1.一組用于擴(kuò)增熒光假單胞菌基因的雙重PCR引物,其特征在于,雙重PCR引物包括用于擴(kuò)增熒光假單胞菌adnA基因的第一引物對(duì),及用于擴(kuò)增熒光假單胞菌fliC基因的第二引物對(duì);
第一引物對(duì):adnA-for:5’-ATGTGGCGTGAAACCAAAAT-3’,
adnA-rev:5’-TCAATCATCCGCCTGTTCA-3’;
第二引物對(duì):fliC-for:5’-GATGCAGCGCCTGTCTTC-3’,
fliC-rev:5’-TCAGTACAGCGGAAGGCA-3’。
2.一種檢測(cè)熒光假單胞菌的試劑盒,其特征在于,包括權(quán)利要求1所述的第一引物對(duì)和第二引物對(duì)、PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸和Taq酶。
3.一種檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(a)提取待測(cè)菌株的基因組DNA,獲得模板DNA;
(b)進(jìn)行雙重PCR反應(yīng),雙重PCR反應(yīng)體系包括:權(quán)利要求1所述的第一引物對(duì)和和第二引物對(duì)、PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸、Taq酶、模板DNA以及ddH2O;
(c)將步驟(b)反應(yīng)得到的產(chǎn)物進(jìn)行電泳。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(b)中,反應(yīng)體系中第一引物對(duì)的正向引物adnA-for、第一引物對(duì)的反向引物adnA-rev、第二引物對(duì)的正向引物fliC-for和第二引物對(duì)的反向引物fliC-rev的最終濃度均為1μM。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(b)中,反應(yīng)體系中Taq酶的最終濃度為0.2-0.5U/μl。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(b)中,PCR緩沖液包括KCl、Tris-HCl和MgCl2,三者在反應(yīng)體系中的最終濃度分別為50mM、10mM和1.5mM。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(b)中,反應(yīng)體系中脫氧核糖核苷三磷酸最終濃度為0.25mM。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(b)中,雙重PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件包括:94℃,預(yù)變性5min;94℃變性15s,60℃退火30s,72℃延伸1min50s,循環(huán)40次;72℃延伸10min;4℃,保存。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)熒光假單胞菌的方法,其特征在于,所述步驟(c)中產(chǎn)物電泳檢測(cè)到長(zhǎng)度為1.47kb的條帶和/或長(zhǎng)度為0.75kb的條帶。