1.一種子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的提取方法,其特征在于,所述方法包括步驟:
1)預(yù)處理
在無菌條件下,對(duì)獲得的子宮內(nèi)膜組織材料,進(jìn)行剪碎處理放入冰浴DMEM/F12培養(yǎng)基中;
2)消化
加入約1-4倍體積的消化液,消化液中含膠原酶I(50U/ml)和膠原酶IV(50U/ml),37℃消化30-90min,獲得單細(xì)胞懸液;將消化好的單細(xì)胞懸液移入離心管,靜置幾分鐘去除剩余的大塊組織;離心后,基質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞存于上清液中;
3)原代培養(yǎng)
將步驟2)分離的細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)基為DMEM/F12培養(yǎng)基,含5-20%(v/v)胎牛血清、1%(w/v)青/鏈霉素,37℃、5%C02培養(yǎng)箱孵育,即獲得所述子宮內(nèi)膜干細(xì)胞。
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟1)中,將子宮內(nèi)膜組織材料剪碎至0.5-2mm3。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,加入約2-3倍體積的消化液。
4.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,所述消化液中還包括亞硫酸氫鈉。
5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述亞硫酸氫鈉的濃度為5-20mg/ml,更優(yōu)選為10mg/ml。
6.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,37℃消化50-60min。
7.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,離心條件為1000-1800rpm離心2-5min。
8.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,離心條件為1500rpm離心3min。
9.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟2)中,加入約2-3倍體積的消化液。
10.一種構(gòu)建子宮內(nèi)膜干細(xì)胞庫(kù)的方法,其特征在于,所述方法包括步驟:
a)根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法提供子宮內(nèi)膜干細(xì)胞;
b)對(duì)步驟a)中獲得的子宮內(nèi)膜干細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。