1.從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于以下步驟:
1)脫脂、脫苷:將海藻洗凈,粉碎,過篩得到海藻粉末,加入丙酮-石油醚混合液回流脫脂,抽濾,濾渣中加入乙醇回流,抽濾,濾渣烘干;
2)酶解:在步驟1最后得到的濾渣中加入蒸餾水和復(fù)合酶制劑酶解,超聲波助溶,酶解結(jié)束后滅酶,過濾,取濾液;
3)去蛋白:在濾液中加入Sevage 試劑,攪拌,去除下層液體及絮狀沉淀物,在上層液體中加入乙醇,攪拌,抽濾取濾渣,用無水乙醇和無水丙酮洗滌,旋蒸干燥得到粗制海藻活性多糖粉末;
4)超濾:粗制海藻活性多糖粉末中加入蒸餾水,超濾,取未濾過液,干燥得到粉末;
5)凝膠層析:粉末中加入蒸餾水,凝膠層析,苯酚 - 硫酸法檢測,收集有顯色反應(yīng)的洗脫液;
6)去鹽、干燥:將洗脫液置于透析袋中透析,取未濾過液,減壓濃縮,冷凍干燥得到活性多糖粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟1中海藻粉末:丙酮-石油醚混合液體積比為1:10~15,丙酮:石油醚體積比為1:1.2~1:1.6,乙醇濃度為85~90%,濾渣:乙醇體積比為1:12~16。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟2中濾渣:蒸餾水體積比:1:25~28,復(fù)合酶加入量為3~5%,酶解溫度為52~56℃,pH為2.7~3.4,酶解時間為2.2~2.7h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟2中復(fù)合酶制劑成份及其重量份為:10~20份纖維素酶、10~15份果膠酶、1~3份NaCl、0.001~0.002份焦磷酸鉀、0.5~1份硫酸鎂、0.004~0.006份聚磷酸銨和0.2~0.8份磷酸二氫鈣。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟3中Sevage 試劑:濾液體積比為1:3~5,乙醇濃度為90~98%,上層液體:乙醇體積比為1:3.7~4.5。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟3中先用濾渣體積35~40倍的無水乙醇洗滌,再用30~32倍的無水丙酮洗滌。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟4與步驟6中濾膜規(guī)格均為3500~4000Da。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟5中粉末:蒸餾水體積比為1:0.02~0.05,注入 DEAE- 瓊脂糖凝膠柱中色譜分離,先用蒸餾水1.2~1.4mL/min沖洗4.2~4.6h,再用0.5MNaCl 以同樣流速繼續(xù)沖洗2.2~2.5h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海藻中提取活性多糖的方法,其特征在于:所述的步驟6中減壓濃縮至未濾過液體積的1/100~1/200。