.05a1.17±0.03a0.14±0.01a5.0％40.78±0.52c22.02±0.82c0.374±0.007c5.32±0.09d0.39±0.02d0.35±0.02c0.06±0.01cd10.0％37.28±0.72d18.54±0.48d0.320±0.016d4.39±0.12e0.36±0.03d0.34±0.02c0.05±0.01d表6不同藥肥濃度對(duì)辣椒生長(zhǎng)指標(biāo)的影響(％)處理株高/cm根長(zhǎng)/cm莖粗/cm地上部鮮重/g地下部鮮重/g地上部干重/g地下部干重/g0％40.44±1.01bc12.46±0.49b0.338±0.012c3.91±0.02b0.73±0.02d0.30±0.01b0.08±0.00b0.5％41.90±0.68b13.54±0.36b0.378±0.013b3.95±0.01b0.92±0.01b0.32±0.01b0.09±0.01b1.0％47.32±1.29a14.94±0.35a0.452±0.011a8.06±0.03a1.79±0.02a0.72±0.01a0.18±0.01a5.0％38.44±1.09c13.10±0.35b0.320±0.005c3.03±0.01c0.79±0.01c0.21±0.01c0.08±0.01b10.0％33.56±0.72d10.24±0.65c0.250±0.006d2.43±0.01d0.42±0.01e0.19±0.01c0.05±0.00c試驗(yàn)五：莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905固體菌劑對(duì)黃瓜和辣椒枯萎病的防治效果測(cè)定：將所用營(yíng)養(yǎng)土121℃高壓滅菌2h后，將黃瓜和辣椒種植在直徑12cm的塑料花盆中，待出苗后，每盆定苗6株，4次重復(fù)。當(dāng)黃瓜長(zhǎng)至30d苗齡，辣椒45d苗齡時(shí)，以篩選的最佳藥肥濃度為用量設(shè)置以下處理：處理1(FB)：用無(wú)菌解剖刀扣掉花盆表面的土壤，按最佳藥肥濃度施入藥肥，7d后在植株莖基部制造傷口，將鐮刀菌Fusariumoxysporum用無(wú)菌水配制成濃度為106～107個(gè)/mL的孢子懸浮液，將該孢子懸浮液用10mL無(wú)菌的醫(yī)用注射器接種于傷口部位，室溫保濕培養(yǎng)48h；處理2(B)：接種方法同處理1，先接鐮刀菌Fusariumoxysporum孢子懸浮液，7d后施入藥肥。處理3(BF)：只接種鐮刀菌Fusariumoxysporum孢子懸浮液，不施用藥肥，接種方法同處理1。黃瓜枯萎病病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0無(wú)癥狀，植物正常生長(zhǎng)；1莖葉輕微泛黃；2葉片黃化，植株輕度萎蔫，可恢復(fù)；3葉片黃化下垂，植株中度萎蔫，不可恢復(fù)；4植株嚴(yán)重萎蔫，枯死。辣椒枯萎病病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0無(wú)癥狀，植物正常生長(zhǎng)；1植株維管束稍變褐色；2植株維管束變褐，且面積占整個(gè)維管束切面的10％～30％；3植株維管束嚴(yán)重腐爛，面積占總面積30％～50％；4植株維管束腐爛面積占總面積的50％以上。15d后按黃瓜和辣椒的枯萎病病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查發(fā)病率和發(fā)病指數(shù)，計(jì)算莫哈韋芽孢桿菌BacillusmojavensisQLY002(CGMCCNo.8905)藥肥對(duì)枯萎病的防效。結(jié)果表明，處理FB和處理B相比，黃瓜和辣椒的發(fā)病率分別降低了37.50％和45.83％，病情指數(shù)分別降低了34.24和33.3，防治效果分別為61.83％和63.96％(表7和表8)，但BF對(duì)B的防治效果僅分別為36.59％和24.63％。因此，莫哈韋芽孢桿菌BacillusmojavensisQLY002(CGMCCNo.8905)藥肥對(duì)枯萎病具有很好的預(yù)防效果。表7黃瓜枯萎病發(fā)病情況項(xiàng)目發(fā)病率(％)病情指數(shù)防治效果(％)處理1(FB)54.17c19.80c61.83處理2(BF)75.00b32.29b36.59處理3(B)91.67a54.04a-表8辣椒枯萎病發(fā)病情況項(xiàng)目發(fā)病率(％)病情指數(shù)防治效果(％)處理1(FB)50.00c17.71c63.96處理2(BF)79.41b38.54b24.63處理3(B)95.83a51.04a-經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，上述莫哈韋芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)QLY002，CGMCCNo.8905微生物菌劑，適宜于黃瓜枯萎病和辣椒枯萎病的防治。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3