專利名稱：清潔工程技術(shù)制取隴南黨參活性物質(zhì)的一種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及到ー種海藻多糖提取制備的方法。
ニ背景技術(shù)：
黨參屬桔梗科多年生蔓性草本植物，在隴南其播種面積為4萬畝左右，總產(chǎn)量300多萬公斤，種植區(qū)域遍布9個縣(區(qū))。黨參多糖是隴南黨參主要活性物質(zhì)有效成分之一，藥理作用廣泛，具有增強(qiáng)體力和非特異性免疫、抗疲勞、抗缺氧、抗應(yīng)激和抗衰老等功能。調(diào)查顯示，隴南黨參內(nèi)多糖的含量平均可達(dá)到33%以上。由于黨參主要分布在亞洲中部和東部，受植物生長地域限制，國外對黨參多糖的提取研究較少，主要集中在國內(nèi)。早在1986年，中國中醫(yī)研究院中藥研究所的張思巨等人 將黨參飲片經(jīng)過脫脂、蒸餾水加熱提取、こ醇沉淀并通過過DEAE纖維素(0H-)柱層析，分離得到四種單ー多糖，并通過化學(xué)組成分析得出這四種多糖為水溶性雜多糖。目前，國內(nèi)黨參多糖提取技術(shù)主要有水提離心法、水提醇沉淀法等(如表2所示)，但現(xiàn)有提取方法由于技術(shù)參數(shù)選擇不合理，導(dǎo)致提取物中黨參多糖含量低。如劉文生等人從山西長治產(chǎn)藏黨參中經(jīng)過水提醇沉、活性炭脫色、95%こ醇沉淀、重結(jié)晶得到精制黨參多糖，苯酚ー硫酸法測定總多糖含量以葡萄糖計達(dá)到20. 9% ;張雅君等人對東黨中所含水溶性多糖通過沸水煎煮、3倍體積的85%こ醇醇析過夜，離心，常規(guī)干燥得到粗多糖，進(jìn)ー步通過酶法聯(lián)合sevage法去除游離蛋白，進(jìn)行了提取分離純化及組成分析，得到了兩種水溶性的多糖，其重均相對分子質(zhì)量分別為6308和7086。專利方面，專利號為200410012172. 7的專利公開了ー種采用水提離心法制備黨參多糖的方法，提取物中黨參多糖含量只在15%以上；專利申請?zhí)枮?00510012557. 8的專利公開的黨參多糖的制備方法，得到的黃色粉末提取物中，黨參多糖含量在60%以上。同時，現(xiàn)有的提取方法得到的提取物都是黨參多糖的粗品，由于提取未經(jīng)進(jìn)ー步純化，提取物雜質(zhì)多、外觀性狀不佳、多糖組分不明確。此外，現(xiàn)有提取方法通常僅以多糖含量為指標(biāo)對提取エ藝進(jìn)行監(jiān)測，不考察提取率，因而不能很好的體現(xiàn)エ藝的科學(xué)性和先進(jìn)性。近年來，許多學(xué)者進(jìn)行了黨參多糖的提取研究，如李艷、宮存杞等對新疆黨參多糖的生物活性及提取エ藝進(jìn)行了詳細(xì)的研究；南換杰、劉文生等人系統(tǒng)研究了潞黨參多糖的提取エ藝；杜清、王瑩瑩等人分別研究了明黨參多糖的特性及提取エ藝，相對而言目前對于甘肅隴南黨參多糖的提取研究較少，僅有甘肅省人民醫(yī)院藥劑科許愛霞等人用常規(guī)水提醇沉法對甘肅產(chǎn)黨參進(jìn)行了提取并常規(guī)干燥，用硫酸-苯酚法測多糖含量為88. 2%?，F(xiàn)階段，人們對隴南黨參的利用還停留在簡單加工、炮制等階段，對其內(nèi)活性物質(zhì)的開發(fā)研究較少，エ藝技術(shù)粗糙，產(chǎn)品提取率低，純度不高，難以支持產(chǎn)業(yè)化推廣，極大的限制了隴南黨參的應(yīng)用與推廣。在此背景下，本發(fā)明以隴南黨參為原料，完成黨參多糖的制備，為超聲波清潔技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)素花黨參多糖的產(chǎn)業(yè)化推廣提供一定的技術(shù)支持。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種超聲波清潔技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)黨參多糖的方法，依此法可以有效提高黨參多糖的產(chǎn)量和產(chǎn)品純度，提高產(chǎn)率，降低生產(chǎn)成本。I、發(fā)明技術(shù)方案一種超聲波清潔技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)黨參多糖的方法，主要通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)(I)除塵清洗將原料黨參除去雜質(zhì)和霉變部分，剰余部分用清水進(jìn)行沖洗，沖洗后的原料放入烘箱內(nèi)烘干；(2)原料預(yù)處理烘干后黨參粉碎成粗粒，過40目篩，烘干后置干燥器內(nèi)備用；(3)脫脂稱取經(jīng)預(yù)處理后的黨參置于圓底燒瓶中，加石油醚后回流脫脂，過濾，揮干殘渣溶媒，對石油醚進(jìn)行回收備用；(4)超聲波提取脫脂后黨參殘渣用こ醇浸潰過夜，超聲提取2次，過濾，再次超聲后過濾，獲得黨參多糖提取液；(5)脫色、沉淀將(4)獲得的黨參多糖提取液減壓濃縮、活性炭脫色、離心分離、こ醇沉淀，過濾獲得黨參多糖粗品；(6)精制制備獲得的黨參多糖粗品內(nèi)加入蒸餾水充分溶解，過濾去除雜質(zhì)，經(jīng)濃縮、こ醇沉淀后得到精制的黨參多糖。2、發(fā)明技術(shù)特點(I)根據(jù)黨參原料烘干過程中烘干溫度會對黨參多糖含量產(chǎn)生影響，對黨參原材料的烘干溫度進(jìn)行了研究，確定了最適的烘干溫度，可保證烘干后黨參原料內(nèi)多糖的最高量，從原料上保證了黨參多糖的最大提取量；(2)根據(jù)多糖類化合物的提取現(xiàn)狀，本發(fā)明創(chuàng)新性的采用超聲波技術(shù)進(jìn)行黨參多糖的提取，具有提取率高、提取時間短、節(jié)約溶劑等特點，避免高溫對提取液活性成分的影響，可保證黨參多糖提取時間短、產(chǎn)率高，產(chǎn)品純度高，成本低；(3)根據(jù)黨參多糖溶于水不溶于こ醇的特性，本發(fā)明創(chuàng)新性的采用水、こ醇交替溶解、洗滌，去除雜質(zhì)，重結(jié)晶后獲得黨參多糖純品，可保證黨參多糖純度達(dá)到99%以上，提取率達(dá)到了 30%以上，技術(shù)達(dá)到國內(nèi)領(lǐng)先水平；(4)本發(fā)明エ藝中創(chuàng)新性的融入了有機(jī)溶劑回收利用技術(shù)和有機(jī)殘渣綠色處理技術(shù)，由于有機(jī)溶液使用量的減少，保證固體殘渣可作為飼料應(yīng)用于養(yǎng)殖行業(yè)，減少材料的浪費和環(huán)境污染，為隴南黨參的清潔生產(chǎn)及綜合利用提供了技術(shù)基礎(chǔ)。
四

圖I :隴南黨參多糖提取制備エ藝流程圖
五具體實施方式

下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明進(jìn)ー步說明。實施例一將原料黨參除去雜質(zhì)和霉變部分，剰余部分用清水進(jìn)行沖洗，沖洗后的原料放入50°C的烘箱內(nèi)烘干；烘干后黨參粉碎成粗粒，過40目篩，50°C烘4h，置干燥器內(nèi)備用；稱取經(jīng)預(yù)處理后的黨參200g置于圓底燒瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脫脂，過濾，揮干殘渣溶媒，對石油醚進(jìn)行回收備用；脫脂后黨參殘渣用80%的こ醇500ml浸潰過夜，超聲提取2次，每次lh，過濾，藥渣加蒸餾水IOOOml浸潰Ih后，超聲提取30min，過濾，再加500ml蒸餾水超聲提取30min，過濾，濾渣處理后可用作飼料，合并上述所有過濾液，獲得黨參多糖提取液，經(jīng)測定黨參多糖的提取率為32. 24% ；將獲得的黨參多糖提取液減壓濃縮至150ml，濃縮液中加入O. 5%的活性炭脫色，離心分離，上清液加95%こ醇使其醇量達(dá)到80%，冰箱靜置過夜，過濾獲得黨參多糖粗品，對減壓濃縮液及多糖的沉淀液進(jìn)行蒸餾回收こ醇備用；制備獲得的黨參多糖粗品內(nèi)加入蒸餾水充分溶解，過濾去除雜質(zhì)，濾液濃縮加入95%的こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加 蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，加入少量黨參多糖純品，冰箱靜置獲得黨參多糖結(jié)晶純品，離心分離，黨參多糖60°C烘干至恒重即得到精制黨參多糖，黨參多糖的總提取率達(dá)到30. 28%，產(chǎn)品純度為99. 30%。實施例ニ將原料黨參除去雜質(zhì)和霉變部分，剰余部分用清水進(jìn)行沖洗，沖洗后的原料放入50°C的烘箱內(nèi)烘干；烘干后黨參粉碎成粗粒，過40目篩，50°C烘4h，置干燥器內(nèi)備用；稱取經(jīng)預(yù)處理后的黨參200g置于圓底燒瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脫脂，過濾，揮干殘渣溶媒，對石油醚進(jìn)行回收備用；脫脂后黨參殘渣用80%的こ醇500ml浸潰過夜，超聲提取3次，每次50min，過濾，藥渣加蒸餾水IOOOml浸潰Ih后，超聲提取30min，過濾，再加500ml蒸餾水超聲提取30min，過濾，濾渣處理后可用作飼料，合并上述所有過濾液，獲得黨參多糖提取液，經(jīng)測定黨參多糖的提取率為32. 65% ；將獲得的黨參多糖提取液減壓濃縮至150ml，濃縮液中加入O. 6%的活性炭脫色，離心分離，上清液加95%こ醇使其醇量達(dá)到80%，冰箱靜置過夜，過濾獲得黨參多糖粗品，對減壓濃縮液及多糖的沉淀液進(jìn)行蒸餾回收こ醇備用；制備獲得的黨參多糖粗品內(nèi)加入蒸餾水充分溶解，過濾去除雜質(zhì)，濾液濃縮加入95%的こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，加入少量黨參多糖純品，冰箱靜置獲得黨參多糖結(jié)晶純品，離心分離，黨參多糖65°C烘干至恒重即得到精制黨參多糖，黨參多糖的總提取率達(dá)到30. 14%，產(chǎn)品純度為99.41%。實施例三將原料黨參除去雜質(zhì)和霉變部分，剰余部分用清水進(jìn)行沖洗，沖洗后的原料放入50°C的烘箱內(nèi)烘干；烘干后黨參粉碎成粗粒，過40目篩，50°C烘4h，置干燥器內(nèi)備用；稱取經(jīng)預(yù)處理后的黨參200g置于圓底燒瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脫脂，過濾，揮干殘渣溶媒，對石油醚進(jìn)行回收備用；脫脂后黨參殘渣用80%的こ醇500ml浸潰過夜，超聲提取2次，每次75min，過濾，藥渣加蒸餾水IOOOml浸潰Ih后，超聲提取30min，過濾，再加500ml蒸餾水超聲提取30min，過濾，濾渣處理后可用作飼料，合并上述所有過濾液，獲得黨參多糖提取液，經(jīng)測定黨參多糖的提取率為31. 79% ；將獲得的黨參多糖提取液減壓濃縮至150ml，濃縮液中加入O. 8%的活性炭脫色，離心分離，上清液加95%こ醇使其醇量達(dá)到80%，冰箱靜置過夜，過濾獲得黨參多糖粗品，對減壓濃縮液及多糖的沉淀液進(jìn)行蒸餾回收こ醇備用；
制備獲得的黨參多糖粗品內(nèi)加入蒸餾水充分溶解，過濾去除雜質(zhì)，濾液濃縮加入95%的こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，加入少量黨參多糖純品，冰箱靜置獲得黨參多糖結(jié)晶純品，離心分離，黨參多糖62°C烘干至恒重即得到精制黨參多糖，黨參多糖的總提取率達(dá)到30. 10%，產(chǎn)品純度為99. 12%。實施例四
將原料黨參除去雜質(zhì)和霉變部分，剰余部分用清水進(jìn)行沖洗，沖洗后的原料放入50°C的烘箱內(nèi)烘干；烘干后黨參粉碎成粗粒，過40目篩，50°C烘4h，置干燥器內(nèi)備用； 稱取經(jīng)預(yù)處理后的黨參200g置于圓底燒瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脫脂，過濾，揮干殘渣溶媒，對石油醚進(jìn)行回收備用；脫脂后黨參殘渣用80%的こ醇500ml浸潰過夜，超聲提取3次,姆次45min,過濾,藥洛加蒸懼水IOOOml浸潰Ih后,超聲提取30min,過濾，再加500ml蒸餾水超聲提取30min，過濾，濾渣處理后可用作飼料，合并上述所有過濾液，獲得黨參多糖提取液，經(jīng)測定黨參多糖的提取率為31. 51% ；將獲得的黨參多糖提取液減壓濃縮至150ml，濃縮液中加入O. 5%的活性炭脫色，離心分離，上清液加95%こ醇使其醇量達(dá)到80%，冰箱靜置過夜，過濾獲得黨參多糖粗品，對減壓濃縮液及多糖的沉淀液進(jìn)行蒸餾回收こ醇備用；制備獲得的黨參多糖粗品內(nèi)加入蒸餾水充分溶解，過濾去除雜質(zhì)，濾液濃縮加入95%的こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，冰箱靜置過夜，過濾，沉淀加蒸餾水充分溶解，過濾去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，加入少量黨參多糖純品，冰箱靜置獲得黨參多糖結(jié)晶純品，離心分離，黨參多糖60°C烘干至恒重即得到精制黨參多糖，黨參多糖的總提取率達(dá)到30. 29%，產(chǎn)品純度為99. 46%。
權(quán)利要求
1.一種清潔工程技術(shù)制取隴南黨參活性物質(zhì)的方法，其特征為(1)除塵清洗將原料黨參除去雜質(zhì)和霉變部分，剰余部分用清水進(jìn)行沖洗，沖洗后的原料放入烘箱內(nèi)烘干；(2)原料預(yù)處理烘干后黨參粉碎成粗粒，過40目篩，烘干后置干燥器內(nèi)備用；(3)脫脂稱取經(jīng)預(yù)處理后的黨參置于圓底燒瓶中，加石油醚后回流脫脂，過濾，揮干殘渣溶媒，對石油醚進(jìn)行回收備用；(4)超聲波提取脫脂后黨參殘渣用こ醇浸潰過夜，超聲提取2次，過濾，再次超聲后過濾，獲得黨參多糖提取液；(5)脫色、沉淀將(4)獲得的黨參多糖提取液減壓濃縮、活性炭脫色、離心分離、こ醇沉淀，過濾獲得黨參多糖粗品；(6)精制制備獲得的黨參多糖粗品內(nèi)加入蒸餾水充分溶解，過濾去除雜質(zhì)，經(jīng)濃縮、こ醇沉淀后得到精制的黨參多糖。
2.如權(quán)利要求I所述的隴南黨參的超聲波提取方法，其特征為超聲時間為45min-75min，超聲次數(shù)為2_3次，黨參多糖的提取率可達(dá)到30%以上。
3.如權(quán)利要求I所述的隴南黨參的脫色、沉淀方法，其特征為在I中步驟(4)超聲波提取后得到的濃縮液中加入0. 3% -0. 8%的活性炭脫色，離心分離，上清液加90%以上こ醇進(jìn)行沉淀，沉淀液進(jìn)行蒸餾回收こ醇備用。
4.如權(quán)利要求I所述的黨參多糖精制方法，其特征為黨參多糖粗品除雜質(zhì)后，濾液濃縮加入90%以上的こ醇，過濾除去雜質(zhì)，濾液濃縮加入無水こ醇，加入少量黨參多糖純品，冰箱靜置獲得黨參多糖結(jié)晶純品，離心分離，黨參多糖于45°C _65°C烘干至恒重即得到精制的黨參多糖。
5.如權(quán)利要求4所述的精制的黨參多糖的純度大于99%。
全文摘要
本發(fā)明涉及甘肅特色藥材隴南黨參中活性物質(zhì)的制取方法。公開了一種清潔工程技術(shù)制取隴南黨參活性物質(zhì)的方法，關(guān)鍵步驟為采用超聲波提取替代傳統(tǒng)的水提法，提高隴南黨參中多糖的提取率，避免高溫對提取成分的影響；采用水-乙醇重結(jié)晶的方式對乙醇沉淀獲得的多糖粗品進(jìn)行精制，制備獲得的活性物質(zhì)——黨參多糖純度可達(dá)到99％以上，提取率達(dá)到30％以上，本工藝操作簡單、條件溫和、提取率高、提取周期短、有機(jī)溶劑使用量少且可有效實現(xiàn)回收利用，濾渣處理后可用作飼料，適合產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。
文檔編號C08B37/00GK102659957SQ201210150798
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者王紹禮 申請人:蘭州金陽生物科技有限公司