本發(fā)明涉及一種重組人血清白蛋白溶液及其制備方法，屬于人工輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人血清白蛋白作為血漿容量擴充劑用途廣泛，是當前的研究熱點之一。在體液中，人血清白蛋白可以運輸脂肪酸、膽色素、氨基酸、類固醇激素、金屬離子和許多治療分子等，同時維持血液正常的滲透壓。在臨床上，人血清白蛋白可用于治療休克與燒傷，用于補充因手術(shù)、意外事故或大出血所致的血液丟失，也可以作為血漿增容劑。
在人工輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域，人血清白蛋白用于輔助生殖程序，包括配子和胚胎操作，作為培養(yǎng)基和精子、卵母細胞/胚胎操作培養(yǎng)基的營養(yǎng)補充。
現(xiàn)有技術(shù)中，常規(guī)的人源性血清白蛋白(hsa)主要來源于人的血清，存在著潛在的人源性病原體及毒素的風險，為輔助生殖技術(shù)帶來重大安全性問題。
我國輔助生殖技術(shù)中的血清白蛋白溶液幾乎完全依賴進口，不僅成本高且溶液經(jīng)長途運輸和海關(guān)檢查后，其有效性受到不同程度的影響，甚至變質(zhì)或者氨化，如果使用變質(zhì)或者氨化的血清白蛋白溶液，將對輔助生殖的治療帶來極為有害的后果和風險。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于，提供一種各項質(zhì)控指標達到體外受精培養(yǎng)液蛋白營養(yǎng)標準，使用安全、無病原體和內(nèi)毒素的重組人血清白蛋白溶液及其制備方法，為輔助生殖技術(shù)的安全性提供了有力保證。
為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
一種重組人血清白蛋白溶液，其特征在于：采用重組人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的鹽溶液中配制而成。
優(yōu)選的，所述鹽溶液是常規(guī)生理氯化鈉鹽溶液。
優(yōu)選的，所述鹽溶液是以hepes、mops或碳酸氫鈉為緩沖劑，并以鈉、鉀、鈣、鎂離子為基礎(chǔ)的化合物溶液。
優(yōu)選的，所述的鹽溶液是以是以hepes或者mops為緩沖劑，以鈉、鉀、鎂、鈣離子為基礎(chǔ)，并以葡萄糖、丙酮酸鈉、乳酸鈉、白蛋白為能量物質(zhì)的化合物溶液，其中包含：氯化鈉98.11-102.00mmol/l、氯化鉀4.55-4.70mmol/l、硫酸鎂0.18-0.22mmol/l、氯化鈣1.92-2.12mmol/l、碳酸氫鈉3.90-4.10mmol/l、hepes或者mops19.99-22.00mmol/l、葡萄糖2.68-2.88mmol/l、丙酮酸鈉0.31-0.33mmol/l、d型或l型乳酸鈉21.11-21.66mmol/l、磷酸二氫鉀0.36-0.39mmol/l。
優(yōu)選的，所述抗菌素為慶大霉素，濃度為5-11μg/ml。
所述重組人血清白蛋白溶液的制備方法，包括以下步驟：
1、稱量好各種組分，備用；
2、稱量好的組分中，除了抗菌素、碳酸氫鈉以外的各組分溶于超純注射級用水中，溶解過程中遵循先固體后液體的原則；所述超純注射級用水經(jīng)0.2μm濾膜過濾，內(nèi)毒素＜0.5eu/ml；
3、向步驟2制得的鹽溶液中依次加入稱量好的抗菌素、碳酸氫鈉；
4、檢測步驟3所得鹽溶液的滲透壓和ph值，并記錄最終滲透壓和ph值；所述滲透壓保持為250-275mosm/kg，所述ph值保持為7.0-7.4，ph值如果不在范圍內(nèi)，則用配制好的鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值；
5、按照預(yù)配置的容量，將重組人血清白蛋白干粉按終濃度為100mg/ml的濃度溶解于鹽溶液中，到充分溶解為止；
6、將步驟5所得重組人血清白蛋白溶液經(jīng)過0.2μm濾膜過濾滅菌后，取樣測試；測試參數(shù)：
a、30-37℃條件下ph值：6.8-7.4；
b、滲透壓：270-290mosm/kg；
c、內(nèi)毒素：＜1.0eu/ml；
d.一細胞鼠胚培養(yǎng)到96小時：≥80％的囊胚形成率；
7、將配置好的酶溶液在百級gmp車間進行無菌分裝和標簽。
有益效果：本發(fā)明是利用醫(yī)療級重組人血清白蛋白(rhsa)完全溶解于鹽溶液中制備而成，不僅可以為多用途培養(yǎng)基提供優(yōu)異的蛋白質(zhì)來源，還排除了人源性病原體及毒素的可能性，從而大大提高輔助生殖的安全性。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。
實施例1：
本實施例所述重組人血清白蛋白溶液，采用重組人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的鹽溶液中配制而成。所述鹽溶液是常規(guī)的生理氯化鈉鹽溶液。所述抗菌素為慶大霉素，濃度為5-11μg/ml。
本實施例所述重組人血清白蛋白溶液的制備方法，包括以下步驟：
1、配制鹽溶液：按0.9％的濃度稱量氯化鈉，將其溶于超純注射級用水中，然后加入稱量好的抗菌素，止至完全溶解。
2、檢測步驟1所得鹽溶液的滲透壓和ph值，并記錄最終滲透壓和ph值；所述滲透壓保持為250-270mosm/kg，所述ph值在20-25℃溫度條件下保持為7.0-7.4；ph值如果不在范圍內(nèi)，則用配制好的鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值；
3、按照預(yù)配置的容量，將重組人血清白蛋白干粉按終濃度為100mg/ml的濃度溶解于鹽溶液中，到充分溶解為止；
4、將步驟3所得重組人血清白蛋白溶液經(jīng)過0.2μm濾膜過濾滅菌后，取樣測試；測試參數(shù)：
a、30-37℃條件下ph值：6.8-7.4；
b、滲透壓：270-290mosm/kg；
c、內(nèi)毒素：＜1.0eu/ml；
d.一細胞鼠胚培養(yǎng)到96小時：≥80％的囊胚形成率；
5、將配置好的酶溶液在百級gmp車間進行無菌分裝和標簽。
實施例2：
本實施例所述重組人血清白蛋白溶液，采用重組人血清白蛋白干粉溶解于含有抗菌素的鹽溶液中配制而成。所述抗菌素為慶大霉素，濃度為5-11μg/ml。
所述的鹽溶液是以是以hepes或者mops為緩沖劑，以鈉、鉀、鎂、鈣離子為基礎(chǔ)，并以葡萄糖、丙酮酸鈉、乳酸鈉、白蛋白為能量物質(zhì)的化合物溶液，其中包含：氯化鈉98.11-102.00mmol/l、氯化鉀4.55-4.70mmol/l、硫酸鎂0.18-0.22mmol/l、氯化鈣1.92-2.12mmol/l、碳酸氫鈉3.90-4.10mmol/l、hepes或者mops19.99-22.00mmol/l、葡萄糖2.68-2.88mmol/l、丙酮酸鈉0.31-0.33mmol/l、d型或l型乳酸鈉21.11-21.66mmol/l、磷酸二氫鉀0.36-0.39mmol/l。
本實施例所述重組人血清白蛋白溶液的制備方法，包括以下步驟：
1、稱量好各種組分，備用；
2、稱量好的組分中，除了抗菌素、碳酸氫鈉以外的各組分溶于超純注射級用水中，溶解過程中遵循先固體后液體的原則；所述超純注射級用水經(jīng)0.2μm濾膜過濾，內(nèi)毒素＜0.5eu/ml；
3、向步驟2制得的鹽溶液中依次加入稱量好的抗菌素、碳酸氫鈉；
4、檢測步驟3所得鹽溶液的滲透壓和ph值，并記錄最終滲透壓和ph值；所述滲透壓保持為250-275mosm/kg，所述ph值在20-25℃溫度條件下保持為7.0-7.4；ph值如果不在范圍內(nèi)，則用配制好的鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值；
5、按照預(yù)配置的容量，將重組人血清白蛋白干粉按終濃度為100mg/ml的濃度溶解于鹽溶液中，到充分溶解為止；
6、將步驟5所得重組人血清白蛋白溶液經(jīng)過0.2μm濾膜過濾滅菌后，取樣測試；測試參數(shù)：
a、30-37℃條件下ph值：6.8-7.4；
b、滲透壓：270-290mosm/kg；
c、內(nèi)毒素：＜1.0eu/ml；
d.一細胞鼠胚培養(yǎng)到96小時：≥80％的囊胚形成率；
7、將配置好的酶溶液在百級gmp車間進行無菌分裝和標簽。
【存儲說明和穩(wěn)定性】
存儲未冷卻的瓶子，冷藏在2-8℃，不要冷凍或暴露于高于39℃的溫度環(huán)境。重組人血清白蛋白是穩(wěn)定的，可存儲至在小瓶和試劑盒標簽上顯示的有效期。使用無菌程序除去所需的體積，不要將任何卷返回到原始容器。
【具體使用方法】
實驗室使用多功能培養(yǎng)基用于精子、卵母細胞和胚胎培養(yǎng)以及冷凍和解凍液的蛋白質(zhì)補充。蛋白質(zhì)補充的量因?qū)嶒炇抑g不同而變化，并且也取決于配子和胚胎使用的不同階段。一般將重組人血清白蛋白(rhsa)100mg/ml溶液補充至5mg/ml的多功能培養(yǎng)基中。
【注意事項】
不要使用任何瓶子顯示顆粒物質(zhì)，渾濁或不清楚或淡黃色或顯示任何微生物污染的跡象的介質(zhì)。不要使用任何無菌包裝已損壞的瓶子。
重組人血清白蛋白不能用作注射產(chǎn)品，內(nèi)含抗菌素。為了避免污染問題，使用無菌技術(shù)進行處理，并在完成程序后丟棄瓶中殘留的多余介質(zhì)。