用于鑒定軍團菌毒力的方法及其專用試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于鑒定軍團菌毒力的方法及其專用試劑盒。本發(fā)明的方法包括如下步驟：(1)設置參數(shù)：Spectral?acquisition?setup；Grating?scan?type:Extended；Confocality:Standard；Spectrum?Range:Low?100.00；Centre?Raman?shit/cm-1；High?2000.00；Configuration:Laser?name?532nm?edge；Grating?name?1800l/mm；Exposure?time/s:10.00；Accumulations:1；Objective:50；Laser?power％:100；(2)進行檢測；(3)得到拉曼光譜圖；在500-2000橫坐標范圍內：如果存在1個以上強度為4000以上的峰，該待測軍團菌為軍團菌強毒株；如果不滿足上述條件，該待測軍團菌為軍團菌弱毒株。本發(fā)明提供的方法快速、簡便、檢測成本低。
【專利說明】用于鑒定軍團菌毒力的方法及其專用試劑盒

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于鑒定軍團菌毒力的方法及其專用試劑盒。

【背景技術】
[0002]軍團菌，系需氧革蘭氏陰性桿菌，以嗜肺軍團菌最易致病。軍團菌屬已有48個軍團菌種被發(fā)現(xiàn)，其中19種被認為與人類呼吸道感染有關。
[0003]流行病學調查證實，軍團菌是通過氣溶膠經(jīng)空氣傳播給人的，與冷卻塔、熱水供應系統(tǒng)、蒸汽濃縮器、礦泉療養(yǎng)浴池、臨床呼吸裝置的加濕器、超級市場蔬菜噴霧器、噴泉等有關。個別報道，引用被軍團菌污染的水和接觸被軍團菌污染的土壤也能引起軍團病。目前為止，人與人之間的傳播尚未得到證實。軍團病的特征為肺炎伴全身性毒血癥癥狀，嚴重者出現(xiàn)周圍回圈衰竭、呼吸衰竭。胸部X線表現(xiàn)在早期為單葉斑片狀陰影，繼而肺實變，病變迅速發(fā)展至多肺葉段，可有肺膿腫形成或少量胸腔積液征。確診依賴于特異性抗體的檢查及在痰、胸腔積液、肺組織活檢標本中分離出細菌。


【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種用于鑒定軍團菌毒力的方法及其專用試劑盒。
[0005]本發(fā)明提供了一種鑒定待測軍團菌的毒力的試劑盒，包括拉曼光譜儀和記載有如下操作規(guī)程的載體:
[0006](I)設置拉曼光譜儀的如下參數(shù):
[0007]關鍵參數(shù)為:Spectralacquisit1n setup ；
[0008]在Range界面設置如下參數(shù):
[0009]Grating scan type:Extended ;
[0010]Confocality: Standard ；
[0011]Spectrum Range: Low 100.00;
[0012]Centre Raman shit/cnT1 ；
[0013]High 2000.00 ；
[0014]Configurat1n: Laser name 532nm edge ；
[0015]Grating name 1800 1/mm ；
[0016]在Acquisit1n界面設置如下參數(shù):
[0017]Exposure time/s: 10.00 ；
[0018]Accumulat1ns:1 ；
[0019]Objective:50 ；
[0020]Laser power %: 100 ；
[0021](2)取待測軍團菌置于載玻片上，放置到完成步驟(I)的參數(shù)設置的拉曼光譜儀中進行檢測；
[0022](3)完成步驟(2)后，將拉曼光譜儀的自帶軟件設置為WiRE3.0，進行數(shù)據(jù)處理，得到拉曼光譜圖；拉曼光譜圖中，在500-2000橫坐標范圍內:如果存在I個以上(含I個)縱坐標(counts)強度為4000以上的峰，該待測軍團菌為軍團菌強毒株；如果不滿足上述條件，該待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
[0023]本發(fā)明還保護一種鑒定待測軍團菌的毒力的方法，包括如下步驟:
[0024](I)設置拉曼光譜儀的如下參數(shù):
[0025]關鍵參數(shù)為:Spectralacquisit1n setup ；
[0026]在Range界面設置如下參數(shù):
[0027]Grating scan type:Extended ;
[0028]Confocality: Standard ；
[0029]Spectrum Range: Low 100.00;
[0030]Centre Raman shit/cm"1 ；
[0031]High 2000.00 ；
[0032]Configurat1n: Laser name 532nm edge ；
[0033]Grating name 1800 1/mm ；
[0034]在Acquisit1n界面設置如下參數(shù):
[0035]Exposure time/s: 10.00 ；
[0036]Accumulat1ns:1 ；
[0037]Objective:50 ；
[0038]Laser power %: 100 ；
[0039](2)取待測軍團菌置于載玻片上，放置到完成步驟(I)的參數(shù)設置的拉曼光譜儀中進行檢測；
[0040](3)完成步驟(2)后，將拉曼光譜儀的自帶軟件設置為WiRE3.0，進行數(shù)據(jù)處理，得到拉曼光譜圖；拉曼光譜圖中，在500-2000橫坐標范圍內:如果存在I個以上(含I個)縱坐標(counts)強度為4000以上的峰，該待測軍團菌為軍團菌強毒株；如果不滿足上述條件，該待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
[0041]所述拉曼光譜儀具體可為生產(chǎn)廠家為英國雷尼紹公司(RENISHAW)，型號為inViaRaman Microscope的拉曼光譜儀。
[0042]軍團菌強毒株和軍團菌弱毒株的定義如下:將待測軍團菌與宿主細胞共培養(yǎng)，如果與共培養(yǎng)的O時刻相比，共培養(yǎng)24小時后宿主細胞內的所述待測軍團菌數(shù)量增加，待測軍團菌為軍團菌強度株；如果不滿足上述條件，待測軍團菌為軍團菌弱毒株。所述宿主細胞具體可為小鼠肺泡巨噬細胞系J774。
[0043]軍團菌強毒株和軍團菌弱毒株的定義具體如下:(I)取待測軍團菌，用PBS緩沖液(pH7.2-7.4,0.01M)懸浮，得到108cfu/ml的菌懸液，然后用RPMI1640培養(yǎng)液將菌懸液稀釋至10倍體積，得到濃度為107cfu/ml的菌液；(2)采用含10% (體積比)胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液懸浮小鼠肺泡巨噬細胞系J774，得到細胞濃度為2 X 15個細胞/mL的細胞懸液；(3)取24孔板，每孔加入500 μ L步驟(2)得到的細胞懸液，置于37°C、5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)4小時；然后加入放入Iml步驟(I)得到的菌液，置于37°C、5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)
1.5小時；然后取出24孔板，用PBS緩沖液清洗三遍以去除非粘附細菌；然后每孔加入I毫升RPMI1640培養(yǎng)液，置于37°C、5% CO2環(huán)境中共培養(yǎng)，分別于共培養(yǎng)O小時或24小時后棄除培養(yǎng)上清，每孔加入ImL滅菌水，刮下孔底部的細胞，并將此細胞混懸液轉移至1.5mL的離心管，梯度稀釋之后接種于BCYE平板，進行軍團菌的菌落計數(shù)；如果與共培養(yǎng)的O時刻相比，共培養(yǎng)24小時后每毫升細胞混懸液中軍團菌的數(shù)量增加，待測軍團菌為軍團菌強度株；如果不滿足上述條件，待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
[0044]軍團菌強毒株和軍團菌弱毒株的定義具體如下:取5只以上BALB/c小鼠，通過氣管吸入的方式，每只BALB/c小鼠吸入40 μ I菌含量為18Cfu的待測軍團菌的菌懸液以進行攻毒，攻毒后的第3天，如果小鼠的死亡率為100%、待測軍團菌為軍團菌強毒株，如果60%以上小鼠具有軍團菌感染的發(fā)病表征且60%以下小鼠死亡、待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
[0045]本發(fā)明提供的方法，快速、簡便、需要樣品量極少、檢測成本低，能夠鑒定軍團菌致病力強弱，減小雜散光和背景輻射所產(chǎn)生的噪聲對測量的影響，提高測量準確性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0046]圖1為實施例1的步驟一的結果圖。
[0047]圖2為實施例1的步驟二的結果圖。
[0048]圖3為對比例I的結果圖。
[0049]圖4為對比例2的結果圖。
[0050]圖5為實施例2的步驟二的結果圖。
[0051]圖6為實施例2的步驟三的結果圖。

【具體實施方式】
[0052]以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值。ACES的全稱為2-乙酰基-2-氨基乙烷磺酸。
[0053]GVPC培養(yǎng)基:甘氨酸3g/L、多粘菌素B硫酸鹽80000IU/L、萬古霉素鹽酸鹽0.001g/L、放線菌酮0.08g/L、酵母浸出物(細菌級)10.0g、瓊脂12.0g、活性炭2.0g、α -酮戊二酸1.0g、ACES 10.0g, KOH 2.8g、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.4g、焦磷酸鐵0.6g，蒸餾水補充至 100mL, il pH 值至 7.0±0.2。
[0054]BCYE培養(yǎng)基:酵母浸出物(細菌級)10.0g、瓊脂12.0g、活性炭2.0g、α -酮戊二酸1.0g, ACES 10.0g, KOH 2.8g、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.4g、焦磷酸鐵0.6g，蒸餾水補充至100mL, il pH 值至 6.9。
[0055]BCYE-cys培養(yǎng)基:酵母浸出物(細菌級)10.0g、瓊脂12.0g、活性炭2.0g、α -酮戊二酸1.0g、ACES10.0g、K0H 2.8g、焦磷酸鐵0.6g，蒸餾水補充至100mL,調pH值至6.9。
[0056]小鼠肺泡巨噬細胞系J774:購自上?；鈱崢I(yè)有限公司，貨號為細胞系J774。
[0057]BALB/c小鼠:北京維通利華實驗動物技術有限公司，產(chǎn)品貨號BALB/c，7周齡。
[0058]實施例中所使用的拉曼光譜儀的生產(chǎn)廠家為英國雷尼紹公司(RENISHAW)，型號為inVia Raman Microscope。
[0059]軍團菌是胞內寄生菌。將待測軍團菌與宿主細胞共培養(yǎng)，如果與共培養(yǎng)的O時刻相比，共培養(yǎng)24小時后宿主細胞內的所述待測軍團菌數(shù)量增加，待測軍團菌為軍團菌強度株；如果不滿足上述條件，待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
[0060]實施例1、采用本發(fā)明的方法對現(xiàn)有菌株的毒力進行比較
[0061]軍團菌ATCC33152，即 ATCC 中編號為 33152 的軍團菌(Leg1nella pneumophilasubsp.pneumophila Brenner et al.),強毒株。
[0062]軍團菌ATCC33156,即 ATCC 中編號為 33156 的軍團菌(Leg1nella pneumophilasubsp.fraseri Brenner et al.),強毒株。
[0063]軍團菌ATCC43878 即 ATCC 中編號為 43878 的軍團菌(Leg1nella brunensisWilkinson et al.)，弱毒株。
[0064]軍團菌ATCC35249 即 ATCC 中編號為 35249 的軍團菌(Leg1nella spiritensisBrenner et al.)，弱毒株。
[0065]軍團菌ATCC35252 即 ATCC 中編號為 35252 的軍團菌(Leg1nella cherriiBrenner et al),弱毒株。
[0066]軍團菌ATCC35304 即 ATCC 中編號為 35304 的軍團菌(Leg1nella rubriIucensBrenner et al.)，弱毒株。
[0067]將以上6株菌分別作為待測菌株進行如下操作:
[0068]一、獲取拉曼光譜圖
[0069]1、將待測菌株接種至BCYE培養(yǎng)基，37°C、110rpm振蕩培養(yǎng)18小時，然后4°C、8000rpm離心10分鐘，收集菌體沉淀。
[0070]2、設置拉曼光譜儀的如下參數(shù):
[0071]關鍵參數(shù)為:Spectralacquisit1n setup ；
[0072]在Range界面設置如下參數(shù):
[0073]Grating scan type:Extended ;
[0074]Confocality: Standard ；
[0075]Spectrum Range: Low 100.00;
[0076]Centre Raman shit/cnT1 ；
[0077]High 2000.00 ；
[0078]Configurat1n: Laser name 532nm edge ；
[0079]Grating name 1800 1/mm ；
[0080]在Acquisit1n界面設置如下參數(shù):
[0081]Exposure time/s:10.00 ；
[0082]Accumulat1ns:1 ；
[0083]Objective:50 ；
[0084]Laser power %:100。
[0085]3、將取少量步驟I得到的菌體沉淀置于載玻片上，放置到完成步驟2的參數(shù)設置的拉曼光譜儀中進行檢測。
[0086]4、完成步驟3后，將拉曼光譜儀的自帶軟件設置為WiRE3.0，進行數(shù)據(jù)處理，得到拉曼光譜圖。
[0087]6個待測菌株的拉曼光譜見圖1。根據(jù)6個待測菌株的拉曼光譜圖確定如下判斷標準:在500-2000橫坐標(Raman shift/cnT1)范圍內:如果存在I個以上(含I個)縱坐標(counts)強度為4000以上的峰，該待測軍團菌為軍團菌強毒株；如果不滿足上述條件，該待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
[0088]二、通過細胞實驗驗證各個菌株的毒力
[0089]1、將待測菌株劃線接種至BCYE培養(yǎng)基平板，置于37°C、5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)48小時。
[0090]2、完成步驟I后，刮取平板上的菌，用PBS緩沖液(pH7.2-7.4、0.01M)懸浮，得到108cfu/ml的菌懸液，然后用RPMI1640培養(yǎng)液將菌懸液稀釋至10倍體積，得到濃度為107cfu/ml 的菌液。
[0091]3、采用含10% (體積比)胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液懸浮小鼠肺泡巨噬細胞系J774，得到細胞濃度為2 X 15個細胞/mL的細胞懸液。
[0092]4、取24孔板，每孔加入500 μ L步驟3得到的細胞懸液，置于37°C、5% C02環(huán)境中培養(yǎng)4小時；然后加入放入Iml步驟2得到的菌液，置于37°C、5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)1.5小時；然后取出24孔板，用PBS緩沖液清洗三遍以去除非粘附細菌；然后每孔加入I毫升RPMI1640培養(yǎng)液，置于37°C、5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)O小時、24小時，48小時或72小時后棄除培養(yǎng)上清，每孔加入ImL滅菌水，用橡膠細胞刮，刮下孔底部的細胞，并將此細胞混懸液轉移至1.5mL的離心管，梯度稀釋之后接種于BCYE平板，進行軍團菌的菌落計數(shù)。
[0093]結果見圖2 (三次重復實驗的平均值)，縱坐標為每毫升細胞混懸液中軍團菌的數(shù)量。
[0094]三、通過動物實驗驗證各個現(xiàn)有菌株的毒力
[0095]將BALB/c小鼠分為7組，每組10只，分別進行如下攻毒處理:
[0096]第一組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I軍團菌ATCC33152的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0097]第二組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I軍團菌ATCC33156的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)；
[0098]第三組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I軍團菌ATCC43878的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0099]第四組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I軍團菌ATCC35249的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0100]第五組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I軍團菌ATCC35252的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0101]第六組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I軍團菌ATCC35304的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0102]第七組(空白對照組):通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40μ I生理鹽水噴霧液。
[0103]攻毒后的第3天，統(tǒng)計每組發(fā)病小鼠的只數(shù)以及死亡情況。發(fā)病表征如下:反應遲緩且全身發(fā)抖且精神萎靡且運動不暢且伴有高熱癥狀。
[0104]第一組具有發(fā)病表征的小鼠為10只(10只均死亡)，第二組具有發(fā)病表征的小鼠為10只(10只均死亡)，第三組具有發(fā)病表征的小鼠為8只(沒有死亡小鼠)，第四組具有發(fā)病表征的小鼠為8只(沒有死亡小鼠)，第五組具有發(fā)病表征的小鼠為7只(其中I只死亡)，第六組具有發(fā)病表征的小鼠為9只(沒有死亡小鼠)，第七組均沒有發(fā)病表征。
[0105]對比例1、
[0106]軍團菌ATCC33152，即 ATCC 中編號為 33152 的軍團菌(Leg1nella pneumophilasubsp.pneumophila Brenner et al.),強毒株。
[0107]軍團菌ATCC33156,即 ATCC 中編號為 33156 的軍團菌(Leg1nella pneumophilasubsp.fraseri Brenner et al.),強毒株。
[0108]軍團菌ATCC43878 即 ATCC 中編號為 43878 的軍團菌(Leg1nella brunensisWilkinson et al.)，弱毒株。
[0109]軍團菌ATCC35249 即 ATCC 中編號為 35249 的軍團菌(Leg1nella spiritensisBrenner et al.)，弱毒株。
[0110]將以上4株菌分別作為待測菌株進行如下操作:
[0111]1、將待測菌株接種至BCYE培養(yǎng)基，37°C、110rpm振蕩培養(yǎng)18小時，然后4°C、8000rpm離心10分鐘，收集菌體沉淀。
[0112]2、設置拉曼光譜儀的如下參數(shù):
[0113]Configurat1n: Laser name 1320nm edge ；
[0114]其它各個參數(shù)均同實施例1的步驟一的2中的參數(shù)。
[0115]4個待測菌株的拉曼光譜見圖3。
[0116]對比例2、
[0117]軍團菌ATCC33152，即 ATCC 中編號為 33152 的軍團菌(Leg1nella pneumophilasubsp.pneumophila Brenner et al.),強毒株。
[0118]軍團菌ATCC33156,即 ATCC 中編號為 33156 的軍團菌(Leg1nella pneumophilasubsp.fraseri Brenner et al.),強毒株。
[0119]軍團菌ATCC43878 即 ATCC 中編號為 43878 的軍團菌(Leg1nella brunensisWilkinson et al.)，弱毒株。
[0120]軍團菌ATCC35249 即 ATCC 中編號為 35249 的軍團菌(Leg1nella spiritensisBrenner et al.)，弱毒株。
[0121]將以上4株菌分別作為待測菌株進行如下操作:
[0122]1、將待測菌株接種至BCYE培養(yǎng)基，37°C、110rpm振蕩培養(yǎng)18小時，然后4°C、8000rpm離心10分鐘，收集菌體沉淀。
[0123]2、設置拉曼光譜儀的如下參數(shù):
[0124]Exposure time/s: 100.00 ；
[0125]其它各個參數(shù)均同實施例1的步驟一的2中的參數(shù)。
[0126]4個待測菌株的拉曼光譜見圖4。
[0127]實施例2、采用本發(fā)明的方法對采集的菌株的毒力進行比較
[0128]一、采集菌株
[0129]2014年3月，從北京市的下水道采集水樣。
[0130]從水樣中分離軍團菌的方法如下:
[0131]1、將水樣涂布于GVPC培養(yǎng)基平板，置于35°C、2.5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。
[0132]2、完成步驟I后，挑取平板上的菌落，采用BCYE培養(yǎng)基平板，置于35°C、2.5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，采用稀釋平板分離法，得到純菌株。
[0133]3、將步驟2得到的各個純菌株分別進行形態(tài)鑒定，滿足如下形態(tài)特征的為候選的軍團菌(軍團菌生長緩慢，易被其它菌掩蓋，需每天在體式鏡上觀察):菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀；在紫外燈下有熒光。
[0134]4、將步驟3得到的各個候選的軍團菌分別進行如下驗證:接種待測菌株分別接種到BCYE培養(yǎng)基平板和BCYE-cys培養(yǎng)基，置于35°C、2.5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，如果待測菌株在BCYE培養(yǎng)基平板上生長而在BCYE-cys培養(yǎng)基平板上不生長，該菌株為候選的軍團菌。
[0135]5、將步驟4的得到的各個候選的軍團菌分別進行進一步驗證，如果滿足如下條件，該菌株為軍團菌:氧化酶(一 /弱+)，硝酸鹽還原一，尿素酶一，明膠液化+，水解馬尿酸。共獲得3株軍團菌。
[0136]二、獲取菌株的拉曼光譜圖
[0137]同實施例1的步驟一。
[0138]步驟一得到的3株軍團菌的拉曼光譜圖見圖5。毒株I和毒株2為軍團菌強毒株，毒株3為軍團菌弱毒株。
[0139]三、通過細胞實驗驗證各個現(xiàn)有菌株的毒力
[0140]方法同實施例1的步驟二。
[0141]步驟一得到的3株軍團菌的毒力見圖6。毒株I和毒株2為軍團菌強毒株，毒株3為軍團菌弱毒株。
[0142]四、通過動物實驗驗證各個現(xiàn)有菌株的毒力
[0143]將BALB/c小鼠分為7組，每組10只，分別進行如下攻毒處理:
[0144]第一組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I毒株I的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0145]第二組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I毒株2的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0146]第三組:通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40 μ I毒株3的菌懸液(其中軍團菌菌含量為18Cfu)以攻毒；
[0147]第四組(空白對照組):通過氣管吸入的方式，每只小鼠吸入40μ I生理鹽水噴霧液。
[0148]攻毒后的第3天，統(tǒng)計每組發(fā)病小鼠的只數(shù)以及死亡情況。發(fā)病表征如下:反應遲緩且全身發(fā)抖且精神萎靡且運動不暢且伴有高熱癥狀。
[0149]第一組具有發(fā)病表征的小鼠為10只(10只均死亡)，第二組具有發(fā)病表征的小鼠為10只(10只均死亡)，第三組具有發(fā)病表征的小鼠為7只(沒有死亡小鼠)，第四組均沒有發(fā)病表征。
【權利要求】
1.一種鑒定待測軍團菌的毒力的試劑盒，包括拉曼光譜儀和記載有如下操作規(guī)程的載體: (1)設置拉曼光譜儀的如下參數(shù): 關鍵參數(shù)為:Spectral acquisit1n setup ； 在Range界面設置如下參數(shù):
Grating scan type:Extended ;
Confocality: Standard ；
Spectrum Range: Low 100.00 ；
Centre Raman shit/cm1;
High 2000.00 ；
Configurat1n: Laser name 532nm edge ；
Grating name 1800 1/mm ； 在Acquisit1n界面設置如下參數(shù):
Exposure time/s:10.00 ；
Accumulat1ns:1 ；
Objective:50 ；
Laser power %: 100 ； (2)取待測軍團菌置于載玻片上，放置到完成步驟(I)的參數(shù)設置的拉曼光譜儀中進行檢測； (3)完成步驟(2)后，將拉曼光譜儀的自帶軟件設置為WiRE3.0，進行數(shù)據(jù)處理，得到拉曼光譜圖；拉曼光譜圖中，在500-2000橫坐標范圍內:如果存在I個以上縱坐標強度為4000以上的峰，該待測軍團菌為軍團菌強毒株；如果不滿足上述條件，該待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
2.一種鑒定待測軍團菌的毒力的方法，包括如下步驟: (I)設置拉曼光譜儀的如下參數(shù): 關鍵參數(shù)為:Spectral acquisit1n setup ； 在Range界面設置如下參數(shù):
Grating scan type:Extended ;
Confocality: Standard ；
Spectrum Range: Low 100.00 ；
Centre Raman shit/cm1;
High 2000.00 ；
Configurat1n: Laser name 532nm edge ；
Grating name 1800 1/mm ； 在Acquisit1n界面設置如下參數(shù):
Exposure time/s:10.00 ；
Accumulat1ns:1 ；
Objective:50 ；
Laser power %: 100 ； (2)取待測軍團菌置于載玻片上，放置到完成步驟(I)的參數(shù)設置的拉曼光譜儀中進行檢測； (3)完成步驟(2)后，將拉曼光譜儀的自帶軟件設置為WiRE3.0，進行數(shù)據(jù)處理，得到拉曼光譜圖；拉曼光譜圖中，在500-2000橫坐標范圍內:如果存在I個以上縱坐標強度為4000以上的峰，該待測軍團菌為軍團菌強毒株；如果不滿足上述條件，該待測軍團菌為軍團菌弱毒株。
【文檔編號】G01N21/65GK104165879SQ201410409558
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年8月19日 優(yōu)先權日:2014年8月19日
【發(fā)明者】劉文軍, 李晶, 秦天, 任紅宇, 賈瀟瀟, 周海健, 邵祝軍, 楊利敏 申請人:中國科學院微生物研究所, 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所