本發(fā)明屬于多糖藥物技術(shù)領域，具體涉及一種蛹蟲草多糖、提取方法及其在制備治療功能性便秘藥物方面的應用。

背景技術(shù)：

功能性便秘（functional constipation,FC）是一種功能性腸病，是指癥狀起源于中、下胃腸道的功能性胃腸病。由于生活規(guī)律改變、情緒抑郁、飲食因素、排便習慣不良、藥物作用等因素所致的便秘，例如，外出旅行的人，由于生活規(guī)律、周圍環(huán)境的改變，以及勞累等因素的影響，多會出現(xiàn)便秘，這種便秘則屬于功能性便秘。

一般來講，功能性便秘多表現(xiàn)為持續(xù)的排便困難、排便頻率減少或排便不盡感，同時不符合腸易激綜合征的診斷標準，并且滿足一定的時間條件。功能性便秘的病人，除腸道易激綜合征外，均可通過生活規(guī)律化、合理飲食、調(diào)暢情志、養(yǎng)成良好排便習慣以及去除其他病因等手段達到治愈便秘的目的。而患有腸道易激綜合征的病人，其發(fā)生的便秘雖屬功能性便秘，但必須去醫(yī)院做進一步的檢查。目前，市場上用于治療功能性便秘的藥物多存在療效不佳、有毒副作用等缺陷。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種可用于治療功能性便秘的蛹蟲草多糖，其治療效果顯著，且無毒副作用，不會引起耐藥性。

本發(fā)明還提供了上述蛹蟲草多糖的提取方法及其在制備治療功能性便秘藥物方面的應用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種蛹蟲草多糖的提取方法，其將蛹蟲草用水煎煮，過濾，濾液中加入無水乙醇至乙醇終濃度為70±5V%，靜置，固液分離，所得沉淀即為蛹蟲草多糖。

進一步優(yōu)選的，可將蛹蟲草用水煎煮2次，第一次煎煮1h，第二次煎煮0.5h，合并兩次濾液，并加入無水乙醇至乙醇終濃度為70V%，冰箱中靜置過夜，離心分離，所得沉淀經(jīng)冷凍干燥后即為蛹蟲草多糖。

采用上述提取方法制備得到的蛹蟲草多糖。

上述蛹蟲草多糖在制備治療功能性便秘藥物方面的應用。蛹蟲草多糖具體用量可以是： 800mg/kg、400mg/kg等。

蛹蟲草 Cordyceps militaris L. Link，又名北冬蟲夏草、北蟲草，是蟲草菌寄生在鱗翅目、鞘翅目、雙翅目等昆蟲蛹體及幼蟲形成的蟲菌復合體，其與冬蟲夏草屬于同一屬。蛹蟲草生長在我國較低海拔的平原流域，國外分布在北美、德國、加拿大、意大利、日本和俄羅斯等。迄今已檢測或分離到的活性物質(zhì)有蟲草素、蟲草酸、蛹蟲草多糖和超氧化物歧化酶等，此外，蛹蟲草中還含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素等成分。文獻報道發(fā)現(xiàn)蛹蟲草具有免疫、調(diào)節(jié)血脂、保護心血管、抗疲勞等功能。多糖是蛹蟲草中重要的活性物質(zhì)之一，具有抗氧化等功效。

目前，尚無中藥蛹蟲草多糖對大鼠功能性便秘治療的報道。本發(fā)明通過測定中藥蛹蟲草多糖對大鼠功能性便秘各項生化指標，考察其治療功能性便秘的效果。試驗結(jié)果證明：其療效顯著，且無毒副作用。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步地詳細介紹，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此。

實施例1

所述蛹蟲草多糖經(jīng)下述步驟獲得：取蛹蟲草樣品1920g，加水至淹沒藥材，用水煎煮（共煎煮2次，第一次1h，第二次0.5h），合并兩次濾液并加入無水乙醇至乙醇終濃度為70V%，冰箱中靜置過夜（12h），離心分離，所得沉淀經(jīng)冷凍干燥（-40℃冰箱冷凍12h，在干燥機中烘干）后即為蛹蟲草多糖，約50g。

應用試驗

一、大鼠功能性便秘模型的建立

（1）試驗動物

SPF級的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠，體重200-220g。動物購買于河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK（豫）2015-0004。

（2）試驗試劑

氯化鈉注射液（辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號：1611032707）；鹽酸洛哌丁胺（Imodium,西安楊森制藥有限公司，批號：160729316）；麻仁丸（湖北諾得勝制藥有限公司，批號：151003）；大鼠胃動素（MTL）ELISA試劑盒（批號：2016Z0121），大鼠胃泌素（GAS）ELISA試劑盒（批號：2016Z0122），大鼠P物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒（批號：2016Z0123），大鼠生長激素（SS）ELISA試劑盒（批號：2016Z0124），大鼠一氧化氮（NO）ELISA試劑盒（批號：2016Z0125），均由深圳子科生物科技有限公司提供。

（3）試驗方法

SPF級的Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠適應性飼養(yǎng)一周（溫度25±2℃，光照12h/d，濕度40-45%），喂養(yǎng)標準飼料，自由飲水。給藥前一天稱量每只大鼠的體重，按體重隨機分組，共分為8組，即：空白組一10只，空白組二10只，模型組一10只，模型組二10只，陽性對照組10只，蛹蟲草多糖高劑量組10只，蛹蟲草多糖中劑量組10只，蛹蟲草多糖低劑量組10只。以1.5mg·Kg·d的鹽酸洛哌丁胺與生理鹽水配制成2ml的懸浮液。

空白組以2mL/只灌胃生理鹽水，模型組以1.5mg·Kg·d的鹽酸洛哌丁胺與生理鹽水配制成2ml的懸浮液給大鼠進行灌胃10天。造模10天后，空白組一與模型組一禁食不禁水12h后，全部以2ml灌胃活性炭懸浮液，灌胃1h后，用10%水合氯醛對大鼠進行麻醉，將大鼠剪取幽門至下端盲腸處的小腸輕拉平鋪至直線。測量剪取的小腸長度（即小腸全長）及其幽門一直到活性炭運動前端的長度（即墨汁推進長度），計算小腸推進率。腹主動脈取血，3000轉(zhuǎn)離心10min，離心得到血清并檢測大鼠胃動素（MTL）、胃泌素（GAS）、生長抑素（SS）、P物質(zhì)的含量。

小腸推進率（%）=（墨汁推進長度/小腸全長）×100%。

結(jié)果顯示：空白組一的小腸推進率（82.27±5.75%）、胃動素（242.17±14.17ｐg/ml）、胃泌素（160.18±14.85ｐg/ml）、生長抑素SS（38.42±4.19ｐg/ml）、P物質(zhì)（56.53±2.47ｐg/ml）；

模型組一的小腸推動率（71.22±9.30%）、胃動素（230.22±8.46ｐg/ml）、胃泌素（145.39±16.74ｐg/ml）、生長抑素SS（45.89±3.81ｐg/ml）、P物質(zhì)（53.73±3.58ｐg/ml）。

結(jié)果經(jīng)過算術(shù)平均值和標準差表示，數(shù)值統(tǒng)計采用SPSS19.0軟件單因素方差分析法(One-Way ANOVA)比較，模型組一的大鼠小腸蠕動率與空白組一相比極顯著降低（0.01﹤P﹤0.05）。模型組一的大鼠胃動素、胃泌素和P物質(zhì)的含量與空白組一的相比均顯著降低（P﹤0.05）。模型組一的大鼠生長激素含量與空白組一的相比顯著升高（P﹤0.05），說明鹽酸洛哌丁胺誘導的大鼠功能性便秘的模型是成功的。

二、藥物治療

大鼠功能性便秘模型建立成功后，將造模成功的大鼠進行給藥治療，空白組二與模型組二每天以1ml/kg灌胃生理鹽水，陽性對照組每天以3mg麻仁丸/kg灌胃給藥，蛹蟲草多糖高劑量組每天以800mg/kg灌胃給藥，蛹蟲草多糖中劑量組每天以400mg/kg灌胃給藥，蛹蟲草多糖低劑量組每天以200mg/kg灌胃給藥，連續(xù)給藥一周。禁食不禁水12小時后，全部以2ml灌胃活性炭懸浮液，灌胃1h后，用10%水合氯醛對大鼠進行麻醉，將大鼠剪取幽門至下端盲腸處的小腸輕拉平鋪至直線。測量剪取的小腸長度（即小腸全長）及其幽門一直到活性炭運動前端的長度（即墨汁推進長度），計算小腸推進率。腹主動脈取血，3000轉(zhuǎn)離心10min，離心得到血清并檢測大鼠胃動素（MTL）、胃泌素（GAS）、生長抑素SS及P物質(zhì)的含量。

數(shù)據(jù)處理：結(jié)果采用算術(shù)平均值和標準差表示，數(shù)值統(tǒng)計采用SPSS19.0軟件單因素方差分析法(One-Way ANOVA)比較其顯著性差異。測定結(jié)果見下表。

此外，將空白組二、模型組二、陽性對照組、蛹蟲草多糖高劑量組、蛹蟲草多糖中劑量組及蛹蟲草多糖低劑量組與空白組一、模型組一進行對比，觀察大鼠便秘重量、大鼠活動、毛色等指標，進一步證明造模成功。在整個實驗過程中，模型組一、模型組二、陽性對照組、蛹蟲草多糖高劑量組、蛹蟲草多糖中劑量組及蛹蟲草多糖低劑量組與空白組一、空白二相比，大鼠活動均減少，毛色都變暗。表1中可以看出，與空白組一、空白組二相比，模型組一、模型組二、陽性對照組、蟲草多糖高劑量組、蟲草多糖中劑量組、蟲草多糖低劑量組的24h便粒重量均極顯著降低（0.01﹤**P﹤0.05）。

表1 造模藥物對24h便粒重量的影響

表2 多糖藥物對腸蠕動的影響

表2中可以看出：模型組二與空白組二相比，模型組二的大鼠腸蠕動顯著降低（*P﹤0.05）。與模型組二相比，陽性對照組及蛹蟲草多糖高、中劑量組的大鼠腸蠕動顯著提升（#P﹤0.05），說明其均具有不錯的療效。

表3 多糖藥物對6h便粒重量的影響

表3中可以看出：模型組二與空白組二相比，模型組二大鼠6h便粒重量顯著性降低（*P﹤0.05）。陽性對照組、蛹蟲草多糖高、中、低劑量組與模型組二相比，陽性對照組、蛹蟲草多糖高劑量組大鼠的6h便粒重量有顯著性增加（#P﹤0.05），蛹蟲草多糖中劑量組大鼠的6h便粒重量雖然高于模型組二，但是不具有顯著性。

表4 多糖藥物對大鼠胃動素含量的影響

表4中可以看出：模型組二與空白組二相比，模型組二大鼠胃動素含量顯著降低（*P﹤0.05）。陽性對照組、蛹蟲草多糖高、中、低劑量組與模型組二相比，陽性對照組、蛹蟲草多糖高劑量組的大鼠胃動素含量有顯著性增加（#P﹤0.05），蛹蟲草多糖中劑量組的大鼠胃動素含量雖高于模型組二，但是不具有顯著性。

表5 多糖藥物對大鼠胃泌素含量的影響

表5中可以看出：模型組二與空白組二相比，模型組二大鼠胃泌素含量顯著降低（*P﹤0.05）。陽性對照組、蛹蟲草多糖高、中、低劑量組與模型組二相比，陽性對照組的大鼠胃泌素含量有顯著性增加（#P﹤0.05），蛹蟲草多糖高劑量組與蛹蟲草多糖中劑量組的大鼠胃泌素含量雖高于模型組二，但是不具有顯著性。

表6 多糖藥物對大鼠P物質(zhì)含量的影響

表6中可以看出：模型組二與空白組二相比，模型組二大鼠P物質(zhì)含量顯著降低（*P﹤0.05）。陽性對照組、蛹蟲草多糖高、中、低劑量組與模型組二相比，陽性對照組、蛹蟲草多糖高劑量組的大鼠P物質(zhì)含量有顯著性增加（#P﹤0.05），蛹蟲草多糖中劑量組的大鼠P物質(zhì)含量雖高于模型組二，但是不具有顯著性。

表7 多糖藥物對大鼠生長抑素SS含量的影響

表7中可以看出：模型組二與空白組二相比，模型組二大鼠生長抑素SS含量顯著升高（*P﹤0.05）。陽性對照組、蛹蟲草多糖高、中、低劑量組與模型組二相比，陽性對照組、蛹蟲草多糖高劑量組的大鼠生長抑素SS含量有顯著性降低（#P﹤0.05），蛹蟲草多糖中、低劑量組的大鼠生長抑素SS含量沒有顯著的效果。

結(jié)論：蛹蟲草多糖能顯著升高血清中的胃動素（MTL）、胃泌素（GAS）、生長抑素（SS）及P物質(zhì)含量，改善功能性便秘，其中蛹蟲草多糖高劑量組效果最顯著。說明：蛹蟲草多糖具有顯著治療功能性便秘的作用，是治療功能性便秘的理想藥物。