本發(fā)明涉及的是海洋水產(chǎn)品生化深加工技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說是一種分段復(fù)合酶解提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的工藝。
背景技術(shù)：
烏賊亦稱烏賊魚，烏賊屬于海產(chǎn)頭足類軟體動物，與章魚和槍烏賊近緣，烏賊分布于世界各大洋，主要生活在熱帶和溫帶沿岸淺水海域，冬季常遷至較深海域，烏賊是我國四大海產(chǎn)之一,在生產(chǎn)中占有非常重要的地位。烏賊不僅具有較高的營養(yǎng)價值，而且還富含藥用價值，烏賊每百克肉含蛋白質(zhì)13克，脂肪僅0.7克，同時還含有碳水化合物和維生素A、B族維生素以及鈣、磷、鐵等人體所必需的各種物質(zhì)元素，是一種高蛋白低脂肪的滋補(bǔ)食品。科研人員在研究中發(fā)現(xiàn)，烏賊的墨囊中含有一種粘多糖，粘多糖是一種含有氮的不均一多糖，是構(gòu)成細(xì)胞間結(jié)締組織的主要成分，它的主要化學(xué)組成為糖醛酸和酪氨基己糖交替出現(xiàn)，有時含硫鍵，研究發(fā)現(xiàn)與證實，粘多糖具有多種藥理活性，包括抗凝血、降血脂、抗病毒、抗腫瘤及抗放射等作用。如何從烏賊墨囊中提取粘多糖是本領(lǐng)域科研工作的研究方向。
中國專利授權(quán)公告號為：CN 103936877B公開的一種從烏賊墨囊中提取粘多糖的方法，采用超微破壁將其制成細(xì)粉，降低了加工過程中對產(chǎn)品所含有的營養(yǎng)物質(zhì)及功效成分的破壞，極大地保留了原有的生物活性成份及功效成分，其粒度小、均勻度好和溶出率高，采用該提取方法，可以提高粘多糖的制得率。但是，該提取工藝在提取過程中先通過中性蛋白酶進(jìn)行酶解，得到酶解液后需要再通過使用有機(jī)溶劑和化學(xué)品進(jìn)行分離、提純，然后在提取制備后還需要對使用的有機(jī)溶劑進(jìn)行回收，避免其造成環(huán)境污染，同時，該提取工藝的粘多糖的純度還需提高，分子量還需要更加穩(wěn)定，技術(shù)還需進(jìn)一步地完善。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明公開的是一種分段復(fù)合酶解提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的工藝，其主要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足和缺點，提供一種從烏賊墨囊中提取和制備粘多糖的工藝，它不僅可以有效地提高烏賊墨小分子硫酸粘多糖的提取率，而且所制得的硫酸粘多糖含量純度更高，分子量更穩(wěn)定，同時，本工藝不需要使用有機(jī)溶劑及化學(xué)品，是一種純天然的提取制備工藝，更加環(huán)保無污染。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
一種分段復(fù)合酶解提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的工藝，所述工藝包括以下具體步驟：
（1）原料處理：先將烏賊新鮮或凍鮮的墨囊去雜質(zhì)、去外囊膜，再使用真空雙錐回轉(zhuǎn)式烘干機(jī)對墨囊進(jìn)行烘干處理，然后使用超微粉碎機(jī)將烘干好的干燥墨囊進(jìn)行粉碎處理，得到200目以上的墨囊粉；
（2）一次酶解：將步驟（1）得到的墨囊粉加入到酶解罐中，并按照墨囊粉：水＝1：4的重量比加入水，然后攪拌均勻，得到懸浮液；然后用堿調(diào)節(jié)PH至8.5～9.5，接著向酶解罐內(nèi)加入占懸浮液重量百分比為0.3%～0.5%的堿性復(fù)合酶，再加入占該堿性復(fù)合酶重量1/10的專用穩(wěn)定劑A，最后升溫并控制料液溫度在40 ℃～50 ℃，保溫攪拌1.5～2小時，得一次酶解液；
（3）二次酶解：將步驟（2）中得到的一次酶解液用酸調(diào)節(jié)PH至中性6.5～7.5，接著加入占該一次酶解液重量百分比為 0.2%～0.4%的糖苷復(fù)合酶進(jìn)行酶解，再加入占該糖苷復(fù)合酶重量1/10的專用催化劑B，先升溫并控制料液溫度在50℃～60 ℃，保溫1.5～2小時，最后升溫至90℃～95℃，保溫 15 min～20min，得二次酶解液；
（4）分離純化干燥：將步驟（3）中得到的二次酶解液經(jīng)過高速離心和超濾膜過濾后，再進(jìn)行噴霧干燥，得到烏賊墨小分子硫酸粘多糖。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的堿性復(fù)合酶包括堿性海洋蛋白酶和堿性脂肪酶，兩者的重量比例為：1：0.2～0.4。
更進(jìn)一步，所述堿性海洋蛋白酶和堿性脂肪酶的重量比例為：1：0.3。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的糖苷復(fù)合酶包括β-葡萄糖苷酶和β-果糖苷酶，兩者的重量比為1：0.8～1.0。
更進(jìn)一步，所述β-葡萄糖苷酶和β-果糖苷酶的重量比為1：0.9。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的專用穩(wěn)定劑A為CaCl。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的專用催化劑B為N-乙酰氨基葡萄糖
更進(jìn)一步，所述烏賊墨小分子硫酸粘多糖的分子量小于等于5000Da。
一種包含有所述權(quán)利要求1至8任一所述制備工藝制得的烏賊墨小分子硫酸粘多糖的硫酸粘多糖制品。
通過上述對本發(fā)明描述可知，和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：
1、本發(fā)明的通過創(chuàng)新烏賊墨小分子硫酸粘多糖提取的方法，利用分段復(fù)合酶解法提取技術(shù)、高速離心和超濾膜過濾方法以及噴霧干燥技術(shù)，提高了制備硫酸粘多糖的提取率。
2、本發(fā)明在復(fù)合酶解過程采用了專用的穩(wěn)定催化劑技術(shù)，提高了硫酸粘多糖的純度，并使其分子量更加穩(wěn)定。
3、本發(fā)明在提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的全程中未使用化學(xué)溶劑，從而避免了溶劑回收及環(huán)境污染，節(jié)能環(huán)保又安全。
具體實施方式
實施例一
一種分段復(fù)合酶解提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的工藝，所述工藝包括以下具體步驟：
（1）原料處理：先將烏賊新鮮或凍鮮的墨囊去雜質(zhì)、去外囊膜，再使用真空雙錐回轉(zhuǎn)式烘干機(jī)對墨囊進(jìn)行烘干處理，然后使用超微粉碎機(jī)將烘干好的干燥墨囊進(jìn)行粉碎處理，得到200目以上的墨囊粉；
（2）一次酶解：將步驟（1）得到的墨囊粉加入到酶解罐中，并按照墨囊粉：水＝1：4的重量比加入水，然后攪拌均勻，得到懸浮液；然后用堿調(diào)節(jié)PH至8.5～9.5，接著向酶解罐內(nèi)加入占懸浮液重量百分比為0.3%的堿性復(fù)合酶，再加入占該堿性復(fù)合酶重量1/10的專用穩(wěn)定劑A，最后升溫并控制料液溫度在40 ℃～50 ℃，保溫攪拌1.5～2小時，得一次酶解液；
（3）二次酶解：將步驟（2）中得到的一次酶解液用酸調(diào)節(jié)PH至中性6.5～7.5，接著加入占該一次酶解液重量百分比為 0.2%的糖苷復(fù)合酶進(jìn)行酶解，再加入占該糖苷復(fù)合酶重量1/10的專用催化劑B，先升溫并控制料液溫度在50℃～60 ℃，保溫1.5～2小時，最后升溫至90℃～95℃，保溫 15 min～20min，得二次酶解液；
（4）分離純化干燥：將步驟（3）中得到的二次酶解液經(jīng)過高速離心和超濾膜過濾后，再進(jìn)行噴霧干燥，得到烏賊墨小分子硫酸粘多糖。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的堿性復(fù)合酶包括堿性海洋蛋白酶和堿性脂肪酶，兩者的重量比例為：1：0.2。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的糖苷復(fù)合酶包括β-葡萄糖苷酶和β-果糖苷酶，兩者的重量比為1：0.8。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的專用穩(wěn)定劑A為CaCl。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的專用催化劑B為N-乙酰氨基葡萄糖
更進(jìn)一步，所述烏賊墨小分子硫酸粘多糖的分子量小于等于5000Da,外觀為黑褐色粉末。
實施例二
一種分段復(fù)合酶解提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的工藝，所述工藝包括以下具體步驟：
（1）原料處理：先將烏賊新鮮或凍鮮的墨囊去雜質(zhì)、去外囊膜，再使用真空雙錐回轉(zhuǎn)式烘干機(jī)對墨囊進(jìn)行烘干處理，然后使用超微粉碎機(jī)將烘干好的干燥墨囊進(jìn)行粉碎處理，得到200目以上的墨囊粉；
（2）一次酶解：將步驟（1）得到的墨囊粉加入到酶解罐中，并按照墨囊粉：水＝1：4的重量比加入水，然后攪拌均勻，得到懸浮液；然后用堿調(diào)節(jié)PH至8.5～9.5，接著向酶解罐內(nèi)加入占懸浮液重量百分比為0.5%的堿性復(fù)合酶，再加入占該堿性復(fù)合酶重量1/10的專用穩(wěn)定劑A，最后升溫并控制料液溫度在40 ℃～50 ℃，保溫攪拌1.5～2小時，得一次酶解液；
（3）二次酶解：將步驟（2）中得到的一次酶解液用酸調(diào)節(jié)PH至中性6.5～7.5，接著加入占該一次酶解液重量百分比為0.4%的糖苷復(fù)合酶進(jìn)行酶解，再加入占該糖苷復(fù)合酶重量1/10的專用催化劑B，先升溫并控制料液溫度在50℃～60 ℃，保溫1.5～2小時，最后升溫至90℃～95℃，保溫 15 min～20min，得二次酶解液；
（4）分離純化干燥：將步驟（3）中得到的二次酶解液經(jīng)過高速離心和超濾膜過濾后，再進(jìn)行噴霧干燥，得到烏賊墨小分子硫酸粘多糖。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的堿性復(fù)合酶包括堿性海洋蛋白酶和堿性脂肪酶，兩者的重量比例為：1： 0.4。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的糖苷復(fù)合酶包括β-葡萄糖苷酶和β-果糖苷酶，兩者的重量比為1： 1。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的專用穩(wěn)定劑A為CaCl。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的專用催化劑B為N-乙酰氨基葡萄糖
更進(jìn)一步，所述烏賊墨小分子硫酸粘多糖的分子量小于等于5000Da,外觀為黑褐色粉末。
實施例三
一種分段復(fù)合酶解提取烏賊墨小分子硫酸粘多糖的工藝，所述工藝包括以下具體步驟：
（1）原料處理：先將烏賊新鮮或凍鮮的墨囊去雜質(zhì)、去外囊膜，再使用真空雙錐回轉(zhuǎn)式烘干機(jī)對墨囊進(jìn)行烘干處理，然后使用超微粉碎機(jī)將烘干好的干燥墨囊進(jìn)行粉碎處理，得到200目以上的墨囊粉；
（2）一次酶解：將步驟（1）得到的墨囊粉加入到酶解罐中，并按照墨囊粉：水＝1：4的重量比加入水，然后攪拌均勻，得到懸浮液；然后用堿調(diào)節(jié)PH至8.5～9.5，接著向酶解罐內(nèi)加入占懸浮液重量百分比為0.4%的堿性復(fù)合酶，再加入占該堿性復(fù)合酶重量1/10的專用穩(wěn)定劑A，最后升溫并控制料液溫度在40 ℃～50 ℃，保溫攪拌1.5～2小時，得一次酶解液；
（3）二次酶解：將步驟（2）中得到的一次酶解液用酸調(diào)節(jié)PH至中性6.5～7.5，接著加入占該一次酶解液重量百分比為 0.3%的糖苷復(fù)合酶進(jìn)行酶解，再加入占該糖苷復(fù)合酶重量1/10的專用催化劑B，先升溫并控制料液溫度在50℃～60 ℃，保溫1.5～2小時，最后升溫至90℃～95℃，保溫 15 min～20min，得二次酶解液；
（4）分離純化干燥：將步驟（3）中得到的二次酶解液經(jīng)過高速離心和超濾膜過濾后，再進(jìn)行噴霧干燥，得到烏賊墨小分子硫酸粘多糖。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的堿性復(fù)合酶包括堿性海洋蛋白酶和堿性脂肪酶，兩者的重量比例為：1：0.3。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的糖苷復(fù)合酶包括β-葡萄糖苷酶和β-果糖苷酶，兩者的重量比為1：0.9。
更進(jìn)一步，所述步驟（2）中的專用穩(wěn)定劑A為CaCl。
更進(jìn)一步，所述步驟（3）中的專用催化劑B為N-乙酰氨基葡萄糖
更進(jìn)一步，所述烏賊墨小分子硫酸粘多糖的分子量小于等于5000Da,外觀為黑褐色粉末。
本發(fā)明不僅可以有效地提高烏賊墨小分子硫酸粘多糖的提取率，而且所制得的硫酸粘多糖含量純度更高，分子量更穩(wěn)定，同時，本工藝不需要使用有機(jī)溶劑及化學(xué)品，是一種純天然的提取制備工藝，更加環(huán)保無污染。
上述僅為本發(fā)明的具體實施方式，但本發(fā)明的設(shè)計構(gòu)思并不僅局限于此，凡是利用此構(gòu)思對本發(fā)明進(jìn)行非實質(zhì)性地改進(jìn)，均應(yīng)該屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。