本發(fā)明屬于癌癥預(yù)后判斷領(lǐng)域，具體涉及pcdh9作為對前列腺癌進(jìn)行分子分型以及對前列腺癌進(jìn)行預(yù)后判斷的標(biāo)志物中的應(yīng)用，還涉及相應(yīng)的試劑盒。
背景技術(shù)：
：：前列腺癌(prostaticcancer,pca)是一種嚴(yán)重威脅男性健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率及死亡率的高峰在70歲左右，占全球腫瘤發(fā)病率第二位、死亡率第六位。我國pca的發(fā)病率近年來一直處于顯著的上升趨勢。在北京、上海、廣州等醫(yī)學(xué)、經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)城市，pca發(fā)病率已位于當(dāng)?shù)厥蟪Ｒ娔[瘤之列。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，中國pca發(fā)病率已從1993年的1.71/10萬男性人口增加到2005年的7.9/10萬男性人口，年增幅約13％。依次推算，預(yù)計2020年，我國pca發(fā)病率將超過40/10萬人口男性，接近歐美國家水平，成為危害男性健康的主要腫瘤“殺手”。由此可見，隨著我國普遍醫(yī)療水平的提高，以及中國正在步入老齡化社會，前列腺癌的防治、研究工作已經(jīng)進(jìn)入刻不容緩的階段。由于pca癥狀隱蔽，導(dǎo)致國內(nèi)初診時處于中晚期的患者居多，且高達(dá)46.3％的患者已發(fā)生局部進(jìn)展或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。前列腺癌患者一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移不僅預(yù)后差，而且嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量。seer(surveillanceepidemiologyandendresults,seer)數(shù)據(jù)庫2004‐2010年的資料顯示，局限性前列腺癌的5年生存率為100％，而轉(zhuǎn)移性前列腺癌僅為28％。然而，由于國內(nèi)前列腺癌研究方面的欠缺，科學(xué)、規(guī)范地開展前列腺癌的診療工作正面臨著重重挑戰(zhàn)，如前列腺癌的高度異質(zhì)性。前列腺癌的預(yù)后迥異，有些患者術(shù)后可以超過10年，有些患者則只有2‐3年，目前雖然臨床上有些指標(biāo)可以預(yù)測腫瘤的惡性程度，如病理評分gleasonscore，但這些指標(biāo)不能準(zhǔn)確的預(yù)測患者的預(yù)后，相同gleasonscore的患者預(yù)后也會存在較大的差異。因此亟需找到預(yù)測pca預(yù)后的分子分型標(biāo)志物。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的之一在于提供pcdh9作為對前列腺癌進(jìn)行分子分型以及對前列腺癌進(jìn)行預(yù)后判斷的標(biāo)志物中的應(yīng)用，通過pcdh9的檢測，提高對前列腺癌進(jìn)行診斷或預(yù)測的準(zhǔn)確性和特異性。pcdh9為原鈣粘蛋白家族成員之一，在細(xì)胞粘附、神經(jīng)投射和突觸形成方面起到重要作用。本發(fā)明中，作為前列腺癌的標(biāo)志物可以是pcdh9的dna、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)。所述pcdh9dna序列為：https://genome-asia.ucsc.edu/cgi-bin/hgc？hgsid＝471531278_ygpzlwdrai1aa0suyaxbvo6aikmn&g＝htcgetdna2&table＝&i＝mixed&l＝66302833&r＝67230336&getdnapos＝chr13％3a66％2c302％2c834-67％2c230％2c336&db＝hg38&hgseq.cdsexon＝1&hgseq.padding5＝0&hgseq.padding3＝0&hgseq.casing＝upper&boolshad.hgseq.maskrepeats＝0&hgseq.repmasking＝lower&boolshad.hgseq.revcomp＝0&submit＝get+dna；所述pcdh9mrna的核苷酸序列(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/nm_203487.2)如seqidno.1所示；所述pcdh9的蛋白質(zhì)序列如seqidno.2所示。本發(fā)明中，可通過pcdh9dna是否缺失或拷貝數(shù)變化，以及pcdh9的mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平變化，確定基因的表達(dá)水平變化，從而對前列腺癌進(jìn)行分子分型以及對前列腺癌進(jìn)行預(yù)后判斷。本發(fā)明中，與所述pcdh9dna的同源性為80％、85％、90％、95％及99％的序列，也可作為前列腺癌的標(biāo)志物。本發(fā)明中，與所述pcdh9mrna的同源性為80％、85％、90％、95％及99％的序列，也可作為前列腺癌的標(biāo)志物。本發(fā)明中，與所述pcdh9蛋白質(zhì)的同源性為80％、85％、90％、95％及99％的序列，也可作為前列腺癌的標(biāo)志物。本發(fā)明還提供了pcdh9dna的檢測試劑在制備對前列腺癌進(jìn)行分子分型的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述pcdh9dna的檢測試劑可以但不限于是特異性檢測pcdh9dna的核酸探針。通過pcdh9dna是否缺失或拷貝數(shù)變化進(jìn)行定量，來對前列腺癌進(jìn)行分子分型。本發(fā)明還提供了pcdh9mrna的檢測試劑在制備對前列腺癌進(jìn)行分子分型的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述pcdh9mrna的檢測試劑可以但不限于是特異性檢測pcdh9mrna的核酸探針。通過對所述基因pcdh9mrna的表達(dá)水平進(jìn)行定量，來對前列腺癌進(jìn)行分子分型。所述mrna的表達(dá)水平可通過以下方法確定：微陣列技術(shù)、rna印跡和定量pcr；所述定量pcr為實時定量pcr或多重pcr等。本發(fā)明還提供了pcdh9的蛋白質(zhì)的檢測試劑在制備對前列腺癌進(jìn)行分子分型的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述蛋白質(zhì)的檢測試劑可以但不限于是特異性檢測pcdh9蛋白質(zhì)的抗體。通過對pcdh9蛋白質(zhì)的表達(dá)水平進(jìn)行定量，來對前列腺癌進(jìn)行分子分型。所述pcdh9蛋白質(zhì)的表達(dá)水平可通過以下方法確定：免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)印跡、elisa、ria和質(zhì)譜法等。本發(fā)明還提供了一種前列腺癌體外診斷產(chǎn)品，所述體外診斷產(chǎn)品包括特異性檢測pcdh9dna的試劑，和/或特異性檢測pcdh9mrna的試劑，和/或特異性檢測pcdh9蛋白質(zhì)的試劑。所述前列腺癌體外診斷產(chǎn)品可用于對前列腺癌進(jìn)行分子分型以及對前列腺癌進(jìn)行預(yù)后判斷。所述特異性檢測pcdh9dna的試劑可以但不限于是核酸探針，所述核酸探針能特異性識別所述pcdh9dna；所述特異性檢測pcdh9mrna的試劑可以但不限于是核酸探針，所述核酸探針能特異性識別所述pcdh9mrna；所述特異性檢測pcdh9蛋白質(zhì)的試劑可以但不限于是抗體，所述抗體特異性識別所述pcdh9的蛋白質(zhì)。其中，所述前列腺癌體外診斷產(chǎn)品包括試劑盒、基因芯片、固體支持體等。所述固體支持體包括陣列、微陣列、蛋白質(zhì)陣列等。本發(fā)明還提供了pcdh9的dna、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)在制備抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移以及侵襲的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了pcdh9的dna、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)在制備抑制前列腺癌致癌基因的藥物中的應(yīng)用；所述前列腺癌致癌基因包括hoxb13、ets1等。本發(fā)明還提供了pcdh9的dna、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)在制備抑制前列腺癌干細(xì)胞標(biāo)志物的藥物中的應(yīng)用；所述前列腺癌干細(xì)胞標(biāo)志物為aldh1a1。本發(fā)明還提供了pcdh9的dna、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)在制備促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制因子表達(dá)的藥物中的應(yīng)用；所述前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制因子包括foxoa、foxp1等。本發(fā)明還提供了pcdh9的dna、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)在制備促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物表達(dá)的藥物中的應(yīng)用；所述上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物為cdh1。本發(fā)明還提出了一種對已確診為前列腺癌的患者進(jìn)行分子分型以及預(yù)后判斷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：a)檢測前列腺癌病理樣本中pcdh9的dna拷貝數(shù)、mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)量；b)通過a)中測定的表達(dá)量，將患者分為正常表達(dá)組和低表達(dá)組，若pcdh9的dna拷貝數(shù)相對于正常人群出現(xiàn)缺失或表達(dá)量降低，或pcdh9mrna或由其編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平出現(xiàn)降低，則為低表達(dá)組，預(yù)示腫瘤惡化、侵襲性較高，生存預(yù)后水平較差，較容易出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或疾病進(jìn)展甚至死亡；否則為正常表達(dá)組。本發(fā)明的有益效果在于，本發(fā)明提出的診斷和預(yù)測前列腺癌的新標(biāo)志物，即pcdh9基因，該標(biāo)志物能對前列腺癌進(jìn)行分子分型以及對前列腺癌進(jìn)行預(yù)后判斷，具有高特異性和高靈敏度的特點；本發(fā)明提出的包含pcdh9標(biāo)志物的檢測試劑的前列腺癌體外診斷產(chǎn)品，其使用方便，具有高準(zhǔn)確度、高特異性和高靈敏度的特點。附圖說明圖1為pcdh9缺失及其表達(dá)水平與前列腺癌惡性程度的關(guān)系：染色體13q21.31‐q21.33拷貝數(shù)變異顯著差別的區(qū)域，定位了pcdh9‐dach1‐klf5‐lect1‐olfm4抑癌基因簇。圖2為65對前列腺癌與癌旁組織樣本測序結(jié)果：pcdh9在癌組織中表達(dá)顯著低于癌旁組織，在缺失型和野生型pcdh9的前列腺癌組織中均發(fā)現(xiàn)了這一現(xiàn)象。圖3為pcdh9缺失前列腺癌組織的pcdh9表達(dá)顯著低于野生型前列腺癌組織樣本；a為tcga數(shù)據(jù)庫；b為talyor2010公開數(shù)據(jù)。圖4為前列腺癌組織中pcdh9表達(dá)量較癌旁正常組織中的表達(dá)量明顯下降；a為gse62872公開數(shù)據(jù)庫；b為tcga公開數(shù)據(jù)庫。圖5為前列腺癌組織中pcdh9表達(dá)量高于轉(zhuǎn)移性前列腺癌組織的表達(dá)量，正常組織中pcdh9mrna的表達(dá)量明顯高于腫瘤組織，同時更加高于轉(zhuǎn)移的前列腺癌組織；a為公開數(shù)據(jù)庫gse6811；b為公開數(shù)據(jù)庫gse21032；c為公開數(shù)據(jù)庫gse35988。圖6為pcdh9表達(dá)量在高臨床分期前列腺癌組織中明顯低于低臨床分期前列腺癌組織(glinsky2004公開數(shù)據(jù))。圖7為患者pcdh9mrna的表達(dá)水平隨著psa水平的不斷升高(4‐10,10‐20，>20)逐漸下降(talyor2010公開數(shù)據(jù))。圖8為pcdh9高表達(dá)和低表達(dá)前列腺癌患者人群生化復(fù)發(fā)風(fēng)險的生存曲線；a為glinsky2004公開數(shù)據(jù)；b為tcga公開數(shù)據(jù)。圖9為pcdh9拷貝數(shù)缺失和正常的前列腺癌患者人群生化復(fù)發(fā)風(fēng)險的生存曲線。a為mskcc紀(jì)念斯隆凱特琳腫瘤中心數(shù)據(jù)；b為tcga公開數(shù)據(jù)。圖10為taylor2010數(shù)據(jù)中轉(zhuǎn)移性前列腺癌樣本中的pcdh9拷貝數(shù)缺失顯著高于原位前列腺癌樣本。圖11為mskcc紀(jì)念斯隆凱特琳腫瘤中心數(shù)據(jù)pcdh9拷貝數(shù)缺失在轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者中與生存期縮短顯著相關(guān)。圖12為grasso2010數(shù)據(jù)中pcdh9拷貝數(shù)缺失在轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者中與生存期縮短顯著相關(guān)。圖13為體外實驗證實pcdh9作為抑癌基因在前列腺癌中的作用；其中，人為外源性過表達(dá)pcdh9后發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的增殖能力、遷移和侵襲能力減弱(preceiver為對照質(zhì)粒，pcdh9為過表達(dá)pcdh9質(zhì)粒)；其中，a，d為增殖能力；b，e為侵襲能力；c，f為遷移能力。圖14為體內(nèi)實驗證實pcdh9作為抑癌基因在前列腺癌中的作用；其中，a，b為過表達(dá)pcdh9的前列腺癌細(xì)胞du145‐pcdh9皮下荷瘤裸鼠模型，前列腺癌腫瘤體積和重量與正常對照組相比明顯降低；c為免疫組化(ihc)顯示，在過表達(dá)pcdh9的前列腺癌細(xì)胞du145‐pcdh9的腫瘤中，pcdh9表達(dá)水平顯著上調(diào)，且細(xì)胞增殖標(biāo)記物ki‐67表達(dá)水平明顯降低。圖15為基因表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)pcdh9表達(dá)上調(diào)后，前列腺癌致癌基因(如：hoxb13、ets1)、癌癥干細(xì)胞標(biāo)志物aldh1a1下調(diào)，轉(zhuǎn)移抑制因子(如：foxoa、foxp1)、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物(cdh1)上調(diào)。圖16為實時定量pcr方法檢測pcdh9表達(dá)上調(diào)后，hoxb13、ets1、foxoa、foxp1、cdh1的表達(dá)變化。具體實施方式結(jié)合以下具體實施例和附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實施本發(fā)明的過程、條件、實驗方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領(lǐng)域的普遍知識和公知常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。實施例1前列腺癌患者前列腺癌組織及周圍正常組織中pcdh9mrna的表達(dá)(1.1)前列腺癌組織與周圍正常組織中pcdh9mrna的表達(dá)量有顯著差異本發(fā)明通過對中國的前列腺癌患者的65對前列腺癌與癌旁組織進(jìn)行測序發(fā)現(xiàn)，位于第13號染色體上的pcdh9出現(xiàn)缺失(如圖1所示)。在同一患者的樣本中，pcdh9mrna表達(dá)水平在前列腺癌組織中較正常組織出現(xiàn)明顯下降。即pcdh9mrna在前列腺癌組織中的表達(dá)量明顯低于相對應(yīng)的癌旁正常組織(圖2)。提示pcdh9可能作為前列腺癌相關(guān)的抑癌基因從而發(fā)揮作用。在pcdh9缺失和pcdh9未發(fā)生缺失的野生型前列腺癌組織中，pcdh9表達(dá)水平在前列腺癌組織中的表達(dá)量也明顯低于相對應(yīng)的癌旁正常組織(圖2)，pcdh9表達(dá)下調(diào)可能與前列腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)。(1.2)患者前列腺癌組織中pcdh9mrna的表達(dá)量下降與pcdh9基因缺失密切相關(guān)如上所述，pcdh9mrna的表達(dá)量與患者生存預(yù)后有顯著相關(guān)性，患者pcdh9mrna的表達(dá)量與多種因素相關(guān)，其中染色體缺失是造成pcdh9mrna的表達(dá)量下降的可能因素之一。通過本發(fā)明的研究發(fā)現(xiàn)，pcdh9mrna的表達(dá)量下降與患者前列腺癌中pcdh9基因缺失密切相關(guān)(圖1，圖2)。(1.3)pcdh9表達(dá)水平下調(diào)與前列腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)本發(fā)明通過研究幾組獨(dú)立的臨床數(shù)據(jù)(如tcga2015年的數(shù)據(jù)(圖3a)，taylor2010年(圖3b)中pcdh9mrna的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，pcdh9在出現(xiàn)缺失的樣本中，其表達(dá)量明顯出現(xiàn)下降；同時對gse62872(圖4a)和tcga(圖4b)的數(shù)據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中pcdh9mrna的表達(dá)量較癌旁正常組織中的表達(dá)量明顯下降。進(jìn)一步地，本發(fā)明對gse6811(圖5a)，gse21032(圖5b)以及gse35988(圖5c)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，前列腺癌患者的正常組織中pcdh9mrna的表達(dá)量明顯高于腫瘤組織(pgse21032＝4.35×10-10，pgse35988＝1.18×10-9)，同時更加高于轉(zhuǎn)移的前列腺癌組織(pgse6811＝0.0087，pgse21032＝2.05×10-8，pgse35988＝3.65×10-9)；提示pcdh9mrna的表達(dá)量與前列腺癌的惡性程度密切相關(guān)，隨著前列腺癌的惡性程度升高，pcdh9mrna的表達(dá)量逐漸下降。(1.4)pcdh9下調(diào)與高psa含量和高級別臨床分期有關(guān)本發(fā)明對不同級別前列腺癌腫瘤組織中pcdh9mrna的表達(dá)量差異進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與t1期相比，t2期前列腺癌腫瘤組織中pcdh9mrna的表達(dá)量降低(ginsky，2004，圖6)，表明pcdh9mrna的表達(dá)量下調(diào)與前列腺癌的高級別臨床分期相關(guān)。前列腺特異性抗原(prostatespecificantigen,psa)是一種傳統(tǒng)的前列腺癌診斷標(biāo)志物，與前列腺癌的惡性程度密切相關(guān)，通過對taylor2010的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)(圖7)，隨著患者psa水平的不斷升高(4-10，10-20，>20)，患者pcdh9mrna的表達(dá)水平逐漸下降，表明pcdh9mrna的表達(dá)水平下調(diào)與高psa水平相關(guān)。(1.5)pcdh9mrna的表達(dá)量下降與發(fā)生生化復(fù)發(fā)的時間相關(guān)本發(fā)明通過生物信息學(xué)的方法，分析前列腺癌患者腫瘤組織中pcdh9mrna的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)pcdh9mrna的高表達(dá)和低表達(dá)組之間患者的預(yù)后有顯著差異。本發(fā)明以前列腺癌患者預(yù)后研究中常用的患者生化復(fù)發(fā)作為衡量患者預(yù)后的標(biāo)準(zhǔn)(即前列腺癌根治術(shù)后連續(xù)兩次血psa水平>0.2ng/ml)。本發(fā)明通過分析發(fā)現(xiàn)，pcdh9mrna的表達(dá)量下降的患者發(fā)生生化復(fù)發(fā)的時間明顯縮短(生化復(fù)發(fā)的時間是指從前列腺癌根治術(shù)到發(fā)生生化復(fù)發(fā)之間的時間，時間明顯縮短，提示這類患者預(yù)后較差)(圖8a，b)。(1.6)pcdh9基因缺失與前列腺癌患者根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)相關(guān)如上所述，pcdh9mrna的表達(dá)量與患者生存預(yù)后有顯著相關(guān)性，而pcdh9mrna的表達(dá)量與其dna缺失有密切關(guān)系，為此，本發(fā)明進(jìn)一步探索了pcdh9基因的dna缺失與患者預(yù)后之間的關(guān)系。本發(fā)明通過進(jìn)一步研究分析發(fā)現(xiàn)，pcdh9出現(xiàn)dna缺失的患者，其生化復(fù)發(fā)的速度要明顯快于dna拷貝數(shù)正常的患者(圖9a，b)，即pcdh9出現(xiàn)dna缺失的患者，生化復(fù)發(fā)時間明顯縮短。(1.7)轉(zhuǎn)移性前列腺癌中pcdh9基因缺失頻率與西方人群相比，中國的前列腺癌患者在初診時出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者比例明顯較高。轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者的預(yù)后判斷也是臨床的難點之一，本發(fā)明通過對數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者中，pcdh9基因缺失頻率顯著高于非轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者(圖10)。進(jìn)一步地，本發(fā)明分析了轉(zhuǎn)移性前列腺患者樣本中pcdh9dna的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者當(dāng)中(圖11和圖12a，b)，pcdh9出現(xiàn)dna缺失的患者其總體生存預(yù)后(overallsurvival)要明顯較未出現(xiàn)dna缺失的患者差。綜上所述，本發(fā)明的研究均提示，pcdh9在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到抑癌基因的作用，pcdh9基因缺失以及pcdh9mrna的表達(dá)量下降在對前列腺癌進(jìn)行預(yù)后判斷方面具有重要價值。實施例2pcdh9在前列腺癌惡性進(jìn)展過程中的作用(2.1)pcdh9與前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲性的相關(guān)性既往并無pcdh9與前列腺癌惡性進(jìn)展相關(guān)的研究報道。在本發(fā)明的前述內(nèi)容中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)pcdh9mrna的表達(dá)量以及是否出現(xiàn)dna缺失與患者預(yù)后密切相關(guān)。而無限增殖以及侵襲轉(zhuǎn)移是腫瘤的重要特征，本發(fā)明對pcdh9與前列腺癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移侵襲性的相關(guān)性進(jìn)行了研究。本發(fā)明通過慢病毒感染的方式，在前列腺癌細(xì)胞系du145中過表達(dá)pcdh9基因，通過cck8實驗檢測了細(xì)胞增殖能力的變化(圖13a，d)，通過transwell實驗檢測了細(xì)胞侵襲(圖13b，e)和遷移能力的變化(圖13c，f)，發(fā)現(xiàn)在過表達(dá)pcdh9基因后，細(xì)胞的增殖能力出現(xiàn)下降，細(xì)胞的侵襲和遷移能力也出現(xiàn)下降。(2.2)裸鼠荷瘤實驗向裸鼠皮下注射過表達(dá)pcdh9的du145前列腺癌細(xì)胞(實驗組，du145‐pcdh9)和陰性對照組(du145‐preceiver，其中preceiver是空載體)，待細(xì)胞生長至對數(shù)增長期，即狀態(tài)最佳時，將1×106個實驗組和陰性對照組的細(xì)胞，分別按照1：1的體積比與基質(zhì)膠混合(bd公司)。每兩天對裸鼠的腫瘤大小進(jìn)行測量。結(jié)果表明，植入過表達(dá)pcdh9的前列腺癌細(xì)胞du145-pcdh9的裸鼠，前列腺癌腫瘤體積和重量明顯降低(圖14a，b)。免疫組化(ihc)分析顯示，在植入過表達(dá)pcdh9的前列腺癌細(xì)胞du145-pcdh9的腫瘤中，pcdh9表達(dá)量顯著上調(diào)，說明體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ统晒?gòu)建，pcdh9得到了外源性地表達(dá)增多，并且細(xì)胞增殖標(biāo)記物ki-67表達(dá)量明顯降低(圖14c)。以上研究均表明，pcdh9的過表達(dá)可以降低前列腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力。(2.3)基因組表達(dá)測定本發(fā)明對du145-pcdh9與du145-preciever兩組細(xì)胞進(jìn)行基因組表達(dá)測定。本發(fā)明通過基因表達(dá)譜芯片測定的方式，發(fā)現(xiàn)pcdh9過度表達(dá)后，前列腺癌致癌基因(如hoxb13、ets1)、癌癥干細(xì)胞標(biāo)志物aldh1a1下調(diào)，轉(zhuǎn)移抑制因子(如foxoa、foxp1)、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物(cdh1)上調(diào)(圖15)。進(jìn)一步地，本發(fā)明通過實時定量pcr的檢測方式，進(jìn)一步驗證了相關(guān)基因的表達(dá)變化，也得到了類似的結(jié)果，如圖16所示。綜上所述，pcdh9在前列腺癌中通過抑制癌癥發(fā)生通路，增強(qiáng)癌癥抑制通路來發(fā)揮抑癌基因作用。<110>上海長海醫(yī)院<120>一種前列腺癌標(biāo)志物pcdh9及其應(yīng)用<160>2<170>patentinversion3.3<210>1<211>6234<212>pcdh9mrna<213>人工序列<400>11agttcagagagaggagagggagaaggagagaggggcagaggggaagggagagagggagag61cacgcgagacggaaaggagcgcctcagagtctctgaagcacgcaagagataaccgattag121gaatttttcgggcaactgtcacccggatagctgtcagagaatcatcatcaccgcaactct181gacgtttcctacaagaagttagagacttaagcagtattggcatcggatggaaatggtatg241catgctgctgtggaaaatatccctgagctgaagaagtgcaactatgtgttgtgtgtgcta301aatgcccagaagaacccagacccagtgggtaagagagacgaaatgtggagagaatgacta361acgacaaatccgtgaatttgttctctggagttgctaatttgccagcccgaagcaacacat421tttacaaggaggaaacattttgctgcttctgatttctccccaaactggtgctaccagatg481catggctttctatgtgttggaacaaatcattcctaactgcagcatactgggaaaggggaa541aggttgaggcaactaaccggctgtctccaaataagtgatgagatataatgcatcctccag601tccatgcacgcttcctcttgcaatttgtgcatcattcctcagtggaaacctttaaaccct661aaaatccaggaaaagaaaataaatacattatcatggacctgagggatttttacctgttgg721ctgctctgattgcctgtttaaggctggattccgcaatagctcaagaacttatttacacta781ttagagaggaattgcctgaaaatgtgcccataggaaacataccaaaggatctgaacattt841ctcacatcaatgctgccacagggaccagcgccagccttgtctacagactggtttctaaag901ctggggatgcccctttggtgaaagtttccagcagcactggggaaattttcacaacctcca961acagaatagacagagaaaaactctgtgctggcgcctcatatgctgaggagaatgagtgtt1021tctttgaacttgaggtggtgatcctccccaatgatttcttcaggctgatcaaaataaaaa1081taattgtcaaggataccaatgataatgcccccatgtttccatctcctgtcatcaatattt1141ccattccagaaaacactttgatcaacagccgctttccaattccatcagcaacagatcctg1201acacaggcttcaatggtgtacagcattatgaattgttaaatgggcagagtgtttttggac1261tggatatcgtggaaactccagagggagagaagtggccacaactgattgttcagcaaaact1321tggatagagaacagaaagatacctatgtgatgaaaatcaaagtagaggatggaggcactc1381cacagaaatccagtacggccatactgcaggtcacagtaagtgatgtaaatgacaacaggc1441cagtgtttaaagagggtcaagtggaggtgcatattccagagaatgctcccgtaggtacct1501ctgtaattcagctccatgccactgatgcagatataggcagtaatgctgaaatccggtaca1561tttttggtgcccaggtcgcccctgcaaccaaaagactctttgctttaaataatactactg1621ggctgattacagttcagaggtccttagatagagaggagacagccattcacaaagtgacag1681tgctggctagtgacggcagctccactcctgctcgagcaacggttaccatcaatgtcaccg1741atgtaaatgataaccctcctaatatagacctcaggtacattataagtcccatcaatggca1801ccgtgtatttatctgagaaagatcctgtcaatacaaagattgccctaattacagtttcag1861ataaggacacagatgtgaatggcaaagtgatctgttttattgaaagagaggtcccatttc1921atttgaaggcggtatatgacaaccaatatttgttagagacctcttctttgttggactatg1981agggcaccaaagaattcagctttaaaattgttgcctctgattctgggaagcccagtttaa2041atcagactgccctggtaagggttaagcttgaggatgaaaatgacaacccaccaattttca2101accagcctgtaattgagctgtcagtttctgaaaacaaccgacgtgggttatacttaacaa2161ctattagtgccacagatgaagacagtgggaaaaatgcagacattgtttatcagcttggac2221cgaatgcctccttctttgatctggaccgaaaaacaggagttttgacagcctccagagtat2281ttgacagagaagaacaagaacgattcatttttacagtaactgccagggacaatgggaccc2341ctcccctccaaagccaagcggctgtgattgttactgttctggatgagaatgacaatagcc2401ccaagtttactcataatcattttcaattttttgtgtctgagaatctgccaaagtatagta2461ctgtgggggtaatcacagtgacagatgcagatgctggagagaataaagctgtgactcttt2521ccattctaaatgacaatgataattttgtgttggatccctattctggagtcataaagtcaa2581atgtctcatttgatagagagcagcagagttcctacacttttgatgtcaaagccactgatg2641gaggacaaccacctcgttcctctactgcaaaagtaactatcaacgtcatggatgtcaatg2701acaacagcccagttgtcatttctccaccgtctaatacttcctttaagttggtgcccctct2761cagccattcctggctccgtggtagcagaagtttttgcagtggatgttgacactggaatga2821acgctgaactaaagtatactatagtgagtggaaacaataaaggcttattccggattgatc2881cagtaacaggtaacattactctggaagaaaaaccagcacctactgatgtgggattgcatc2941gtttggtggtcaacataagtgacctggggtaccctaagtctttgcacacgcttgtgcttg3001tattcctttatgttaacgacactgctggaaatgcctcctatatctatgacttgatccgca3061ggactatggagaccccgttggacaggaacataggggatagtagccaaccctatcaaaatg3121aggactatctaaccatcatgattgccatcatcgccggtgccatggtggtcattgttgtga3181tcttcgtcaccgttctggtgcgctgtcgccatgcatcaaggttcaaagcagctcagagga3241gcaagcaaggtgccgaatggatgtccccaaaccaggagaacaagcaaaacaagaaaaaga3301aaagaaagaaaaggaagtctcccaaaagctctcttttgaactttgttactatcgaagagt3361ccaaacccgatgatgcagttcatgaacctatcaatgggacaataagcctgccggctgaac3421tggaggagcaaagtataggaagatttgactggggcccggcacctccaacaacattcaagc3481ctaacagtcctgacctggccaagcactacaaatctgcttctccacagcctgcttttcatc3541tcaaaccagacactccagtttccgtgaaaaagcaccacgtgattcaggaactccctttgg3601acaacacctttgttgggggttgtgacaccctttctaaacgctcttccactagttcagatc3661acttcagtgcctcagagtgcagttcccaaggaggcttcaagacaaagggccccttacaca3721ccagacagtgtaactcacacagcaaaagtgacaatattcctgtcactcctcagaaatgtc3781ccagctccacgggtttccacattcaggagaatgaagaaagccattacgagtcgcagcgcc3841gtgttacgtttcatctccctgatggctcccaggaaagctgcagtgacagtggtctaggag3901accatgagccggtgggtagtggaaccctgatctcacaccctcttcctctggttcagccac3961aggacgaattctatgaccaggcctctccggacaagaggactgaagcagatggcaactctg4021atcccaactctgatgggcct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