本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法。

背景技術(shù)：

銀耳( Tremella fuciformls )是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，營(yíng)養(yǎng)豐富的藥食兩用菌，具有滋補(bǔ)生津、潤(rùn)肺養(yǎng)胃之功效。銀耳多糖是銀耳的主要活性成分，具有提高機(jī)體免疫能力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗?jié)?、抗血栓形成、抗突變等作用。目前，銀耳多糖的常用提取方法是熱水浸提法，但這種傳統(tǒng)的提取方法存在著提取率低、耗時(shí)、造成了資源浪費(fèi)等問(wèn)題。銀耳多糖分為胞外多糖和胞壁多糖，胞壁多糖用水很難提取完全，即使是稀酸或稀堿提取法，又由于部分多糖易發(fā)生水解，破壞多糖的活性結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致多糖損失和提取率減少。

現(xiàn)有在銀耳中提取的技術(shù)，例如一種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，該發(fā)明涉及一種銀耳多糖和銀耳蛋白的提取方法，包括：（1）銀耳菌的活化培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)；（2）超濾膜濃縮和破碎銀耳孢子；（3）聚乙二醇/無(wú)機(jī)鹽雙水相體系的配制；（4）聚乙二醇/ 無(wú)機(jī)鹽雙水相體系提??；（5）冷凍干燥制備銀耳多糖；（6）聚乙二醇/ 無(wú)機(jī)鹽雙水相體系二次提取，超濾膜過(guò)濾，冷凍干燥制備銀耳蛋白。該發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)銀耳孢子生產(chǎn)和多糖提取的連續(xù)化、規(guī)模化，便于銀耳多糖的工業(yè)化生產(chǎn)；得到的產(chǎn)物中既有銀耳孢子的胞內(nèi)多糖，又有銀耳孢子液體發(fā)酵產(chǎn)生的胞外多糖，極大提高了銀耳多糖的產(chǎn)率；并且使銀耳多糖和蛋白質(zhì)得到同時(shí)分離，避免了現(xiàn)有sevag 法去除蛋白質(zhì)的復(fù)雜操作和機(jī)溶劑污染的弊端，提高了多糖的純度。

該發(fā)明的這種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，提取較為復(fù)雜，提取時(shí)間久，且提取的銀耳多糖和銀耳蛋白相對(duì)純度較差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種提高多糖提取效率，產(chǎn)量高，提高提取純度，提取簡(jiǎn)便的提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法。

為解決上述現(xiàn)有的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下方案：一種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，包括以下制備步驟：

1）選取銀耳用清水清洗，微波干燥15-23min，粉碎至100-150目，得銀耳粉末；

2）在銀耳粉末中加入1.2-1.7倍的乙醇乙醚混合液，回流1-3h后過(guò)濾取濾渣；

3）在濾渣中加入2-3倍的清水，攪拌，超聲波助溶浸泡，再加入氫氧化鈉濃度1-2%的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至10-11后浸泡，回流浸提2-3次，合并得浸提液；

4）在浸提液中加入飽和度為95-98%的乙醇，攪拌，浸泡，得沉淀物；

5）在沉淀物中加入去離子水和0.01-0.02%的助濾劑后超濾膜濃縮，干燥，得銀耳多糖；

6）在銀耳多糖中加入2-3倍的蒸餾水，依次加入氯仿和正丁醇，振搖20-35min，離心，取水層和溶液層交界處的液體，超濾膜濃縮，干燥，得銀耳蛋白。

作為優(yōu)選，步驟2中乙醇乙醚混合液中乙醇與乙醚的比例:1-1.2：1，加入乙醇乙醚混合液時(shí)溫度加熱至52-61℃，使銀耳在乙醇乙醚中有效的脫脂，為提高提取多糖和蛋白提供便捷。

作為優(yōu)選，步驟3中加入氫氧化鈉水溶液浸泡時(shí)還需加入復(fù)合酶，酶解1-2.3h，后滅酶10-17min，采用復(fù)合酶將液浸泡成分酶解，通過(guò)復(fù)合酶破壞細(xì)胞壁，提高提取多糖和蛋白的純度。

作為優(yōu)選，復(fù)合酶為纖維素酶和果膠酶按1：3-4.6的比例混合而成，按一定的比例調(diào)節(jié)使用酶，提高酶解質(zhì)量和酶解效率。

作為優(yōu)選，步驟5中助濾劑的成分及其重量份為：蒙脫石4-10份,六偏磷酸鈉0.1～0.5份,碳酸鈉4.2～6.3份,硅溶膠5～8.4份,氫氧化鋁1.8～2.2份，瑪雅藍(lán)0.01-0.02份、硫氰酸胍0.02-0.04份，通過(guò)助濾劑將不需要的雜質(zhì)充分吸附，提高提取純度。

作為優(yōu)選，步驟5中超濾膜濃縮時(shí)采用截留分子量為3000～6000Dal的超濾膜濃縮，干燥方式為冷凍干燥，干燥時(shí)有效的保護(hù)多糖的組織，提高提取多糖的功效。

作為優(yōu)選，步驟6中銀耳多糖溶于蒸餾水后還需加入0.02-0.04%的蛋白酶抑制劑，防止在提取蛋白時(shí)蛋白降解，保證提取蛋白的純度。

作為優(yōu)選，步驟6中氯仿的加入量為銀耳多糖溶液的20-30%，正丁醇的加入量為氯仿溶液的25-38%。

作為優(yōu)選，步驟6中超濾膜濃縮時(shí)采用截留分子量為6000～10000Dal的超濾膜濃縮，干燥方式為冷凍干燥。

有益效果：本發(fā)明提供的這種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，提取簡(jiǎn)便，提取效率高，能有效的提高提取的純度，增強(qiáng)提取后物質(zhì)的功能性?？赡苁钳B加產(chǎn)生了意想不到的有益成分或協(xié)同交互作用，瑪雅藍(lán)和硫氰酸胍通過(guò)氫氧化鋁、六偏磷酸鈉促進(jìn)多糖的溶解，從而提高其產(chǎn)量，本發(fā)明采用了上述技術(shù)方案提供一種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的不足，設(shè)計(jì)合理，操作方便。

具體實(shí)施方式

結(jié)合以下實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)描述：

實(shí)施例1：

一種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，包括以下制備步驟：

1）選取銀耳用清水清洗，微波干燥15min，粉碎至100目，得銀耳粉末；

2）在銀耳粉末中加入1.2倍的乙醇乙醚混合液，回流1h后過(guò)濾取濾渣；

3）在濾渣中加入2倍的清水，攪拌，超聲波助溶浸泡，再加入氫氧化鈉濃度1%的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至10后浸泡，回流浸提2次，合并得浸提液；

4）在浸提液中加入飽和度為95%的乙醇，攪拌，浸泡，得沉淀物；

5）在沉淀物中加入去離子水和0.01%的助濾劑后超濾膜濃縮，干燥，得銀耳多糖；

6）在銀耳多糖中加入2-3倍的蒸餾水，依次加入氯仿和正丁醇，振搖32min，離心，取水層和溶液層交界處的液體，超濾膜濃縮，干燥，得銀耳蛋白。

步驟2中乙醇乙醚混合液中乙醇與乙醚的比例1.2：1，加入乙醇乙醚混合液時(shí)溫度加熱至52℃，使銀耳在乙醇乙醚中有效的脫脂，為提高提取多糖和蛋白提供便捷。

步驟3中加入氫氧化鈉水溶液浸泡時(shí)還需加入復(fù)合酶，酶解2.3h，后滅酶17min，采用復(fù)合酶將液浸泡成分酶解，通過(guò)復(fù)合酶破壞細(xì)胞壁，提高提取多糖和蛋白的純度。

復(fù)合酶為纖維素酶和果膠酶按1：4.6的比例混合而成，按一定的比例調(diào)節(jié)使用酶，提高酶解質(zhì)量和酶解效率。

步驟5中助濾劑的成分及其優(yōu)選重量份為：蒙脫石10份,六偏磷酸鈉0.5份,碳酸鈉6.3份，硅溶膠8.4份,氫氧化鋁2.2份，瑪雅藍(lán)0.02份、硫氰酸胍0.04份，通過(guò)助濾劑將不需要的雜質(zhì)充分吸附，提高提取純度。

步驟5中超濾膜濃縮時(shí)采用截留分子量為4000Dal的超濾膜濃縮，干燥方式為冷凍干燥，干燥時(shí)有效的保護(hù)多糖的組織，提高提取多糖的功效。

步驟6中銀耳多糖溶于蒸餾水后還需加入0.04%的蛋白酶抑制劑，防止在提取蛋白時(shí)蛋白降解，保證提取蛋白的純度。

步驟6中氯仿的加入量為銀耳多糖溶液的30%，正丁醇的加入量為氯仿溶液的25-38%。

步驟6中超濾膜濃縮時(shí)采用截留分子量為8000Dal的超濾膜濃縮，干燥方式為冷凍干燥。

實(shí)施例2：

一種提取銀耳多糖和銀耳蛋白的方法，包括以下制備步驟：

1）選取銀耳用清水清洗，微波干燥15min，微波頻率為3000MHz，粉碎至100目，得銀耳粉末；

2）在銀耳粉末中加入1.2倍的乙醇乙醚混合液，乙醇與乙醚的比例為1.2：1，加入乙醇乙醚混合液時(shí)溫度加熱至52℃，使銀耳在乙醇乙醚中有效的脫脂，為提高提取多糖和蛋白提供便捷，回流1h后過(guò)濾取濾渣；

3）在濾渣中加入2倍的清水，攪拌，超聲波助溶浸泡，再加入氫氧化鈉濃度1%的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至11后浸泡，加入氫氧化鈉水溶液浸泡時(shí)還需加入復(fù)合酶，酶解2.3h，后滅酶17min，其中復(fù)合酶為纖維素酶和果膠酶按1：4.6的比例混合而成，按一定的比例調(diào)節(jié)使用酶，提高酶解質(zhì)量和酶解效率，采用復(fù)合酶將液浸泡成分酶解，通過(guò)復(fù)合酶破壞細(xì)胞壁，提高提取多糖和蛋白的純度，為了防止多糖降解還可加入微量的硼氫化鈉，加入量為0.002%，回流浸提2次，合并得浸提液；

4）在浸提液中加入飽和度為95%的乙醇，攪拌，浸泡，得沉淀物；

5）在沉淀物中加入去離子水和0.02%的助濾劑后超濾膜濃縮，干燥，得銀耳多糖，超濾膜濃縮時(shí)采用截留分子量為5000Dal的超濾膜濃縮，干燥方式為冷凍干燥，干燥時(shí)有效的保護(hù)多糖的組織，提高提取多糖的功效；

6）在銀耳多糖中加入2-3倍的蒸餾水，依次加入氯仿和正丁醇，氯仿的加入量為銀耳多糖溶液的30%，正丁醇的加入量為氯仿溶液的25-38%，振搖24min，離心，取水層和溶液層交界處的液體，超濾膜濃縮，干燥，得銀耳蛋白，超濾膜濃縮時(shí)采用截留分子量為8000Dal的超濾膜濃縮，干燥方式為冷凍干燥。

該提取過(guò)正中考慮蛋白與多糖的多方面影響因素，采用最適宜的環(huán)境對(duì)銀耳多糖和蛋白的提取，有效的提高了提取的濃度，并通過(guò)助溶、脫脂等工藝提高了提取速度，可有效的運(yùn)用于企業(yè)生產(chǎn)中。

本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明作舉例說(shuō)明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的或者超越所附權(quán)利要求書(shū)所定義的范圍。