本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
中，鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑與方法。
背景技術(shù)：
：中國是世界上最早開展野鴨馴化飼養(yǎng)的國家之一，鴨肉及其加工副產(chǎn)品鴨脖、鴨腸、鴨爪等在中國有著非常廣泛的群眾基礎(chǔ)。北京鴨是由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所水禽研究室歷經(jīng)數(shù)十年選育而成的品種。準(zhǔn)確的系譜信息是家禽遺傳育種能夠順利開展的基礎(chǔ)，是獲得遺傳進(jìn)展的根本保障。錯(cuò)誤的系譜信息會(huì)影響遺傳評(píng)估的準(zhǔn)確性，降低遺傳進(jìn)展，給育種場和生產(chǎn)企業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。實(shí)際的育種工作中，從種蛋收集、孵化、種鴨飼養(yǎng)、到家系組配等各個(gè)環(huán)節(jié)都需要人工來進(jìn)行操作和記錄，因人為錯(cuò)誤而導(dǎo)致系譜不準(zhǔn)確在所難免。因此，需要通過親子鑒定糾正系譜記錄的錯(cuò)誤，以獲得盡可能多的遺傳進(jìn)展。近年來，分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，AFLP、RAPD、SSR等分子標(biāo)記被廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性評(píng)估和親子鑒定。目前在畜禽親子關(guān)系鑒定領(lǐng)域應(yīng)用最多的是微衛(wèi)星標(biāo)記，F(xiàn)AO已經(jīng)推薦了適用于豬、雞、牛、羊等主要畜禽遺傳多樣性及親子鑒定的微衛(wèi)星標(biāo)記體系。但是，用于鴨親子鑒定的微衛(wèi)星標(biāo)記體系仍然空缺。目前，NCBI網(wǎng)站僅報(bào)道了數(shù)百條鴨微衛(wèi)星標(biāo)記，且這些標(biāo)記因其穩(wěn)定性差、多態(tài)性低等原因大都不能用于親子鑒定，而具有應(yīng)用前景的3-4堿基重復(fù)的高度多態(tài)性微衛(wèi)星序列則及其缺乏。因此，需要通過挖掘和篩選微衛(wèi)星標(biāo)記建立適合于北京鴨的親子鑒定體系。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何鑒定北京鴨的親子關(guān)系。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑，為成套試劑3、成套試劑2或成套試劑1；所述成套試劑1由名稱分別為IAS05-P、IAS07-P和IAS11-P的引物對組成；所述IAS05-P由名稱分別為IAS05-F和IAS05-R的單鏈DNA組成；所述IAS05-F是如下a1)至a4)中的任一種單鏈DNA：a1)序列表中序列1所示的單鏈DNA；a2)在a1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；a3)與a1)或a2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；a4)在嚴(yán)格條件下與a1)或a2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS05-R是如下b1)至b4)中的任一種單鏈DNA：b1)序列表中序列2所示的單鏈DNA；b2)在b1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；b3)與b1)或b2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；b4)在嚴(yán)格條件下與b1)或b2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS07-P由名稱分別為IAS07-F和IAS07-R的單鏈DNA組成；所述IAS07-F是如下c1)至c4)中的任一種單鏈DNA：c1)序列表中序列3所示的單鏈DNA；c2)在c1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；c3)與c1)或c2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；c4)在嚴(yán)格條件下與c1)或c2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS07-R是如下d1)至d4)中的任一種單鏈DNA：d1)序列表中序列4所示的單鏈DNA；d2)在d1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；d3)與d1)或d2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；d4)在嚴(yán)格條件下與d1)或d2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS11-P由名稱分別為IAS11-F和IAS11-R的單鏈DNA組成；所述IAS11-F是如下e1)至e4)中的任一種單鏈DNA：e1)序列表中序列5所示的單鏈DNA；e2)在e1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；e3)與e1)或e2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；e4)在嚴(yán)格條件下與e1)或e2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS11-R是如下f1)至f4)中的任一種單鏈DNA：f1)序列表中序列6所示的單鏈DNA；f2)在f1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；f3)與f1)或f2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；f4)在嚴(yán)格條件下與f1)或f2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述成套試劑2由所述成套試劑1和試劑A組成；所述試劑A為名稱為IAS06-P的引物對和/或名稱為IAS08-P的引物對；所述IAS06-P由名稱分別為IAS06-F和IAS06-R的單鏈DNA組成；所述IAS06-F是如下g1)至g4)中的任一種單鏈DNA：g1)序列表中序列7所示的單鏈DNA；g2)在g1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；g3)與g1)或g2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；g4)在嚴(yán)格條件下與g1)或g2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS06-R是如下h1)至h4)中的任一種單鏈DNA：h1)序列表中序列8所示的單鏈DNA；h2)在h1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；h3)與h1)或h2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；h4)在嚴(yán)格條件下與h1)或h2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS08-P由名稱分別為IAS08-F和IAS08-R的單鏈DNA組成；所述IAS08-F是如下i1)至i4)中的任一種單鏈DNA：i1)序列表中序列9所示的單鏈DNA；i2)在i1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；i3)與i1)或i2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；i4)在嚴(yán)格條件下與i1)或i2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS08-R是如下j1)至j4)中的任一種單鏈DNA：j1)序列表中序列10所示的單鏈DNA；j2)在j1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；j3)與j1)或j2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；j4)在嚴(yán)格條件下與j1)或j2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述成套試劑3由所述成套試劑2和試劑B組成；所述試劑B為名稱分別為IAS12-P、IAS13-P、IAS04-P、IAS03-P、IAS01-P和IAS14-P的引物對中的六種、任五種、任四種、任三種、任兩種或任一種；所述IAS12-P由名稱分別為IAS12-F和IAS12-R的單鏈DNA組成；所述IAS12-F是如下k1)至k4)中的任一種單鏈DNA：k1)序列表中序列11所示的單鏈DNA；k2)在k1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；k3)與k1)或k2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；k4)在嚴(yán)格條件下與k1)或k2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS12-R是如下l1)至l4)中的任一種單鏈DNA：l1)序列表中序列12所示的單鏈DNA；l2)在l1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；l3)與l1)或l2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；l4)在嚴(yán)格條件下與l1)或l2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS13-P由名稱分別為IAS13-F和IAS13-R的單鏈DNA組成；所述IAS13-F是如下m1)至m4)中的任一種單鏈DNA：m1)序列表中序列13所示的單鏈DNA；m2)在m1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；m3)與m1)或m2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；m4)在嚴(yán)格條件下與m1)或m2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS13-R是如下n1)至n4)中的任一種單鏈DNA：n1)序列表中序列14所示的單鏈DNA；n2)在n1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；n3)與n1)或n2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；n4)在嚴(yán)格條件下與n1)或n2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS04-P由名稱分別為IAS04-F和IAS04-R的單鏈DNA組成；所述IAS04-F是如下o1)至o4)中的任一種單鏈DNA：o1)序列表中序列15所示的單鏈DNA；o2)在o1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；o3)與o1)或o2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；o4)在嚴(yán)格條件下與o1)或o2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS04-R是如下p1)至p4)中的任一種單鏈DNA：p1)序列表中序列16所示的單鏈DNA；p2)在p1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；p3)與p1)或p2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；p4)在嚴(yán)格條件下與p1)或p2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS03-P由名稱分別為IAS03-F和IAS03-R的單鏈DNA組成；所述IAS03-F是如下q1)至q4)中的任一種單鏈DNA：q1)序列表中序列17所示的單鏈DNA；q2)在q1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；q3)與q1)或q2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；q4)在嚴(yán)格條件下與q1)或q2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS03-R是如下r1)至r4)中的任一種單鏈DNA：r1)序列表中序列18所示的單鏈DNA；r2)在r1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；r3)與r1)或r2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；r4)在嚴(yán)格條件下與r1)或r2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS01-P由名稱分別為IAS01-F和IAS01-R的單鏈DNA組成；所述IAS01-F是如下s1)至s4)中的任一種單鏈DNA：s1)序列表中序列19所示的單鏈DNA；s2)在s1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；s3)與s1)或s2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；s4)在嚴(yán)格條件下與s1)或s2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS01-R是如下t1)至t4)中的任一種單鏈DNA：t1)序列表中序列20所示的單鏈DNA；t2)在t1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；t3)與t1)或t2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；t4)在嚴(yán)格條件下與t1)或t2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS14-P由名稱分別為IAS14-F和IAS14-R的單鏈DNA組成；所述IAS14-F是如下u1)至u4)中的任一種單鏈DNA：u1)序列表中序列21所示的單鏈DNA；u2)在u1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；u3)與u1)或u2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；u4)在嚴(yán)格條件下與u1)或u2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述IAS14-R是如下v1)至v4)中的任一種單鏈DNA：v1)序列表中序列22所示的單鏈DNA；v2)在v1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；v3)與v1)或v2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；v4)在嚴(yán)格條件下與v1)或v2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA。所述添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸具體可添加一至五個(gè)核苷酸。這里使用的術(shù)語“同一性”指與天然核酸序列的序列相似性?！巴恍浴卑ㄅc本發(fā)明的序列1-22中任一序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行評(píng)價(jià)。使用計(jì)算機(jī)軟件，兩個(gè)或多個(gè)序列之間的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用來評(píng)價(jià)相關(guān)序列之間的同一性。所述嚴(yán)格條件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下雜交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下雜交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃條件下雜交并洗膜。上述85％以上同一性，可為85％、90％或95％以上的同一性。所述鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑的引物對均可由熒光物質(zhì)標(biāo)記。所述IAS01-P、所述IAS07-P、所述IAS11-P和所述IAS04-P均可由HEX標(biāo)記。所述IAS03-P、所述IAS06-P、所述IAS08-P和所述IAS05-P均可由FAM標(biāo)記。所述IAS13-P、所述IAS12-P和所述IAS14-P均可由TAMRA標(biāo)記。所述成套試劑的各引物對可單獨(dú)使用，也可在一起使用，無論單獨(dú)使用還是在一起使用，各引物對的配比均可根據(jù)具體需要確定。所述成套試劑各引物對中兩條單鏈DNA的摩爾比均可為1:1。各引物對或各引物對的兩條單鏈DNA均可獨(dú)立包裝。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的系統(tǒng)。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的系統(tǒng)，包括所述鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑。所述系統(tǒng)具體可由所述鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑與A1和/或A2組成；所述A1為進(jìn)行PCR擴(kuò)增所需的試劑和/或儀器；所述A2為進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記基因分型所需的儀器和/或軟件和/或模塊。所述進(jìn)行PCR擴(kuò)增所需的試劑具體可為北京蕾創(chuàng)生物科技有限公司的2×TaqPCRMasterMix。所述進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記基因分型所需的儀器可為ABIPRISM3730XL遺傳分析儀。所述進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記基因分型所需的軟件可為GeneMapperV3.2軟件。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套分子標(biāo)記。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套分子標(biāo)記，為成套標(biāo)記3、成套標(biāo)記2或成套標(biāo)記1；所述成套標(biāo)記1由名稱分別為IAS05、IAS07和IAS11的分子標(biāo)記組成；所述IAS05、所述IAS07和所述IAS11分別為以北京鴨基因組DNA為模板利用所述IAS05-P、所述IAS07-P和所述IAS11-P進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的DNA分子；所述成套標(biāo)記2由所述成套標(biāo)記1和成套標(biāo)記A組成；所述成套標(biāo)記A為名稱為IAS06的分子標(biāo)記和/或名稱為IAS08的分子標(biāo)記；所述IAS06和所述IAS08分別為以北京鴨基因組DNA為模板利用所述IAS06-P和所述IAS08-P進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的DNA分子；所述成套標(biāo)記3由所述成套標(biāo)記2與成套標(biāo)記B組成；所述成套標(biāo)記B為名稱分別為IAS12、IAS13、IAS04、IAS03、IAS01和IAS14的分子標(biāo)記中的六種、任五種、任四種、任三種、任兩種或任一種；所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14分別為以北京鴨基因組DNA為模板利用所述IAS12-P、所述IAS13-P、所述IAS04-P、所述IAS03-P、所述IAS01-P和所述IAS14-P進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的DNA分子。所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06、所述IAS08、所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14均為微衛(wèi)星標(biāo)記。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的方法。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的方法，包括：利用所述鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑分別檢測待測子代北京鴨和待測親本北京鴨的分子標(biāo)記，根據(jù)所述分子標(biāo)記鑒定所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨是否具有親子關(guān)系；所述分子標(biāo)記為所述鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套分子標(biāo)記。在實(shí)際應(yīng)用中，確定所述分子標(biāo)記具體為哪些標(biāo)記時(shí)，可根據(jù)所述分子標(biāo)記在待測北京鴨群體中的累積排除概率來確定，所述分子標(biāo)記的累積排除概率只要滿足大于等于0.99即可用于進(jìn)一步具體的待測北京鴨個(gè)體間的親子鑒定。在鑒定待測北京鴨親子關(guān)系時(shí)，(1)如所用分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記1，且累積排除概率大于等于0.99時(shí)，則需同時(shí)滿足所用的分子標(biāo)記均符合孟德爾遺傳才可確定所述待測北京鴨具有親子關(guān)系，即：(1a)累積排除概率大于等于0.99且所用的分子標(biāo)記均符合孟德爾遺傳時(shí)，所述待測北京鴨具有或候選具有親子關(guān)系；(1b)累積排除概率大于等于0.99且所用的分子標(biāo)記至少有一個(gè)不滿足孟德爾遺傳時(shí)，所述待測北京鴨不具有或候選不具有親子關(guān)系。(2)如所用分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記2，且累積排除概率大于等于0.99時(shí)，則需同時(shí)滿足所用的分子標(biāo)記完全符合孟德爾遺傳才可確定所述待測北京鴨具有親子關(guān)系，即：(2a)累積排除概率大于等于0.99且所用的分子標(biāo)記均符合孟德爾遺傳時(shí)，所述待測北京鴨具有或候選具有親子關(guān)系；(2b)累積排除概率大于等于0.99且所用的分子標(biāo)記至少有1個(gè)不符合孟德爾遺傳時(shí)，所述待測北京鴨不具有或候選不具有親子關(guān)系。(3)如所用分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記3，且累積排除概率大于等于0.99時(shí)，則需同時(shí)滿足所用的分子標(biāo)記有不大于1個(gè)不符合孟德爾遺傳才可確定所述待測北京鴨具有親子關(guān)系，即：(3a)累積排除概率大于等于0.99且所用的分子標(biāo)記有小于等于1個(gè)不符合孟德爾遺傳時(shí)，所述待測北京鴨具有或候選具有親子關(guān)系；(3b)累積排除概率大于等于0.99且所用的分子標(biāo)記有大于等于2個(gè)不符合孟德爾遺傳時(shí)，所述待測北京鴨不具有或候選不具有親子關(guān)系。上文中，增加所用分子標(biāo)記的個(gè)數(shù)的目的是使累積排除概率大于等于0.99，在累積排除概率大于等于0.99時(shí)按照(2a)和(2b)確定所述待測北京鴨是否具有親子關(guān)系。上文中，在進(jìn)一步增加所用分子標(biāo)記的個(gè)數(shù)以進(jìn)一步確定所述待測北京鴨是否具有親子關(guān)系時(shí)，所增加的分子標(biāo)記可依據(jù)排除概率從大到小順序依次增加。所增加的分子標(biāo)記具體可按照表5的順序依次增加，即可按照所述IAS05標(biāo)記、所述IAS07標(biāo)記、所述IAS11標(biāo)記、所述IAS06標(biāo)記、所述IAS08標(biāo)記、所述IAS12標(biāo)記、所述IAS13標(biāo)記、所述IAS04標(biāo)記、所述IAS03標(biāo)記、所述IAS01標(biāo)記和所述IAS14標(biāo)記的順序依次增加。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在檢測待測北京鴨與待測父母對是否存在親子關(guān)系時(shí)，所述分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記1的所述IAS05、所述IAS07和所述IAS11。在待測子代北京鴨的一個(gè)親本已知、鑒定待測親本北京鴨是否為所述待測子代北京鴨的另一親本時(shí)，所述分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記2的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06和所述IAS08。在待測子代北京鴨的一個(gè)親本未知、鑒定待測親本北京鴨是否為所述待測子代北京鴨的另一親本時(shí)，所述分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記3的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06、所述IAS08、所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14。上述方法中，所述檢測待測子代北京鴨和待測親本北京鴨的分子標(biāo)記可為檢測所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨所述分子標(biāo)記的基因型或序列。所述根據(jù)所述分子標(biāo)記鑒定所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨是否具有親子關(guān)系可為根據(jù)所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨所述分子標(biāo)記的基因型或序列鑒定所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨是否具有親子關(guān)系。所述根據(jù)所述分子標(biāo)記鑒定所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨是否具有親子關(guān)系具體可為根據(jù)所述分子標(biāo)記在所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨間是否符合孟德爾遺傳規(guī)律以及所述分子標(biāo)記的累積排除概率，鑒定所述待測子代北京鴨與所述待測親本北京鴨是否具有親子關(guān)系。在所述分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記1中的所述IAS05、所述IAS07和所述IAS11且累積排除概率大于0.99時(shí)，如這3個(gè)標(biāo)記中至少有一個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則所述待測親本不為或候選不為所述待測子代的親本；如這3個(gè)標(biāo)記都符合孟德爾遺傳，則所述待測親本為或候選為所述待測子代的親本。在所述分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記2中的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06和所述IAS08且累積排除概率大于0.99時(shí)，如這5個(gè)標(biāo)記中有大于等于1個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則所述待測親本不為或候選不為所述待測子代的親本；如5個(gè)標(biāo)記均符合孟德爾遺傳，則所述待測親本為或候選為所述待測子代的親本。在所述分子標(biāo)記為所述成套標(biāo)記3中的所述IAS05、所述IAS07、所述IAS11、所述IAS06、所述IAS08、所述IAS12、所述IAS13、所述IAS04、所述IAS03、所述IAS01和所述IAS14且累積排除概率大于0.99時(shí)，如這11個(gè)標(biāo)記中有大于等于2個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則所述待測親本不為或候選不為所述待測子代的親本；如11個(gè)標(biāo)記中有小于2個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則所述待測親本為或候選為所述待測子代的親本。上述方法中，所述利用成套試劑分別檢測待測子代北京鴨和待測親本北京鴨的分子標(biāo)記，可為利用所述成套試劑分別對所述待測子代北京鴨和所述待測親本北京鴨的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測所述分子標(biāo)記。上述方法中，在進(jìn)行所述PCR擴(kuò)增時(shí)，所述IAS05-P、所述IAS07-P、所述IAS11-P、所述IAS06-P、所述IAS08-P、所述IAS12-P、所述IAS13-P、所述IAS04-P、所述IAS03-P、所述IAS01-P和所述IAS14-P的退火溫度均可為55-60℃。上述方法中，所述IAS05-P的退火溫度具體可為60℃。所述IAS07-P的退火溫度具體可為58.5℃。所述IAS11-P的退火溫度具體可為57.5℃。所述IAS06-P的退火溫度具體可為58℃。所述IAS08-P的退火溫度具體可為58.5℃。所述IAS12-P的退火溫度具體可為57.5℃。所述IAS13-P的退火溫度具體可為58℃。所述IAS04-P的退火溫度具體可為57.5℃。所述IAS03-P的退火溫度具體可為57.5℃。所述IAS01-P的退火溫度具體可為58.5℃。所述IAS14-P的退火溫度具體可為58.5℃。在利用所述成套試劑中的各引物對進(jìn)行所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系中，各單鏈DNA的濃度均可為0.4mM。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了下述任一應(yīng)用：X1、所述成套試劑在制備鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系產(chǎn)品中的應(yīng)用；X2、所述成套試劑在鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系中的應(yīng)用；X3、所述成套試劑在北京鴨育種中的應(yīng)用；X4、所述系統(tǒng)在制備鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系產(chǎn)品中的應(yīng)用；X5、所述系統(tǒng)在鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系中的應(yīng)用；X6、所述系統(tǒng)在北京鴨育種中的應(yīng)用；X7、所述成套分子標(biāo)記在鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系中的應(yīng)用；X8、所述成套分子標(biāo)記在北京鴨育種中的應(yīng)用；X9、所述方法在北京鴨育種中的應(yīng)用。本發(fā)明中，在經(jīng)過排除概率的評(píng)價(jià)后，所述成套試劑、所述系統(tǒng)、所述成套分子標(biāo)記和所述方法也均可用于其他品種的鴨群體。本發(fā)明中，所述排除概率(Probabilityofpaternityexclusion，PE)是評(píng)價(jià)遺傳標(biāo)記在親子鑒定中實(shí)用價(jià)值大小的一個(gè)重要指標(biāo)，是利用各標(biāo)記的等位基因頻率來計(jì)算候選親本某標(biāo)記的等位基因不是來自親生父親或親生母親的排除概率。所述累積排除概率(Combinedexclusionprobabilities)與所述排除概率可按照以下方法計(jì)算：(1)當(dāng)另一親本信息未知時(shí)，排除子代與候選親本是親子關(guān)系的排除概率P為：k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率CPE(1)的計(jì)算公式為：CPE(1)＝1-(1-P1)(1-P2)(1-P3)…(1-Pk)，Pk為第k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率；(2)當(dāng)另一親本信息已知時(shí)，排除子代與候選親本是親子關(guān)系的排除概率R為：k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率CPE(2)的計(jì)算公式為：CPE(2)＝1-(1-R1)(1-R2)(1-R3)…(1-Rk)，Rk為第k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率；(3)排除子代與無關(guān)的候選父母對是親子關(guān)系的排除概率Q為：k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率CPE(3)的計(jì)算公式為：CPE(3)＝1-(1-Q1)(1-Q2)(1-Q3)…(1-Qk)，Qk為第k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率。其中，n代表每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因數(shù)，pi代表第i個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的頻率。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑與成套分子標(biāo)記可用于鑒定北京鴨，該成套分子標(biāo)記中的11個(gè)標(biāo)記多態(tài)性高，標(biāo)記間不連鎖且片段大小間隔適當(dāng)，易于同時(shí)檢測。利用本發(fā)明的成套試劑與成套分子標(biāo)記在檢測待測北京鴨與待測父母是否存在親子關(guān)系時(shí)的累積排除概率可達(dá)0.999999，在待測子代北京鴨的一個(gè)親本已知、鑒定待測親本北京鴨是否為所述待測子代北京鴨的另一親本時(shí)的累積排除概率可達(dá)0.99974，在待測子代北京鴨的一個(gè)親本未知、鑒定待測親本北京鴨是否為所述待測子代北京鴨的另一親本時(shí)的累積排除概率可達(dá)0.991419。本發(fā)明還通過優(yōu)化PCR擴(kuò)增條件(如退火溫度)和PCR擴(kuò)增體系(如引物濃度)，建立了基于上述成套試劑與成套分子標(biāo)記的微衛(wèi)星標(biāo)記基因分型方法。本發(fā)明的成套試劑與成套分子標(biāo)記可用于北京鴨的完整、準(zhǔn)確的系譜鑒定和個(gè)體識(shí)別，可校正發(fā)生混亂的北京鴨育種系譜，從而提高育種準(zhǔn)確性和加快育種進(jìn)程，具有良好的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)效益。附圖說明圖1為IAS07標(biāo)記和IAS08標(biāo)記的基因型分型。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑、儀器等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑能用于鑒定北京鴨親子鑒定一、鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑的制備本實(shí)施例提供的鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑，為成套試劑1、成套試劑2和成套試劑3；成套試劑1由名稱分別為IAS05-P、IAS07-P和IAS11-P的引物對組成；IAS05-P由名稱分別為IAS05-F和IAS05-R的單鏈DNA組成；IAS07-P由名稱分別為IAS07-F和IAS07-R的單鏈DNA組成；IAS11-P由名稱分別為IAS11-F和IAS11-R的單鏈DNA組成；成套試劑2由成套試劑1和試劑A組成；試劑A由名稱分別為IAS06-P和IAS08-P的引物對組成；IAS06-P由名稱分別為IAS06-F和IAS06-R的單鏈DNA組成；IAS08-P由名稱分別為IAS08-F和IAS08-R的單鏈DNA組成；成套試劑3由成套試劑2和試劑B組成；試劑B由名稱分別為IAS12-P、IAS13-P、IAS04-P、IAS03-P、IAS01-P和IAS14-P的引物對組成；IAS12-P由名稱分別為IAS12-F和IAS12-R的單鏈DNA組成；IAS13-P由名稱分別為IAS13-F和IAS13-R的單鏈DNA組成；IAS04-P由名稱分別為IAS04-F和IAS04-R的單鏈DNA組成；IAS03-P由名稱分別為IAS03-F和IAS03-R的單鏈DNA組成；IAS01-P由名稱分別為IAS01-F和IAS01-R的單鏈DNA組成；IAS14-P由名稱分別為IAS14-F和IAS14-R的單鏈DNA組成。各引物對的PCR產(chǎn)物具有不同片段長度、處于不同染色體位置，屬于11種不同的微衛(wèi)星標(biāo)記，將其分別命名為IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記、IAS11標(biāo)記、IAS06標(biāo)記、IAS08標(biāo)記、IAS12標(biāo)記、IAS13標(biāo)記、IAS04標(biāo)記、IAS03標(biāo)記、IAS01標(biāo)記和IAS14標(biāo)記。各引物對中兩條單鏈DNA的摩爾比均為1:1，各引物對的兩條單鏈DNA均獨(dú)立包裝，各引物對均由熒光物質(zhì)標(biāo)記，具體信息如表1所示。表1、鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑各引物對的具體信息二、鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑的排除概率分別提取中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所北京鴨保種場的96只北京鴨的基因組DNA，以基因組DNA為模板利用各引物對和退火溫度進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增利用經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)體系(表2)及優(yōu)化后的反應(yīng)條件(表3)。將PCR產(chǎn)物經(jīng)ABIPRISM3730XL遺傳分析儀進(jìn)行電泳與測序后，利用GeneMapperV3.2軟件，設(shè)定分子量標(biāo)準(zhǔn)條帶后，根據(jù)遺傳分析儀所收集電泳熒光信號(hào)的顏色和位置，自動(dòng)計(jì)算各微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型。圖1以IAS07標(biāo)記和IAS08標(biāo)記為例，該圖中IAS07-P(FAM，熒光綠)標(biāo)記為雜合子，片段大小為(254bp，276bp)；IAS08-P(HEX，熒光藍(lán))標(biāo)記為純合子，片段大小為(157bp，157bp)。表2、PCR反應(yīng)體系注：表2中，2×TaqPCRMasterMix為北京蕾創(chuàng)生物科技有限公司產(chǎn)品，組成成分包括：0.1units/ml的TaqDNAPolymerase(recombinant)，4mM的MgCl2，dNTPs(dATP、dCTP、dGTP和dTTP，每種dNTP的濃度均為0.5mM)，其它穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑；藍(lán)色染料。表3、PCR反應(yīng)循環(huán)條件微衛(wèi)星標(biāo)記的群體遺傳學(xué)分析：應(yīng)用Cervus3.07軟件統(tǒng)計(jì)11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記遺傳多態(tài)性參數(shù)，包括等位基因數(shù)、觀測雜合度、期望雜合度和多態(tài)信息含量，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記等位基因數(shù)在4～13個(gè)，均表現(xiàn)高度多態(tài)性；各標(biāo)記的觀測雜合度在0.551～0.859之間，期望雜合度在0.585～0.856之間，且每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的觀測雜合度和期望雜合度差值不大，在0.004～0.138之間，說明各微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因分布合理，能夠準(zhǔn)確的反映群體的遺傳結(jié)構(gòu)。各標(biāo)記的多態(tài)信息含量(PIC)在0.545～0.834之間，說明這11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在鑒定北京鴨中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。表4、11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳多態(tài)性標(biāo)記等位基因數(shù)觀測雜合度期望雜合度多態(tài)信息含量IAS01標(biāo)記70.6410.6140.571IAS03標(biāo)記40.6150.6470.582IAS04標(biāo)記50.5510.6730.627IAS05標(biāo)記130.7180.8560.834IAS14標(biāo)記50.5640.5850.545IAS07標(biāo)記80.8080.8380.811IAS08標(biāo)記70.6150.7450.708IAS12標(biāo)記50.7690.7380.691IAS11標(biāo)記80.8590.8350.807IAS06標(biāo)記80.7560.7640.722IAS13標(biāo)記40.7180.7140.66根據(jù)各微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因頻率，計(jì)算所檢測標(biāo)記的排除概率及累積排除概率(Combinedexclusionprobabilities)。排除概率(Probabilityofpaternityexclusion，PE)是評(píng)價(jià)遺傳標(biāo)記在親子鑒定中實(shí)用價(jià)值大小的一個(gè)重要指標(biāo)，是利用各標(biāo)記的等位基因頻率來計(jì)算候選親本某標(biāo)記的等位基因不是來自親生父親或親生母親的排除概率。排除概率與累積排除概率按照以下三種情況計(jì)算：(1)當(dāng)另一親本信息未知時(shí)，排除子代與候選親本是親子關(guān)系的排除概率P為：k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率CPE(1)的計(jì)算公式為：CPE(1)＝1-(1-P1)(1-P2)(1-P3)…(1-Pk)，Pk為第k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率；(2)當(dāng)另一親本信息已知時(shí)，排除子代與候選親本是親子關(guān)系的排除概率R為：k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率CPE(2)的計(jì)算公式為：CPE(2)＝1-(1-R1)(1-R2)(1-R3)…(1-Rk)，Rk為第k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率；(3)排除子代與無關(guān)的候選父母對是親子關(guān)系的排除概率Q為：k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率CPE(3)的計(jì)算公式為：CPE(3)＝1-(1-Q1)(1-Q2)(1-Q3)…(1-Qk)，Qk為第k個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率。其中，n代表每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因數(shù)，pi代表第i個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的頻率。親子鑒定是基于孟德爾遺傳的兩個(gè)基本定律：分離和自由組合歸律。子代的兩個(gè)等位基因一個(gè)來自父親，一個(gè)來自母親。通過結(jié)果分析，如果符合孟德爾遺傳定律，則不能排除具有親子關(guān)系，否則可以排除其親子關(guān)系。根據(jù)孟德爾遺傳定律，后代染色體上的全部基因，一半遺傳于其親生父親，一半遺傳于其親生母親。因此，在應(yīng)用微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行親子鑒定時(shí)，(i)肯定子代的某個(gè)標(biāo)記基因型來自親生親本，而候選親本并不攜帶此標(biāo)記基因型，這就違背了孟德爾遺傳定律，可以排除子代與候選親本之間的親子關(guān)系；(ii)肯定子代的某個(gè)標(biāo)記基因型來自親生親本，而候選親本也攜帶此標(biāo)記基因型，則符合孟德爾遺傳定律，因此不能排除子代與候選親本之間的親緣關(guān)系。計(jì)算每個(gè)候選親本在所有微衛(wèi)星標(biāo)記排除概率(表5)，由表5可知，IAS05標(biāo)記的排除概率最高為0.543，IAS14、IAS01、IAS03標(biāo)記的排除概率相對較低。通過計(jì)算累積排除概率(表6)，由表6可知，這11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在三種不同情況下，累積排除概率CPE(1)、CPE(2)、CPE(3)分別高達(dá)0.9914、0.9997、0.999999，說明這11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記親子鑒定效力極高。表5、11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的排除概率標(biāo)記PRQIAS05標(biāo)記0.5430.7060.875IAS07標(biāo)記0.4960.6670.842IAS11標(biāo)記0.4860.6590.833IAS06標(biāo)記0.3650.5430.728IAS08標(biāo)記0.3520.5340.731IAS12標(biāo)記0.3260.5040.689IAS13標(biāo)記0.2860.4590.635IAS04標(biāo)記0.2620.4390.63IAS03標(biāo)記0.2190.3760.541IAS01標(biāo)記0.2150.3880.579IAS14標(biāo)記0.1910.3630.551表6、微衛(wèi)星標(biāo)記累積排除概率標(biāo)記CPE(1)CPE(2)CPE(3)IAS05標(biāo)記0.5430.7060.875IAS07標(biāo)記0.7696720.9020980.98025IAS11標(biāo)記0.8816110.9666150.996702IAS06標(biāo)記0.9248230.9847430.999103IAS08標(biāo)記0.9512850.992890.999759IAS12標(biāo)記0.9671660.9964740.999925IAS13標(biāo)記0.9765570.9980920.999973IAS04標(biāo)記0.9826990.998930.99999IAS03標(biāo)記0.9864880.9993320.999995IAS01標(biāo)記0.9893930.9995910.999998IAS14標(biāo)記0.9914190.999740.999999注：表6中，與微衛(wèi)星標(biāo)記同行的CPE(1)均為另一親本信息未知時(shí)，該行標(biāo)記與該標(biāo)記上方標(biāo)記的累積排除概率，如與IAS05標(biāo)記同行的CPE(1)為0.543，0.543為IAS05標(biāo)記在另一親本信息未知時(shí)的排除概率，與IAS12標(biāo)記同行的CPE(1)為0.967166，0.967166為在另一親本信息未知時(shí)IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記、IAS11標(biāo)記、IAS06標(biāo)記、IAS08標(biāo)記和IAS12標(biāo)記的累積排除概率，如與IAS14標(biāo)記同行的CPE(1)為0.991419，0.991419為在另一親本信息未知時(shí)這11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的累積排除概率。CPE(2)和CPE(3)同CPE(1)。將11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記按照單個(gè)標(biāo)記排除概率的高低進(jìn)行排序(順序見表5)，然后劃分為不同標(biāo)記數(shù)目的標(biāo)記組合，分別含1-11個(gè)標(biāo)記。在實(shí)際應(yīng)用中，所用含N(1≤N≤11)個(gè)標(biāo)記的微衛(wèi)星標(biāo)記組合中的微衛(wèi)星標(biāo)記是按照排除概率排序名稱靠前的N個(gè)標(biāo)記，以保證標(biāo)記數(shù)目一定的情況下，獲得最大的累積排除概率。由表6可知，在不同應(yīng)用場景下，微衛(wèi)星標(biāo)記的鑒定效力是不同的。微衛(wèi)星標(biāo)記數(shù)目為11時(shí)單親累積排除概率(即在另一親本信息未知時(shí)的累積排除概率)大于0.99，而對于第二親本信息已知和候選父母對的鑒定，則只分別需要前5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(即IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記、IAS11標(biāo)記、IAS06標(biāo)記和IAS08標(biāo)記)和前3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(即IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記和IAS11標(biāo)記)，即可使累積排除概率大于0.99；因此，依據(jù)親子鑒定累積排除概率不低于0.99的標(biāo)準(zhǔn)，為降低檢測成本，在實(shí)際應(yīng)用時(shí)所需要選擇的微衛(wèi)星標(biāo)記分別為：(1)當(dāng)另一親本信息未知時(shí)，檢測待測子代與待測親本是否為親子關(guān)系需應(yīng)用全部11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(即由IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記、IAS11標(biāo)記、IAS06標(biāo)記、IAS08標(biāo)記、IAS12標(biāo)記、IAS13標(biāo)記、IAS04標(biāo)記、IAS03標(biāo)記、IAS01標(biāo)記和IAS14標(biāo)記組成的成套標(biāo)記3)；(2)當(dāng)另一親本信息已知時(shí)，檢測待測子代與待測親本是否為親子關(guān)系需要應(yīng)用前5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(即由IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記、IAS11標(biāo)記、IAS06標(biāo)記和IAS08標(biāo)記組成的成套標(biāo)記2)；(3)排除待測子代與待測父母對是否為親子關(guān)系時(shí)，則只需要應(yīng)用前3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(即由IAS05標(biāo)記、IAS07標(biāo)記和IAS11標(biāo)記組成的成套標(biāo)記1)。在進(jìn)行具體檢測時(shí)，當(dāng)另一親本信息未知時(shí)，利用步驟一中的成套試劑3對待測親本與待測子代基因組DNA進(jìn)行檢測，確定待測親本與待測子代成套標(biāo)記中11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型，根據(jù)其基因型確定該待測親本是否為該待測子代的親本：如11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中有大于等于2個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則該待測親本非該待測子代的親本；如11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中有小于2個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則該待測親本為該待測子代的親本；當(dāng)另一親本信息已知時(shí)，利用步驟一中的成套試劑2對待測親本與待測子代基因組DNA進(jìn)行檢測，確定待測親本與待測子代成套標(biāo)記2這5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型，根據(jù)其基因型確定該待測親本是否為該待測子代的親本：如5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中至少有1個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則該待測親本非該待測子代的親本；如5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記均符合孟德爾遺傳，則該待測親本為該待測子代的親本；排除子代與無關(guān)的候選父母對是親子關(guān)系時(shí)，利用步驟一中的成套試劑1對待測父母對的每個(gè)候選親本與待測子代基因組DNA進(jìn)行檢測，確定待測父母對的每個(gè)候選親本與待測子代成套標(biāo)記1中這3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型，根據(jù)其基因型確定該待測父母對是否為待測子代的親本：針對該待測父母對中的每個(gè)待測親本，如3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中有至少1個(gè)標(biāo)記不符合孟德爾遺傳，則該待測父母對中的該待測親本非待測子代的親本；如3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記都符合孟德爾遺傳，則該待測父母對中的該待測親本為待測子代的親本。三、微衛(wèi)星標(biāo)記組合的親子鑒定效力檢驗(yàn)Cervus軟件可以通過親權(quán)模擬(simulation)來評(píng)估可信度。模擬的目的是通過比較大量隨機(jī)后代的LOD值，得到大量的Delta分布(模擬10,000次)。通過比較最可能親本(most-likelyparent)是真正親本(trueparent)時(shí)Delta分布與最可能親本不是真正親本時(shí)Delta分布，得到Delta關(guān)鍵值，假如這個(gè)關(guān)鍵值是在特定可信度水平如95％確定的，那么當(dāng)分析真實(shí)數(shù)據(jù)的親權(quán)關(guān)系時(shí)，最可能親本的LOD值超過Delta關(guān)鍵值，其親權(quán)鑒定的可信度即為可信度95％。應(yīng)用上文11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對步驟二的96只北京鴨的基因型分型結(jié)果進(jìn)行模擬親子鑒定，抽樣10000次。結(jié)果顯示，當(dāng)一個(gè)親本已知時(shí)，Delta關(guān)鍵值為0，鑒定成功率達(dá)到99％，可信度大于95％；當(dāng)沒有親本信息時(shí)，Delta關(guān)鍵值為1.05，鑒定成功率達(dá)到87％，可信度大于95％。從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所北京鴨保種場的北京鴨群體中隨機(jī)選擇系譜記錄準(zhǔn)確的6對親子對(E01與D07，E03與D03，E04與D03，E06與C02，E07與D01，E09與A11，每一親子對中子代的另一親本信息均未知)和1個(gè)無關(guān)公鴨(F01)，分別提取上基因組DNA，利用實(shí)施例1的成套試劑3按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在ABIPRISM3730XL遺傳分析儀上檢測，并確定各對象各微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型。通過對它們11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記基因型的分析，應(yīng)用似然法鑒定它們之間的親子關(guān)系。鑒定結(jié)果與實(shí)際系譜一致，LOD值從3.64～8.32，且置信度均達(dá)到95％(表7)。而無關(guān)公鴨作為候選父親時(shí)，LOD值均小于0，表示它不可能是各子代的親生父親。此結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了該微衛(wèi)星標(biāo)記組合可以作為北京鴨親子鑒定的檢測體系，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可信。表7、LOD值實(shí)施例2、鑒定或輔助鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑在北京鴨親子關(guān)系鑒定中的應(yīng)用從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所北京鴨保種場的北京鴨群體中選擇了3只北京鴨，編號(hào)分別為E03、E07和C12，現(xiàn)已知編號(hào)為E07的北京鴨為編號(hào)為C12(公)的北京鴨的子代，編號(hào)為E03的北京鴨與E07無親緣關(guān)系(即為無關(guān)父親)。下面將E03與C12作為E07候選父親，對實(shí)施例1的成套試劑能用于鑒定北京鴨親子關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證。分別提取上述3只北京鴨的基因組DNA，利用實(shí)施例1的成套試劑3按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在ABIPRISM3730XL遺傳分析儀上檢測，并確定各樣本各微衛(wèi)星標(biāo)記的基因型，結(jié)果見表8。表8、檢測結(jié)果在被檢測的11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中，除IAS11標(biāo)記外，候選子代E07和候選父親C12的IAS01標(biāo)記、IAS03標(biāo)記、IAS04標(biāo)記、IAS05標(biāo)記、IAS14標(biāo)記、IAS07標(biāo)記、IAS08標(biāo)記、IAS12標(biāo)記、IAS06標(biāo)記和IAS13標(biāo)記均完全符合孟德爾遺傳，根據(jù)前述判定標(biāo)準(zhǔn)，E07與候選父親C12存在親子關(guān)系；而E07和候選父親E03有5個(gè)標(biāo)記(IAS07、IAS08、IAS12、IAS13、IAS04))不符合孟德爾遺傳規(guī)律，故排除子代E07與候選父親E03的親子關(guān)系。該檢測結(jié)果與實(shí)際情況完全一致。<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所<120>鑒定北京鴨親子關(guān)系的成套試劑與方法<160>22<170>PatentInversion3.5<210>1<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>1tctgtgtagttgcggaatgc20<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>2aaagcatttttagtgccccc20<210>3<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>3aattggctgttcccaaagtg20<210>4<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>4tgcttcctcactgcaacatc20<210>5<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>5agggcattttgtgacgagac20<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>6cctgaagcgcctattgaaac20<210>7<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>7aggcagaggtcaactcctca20<210>8<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>8ccacctcactgaaagcaaca20<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>9tgggaatggaggaacttgtc20<210>10<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>10ttggaccaggtgccttttag20<210>11<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>11ttgagggcattgacttgttg20<210>12<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>12ccaacagaatcacaaagcaca21<210>13<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>13tccctgatctaaggtccctg20<210>14<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>14tcaaggcaacaaagaatcactg22<210>15<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>15cagccaggattaaaaccaga20<210>16<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>16taggagatctgtcggccact20<210>17<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>17aaacactttggggctttttg20<210>18<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>18ccacaccgattttcatcaca20<210>19<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>19actagggaacaaggcagggt20<210>20<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>20ctctcccacaccagaccaat20<210>21<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>21caactactccgtggtcagca20<210>22<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>22agcaacgacctctactccca20當(dāng)前第1頁1 2 3