本發(fā)明屬于活性多肽提取領域，尤其涉及一種魷魚活性多肽的提取方法。
背景技術：
魷魚，又稱句公、柔魚或槍烏賊，是軟體動物門頭足綱管魷目開眼亞目的動物。我國魷魚加工主要分布在浙江和山東，魷魚年加工量為30~40萬噸，其中魷魚皮占加工量的8%~10%，魷魚皮干物質中80%左右是膠原蛋白，本發(fā)明以魷魚及其加工廢棄物為原料提取魷魚活性多肽，制備具有抗氧化活性多肽產品，為魷魚加工廢棄物的綜合利用探索一條新途徑，并且可以減少環(huán)境污染，又能夠充分利用現(xiàn)有資源，提高企業(yè)的經濟效益。
現(xiàn)有技術提供多種活性多肽提取方法，例如，中國發(fā)明專利文獻一種鱉甲活性多肽提取物的制備方法及應用授權公告號：cn103705907b該發(fā)明屬于中藥提取物的制備技術領域，具體公開了一種鱉甲活性多肽提取物的制備方法及應用。本發(fā)明方法的具體步驟包括：鱉甲經水煎煮提取，提取液用蒸餾水稀釋至相當于含鱉甲藥材4-8g/100ml的濃度，分別采用微濾、多級超濾得到超濾液，減壓濃縮，冷凍干燥得到分子量小于6kd的凍干粉。該發(fā)明采用多級膜分離方法制備鱉甲的活性多肽物質部位，經過中試試驗，其工藝參數(shù)可過渡到產業(yè)化；所制備的鱉甲活性多肽提取物具有保肝作用，可以用于制備預防或治療肝纖維化、酒精性肝損傷的藥物或保健食品。
現(xiàn)有技術采用多級膜分離方法制備鱉甲的活性多肽物質部位，提取到的鱉甲活性多肽提取物具有保肝作用，但提取時間長，提取率有待提高。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對上述技術問題提供一種魷魚活性多肽的提取方法，多肽活性高，提取工藝簡單且活性多肽提取率顯著提高。
本發(fā)明針對上述技術問題所采取的方案為：一種魷魚活性多肽的提取方法，步驟如下：
1）預處理：將魷魚用蒸餾水洗凈，切塊；用蒸餾水去除魷魚中雜質，避免雜質對提取活性多肽的影響，切塊為后續(xù)勻漿做工藝準備。
2）勻漿：往魷魚塊中加入緩沖液冰浴勻漿；加入緩沖液穩(wěn)定ph值，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，有利于活性多肽溶出和提取。
3）離心：將勻漿后的溶液進行攪拌，靜置，離心取上清液；攪拌讓勻漿液充分混合，利于多肽的提取，采用離心機取得上清液，便于后續(xù)的抽濾及提高活性多肽的提取率。
4）凍干：在上清液中加入魷魚0.3~1.2%重量份的析出劑，靜置抽濾得到魷魚活性多肽，凍干保存。加入析出劑提高魷魚中的活性多肽析出，效果明顯優(yōu)異，由于活性多肽對環(huán)境的要求較高，故采用凍干保存方式。
緩沖液液ph為6.5~8，濃度為45~55mol/l，在此范圍的ph值和濃度緩沖液與魷魚反應效果優(yōu)異。
緩沖液由以下成分及重量份組成：磷酸二氫鉀5~10份、氫氧化鈉2~8份、氯化鈉1~3份、二氫黃酮甙0.1~1份、三聚磷酸鈉1~4份、聚丙烯酸甲酯0.3~1.2份。維持ph的平衡，起到溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取。
析出劑由以下成分及重量份組成：硫酸銨3~5份、氯化鈉1~3份、硝酸鉀0.5~1份、納他霉素0.2~0.6份和γ-亞麻酸1~3份。在短時間有效的使活性多肽析出并且不影響多肽的活性，提高活性多肽的提取率，使魷魚活性多肽提取時間縮短，保證較高的提取率。
步驟3中攪拌時間為10~15min,在2~10℃下靜置2~3小時，置入離心機進行離心，離心轉速9000~10000r/min,離心10~20min。通過攪拌使緩沖液與魷魚塊的勻漿充分混合讓活性多肽分布均勻，使用離心機取得上清液，除去無用的雜質。
蒸餾水中添加有二甲基甲酰胺2~3重量份和β-環(huán)糊精0.1~0.7重量份，可有效的去除魷魚表面雜質，使雜質溶解并清洗干凈，避免提取過程中雜質對提取到的活性多肽和提取率的影響。
步驟2中緩沖液加入量按體積是魷魚塊的2~3倍，保證緩沖液充分與魷魚塊混合，而緩沖液起到維持ph的平衡，溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取。
步驟4中抽濾使用1~3層濾紙和1~2層的200~400目濾布抽濾，避免在預處理清洗后提取過程中有雜質參雜進提取液，進一步濾除上清液中雜質，保證提取的活性多肽純度高且提取率也高。
有益效果：本發(fā)明在預處理中使用的蒸餾水中添加有二甲基甲酰胺和β-環(huán)糊精，可有效的去除魷魚表面雜質，使雜質溶解并清洗干凈，避免提取過程中雜質對提取到的活性多肽和提取率的影響，在勻漿過程中使用的緩沖液可維持ph的平衡，起到溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取，在上清液中添加析出劑可在短時間有效的使活性多肽析出并且不影響多肽的活性，提高活性多肽的提取率，使魷魚活性多肽提取時間縮短，保證較高的提取率。本發(fā)明以魷魚為原料，從魷魚中提取活性多肽工藝簡單，提取的活性多肽含量高，提取效果優(yōu)異，提取的魷魚活性多肽具有很好的應用價值。
具體實施例
以下結合具體實施例作進一步詳細描述：
實施例1：
一種魷魚活性多肽的提取方法，步驟如下：
1）預處理：將魷魚用蒸餾水洗凈，切塊；用蒸餾水去除魷魚中雜質，避免雜質對提取活性多肽的影響，切塊為后續(xù)勻漿做工藝準備。
2）勻漿：往魷魚塊中加入緩沖液冰浴勻漿；加入緩沖液穩(wěn)定ph值，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，有利于活性多肽溶出和提取。
3）離心：將勻漿后的溶液進行攪拌，靜置，離心取上清液；攪拌讓勻漿液充分混合，利于多肽的提取，采用離心機取得上清液，便于后續(xù)的抽濾及提高活性多肽的提取率。
4）凍干：在上清液中加入魷魚0.3~1.2%重量份的析出劑，靜置抽濾得到魷魚活性多肽，凍干保存。加入析出劑提高魷魚中的活性多肽析出，效果明顯優(yōu)異，由于活性多肽對環(huán)境的要求較高，故采用凍干保存方式。
緩沖液液ph為6.5~8，濃度為45~55mol/l，在此范圍的ph值和濃度緩沖液與魷魚反應效果優(yōu)異。
緩沖液由以下成分及重量份組成：磷酸二氫鉀5~10份、氫氧化鈉2~8份、氯化鈉1~3份、二氫黃酮甙0.1~1份、三聚磷酸鈉1~4份、聚丙烯酸甲酯0.3~1.2份。起到維持ph的平衡，溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取。
析出劑由以下成分及重量份組成：硫酸銨3~5份、氯化鈉1~3份、硝酸鉀0.5~1份、納他霉素0.2~0.6份和γ-亞麻酸1~3份。在短時間有效的使活性多肽析出并且不影響多肽的活性，提高活性多肽的提取率，使魷魚活性多肽提取時間縮短，保證較高的提取率。
步驟3中攪拌時間為10~15min,在2~10℃下靜置2~3小時，置入離心機進行離心，離心轉速9000~10000r/min,離心10~20min。通過攪拌使緩沖液與魷魚塊的勻漿充分混合讓活性多肽分布均勻，使用離心機取得上清液，除去無用的雜質。
蒸餾水中添加有二甲基甲酰胺2~3重量份和β-環(huán)糊精0.1~0.7重量份，可有效的去除魷魚表面雜質，使雜質溶解并清洗干凈，避免提取過程中雜質對提取到的活性多肽和提取率的影響。
步驟2中緩沖液加入量按體積是魷魚塊的2~3倍，保證緩沖液充分與魷魚塊混合，而緩沖液起到維持ph的平衡，溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取。
步驟4中抽濾使用1~3層濾紙和1~2層的200~400目濾布抽濾，避免在預處理清洗后提取過程中有雜質參雜進提取液，進一步濾除上清液中雜質，保證提取的活性多肽純度高且提取率也高。
實施例2：
一種魷魚活性多肽的提取方法，優(yōu)選的步驟如下：
1）預處理：將魷魚用蒸餾水洗凈，切塊；用蒸餾水去除魷魚中雜質，避免雜質對提取活性多肽的影響，切塊為后續(xù)勻漿做工藝準備。
2）勻漿：往魷魚塊中加入緩沖液冰浴勻漿；緩沖液加入量按體積是魷魚塊的優(yōu)選3倍，保證緩沖液充分與魷魚塊混合，加入緩沖液穩(wěn)定ph值，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，有利于活性多肽溶出和提取。緩沖液液ph為優(yōu)選7.2，濃度為優(yōu)選50mol/l，在此的ph值和濃度緩沖液與魷魚反應效果優(yōu)異。
3）離心：將勻漿后的溶液進行攪拌，靜置，離心取上清液；攪拌時間為優(yōu)選15min,在優(yōu)選4℃下靜置優(yōu)選3小時，置入離心機進行離心，優(yōu)選離心轉速10000r/min,優(yōu)選離心15min。通過攪拌使緩沖液與魷魚塊的勻漿充分混合讓活性多肽分布均勻，使用離心機取得上清液，除去無用的雜質。攪拌讓勻漿液充分混合，利于多肽的提取，采用離心機取得上清液，便于后續(xù)的抽濾及提高活性多肽的提取率。
4）凍干：在上清液中加入魷魚優(yōu)選的1.2%重量份的析出劑，靜置抽濾得到魷魚活性多肽，凍干保存。抽濾使用優(yōu)選3層濾紙和優(yōu)選1層的優(yōu)選300目濾布抽濾，避免在預處理清洗后提取過程中有雜質參雜進提取液，進一步濾除上清液中雜質，保證提取的活性多肽純度高且提取率也高。加入析出劑提高魷魚中的活性多肽析出，效果明顯優(yōu)異，由于活性多肽對環(huán)境的要求較高，故采用凍干保存方式。
緩沖液由以下成分及重量份組成：優(yōu)選磷酸二氫鉀10份、優(yōu)選氫氧化鈉7份、優(yōu)選氯化鈉2份、優(yōu)選二氫黃酮甙0.1份、優(yōu)選三聚磷酸鈉3份、優(yōu)選聚丙烯酸甲酯0.8份。起到維持ph的平衡，溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，二氫黃酮甙和三聚磷酸鈉通過磷酸二氫鉀保持活性多肽活性，提高多肽活性，聚丙烯酸甲酯是活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取，從而提高多肽提取率。
析出劑由以下成分及重量份組成：優(yōu)選硫酸銨4份、優(yōu)選氯化鈉2份、優(yōu)選硝酸鉀0.7份、優(yōu)選納他霉素0.3份和優(yōu)選γ-亞麻酸1份。在短時間有效的使活性多肽析出并且不影響多肽的活性，提高活性多肽的提取率，使魷魚活性多肽提取時間縮短，保證較高的提取率。
蒸餾水中添加有優(yōu)選二甲基甲酰胺2重量份和優(yōu)選β-環(huán)糊精0.5重量份，可有效的去除魷魚表面雜質，使雜質溶解并清洗干凈，避免提取過程中雜質對提取到的活性多肽和提取率的影響。
本發(fā)明在預處理中使用的蒸餾水中添加有二甲基甲酰胺和β-環(huán)糊精，可有效的去除魷魚表面雜質，使雜質溶解并清洗干凈，避免提取過程中雜質對提取到的活性多肽和提取率的影響，在勻漿過程中使用的緩沖液可維持ph的平衡，起到溶解保護作用，提高魷魚的持水能力，便于勻漿，調節(jié)離子強度，避免引起細胞滲透壓改變，活性多肽分布均勻，有利于活性多肽溶出和提取，在上清液中添加析出劑可在短時間有效的使活性多肽析出并且不影響多肽的活性，提高活性多肽的提取率，使魷魚活性多肽提取時間縮短，保證較高的提取率。本發(fā)明以魷魚為原料，從魷魚中提取活性多肽工藝簡單，提取的活性多肽含量高，提取效果優(yōu)異，提取的魷魚活性多肽具有很好的應用價值。
應當理解，這些實施案例的用途僅用于說明本發(fā)明而非意欲限制本發(fā)明的保護范圍。此外，也應理解，在閱讀了本發(fā)明的技術內容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動、修改和變型，所有的這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的保護范圍之內。