本發(fā)明涉及生物發(fā)酵的
技術領域：
，特別涉及一種誘變菌株紅曲紅曲菌、采用誘變菌株紅曲紅曲菌液態(tài)發(fā)酵制取紅曲多糖的方法，以及采用該方法制得的紅曲菌絲體提取物及紅曲多糖。
背景技術：
：我國紅曲菌種資源豐富，無論作為食用還是藥用，紅曲都起著重要的作用。紅曲的潛在價值很大，為了更好的服務于人類，我們應積極利用紅曲的藥理研發(fā)新產品，尤其是洛伐他汀類在降低膽固醇方面的應用，減少動脈粥樣硬化發(fā)生，防治冠心病等心血管病。但是，洛伐他汀是處方藥物，毒副作用很嚴重，無法保證紅曲的安全問題。紅曲菌分泌的紅曲多糖屬于真菌多糖（mycopolysaccharide），無毒副作用，可使用于食品和保健食品原輔料，在國際學術界公認真菌多糖為生物反應調節(jié)物（biologicalresponsemodifier，brm），即免疫調節(jié)劑（immuno-modulator）。目前，功能性紅曲主要由中國提供，而大部分廠家基本上均采用三角瓶或淺盤培養(yǎng)生產，生產方式落后，并且這種生產方式仍屬于傳統(tǒng)的固態(tài)培養(yǎng)，不僅培養(yǎng)周期長，而且易污染而導致生產失敗。不僅如此，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)中的谷類淀粉只能少數(shù)被紅曲菌利用，難以像液態(tài)發(fā)酵一樣發(fā)酵完全、徹底，進而生產出富含紅曲多糖的紅曲菌絲體。固態(tài)發(fā)酵生產功能性紅曲除了以上存在的不足以外，其還存在的問題就是，工藝復雜，其主要采用手工操作為主，操作步驟繁瑣，勞動強度大，周期長，并且質量穩(wěn)定性不高，不適宜規(guī)?；a，難以實現(xiàn)自動化，標準化，而且生物量檢測難以進行，產品中紅曲多糖含量較低。申請人于2013-09-29申請了《液態(tài)發(fā)酵制取功能性紅曲菌絲體和發(fā)酵液的方法及制品》發(fā)明專利，其申請?zhí)枮?01310455410.0，授權公告號為cn103602590b。所述液態(tài)發(fā)酵制取功能性紅曲菌絲體和發(fā)酵液的方法是采用誘變菌株叢毛紅曲菌(monascuspilosuszhengyz101)，經液態(tài)發(fā)酵制成。其中，誘變菌株叢毛紅曲菌(monascuspilosuszhengyz101)的生物保藏編號為：cgmcc8167。但是，采用上述菌種制得的紅曲菌絲體低含紅曲多糖。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術問題在于，提供一種優(yōu)良紅曲菌，其有效防止雜菌污染、霉菌毒素和處方藥物產生，高產紅曲多糖。本發(fā)明所要解決的技術問題還在于，提供一種利用該菌種制備紅曲多糖的方法，有效防止雜菌污染、霉菌毒素和處方藥物產生，并高效進行液態(tài)發(fā)酵生產、紅曲菌絲體提取及純化。本發(fā)明所要解決的技術問題還在于，提供一種由上述方法制得的紅曲菌絲體提取物，其紅曲多糖含量高達95~99%。本發(fā)明所要解決的技術問題還在于，提供一種由上述方法制得的紅曲多糖。為達到上述技術效果，本發(fā)明提供了一種誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)，所述紅曲紅曲菌于2016年12月2日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，生物保藏編號為：gdmcc60124。相應的，本發(fā)明還提供一種采用誘變菌株紅曲紅曲菌液態(tài)發(fā)酵制取紅曲多糖的方法，包括以下步驟：（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將谷類淀粉原料配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基；（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉8～20%、硝酸鈉0.1～0.3%、酵母膏0.2～0.5%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的60～80%，調節(jié)ph值為3.0～5.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分；（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。作為上述方案的改進，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入0.5-1%的纖維素酶，在40-60℃保溫攪拌1-3小時，然后升溫至80-100℃攪拌浸提1-3小時；將混合液降溫至40-50℃，調節(jié)ph至7.5-8.5，加入0.05-0.1%的蛋白酶進行水解2-3小時，然后緩慢加入1-2%三氯乙酸，攪拌20-30min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入80-90%乙醇至醇濃度為60-70%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。作為上述方案的改進，所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為1-2mpa，溫度為20-40℃，轉子的轉速為200-800r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。作為上述方案的改進，所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁10～20be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按40～70%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)6～8天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉8～15%，硝酸鈉0.1～0.3％，瓊脂2～3%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比40～70%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉8～15%、硝酸鈉0.1～0.3%、酵母膏0.1～0.5%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為3.0～5.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量40～70%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。作為上述方案的改進，步驟（4）發(fā)酵處理中：所述的高溫滅菌時間為20～30min，溫度為121～125℃，壓力為0.1～0.15mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為25～35℃，通風比為1：0.3～1.5；發(fā)酵罐內壓力為0.03～0.08mpa，時間為75～120h。作為上述方案的改進，所步驟（1）中的谷類淀粉原料，為大米、大麥、小麥、燕麥、蕎麥、玉米中的一種或幾種混合物制得的淀粉。相應的，本發(fā)明還公開一種紅曲菌絲體提取物，其由誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為菌種，經液態(tài)發(fā)酵制得。作為上述方案的改進，所述紅曲菌絲體提取物中的紅曲多糖含量為95~99%。相應的，本發(fā)明還公開一種紅曲多糖，其由誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為菌種，先經液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)得到紅曲菌絲體，再經提取紅曲菌絲體制得紅曲菌絲體提取物，最后經純化紅曲菌絲體提取物而得。實施本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明提供一種優(yōu)良紅曲菌，已于2016年12月2日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，生物保藏編號為：gdmcc60124，能較好的適應谷類原料的液態(tài)發(fā)酵工藝，其生命力強、繁殖速度快、生產效率高，且可以有效防止雜菌污染、霉菌毒素和處方藥物產生，高產紅曲多糖。本發(fā)明提供的制備方法，采用發(fā)酵罐進行液態(tài)發(fā)酵，不產生污染，其生產工藝先進，取代傳統(tǒng)的手工操作模式，操作步驟簡單，勞動強度小，周期短，質量穩(wěn)定性高，適宜規(guī)?；a，而且生物量可定量檢測，產品中紅曲多糖含量較高。本發(fā)明以液態(tài)發(fā)酵谷類原料所生產的紅曲菌絲體提取物作為最終產物，其中紅曲多糖含量高達95~99%，紅曲多糖是一種具有免疫調節(jié)、保肝解毒功效的活性物質，可調控細胞分裂和分化，具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等藥理作用。本發(fā)明采用特定菌種，通過特定的液態(tài)發(fā)酵方法，制得高含紅曲多糖的紅曲菌絲體提取物，其在保健食品和功能性食品的應用十分廣泛，市場價值極大。具體實施方式為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明作進一步地詳細描述。本發(fā)明提供了一種誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)，所述紅曲紅曲菌于2016年12月2日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，該保藏中心的地址為廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，生物保藏編號為：gdmcc60124，分類學名稱為紅曲紅曲菌(monascusanka)，可以有效防止雜菌污染、霉菌毒素和處方藥物產生，高產紅曲多糖。相應的，本發(fā)明還提供一種采用誘變菌株紅曲紅曲菌液態(tài)發(fā)酵制取紅曲多糖的方法，包括以下步驟：（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將谷類淀粉原料配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基；所述谷類淀粉原料，為大米、大麥、小麥、燕麥、蕎麥、玉米中的一種或幾種混合物制得的淀粉。優(yōu)選的，所述谷類淀粉原料為大米。（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；具體的，所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁10～20be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按40～70%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)6～8天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉8～15%，硝酸鈉0.1～0.3％，瓊脂2～3%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比40～70%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉8～15%、硝酸鈉0.1～0.3%、酵母膏0.1～0.5%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為3.0～5.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量40～70%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉8～20%、硝酸鈉0.1～0.3%、酵母膏0.2～0.5%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的60～80%，調節(jié)ph值為3.0～5.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；所述的高溫滅菌時間為20～30min，溫度為121～125℃，壓力為0.1～0.15mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為25～35℃，通風比為1：0.3～1.5；發(fā)酵罐內壓力為0.03～0.08mpa，時間為75～120h。（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分；（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。優(yōu)選的，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入0.5-1%的纖維素酶，在40-60℃保溫攪拌1-3小時，然后升溫至80-100℃攪拌浸提1-3小時；將混合液降溫至40-50℃，調節(jié)ph至7.5-8.5，加入0.05-0.1%的蛋白酶進行水解2-3小時，然后緩慢加入1-2%三氯乙酸，攪拌20-30min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入80-90%乙醇至醇濃度為60-70%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。采用上述提取方法，紅曲多糖的含量高達95~99%，蛋白脫除率達90%以上，產率可達5%以上，且最大限度保護了紅曲多糖的原本結構，保證其具有良好的活性。此外，此提取方法高效、簡便、經濟，不含有害物質，滿足環(huán)保要求，適合大規(guī)模推廣使用。優(yōu)選的，所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為1-2mpa，溫度為20-40℃，轉子的轉速為200-800r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。采用上述純化方法，紅曲多糖的純度高，且最大限度保護了紅曲多糖的原本結構，保證其具有良好的活性。此外，此純化方法操作過程簡單，滿足環(huán)保要求，適合大規(guī)模推廣使用。需要說明的是，提取方法和純化方法中，加入物質的%是指重量百分比。本發(fā)明提供的制備方法，采用發(fā)酵罐進行液態(tài)發(fā)酵，不產生污染，其生產工藝先進，取代傳統(tǒng)的手工操作模式，操作步驟簡單，勞動強度小，周期短，質量穩(wěn)定性高，適宜規(guī)?；a，而且生物量可定量檢測，產品中紅曲多糖含量較高。相應的，本發(fā)明公開一種紅曲菌絲體提取物，其由誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為菌種，經液態(tài)發(fā)酵制得。所述紅曲菌絲體提取物中的紅曲多糖含量高達95~99%。相應的，本發(fā)明公開一種紅曲多糖，其由誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為菌種，先經液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)得到紅曲菌絲體，再經提取紅曲菌絲體制得紅曲菌絲體提取物，最后經純化紅曲菌絲體提取物而得。紅曲多糖是一種具有免疫調節(jié)、保肝解毒功效的活性物質，可調控細胞分裂和分化，具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等藥理作用，用來治療免疫性缺陷疾病和臨床治療引起的免疫功能下降等疾病。本發(fā)明采用特定菌種，通過特定的液態(tài)發(fā)酵方法，制得高含紅曲多糖的紅曲菌絲體提取物，其在保健食品和功能性食品的應用十分廣泛，市場價值極大。將本發(fā)明與其他技術作對比，結果如下：一、本發(fā)明：采用紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)，生物保藏編號為：gdmcc60124，通過液態(tài)發(fā)酵制?。粚Ρ壤?：采用紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)，生物保藏編號為：gdmcc60124，通過固態(tài)發(fā)酵制?。粚Ρ壤?，采用叢毛紅曲菌(monascuspilosuszhengyz101)，其生物保藏編號為：cgmcc8167，通過液態(tài)發(fā)酵制取。二、對比結果：項目紅曲菌發(fā)酵產物多糖紅曲來源（原料）紅曲多糖含量本發(fā)明液態(tài)發(fā)酵制取的紅曲菌絲體紅曲菌絲體提取物95~99%對比例1固態(tài)發(fā)酵制取的紅曲米紅曲米粉末2~3%對比例2液態(tài)發(fā)酵制取的紅曲菌絲體紅曲菌絲體粉末5~6%下面以具體實施例進一步闡述本發(fā)明實施例1（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將大米配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基；（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種，生物保藏編號為：gdmcc60124；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁10be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按40%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)6天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉8%，硝酸鈉0.1％，瓊脂2%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比40%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉8%、硝酸鈉0.1%、酵母膏0.1%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為3.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量40%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉8%、硝酸鈉0.1%、酵母膏0.2%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的60%，調節(jié)ph值為3.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；所述的高溫滅菌時間為20min，溫度為121℃，壓力為0.1mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為25℃，通風比為1：0.3；發(fā)酵罐內壓力為0.03mpa，時間為75h。（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分。（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。其中，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入0.5%的纖維素酶，在40℃保溫攪拌1小時，然后升溫至80℃攪拌浸提1小時；將混合液降溫至40℃，調節(jié)ph至7.5，加入0.05%的蛋白酶進行水解2小時，然后緩慢加入1%三氯乙酸，攪拌20min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入80%乙醇至醇濃度為60%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為1mpa，溫度為20℃，轉子的轉速為200r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。實施例2（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將大麥配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基；（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種，生物保藏編號為：gdmcc60124；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁15be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按50%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)7天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉10%，硝酸鈉0.2％，瓊脂3%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比50%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉12%、硝酸鈉0.5%、酵母膏0.5%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為4.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量50%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉15%、硝酸鈉0.2%、酵母膏0.3%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的70%，調節(jié)ph值為4.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；所述的高溫滅菌時間為25min，溫度為122℃，壓力為0.12mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為28℃，通風比為1：0.8；發(fā)酵罐內壓力為0.05mpa，時間為90h。（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分；（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。其中，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入0.6%的纖維素酶，在45℃保溫攪拌2小時，然后升溫至85℃攪拌浸提1.5小時；將混合液降溫至45℃，調節(jié)ph至8，加入0.07%的蛋白酶進行水解2小時，然后緩慢加入1%三氯乙酸，攪拌25min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入82%乙醇至醇濃度為65%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為2mpa，溫度為30℃，轉子的轉速為300r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。實施例3（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將玉米配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基；（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種，生物保藏編號為：gdmcc60124；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁18be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按60%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)7天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉12%，硝酸鈉0.3％，瓊脂2.5%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比60%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉12%、硝酸鈉0.3%、酵母膏0.4%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為4.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量65%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉15%、硝酸鈉0.3%、酵母膏0.4%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的70%，調節(jié)ph值為5.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；所述的高溫滅菌時間為28min，溫度為124℃，壓力為0.14mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為32℃，通風比為1：1.2；發(fā)酵罐內壓力為0.06mpa，時間為110h。（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分；（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。其中，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入0.7%的纖維素酶，在50℃保溫攪拌2小時，然后升溫至90℃攪拌浸提2小時；將混合液降溫至48℃，調節(jié)ph至8，加入0.08%的蛋白酶進行水解3小時，然后緩慢加入1.5%三氯乙酸，攪拌20min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入85%乙醇至醇濃度為65%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為1.7mpa，溫度為30℃，轉子的轉速為500r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。實施例4（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將大米配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基；（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種，生物保藏編號為：gdmcc60124；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁20be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按70%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)8天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉15%，硝酸鈉0.3％，瓊脂3%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比70%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉15%、硝酸鈉0.3%、酵母膏0.5%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為5.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量70%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉20%、硝酸鈉0.3%、酵母膏0.5%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的80%，調節(jié)ph值為5.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；所述的高溫滅菌時間為30min，溫度為125℃，壓力為0.15mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為35℃，通風比為1：1.5；發(fā)酵罐內壓力為0.08mpa，時間為120h。（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分；（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。其中，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入0.8%的纖維素酶，在55℃保溫攪拌2.5小時，然后升溫至95℃攪拌浸提2.5小時；將混合液降溫至48℃，調節(jié)ph至8.2，加入0.09%的蛋白酶進行水解2小時，然后緩慢加入2%三氯乙酸，攪拌30min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入88%乙醇至醇濃度為68%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為2mpa，溫度為35℃，轉子的轉速為600r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。實施例5（1）制備菌種發(fā)酵培養(yǎng)基：將大米和小麥配制成菌種發(fā)酵培養(yǎng)基，其中，大米：小麥=1:1；（2）制取菌種：制取誘變菌株紅曲紅曲菌(monascusankayangyz2001)作為發(fā)酵菌種，生物保藏編號為：gdmcc60124；（3）生產種培養(yǎng)基的制備：將步驟（2）所選取的菌株分別用下列培養(yǎng)基培養(yǎng)：斜面培養(yǎng)基、斜面特制培養(yǎng)基、液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基；所述斜面培養(yǎng)基的制備方法為：取麥芽汁20be作為通用培養(yǎng)基，煮沸，按重量比分別按60%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻,與步驟（1）中選取的菌株接種，并進行斜面培養(yǎng)基的培養(yǎng)7天；所述斜面特制培養(yǎng)基的制備方法為：取按照重量百分比計算的可溶性淀粉或米粉10%，硝酸鈉0.3％，瓊脂2.5%與剩余量的水進行混合，煮沸，與步驟（1）中培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基,分別按重量比55%的量裝入試管或茄子瓶，滅菌，冷卻，接種并進行斜面特制培養(yǎng)基的培養(yǎng)；所述液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基的制備方法為：選取淀粉或米粉13%、硝酸鈉0.2%、酵母膏0.4%、與剩余量的水進行混合、攪拌均勻，再用乳酸或醋酸調節(jié)ph值為5.0，煮沸，形成液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基，分別按重量55%的量裝入三角瓶，滅菌，冷卻、接種并進行液態(tài)搖瓶培養(yǎng)。（4）發(fā)酵處理：將步驟（1）的菌種發(fā)酵培養(yǎng)基按照重量百分比計算的谷類淀粉18%、硝酸鈉0.2%、酵母膏0.3%與剩余量的水進行混合，攪拌均勻后泵入生產發(fā)酵罐，加入自來水至罐體有效體積的72%，調節(jié)ph值為5.0，高溫滅菌后冷卻至常溫，將步驟3中生產的液態(tài)搖瓶種接入此發(fā)酵液培養(yǎng)基，進行液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，使菌株生長出紅曲菌絲體；所述的高溫滅菌時間為25min，溫度為123℃，壓力為0.13mpa；液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度為30℃，通風比為1：1；發(fā)酵罐內壓力為0.06mpa，時間為110h。（5）發(fā)酵后處理：將步驟（4）中已培養(yǎng)好的紅曲菌絲體，經過壓榨、膜過濾后，分離出固體部分；（6）提取紅曲多糖：將分離出的固體部分，經提取、純化、干燥，得到紅曲多糖。其中，所述紅曲多糖的提取方法如下：將分離出的固體部分粉碎，按1:1加入純凈水，得到混合液；在混合液中加入1%的纖維素酶，在60℃保溫攪拌3小時，然后升溫至100℃攪拌浸提3小時；將混合液降溫至50℃，調節(jié)ph至8.5，加入0.1%的蛋白酶進行水解3小時，然后緩慢加入2%三氯乙酸，攪拌30min，離心除去蛋白質沉淀；攪拌下緩慢加入90%乙醇至醇濃度為70%，離心收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇洗滌，經真空冷凍干燥，得到紅曲多糖。所述紅曲多糖的純化方法如下：采用超濾技術對提取得到的紅曲多糖進一步純化，純化過程中截留的分子量范圍為100000-500000d，工作壓力為2mpa，溫度為40℃，轉子的轉速為800r/min；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得到紅曲多糖。將實施例1-5做技術檢測，結果如下：項目實施例1實施例2實施例3實施例4實施例5紅曲多糖含量99.0%98.5%98.7%98.2%97.4%洛伐他汀0.0005%0.0007%0.0008%0.0004%0.0006%桔霉素1ppb1ppb1ppb1ppb2ppb綜上所述，本發(fā)明采用特定菌種，通過特定的液態(tài)發(fā)酵方法，獲得高含紅曲多糖的紅曲菌絲體提取物，具體的，所述紅曲多糖含量為95~99%。紅曲多糖是一種具有免疫調節(jié)、保肝解毒功效的活性物質，可調控細胞分裂和分化，具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等藥理作用，用來治療免疫性缺陷疾病和臨床治療引起的免疫功能下降等疾病。高含紅曲多糖的紅曲菌絲體提取物在保健食品和功能性食品的應用十分廣泛，市場價值極大。以上所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁12