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一種形態(tài)改變的工程大腸桿菌的構(gòu)建方法、工程大腸桿菌及應(yīng)用與流程

文檔序號:12545017閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種形態(tài)改變的工程大腸桿菌的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟為

1)以質(zhì)粒PACYCDuet-1為出發(fā)質(zhì)粒,將用于合成聚乳酸的外源性丙酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶PCT基因和PHA合成酶基因引入質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌BL21;

2)通過PCR的方法對合成乳酸酯的乳酸脫氫酶LDH基因引入突變位點,提高酶的活性;以質(zhì)粒pTrcHis2B為出發(fā)質(zhì)粒,將遺傳修飾后的LDH基因引入質(zhì)粒并轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌BL21中,得到pTrcHis2B-LDH;

3)對SOS細胞分裂抑制sulA基因進行突變,以質(zhì)粒pTrcHis2B-LDH為出發(fā)質(zhì)粒,通過同源重組的方法將突變后的sulA基因引入質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌BL21中,通過過表達突變后的sulA基因,抑制細胞分裂,增大細胞內(nèi)體積,得到工程大腸桿菌。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟1)中對轉(zhuǎn)移酶PCT基因進行優(yōu)化,得到PCTcp,序列為SEQ ID NO:1。

3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟1)中對PHA合成酶基因進行優(yōu)化,得到PHApse,序列為SEQ ID NO:2。

4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟2)遺傳修飾后的LDH基因的序列為SEQ ID NO:3。

5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟3)突變后的sulA基因的序列為SEQ ID NO:4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項構(gòu)建方法得到的工程大腸桿菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的工程大腸桿菌應(yīng)用于合成乳酸、聚乳酸或3羥基丙酸共聚物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,工程大腸桿菌以葡萄糖為底物合成聚乳酸。

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