亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

鼠李糖脂合成的制作方法

文檔序號(hào):11285468閱讀:308來(lái)源:國(guó)知局
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于從碳源生產(chǎn)至少一種鼠李糖脂的方法和細(xì)胞。特別地,碳源可以是包含至少6個(gè)碳原子的有機(jī)化合物,并且鼠李糖脂可以是二鼠李糖基脂質(zhì)。發(fā)明背景市場(chǎng)上存在對(duì)于由可再生原料生產(chǎn)的可生物降解的表面活性劑作為從石油化工原料獲得的目前可用的表面活性劑的合適替代物的一般需求。該需求隨可預(yù)見(jiàn)的石油化工原料短缺和對(duì)表面活性劑的漸增需求而特別突出。鼠李糖脂是這種表面活性劑的至少一個(gè)實(shí)例。鼠李糖脂代表經(jīng)濟(jì)上令人關(guān)注的一類,因?yàn)樗鼈兛赡軡撛诘靥鎿Q由石油或其產(chǎn)物制成的常規(guī)表面活性劑,并且因此一定會(huì)改善所得到的制劑的環(huán)境性能。這些鼠李糖脂包含至少一個(gè)單鼠李糖基脂質(zhì)或兩個(gè)鼠李糖基團(tuán)(二鼠李糖基脂質(zhì))和一個(gè)或兩個(gè)3-羥基脂肪酸殘基(handbookofhydrocarbonandlipidmicrobiology,2010)。它們具有表面活性性質(zhì),這在用作表面活性劑的各種各樣應(yīng)用中是需要的(參見(jiàn)leitermann等人,2009)。特別地,作為家用、清潔、化妝品、食品加工、制藥、植物保護(hù)及其他應(yīng)用中的表面活性劑,可以在很大程度上使用鼠李糖脂。目前使用的生產(chǎn)這些鼠李糖脂的方法采用各種人和動(dòng)物致病菌的野生型分離物,所述致病菌特別是假單胞菌屬(pseudomonas)和伯克霍爾德氏菌屬(burkholderia)的成員(handbookofhydrocarbonandlipidmicrobiology,2010)。這些致病生物能夠?qū)οM(fèi)者造成疾病的事實(shí)相當(dāng)大地降低了客戶對(duì)這些常規(guī)生產(chǎn)的鼠李糖脂的接受度。此外,由于資本支出增加和可能附加的生產(chǎn)步驟,更高的安全要求也增加生產(chǎn)成本。因?yàn)槠渲惺褂眠@些鼠李糖脂的產(chǎn)品主要是可以以非常低的成本生產(chǎn)的高容量化學(xué)品,所以鼠李糖脂還必須能夠以盡可能低的成本生產(chǎn),且盡可能對(duì)于客戶沒(méi)有健康風(fēng)險(xiǎn)并具有限定的性質(zhì)。目前可用于生產(chǎn)鼠李糖脂的方法包括使用這些致病生物和植物油作為唯一底物或共底物(handbookofhydrocarbonandlipidmicrobiology,2010)。然而,與其他碳源諸如例如葡萄糖、蔗糖或多糖(諸如例如淀粉、纖維素和半纖維素)、甘油、co、co2或ch4相比,植物油是比較昂貴的原料。鼠李糖脂也使用碳源諸如例如葡萄糖、蔗糖或多糖由非致病生物生產(chǎn),如wo2012013554a1中所教導(dǎo)的。需要大量資源從這樣的短碳鏈來(lái)構(gòu)建鼠李糖脂。然而,仍然存在使用非致病生物和替代可再生原料有效地(即廉價(jià)地且從健康的觀點(diǎn)來(lái)看安全地)且以多于足夠的量生產(chǎn)鼠李糖脂(特別是單鼠李糖基脂質(zhì)和/或二鼠李糖基脂質(zhì))的需要。發(fā)明描述本發(fā)明涉及可以能夠解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題的方法。特別地,本發(fā)明涉及通過(guò)在至少一種碳源的存在下接觸重組細(xì)胞來(lái)生產(chǎn)至少一種鼠李糖脂的方法,其中碳源是包含多于6個(gè)碳原子的至少一種烷烴。與細(xì)胞的野生型相比,重組細(xì)胞包含酶α/β水解酶、鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i或鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii中的至少一種的增加的活性。該方法可以是尤其有利的,因?yàn)樗梢栽试S高選擇性生產(chǎn)單鼠李糖基脂質(zhì)和/或二鼠李糖基脂質(zhì),且所產(chǎn)生的不期望的副產(chǎn)物和中間產(chǎn)物的量中的降低。例如,與目前可用的方法相比,至少可以存在更少的中間產(chǎn)物,例如根據(jù)本發(fā)明的任何方面形成的β-羥基脂肪酸的二聚體(脂肪酸二聚體)。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法的進(jìn)一步優(yōu)點(diǎn)包括但不限于可以利用非致病性和培養(yǎng)簡(jiǎn)單的生物的事實(shí)。進(jìn)一步優(yōu)點(diǎn)可以包括以下事實(shí):使用根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法,可以不需要油和簡(jiǎn)單的碳水化合物底物(例如葡萄糖、果糖或蔗糖)是唯一底物或共底物。根據(jù)本發(fā)明的任何方面,另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)可以是可以產(chǎn)生具有限定和可調(diào)節(jié)性質(zhì)的鼠李糖脂。另外,具體地,可以產(chǎn)生二鼠李糖基脂質(zhì)。進(jìn)一步優(yōu)點(diǎn)可以是與用不含這些活性增強(qiáng)的細(xì)胞相比,鼠李糖脂可以以更高的空間時(shí)間和碳產(chǎn)量而產(chǎn)生。此外,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法使得較高級(jí)的碳烷烴(c6及以上)能夠直接轉(zhuǎn)化為鼠李糖脂,而不是首先分解成較小的c鏈,然后重建為鼠李糖脂。根據(jù)本發(fā)明的任何方面,可以使用本發(fā)明的任何方面產(chǎn)生的鼠李糖脂和/或鼠李糖脂混合物同樣也可以是本發(fā)明的主題??梢愿鶕?jù)本發(fā)明的任何方面產(chǎn)生的鼠李糖脂和混合物可有利地至少用于清潔劑或護(hù)理劑,化妝品、皮膚病學(xué)或藥物制劑以及植物保護(hù)制劑、表面活性劑濃縮物等等中。術(shù)語(yǔ)“護(hù)理劑”在此處應(yīng)理解為意指實(shí)現(xiàn)下述目的的制劑:維持物品的原始形式,降低或避免外部影響(例如時(shí)間、光照、溫度、壓力、污染、與接觸制品的其他反應(yīng)性化合物的化學(xué)反應(yīng)等等)以及老化、污染、材料疲勞的效應(yīng),和/或甚至改善物品所需的正面性質(zhì)。物品所需的正面性質(zhì)的實(shí)例可以包括特點(diǎn)例如改善的頭發(fā)光澤或物品的更大彈性等等?!爸参锉Wo(hù)制劑”在本文中應(yīng)理解為意指按其制備性質(zhì)用于植物保護(hù)的那些制劑。如果制劑中含有選自除草劑、殺真菌劑、殺蟲(chóng)劑、殺螨劑、殺線蟲(chóng)劑、防鳥(niǎo)害保護(hù)物質(zhì)、植物營(yíng)養(yǎng)素和土壤結(jié)構(gòu)改善劑的至少一種化合物,則尤其如此。根據(jù)本發(fā)明的任何方面產(chǎn)生的鼠李糖脂可以用作護(hù)理劑和清潔劑的組分,所述護(hù)理劑和清潔劑在家政、工業(yè)中,特別是對(duì)硬表面、皮革和/或紡織品使用。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面,提供了生產(chǎn)至少一種鼠李糖脂的至少一種方法,其包括:(a)使重組細(xì)胞與含有碳源的培養(yǎng)基接觸;其中所述重組細(xì)胞已進(jìn)行遺傳修飾,使得與細(xì)胞的野生型相比,所述細(xì)胞具有酶e1、e2和e3中的至少一種的增加的活性,其中所述酶e1是α/β水解酶(rhla),酶e2是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i(rhlb),并且酶e3是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii(rhlc),并且其中碳源是包含至少6個(gè)或更多個(gè)碳原子的烷烴。特別地,細(xì)胞可以包括所有三種酶e1,e2和e3的增加的活性。更特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞包含相對(duì)于野生型細(xì)胞的酶e1α/β水解酶(rhla)、酶e2鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i(rhlb)和酶e3鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii(rhlc)增加的活性,并且所產(chǎn)生的鼠李糖脂是至少一種二鼠李糖基脂質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面,提供了能夠從c6-c10烷烴和/或鏈烷酸形成至少一種鼠李糖脂的細(xì)胞,其中所述細(xì)胞已進(jìn)行遺傳修飾,使得與細(xì)胞的野生型相比,所述細(xì)胞具有酶氧化還原酶以及酶e1、e2和e3中的至少一種的增加的活性,其中所述酶e1是α/β水解酶,酶e2是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i,并且酶e3是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞包含相對(duì)于野生型細(xì)胞的酶e1α/β水解酶(rhla)、酶e2鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i(rhlb)和酶e3鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii(rhlc)增加的活性,并且所產(chǎn)生的鼠李糖脂是至少一種二鼠李糖基脂質(zhì)。更特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以能夠形成鼠李糖脂,并且與其野生型相比,具有至少一種基因產(chǎn)物或基因產(chǎn)物rhla、rhlb和rhlc的同源物的增加的活性。至少在一個(gè)實(shí)例中,來(lái)自銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa)的基因rhla、rhlb和rhlc可以引入gras生物內(nèi)(一般視為保存(generallyregardedassave))(如wo2012013554a1中所述),以從碳源產(chǎn)生鼠李糖脂,所述碳源是包含至少6個(gè)或更多個(gè)碳原子的烷烴。在一個(gè)具體實(shí)例中,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以是菌株kt2440的惡臭假單胞菌(p.putida)。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法中使用的碳源是包含至少6個(gè)或更多個(gè)碳原子的烷烴。烷烴可以具有化學(xué)式cnh2n+2,其中‘n’可以大于6。更特別地,‘n’可以是6、7、8、9或10。甚至更特別地,烷烴可以選自己烷、庚烷、辛烷、壬烷和癸烷。在另一個(gè)實(shí)例中,碳源可以是鏈烷酸。特別地,鏈烷酸可以具有6個(gè)或多于6個(gè)碳原子。更特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法中使用的鏈烷酸可以選自己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸等等。在一個(gè)實(shí)例中,碳源可以包含具有6-10個(gè)碳原子的烷烴和/或鏈烷酸的組合。例如,碳源可以包含己酸和己烷;己酸和癸烷;己酸和癸酸;癸酸和己烷;癸酸和癸烷等等。根據(jù)本發(fā)明的任何方面使用的培養(yǎng)基包含至少一種碳源。培養(yǎng)基中的碳源可以至少是含有6個(gè)或更多個(gè)碳原子的烷烴和/或鏈烷酸。特別地,培養(yǎng)基中的碳源可以基本上由己烷和/或己酸組成或?qū)嵸|(zhì)上包含己烷和/或己酸。特別地,c6分子的總量至少為或等于培養(yǎng)基中總碳含量的按重量計(jì)20%、40%、50%、60%或70%。更特別地,c6分子的總量至少為或等于培養(yǎng)基中碳源的按重量計(jì)50%、70%或80%。甚至更特別地,c6分子可以至少為或等于培養(yǎng)基中碳源的按重量計(jì)90%或約100%。在該實(shí)例中,c6分子可以指己烷和/或己酸。在另一個(gè)實(shí)例中,培養(yǎng)基中的碳源可以基本上由癸烷和/或癸酸組成或?qū)嵸|(zhì)上包含癸烷和/或癸酸。特別地,c10分子的總量至少為或等于培養(yǎng)基中總碳含量的按重量計(jì)20%、40%、50%、60%或70%。更特別地,c10分子的總量至少為或等于培養(yǎng)基中碳源的按重量計(jì)50%、70%或80%。甚至更特別地,c10分子可以至少為或等于培養(yǎng)基中碳源的按重量計(jì)90%或約100%。在該實(shí)例中,c10分子可以指癸烷和/或癸酸。在一個(gè)實(shí)例中,培養(yǎng)基可以包含第二碳源。特別地,碳源可以是碳水化合物諸如例如葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、木糖、乳糖、果糖、麥芽糖、糖蜜、淀粉、纖維素和半纖維素,植物和動(dòng)物油和脂肪諸如例如大豆油、紅花油、花生油、大麻籽油、麻瘋果油、椰子脂、葫蘆油、亞麻籽油、玉米油、罌粟油、月見(jiàn)草油、橄欖油、棕櫚仁油、棕櫚油、菜籽油、芝麻油、向日葵油、葡萄籽油、核桃油、小麥胚芽油和椰子油,脂肪酸諸如例如辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、花生四烯酸、山崳酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、γ-亞麻酸及其甲酯或乙酯以及脂肪酸混合物,含有上述任何脂肪酸的甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯,醇諸如例如甘油、乙醇和甲醇,烴例如甲烷,含碳?xì)怏w和氣體混合物,例如co、co2、合成氣或煙道氣,氨基酸例如l-谷氨酸或l-纈氨酸或有機(jī)酸諸如例如乙酸。這些物質(zhì)可以個(gè)別使用或作為混合物使用??梢允褂锰妓衔?,特別是單糖、寡糖或多糖,如us6,01,494和us6,136,576中所述的碳源,以及烴,特別是烷烴、烯烴和炔烴,以及由其衍生的一元羧酸以及來(lái)源于這些一元羧酸的甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯,以及甘油和乙酸??梢允褂煤懈视团c下述的酯化產(chǎn)物的甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯:辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、花生四烯酸、山崳酸、油酸、亞油酸、亞麻酸和/或γ-亞麻酸。根據(jù)本發(fā)明的任何方面,細(xì)胞可以能夠從長(zhǎng)鏈碳源如己烷、己酸、癸烷、癸酸等等形成鼠李糖脂是很大的優(yōu)點(diǎn)。這是因?yàn)檫@些長(zhǎng)碳鏈可以直接用于所形成的鼠李糖脂的骨架。這節(jié)省了將這些長(zhǎng)鏈分子破壞為c2分子模塊所需的資源和能量,所述c2分子模塊然后用于構(gòu)建復(fù)合鼠李糖脂(complexrhamnolipids)。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法因此更節(jié)能并且減少浪費(fèi)。特別地,所產(chǎn)生的鼠李糖脂是至少一種二鼠李糖基脂質(zhì)。堿性化合物如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨或氨水,或者酸性化合物如磷酸或硫酸可以適當(dāng)?shù)赜糜谂囵B(yǎng)基中,用于培養(yǎng)物的ph控制。消泡劑諸如例如脂肪酸聚乙二醇酯可以用于控制泡沫發(fā)生??梢詫⒑线m的選擇性作用物質(zhì)諸如例如抗生素加入培養(yǎng)基中,用于維持質(zhì)粒的穩(wěn)定性。為了維持好氧條件,可以將氧或含氧氣體混合物諸如例如空氣摻入培養(yǎng)物內(nèi)。培養(yǎng)物的溫度通常大于或等于20℃、25℃,它也可以大于或等于40℃,其中有利地可以使用至少或等于95℃,特別是至少或等于90℃,且更特別是至少或等于80℃的培養(yǎng)溫度。技術(shù)人員將理解哪些構(gòu)成用于從碳源生產(chǎn)鼠李糖脂的合適條件。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以在碳源中培養(yǎng)和/或生長(zhǎng),以產(chǎn)生鼠李糖脂。在另一個(gè)實(shí)例中,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的重組細(xì)胞可以僅與碳源接觸,而不進(jìn)一步生長(zhǎng)。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的重組細(xì)胞可以至少?gòu)暮?至10個(gè)碳原子的烷烴和/或鏈烷酸生產(chǎn)鼠李糖脂。使用本領(lǐng)域已知的基本方法,技術(shù)人員將能夠改變培養(yǎng)基中的條件,以適合根據(jù)本發(fā)明的任何方面使用的相關(guān)細(xì)胞。在根據(jù)本發(fā)明的任何方面的方法中,由細(xì)胞形成的鼠李糖脂可以任選地從細(xì)胞和/或培養(yǎng)基中分離??梢詰?yīng)用本領(lǐng)域已知的用于從復(fù)雜組合物中分離低分子量物質(zhì)的所有方法。例如,可以在產(chǎn)物相中使用諸如過(guò)濾、提取、吸附(層析法)、結(jié)晶等等方法。產(chǎn)物相中的分離產(chǎn)物還可以包含生物質(zhì)和各種雜質(zhì)的其他不需要的殘余物,例如油,脂肪酸和其他營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組成成分。這些雜質(zhì)等等的分離可以在無(wú)溶劑方法中進(jìn)行。因此,例如,分離的產(chǎn)物可以首先用水稀釋,以促進(jìn)ph的調(diào)節(jié)。然后可以通過(guò)分別用酸或堿降低或升高ph,將鼠李糖脂轉(zhuǎn)化為水溶性形式,而使產(chǎn)物相和水相均化。可以通過(guò)在較高溫度下例如在60至90℃下溫育反應(yīng)混合物和/或伴隨恒定混合,來(lái)幫助鼠李糖脂在水相中的溶解度。通過(guò)堿或酸后續(xù)升高或降低ph,然后將鼠李糖脂再次轉(zhuǎn)化成水不溶性形式,使得它們可以容易地從水相中分離。然后將產(chǎn)物相用水洗滌一次或幾次,以去除水溶性雜質(zhì)。油殘余物可以例如通過(guò)借助于合適溶劑,有利地借助于有機(jī)溶劑的提取進(jìn)行分離。烷烴諸如例如正己烷等等可以用作溶劑。產(chǎn)物與水相的分離可以使用合適溶劑(例如酯,例如乙酸乙酯、乙酸丁酯等等)替代上述無(wú)溶劑方法來(lái)完成。這些提取步驟可以以任何所需順序進(jìn)行。技術(shù)人員將能夠容易地改變所使用的步驟順序和/或溶劑,以適合于細(xì)胞和待提取的鼠李糖脂。在另一個(gè)實(shí)例中,溶劑可以用于提取根據(jù)本發(fā)明的任何方面生產(chǎn)的鼠李糖脂。特別地,可以使用有機(jī)溶劑。更特別地,正戊醇可以用作溶劑。例如,進(jìn)行蒸餾以去除溶劑。隨后,可以例如借助于層析方法進(jìn)一步純化凍干產(chǎn)物。例如,可以采用借助于合適溶劑的沉淀,借助于合適溶劑的提取,例如借助于環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物的絡(luò)合,借助于層析方法的結(jié)晶、純化或分離,或?qū)⑹罄钐侵D(zhuǎn)化成容易分離的衍生物。根據(jù)本發(fā)明的任何方面采用的重組細(xì)胞已進(jìn)行遺傳修飾,使得與細(xì)胞的野生型相比,所述細(xì)胞具有酶e1、e2和e3中的至少一種的增加的活性,其中所述酶e1是α/β水解酶,酶e2是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i,并且酶e3是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii。根據(jù)本發(fā)明的任何方面使用的重組細(xì)胞可以根據(jù)wo2012013554a1中公開(kāi)的方法進(jìn)行制備。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞包含相對(duì)于野生型細(xì)胞的酶e1α/β水解酶(rhla)、酶e2鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i(rhlb)和酶e3鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii(rhlc)增加的活性。特別地,在根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞中,酶e1可以能夠催化3-羥基烷?;?acp經(jīng)由3-羥基烷酰基-3-羥基鏈烷酸-acp轉(zhuǎn)化為羥基烷?;?3-羥基鏈烷酸,酶e2可以是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶i,并且可以能夠催化dtdp-鼠李糖和3-羥基烷酰基-3-羥基鏈烷酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基烷?;?3-羥基鏈烷酸,并且酶e3可以是鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶ii,并且可以能夠催化dtdp-鼠李糖和a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基烷酰基-3-羥基鏈烷酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-(1-2)-a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基烷?;?3-羥基鏈烷酸,其中這些酶e1、e2和e3可以選自:-至少一種酶e1,其包含選自seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6的氨基酸序列及其片段;-至少一種酶e2,其包含選自seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11的氨基酸序列及其片段,和-至少一種酶e3,其包含選自seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15的氨基酸序列及其片段。關(guān)于酶e1、e2或e3中的任何一種的片段可以包含多肽序列,其中與各個(gè)酶的序列相比,高達(dá)25%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且片段包含各個(gè)酶的至少10%的酶促活性。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞中的酶e1可以選自:-酶e1a,其包含多肽序列seqidno:2或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:2相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:2的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e1a的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基癸?;?acp經(jīng)由3-羥基癸?;?3-羥基癸酸-acp轉(zhuǎn)化為羥基癸酰基-3-羥基癸酸的能力,-酶e1b,其包含多肽序列seqidno:3或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:3相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:3的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e1b的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基癸酰基-acp經(jīng)由3-羥基癸?;?3-羥基癸酸-acp轉(zhuǎn)化為羥基癸酰基-3-羥基癸酸的能力,-酶e1c,其包含多肽序列seqidno:4或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:4相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:4的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e1c的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基癸?;?acp經(jīng)由3-羥基癸?;?3-羥基癸酸-acp轉(zhuǎn)化為羥基癸酰基-3-羥基癸酸的能力,-酶e1d,其包含多肽序列seqidno:5或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:5相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:5的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e1d的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基癸?;?acp經(jīng)由3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸-acp轉(zhuǎn)化為羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,和-酶e1e,其包含多肽序列seqidno:6或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:6相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:6的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e1e的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基癸?;?acp經(jīng)由3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸-acp轉(zhuǎn)化為羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞中使用的酶e2可以選自:-酶e2a,其具有多肽序列seqidno:7或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:7相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:7的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e2a的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和3-羥基癸?;?3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸的能力,-酶e2b,其具有多肽序列seqidno:8或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:8相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:8的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e2b的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,-酶e2c,其具有多肽序列seqidno:9或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:9相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:9的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e2c的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,-酶e2d,其具有多肽序列seqidno:10或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:10相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:10的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e2d的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和3-羥基癸?;?3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,和-酶e2e,其具有多肽序列seqidno:11或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:11相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:11的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e2e的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞中使用的酶e3可以選自:-酶e3a,其具有多肽序列seqidno:12或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:12相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:12的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e3a的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-(1-2)-a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,-酶e3b,其具有多肽序列seqidno:13或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:13相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:13的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e3b的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-(1-2)-a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,-酶e3c,其具有多肽序列seqidno:14或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:14相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:14的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e3c的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-(1-2)-a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力,和-酶e3d,其具有多肽序列seqidno:15或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:15相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:15的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e3d的酶促活性可以被理解為意指優(yōu)選將dtdp-鼠李糖和a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸轉(zhuǎn)化為a-l-吡喃鼠李糖基-(1-2)-a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸?;?3-羥基癸酸的能力。技術(shù)人員將理解,上文對(duì)于酶e1a至e3b指示的活性僅是這些酶的更廣譜活性的特殊示例性選擇;所提及的各活性是在給定酶的情況下可用可靠測(cè)量方法的活性。因此,顯而易見(jiàn)的是,用具有直鏈飽和的c10-烷基的底物的酶也可以能夠轉(zhuǎn)化含有c6-或c16-烷基的那些底物,所述底物也可以任選地是支化的或不飽和的。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的重組細(xì)胞也可以進(jìn)行遺傳修飾,使得與細(xì)胞的野生型相比,所述細(xì)胞具有酶氧化還原酶的增加的活性。特別地,細(xì)胞可以進(jìn)行遺傳修飾,使得細(xì)胞具有e1、e2或e3或其組合和氧化還原酶的增加的活性。更特別地,細(xì)胞可以具有e1、e2、e3和氧化還原酶的增加的活性。在一個(gè)實(shí)例中,細(xì)胞具有e1和e2和氧化還原酶、或e1和e3和氧化還原酶、或e2和e3和氧化還原酶的增加的活性。氧化還原酶可以是alkb型氧化還原酶。這類氧化還原酶alkb是來(lái)自惡臭假單胞菌alkbgt系統(tǒng)的氧化還原蛋白,依賴于兩種輔助多肽alkg和alkt。alkt是將電子從nadh轉(zhuǎn)移到alkg的fad依賴性紅素氧還蛋白還原酶。alkg是紅素氧還蛋白,充當(dāng)alkb的直接電子供體的含鐵氧化還原蛋白。在一個(gè)具體實(shí)例中,alkb型氧化還原酶是來(lái)自惡臭假單胞菌gpo1的alkb(登錄號(hào):cab54050.1(版本1)seqidno:1,在本申請(qǐng)中使用的任何登錄號(hào)指來(lái)自由ncbi運(yùn)行的genbank數(shù)據(jù)庫(kù)的相應(yīng)序列,其中所提及的版本是2014年4月4日在線可得的版本)。該酶alkb型氧化還原酶具有多肽序列seqidno:1或具有多肽序列,在所述多肽序列中,與參考序列seqidno:1相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有參考序列seqidno:1的酶的至少10%、50%、80%,特別是多于92%的酶促活性,其中關(guān)于酶alkb型氧化還原酶的酶促活性可以被理解為意指根據(jù)本發(fā)明的任何方面,將具有6個(gè)或更多個(gè)碳原子的至少一種烷烴轉(zhuǎn)化為相應(yīng)鏈烷酸的能力。氧化還原酶可以是單加氧酶。特別地,單加氧酶可以是p450型單加氧酶,例如來(lái)自熱帶假絲酵母(candidatropicalis)或來(lái)自鷹嘴豆(cicerarietinum)的細(xì)胞色素p450。更特別地,cyp153單加氧酶,例??如來(lái)自泊庫(kù)島食烷菌(alcanivoraxborkumensis)sk2(yp_691921)的細(xì)胞色素p450-單加氧酶。單加氧酶可以用于首先將丁烷氧化為醇。在另一個(gè)實(shí)例中,氧化還原酶可以是nad(p)h依賴性醇脫氫酶(adh)。特別地,adh可以來(lái)自大腸桿菌(escherichiacoli)ms187-1(zp_07145023)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(bacillusstearothermophilus)(p42328)、富養(yǎng)羅爾斯通氏菌(ralstoniaeutropha)(acb78191.1)、短乳桿菌(lactobacillusbrevis)(yp_795183.1)、高加索酸奶乳桿菌(lactobacilluskefiri)(acf95832.1)、馬肝、泛養(yǎng)副球菌(paracoccuspantotrophus)(acb78182.1)或矢野口鞘氨醇菌(sphingobiumyanoikuyae)(eu427523.1)。在一個(gè)實(shí)例中,adh可以是例如來(lái)自熱帶假絲酵母(aas46878.1)的黃素依賴性adh。在一個(gè)實(shí)例中,氧化還原酶可以來(lái)自葡萄糖-甲醇-膽堿-氧化還原酶家族,尤其是來(lái)自柄桿菌屬菌種(caulobactersp.)k31(abz74557.1)。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的任何方面,碳源是直接或原位地由相應(yīng)的烷烴產(chǎn)生的包含6至10個(gè)碳原子的鏈烷酸時(shí),也可以使用這種特定的氧化還原酶。術(shù)語(yǔ)“增加的酶活性”被理解為意指增加的細(xì)胞內(nèi)活性。下文關(guān)于細(xì)胞中增加的酶促活性的描述和定義既適用于酶e1至e3和氧化還原酶的活性中的增加,也適用于本公開(kāi)內(nèi)容中所有隨后提及的酶,其活性可任選地增加。特別地,如本說(shuō)明書自始至終關(guān)于酶e1、e2和e3描述的所有方法都可以應(yīng)用于酶氧化還原酶,所述氧化還原酶可以任選存在于根據(jù)本發(fā)明的任何方面的重組細(xì)胞中。原則上,酶促活性中的增加可以通過(guò)下述來(lái)達(dá)到:增加編碼酶的一種或多種基因序列的拷貝數(shù),使用強(qiáng)啟動(dòng)子或改善的核糖體結(jié)合位點(diǎn),減弱例如通過(guò)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子的基因表達(dá)的負(fù)調(diào)節(jié),或擴(kuò)大基因表達(dá)的正調(diào)節(jié),修飾基因的密碼子使用,以各種方式增加mrna或酶的半衰期,修飾基因表達(dá)的調(diào)節(jié)或利用編碼具有增加活性的適當(dāng)酶的基因或等位基因,并且任選地組合這些措施。根據(jù)本發(fā)明的任何方面,遺傳修飾的細(xì)胞例如通過(guò)使用載體的轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、綴合或這些方法的組合來(lái)產(chǎn)生,所述載體含有所需基因、該基因的等位基因或其部分,并且任選地含有使得基因能夠表達(dá)的啟動(dòng)子。異源表達(dá)特別通過(guò)將基因或等位基因整合到細(xì)胞的染色體或染色體外復(fù)制載體中來(lái)實(shí)現(xiàn)。de-a-10031999給出了如通過(guò)丙酮酸羧化酶例示的,增加細(xì)胞中酶活性的方法的幾個(gè)例子。技術(shù)人員將容易地能夠使用de-a-10031999中公開(kāi)的方法,用于增加根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞中的酶活性。上文和所有隨后提及的酶或基因的表達(dá)可借助于單向和/或雙向蛋白質(zhì)凝膠分離,以及隨后使用適當(dāng)?shù)姆治鲕浖鈱W(xué)鑒定凝膠中的蛋白質(zhì)濃度來(lái)檢測(cè)。如果酶活性中的增加排他地取決于相應(yīng)基因表達(dá)中的增加,則可以通過(guò)在野生型細(xì)胞和遺傳修飾的細(xì)胞之間的單向或雙向蛋白分離的比較,以簡(jiǎn)單的方式來(lái)測(cè)定酶活性中的增加的定量。在棒狀桿菌屬(corynebacterium)的情況下用于制備蛋白質(zhì)凝膠和用于鑒定蛋白質(zhì)的通常方法是通過(guò)hermann等人,2001描述的程序。蛋白質(zhì)濃度可以通過(guò)下述進(jìn)行分析:使用對(duì)于待檢測(cè)的蛋白質(zhì)特異性的抗體的蛋白質(zhì)印跡雜交(sambrook等人,1989),以及使用用于濃度測(cè)定的適當(dāng)軟件的后續(xù)光學(xué)分析(lohaus和meyer,1989)。dna結(jié)合蛋白的活性可以借助于dna帶移測(cè)定(也稱為凝膠阻滯)來(lái)測(cè)量(wilson等人,2001)。dna結(jié)合蛋白對(duì)其他基因表達(dá)的作用可以通過(guò)各種眾所周知的報(bào)道基因測(cè)定方法來(lái)檢測(cè)(sambrook等人,1989)。細(xì)胞內(nèi)酶促活性也可以根據(jù)各種確定的方法進(jìn)行測(cè)定(donahue等人,2000;ray等人,2000;freedberg等人,1973)。如果在下述實(shí)施例中未指出用于測(cè)定精確酶的活性的具體方法,則可以借助于hermann等人,2001,lohaus等人,1998,lottspeich,1999和wilson等人,2001中所述的方法,進(jìn)行酶活性增加的測(cè)定或酶活性減少的測(cè)定。如果酶活性中的增加通過(guò)內(nèi)源基因的突變來(lái)實(shí)現(xiàn),則可以通過(guò)常規(guī)方法諸如例如通過(guò)uv照射或通過(guò)誘變化學(xué)品隨機(jī)產(chǎn)生這樣的突變,或者借助于遺傳工程方法例如缺失、插入和/或核苷酸交換選擇性地產(chǎn)生這樣的突變。通過(guò)這些突變獲得經(jīng)修飾的細(xì)胞。酶的突變體還特別是那些酶,所述酶不再是反饋、產(chǎn)物或底物可抑制的(inhabitable),或是這樣的以便至與野生型酶相比至少降低的程度。如果酶活性中的增加通過(guò)酶合成中的增加來(lái)實(shí)現(xiàn),則相應(yīng)基因的拷貝數(shù)可以是增加的,或位于結(jié)構(gòu)基因上游的啟動(dòng)子和調(diào)節(jié)區(qū)或核糖體結(jié)合位點(diǎn)可以是突變的。摻入結(jié)構(gòu)基因上游的表達(dá)盒以相同的方式起作用。還能夠借助于至少誘導(dǎo)型啟動(dòng)子來(lái)增加基因在任何所需時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)?!霸鰪?qiáng)子”也可以作為調(diào)節(jié)序列分配給目的酶基因,其同樣借助于rna聚合酶和dna之間改善的相互作用而造成增加的基因表達(dá)。由于mrna壽命延長(zhǎng)的措施,表達(dá)同樣得到改善。另外,通過(guò)防止酶蛋白的降解,酶活性也可以得到增加?;蚧蚧驑?gòu)建體此處存在于具有不同拷貝數(shù)的質(zhì)粒中,或者在染色體中整合并擴(kuò)增。在另一個(gè)實(shí)例中,相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)可以通過(guò)修飾培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)管理來(lái)實(shí)現(xiàn)。本領(lǐng)域技術(shù)人員尤其在下述中找到對(duì)于這一點(diǎn)的指導(dǎo):martin等人,1987,guerrero等人,1994,tsuchiya和morinaga,1988,eikmanns等人,1991,ep-a-0472869,us4,601,893,schwarzer和pühler,1991,reinscheid等人,1994,labarre等人,1993,wo96/15246a,malumbres等人,1993,jp10229891a,jensen和hammer,1998,以及已知的遺傳學(xué)和分子生物學(xué)教科書。如同突變,上述措施同樣產(chǎn)生可以用于本發(fā)明的任何方面中的遺傳修飾細(xì)胞。例如,附加型質(zhì)粒用于增加各個(gè)基因的表達(dá)。原則上,合適的質(zhì)?;蜉d體對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)在理論上都可用于此目的。這樣的質(zhì)粒和載體可以例如得自novagen、promega、newenglandbiolabs、clontech或gibcobrl公司的手冊(cè)。特別地,質(zhì)粒和載體可以在下述中發(fā)現(xiàn):glover,d.m.,1985,rodriguez,r.l.和denhardt,d.t,1988,butterworth,stoneham;goeddel,d.v.,1990,fritsch,e.f.和maniatis,t.,1989。然后將包含待擴(kuò)增基因的質(zhì)粒載體通過(guò)綴合或轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)變?yōu)樗杈?。綴合方法例如在sch?fer等人,1994中描述。用于轉(zhuǎn)化的方法例如至少在thierbach等人,1988,dunican和shivnan,1989以及tauch等人,1994中描述。在借助于“交換”事件的同源重組之后,所得到的菌株包含相關(guān)基因的至少兩個(gè)拷貝。使用該方法,至少可以將基因的拷貝數(shù)增加至菌株中的所需數(shù)目。在上文和下述實(shí)施例中使用的表述下,“與其野生型相比增加的酶(ex)活性”總是應(yīng)理解為意指各個(gè)酶ex的活性增加至少2倍,特別是至少10倍,更特別是至少100倍,甚至更特別是至少1,000倍,且最特別是至少10,000倍。具有“與其野生型相比增加的酶(ex)活性”的根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞特別還包括這樣的細(xì)胞,其野生型不含這種酶ex的活性或至少不含這種酶ex的可檢測(cè)活性,并且僅在例如通過(guò)過(guò)表達(dá)增加酶活性后顯示該酶ex的可檢測(cè)活性。在這方面,術(shù)語(yǔ)“過(guò)表達(dá)”或下文實(shí)例中使用的表述“增加表達(dá)”也包含這樣的情況,其中起始細(xì)胞例如野生型細(xì)胞沒(méi)有表達(dá)或至少?zèng)]有可檢測(cè)的表達(dá),并且可檢測(cè)的酶ex合成僅通過(guò)重組方法進(jìn)行誘導(dǎo)。ex也可以指氧化還原酶。細(xì)胞的“野生型”在本文中指定其基因組以如通過(guò)進(jìn)化自然形成的狀態(tài)存在的細(xì)胞。該術(shù)語(yǔ)用于整個(gè)細(xì)胞以及各個(gè)基因兩者。術(shù)語(yǔ)“野生型”因此特別地不包括這樣的細(xì)胞或這樣的基因,其基因序列至少部分借助于重組方法人為進(jìn)行修飾。術(shù)語(yǔ)‘野生型’還可以包括在與目的基因無(wú)關(guān)的其他方面(即,關(guān)于一個(gè)或多個(gè)基因)已進(jìn)行遺傳修飾的細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“野生型”因此不包括這樣的細(xì)胞,在所述細(xì)胞中特定目的基因的基因序列至少部分已使用重組方法人為改變。因此,在一個(gè)實(shí)例中,關(guān)于酶e1的野生型細(xì)胞可以指在細(xì)胞中具有酶e1的天然/未改變的表達(dá)的細(xì)胞。關(guān)于酶e2、e3等的野生型細(xì)胞可以以相同的方式加以解釋,并且可以指在細(xì)胞中分別具有酶e2、e3等的天然/未改變的表達(dá)的細(xì)胞。導(dǎo)致給定多肽的性質(zhì)和功能沒(méi)有顯著變化的給定多肽序列的氨基酸基團(tuán)的改變是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。因此,例如,“保守氨基酸”可以相互交換。這種合適的氨基酸取代的實(shí)例包括但不限于:ala取代ser;arg取代lys;asn取代gln或his;asp取代glu;cys取代ser;gln取代asn;glu取代asp;gly取代pro;his取代asn或gln;ile取代leu或val;leu取代met或val;lys取代arg或gln或glu;met取代leu或ile;phe取代met或leu或tyr;ser取代thr;thr取代ser;trp取代tyr;tyr取代trp或phe;val取代ile或leu。同樣已知以例如氨基酸插入或缺失形式,特別是在多肽的n末端或c末端處的改變通常對(duì)多肽的功能不發(fā)揮顯著的影響。酶的活性可以通過(guò)以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式破壞含有該活性的細(xì)胞來(lái)測(cè)定,所述方式例如借助于球磨機(jī)、弗氏壓碎器或超聲波粉碎器。隨后,可以通過(guò)在13,000rpm和4℃下至少離心10分鐘來(lái)進(jìn)行細(xì)胞、細(xì)胞碎片和破碎輔助物諸如例如玻璃珠的分離。使用所得到的無(wú)細(xì)胞粗提取物,然后可以進(jìn)行酶測(cè)定,伴隨產(chǎn)物的后續(xù)lc-esi-ms檢測(cè)??商娲兀璧拿缚梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法,例如通過(guò)層析方法(例如鎳-次氮基三乙酸親和層析、鏈霉抗生物素蛋白親和層析、凝膠過(guò)濾層析或離子交換層析)進(jìn)行富集,或者另外純化至同質(zhì)性。酶e1的活性可以以下述方式使用如上所述獲得的酶樣品進(jìn)行測(cè)定:標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定可以含有在120μl終體積中的100μm大腸桿菌acp、1mmβ巰基乙醇、200μm丙二酰輔酶a、40μm辛酰輔酶a(對(duì)于e1a)或十二烷酰輔酶a(對(duì)于e1b)、100μmnadph、2μg大腸桿菌fabd、2μg結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis)fabh、1μg大腸桿菌fabg、0.1m磷酸鈉緩沖液ph7.0和5μg酶e1。acp、β巰基乙醇和磷酸鈉緩沖液在37℃下溫育30分鐘,以完全降低acp。然后可以通過(guò)加入酶e1開(kāi)始反應(yīng)??梢允褂?ml水來(lái)停止反應(yīng),所述水已用hcl酸化至ph2.0,并且隨后用2ml氯仿/甲醇(2:1(v:v))提取兩次。然后通過(guò)離心(16,100g,5分鐘,rt)進(jìn)行相分離??梢匀〕鱿虏坑袡C(jī)相,在真空離心機(jī)中完全蒸發(fā),并且沉淀物可以在50μl甲醇中溶解。未溶解的組成成分通過(guò)離心(16,100g,5分鐘,rt)作為沉淀物取出,并且借助于lc-esi-ms分析樣品。通過(guò)分析相應(yīng)的質(zhì)量跟蹤(masstraces)和ms2光譜來(lái)進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定。酶e2的活性可以以下述方式使用如上所述獲得的酶樣品如下進(jìn)行測(cè)定:標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定可以含有185μl10mmtris-hcl(ph7.5)、10μl125mmdtdp-鼠李糖、以及50μl蛋白質(zhì)粗提取物(約1mg總蛋白)或溶液中的純化蛋白質(zhì)(5μg純化蛋白質(zhì))。通過(guò)加入10μl3-羥基癸?;?3-羥基癸酸(對(duì)于e2a)或3-羥基十四烷酰基-3-羥基十四烷酸(對(duì)于e2b)的10mm乙醇溶液開(kāi)始反應(yīng),并且在30℃下伴隨振蕩(600rpm)溫育1小時(shí)。隨后,反應(yīng)可以用1ml丙酮進(jìn)行處理。未溶解的組成成分通過(guò)離心(16,100g,5分鐘,rt)作為沉淀物取出,并且借助于lc-esi-ms分析樣品。通過(guò)分析相應(yīng)的質(zhì)量跟蹤和ms2光譜來(lái)進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定。酶e3的活性可以使用如上所述獲得的酶樣品如下進(jìn)行測(cè)定:標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定可以含有185μl10mmtris-hcl(ph7.5)、10μl125mmdtdp-鼠李糖、以及50μl蛋白質(zhì)粗提取物(約1mg總蛋白)或溶液中的純化蛋白質(zhì)(5μg純化蛋白質(zhì))。通過(guò)加入10μla-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸(對(duì)于e3a)或a-l-吡喃鼠李糖基-3-羥基十四烷?;?3-羥基十四烷酸(對(duì)于e3b)的10mm乙醇溶液開(kāi)始反應(yīng),并且在30℃下伴隨振蕩(600rpm)溫育1小時(shí)。隨后,反應(yīng)用1ml丙酮進(jìn)行處理。未溶解的組成成分通過(guò)離心(16,100g,5分鐘,rt)沉淀,并且借助于lc-esi-ms分析樣品。通過(guò)分析相應(yīng)的質(zhì)量跟蹤和ms2光譜來(lái)進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的重組細(xì)胞可以具有至少e1、e2和/或e3的增加的活性。特別地,細(xì)胞可以具有e1、e2或e3或其組合的增加的活性。更特別地,細(xì)胞可以具有e1、e2和e3的增加的活性。在一個(gè)實(shí)例中,細(xì)胞具有e1和e2、或e1和e3、或e2和e3的增加的活性。酶氧化還原酶的活性可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行測(cè)定。特別地,alkb型氧化還原酶的活性可以使用wo2009/077461a1中公開(kāi)的方法進(jìn)行測(cè)定,p450型單加氧酶的活性可以使用scheps,d等人,2011中提供的方法進(jìn)行測(cè)定,并且adh的活性通過(guò)benson,s.,shapiro,j.,j.bacteriol.1976,126,794-798中提供的方法進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的遺傳修飾細(xì)胞可以在分批方法(分批培養(yǎng))或補(bǔ)料分批方法(補(bǔ)料方法)或重復(fù)補(bǔ)料分批方法(重復(fù)補(bǔ)料方法)中連續(xù)或不連續(xù)地與培養(yǎng)基接觸,用于生產(chǎn)上述產(chǎn)物的目的,并且因此進(jìn)行培養(yǎng)。如gb-a-1009370中所述,也可以設(shè)想半連續(xù)方法。已知培養(yǎng)方法的概括在chmiel的教科書或storhas的教科書中描述。待使用的培養(yǎng)基必須以適當(dāng)?shù)姆绞綕M足各個(gè)菌株的需求。不同酵母株的培養(yǎng)基的描述例如包含在klauswolf,1996中。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以是原核生物或真核生物。這些可以是哺乳動(dòng)物細(xì)胞(諸如例如,來(lái)自人的細(xì)胞),植物細(xì)胞或微生物如酵母、真菌或細(xì)菌,其中微生物是特別優(yōu)選的,并且細(xì)菌和酵母是最優(yōu)選的。合適的細(xì)菌、酵母或真菌特別是作為細(xì)菌、酵母或真菌菌株保藏于deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturen(德國(guó)微生物保藏和細(xì)胞培養(yǎng)中心(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures))gmbh(dsmz),brunswick,德國(guó)的那些細(xì)菌、酵母或真菌。根據(jù)本發(fā)明合適的細(xì)菌屬于在下文列出的屬:-http://www.dsmz.de/species/bacteria.htm,根據(jù)本發(fā)明合適的酵母屬于在下文列出的屬:-http://www.dsmz.de/species/yeasts.htm并且根據(jù)本發(fā)明合適的真菌是在下文列出的那些:-http://www.dsmz.de/species/fungi.htm。特別地,細(xì)胞可以選自屬曲霉屬(aspergillus)、棒狀桿菌屬(corynebacterium)、短桿菌屬(brevibacterium)、芽孢桿菌屬(bacillus)、不動(dòng)桿菌屬(acinetobacter)、產(chǎn)堿桿菌屬(alcaligenes)、乳桿菌屬(lactobacillus)、副球菌屬(paracoccus)、乳球菌屬(lactococcus)、假絲酵母??屬(candida)、畢赤酵母屬(pichia)、漢遜酵母屬(hansenula)、克魯維酵母屬(kluyveromyces)、酵母屬(saccharomyces)、埃希氏菌屬(escherichia)、發(fā)酵單胞菌屬(zymomonas)、耶氏酵母屬(yarrowia)、甲基桿菌屬(methylobacterium)、羅爾斯通氏菌屬(ralstonia)、假單胞菌屬、紅螺菌屬(rhodospirillum)、紅桿菌屬(rhodobacter)、伯克霍爾德氏菌屬、梭菌屬(clostridium)和貪銅菌屬(cupriavidus)。更特別地,細(xì)胞可以選自構(gòu)巢曲霉(aspergillusnidulans)、黑曲霉(aspergillusniger)、廣泛產(chǎn)堿桿菌(alcaligeneslatus)、巨大芽孢桿菌(bacillusmegaterium)、枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)、黃色短桿菌(brevibacteriumflavum)、乳糖發(fā)酵短桿菌(brevibacteriumlactofermentum)、須芒草伯克霍爾德氏菌(burkholderiaandropogonis)、巴西伯克霍爾德氏菌(b.brasilensis)、b.caledonica、卡瑞苯西思伯克霍爾德氏菌(b.caribensis)、石竹伯克霍爾德氏菌(b.caryophylli)、b.fungorum、唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(b.gladioli)、b.glathei、莢殼伯克霍爾德氏菌(b.glumae)、b.graminis、b.hospita、b.kururiensis、吩嗪伯克霍爾德氏菌(b.phenazinium)、b.phymatum、b.phytofirmans、植物伯克霍爾德氏菌(b.plantarii)、b.sacchari、新加坡伯克霍爾德氏菌(b.singaporensis)、b.sordidicola、b.terricola、b.tropica、b.tuberum、b.ubonensis、b.unamae、b.xenovorans、b.anthina、吡咯伯克霍爾德氏菌(b.pyrrocinia)、泰國(guó)伯克霍爾德氏菌(b.thailandensis)、布朗克假絲酵母(candidablankii)、皺褶假絲酵母(candidarugosa)、谷氨酸棒狀桿菌(corynebacteriumglutamicum)、corynebacteriumefficiens、大腸桿菌、多形漢遜酵母(hansenulapolymorpha)、乳酸克魯維酵母(kluveromyceslactis)、扭脫甲基桿菌(methylobacteriumextorquens)、善變副球菌(paracoccusversutus)、銅綠假單胞菌、爛泥假單胞菌(p.borbori)、香茅醇假單胞菌(p.citronellolis)、變黃假單胞菌(p.flavescens)、門多薩假單胞菌(p.mendocina)、硝基還原假單胞菌(p.nitroreducens)、食油假單胞菌(p.oleovorans)、類產(chǎn)堿假單胞菌(p.pseudoalcaligenes)、食樹(shù)脂假單胞菌(p.resinovorans)、稻草假單胞菌(p.straminea)、橘黃假單胞菌(p.aurantiaca)、致金假單胞菌(p.aureofaciens)、綠針假單胞菌(p.chlororaphis)、莓實(shí)假單胞菌(p.fragi)、隆德假單胞菌(p.lundensis)、腐臭假單胞菌(p.taetrolens)、南極假單胞菌(p.antarctica)、產(chǎn)氮假單胞菌(p.azotoformans)、'p.blatchfordae'、油菜假單胞菌(p.brassicacearum)、布氏假單胞菌(p.brenneri)、雪松假單胞菌(p.cedrina)、皺褶假單胞菌(p.corrugata)、熒光假單胞菌(p.fluorescens)、蓋氏假單胞菌(p.gessardii)、黎巴嫩假單胞菌(p.libanensis)、孟氏假單胞菌(p.mandelii)、邊緣假單胞菌(p.marginalis)、地中海假單胞菌(p.mediterranea)、子午線假單胞菌(p.meridiana)、米氏假單胞菌(p.migulae)、霉味假單胞菌(p.mucidolens)、東方假單胞菌(p.orientalis)、人參假單胞菌(p.panacis)、解朊假單胞菌(p.proteolytica)、羅氏假單胞菌(p.rhodesiae)、類黃假單胞菌(p.synxantha)、賽維瓦爾假單胞菌(p.thivervalensis)、托拉氏假單胞菌(p.tolaasii)、維羅納假單胞菌(p.veronii)、脫氮假單胞菌(p.denitrificans)、穿孔素假單胞菌(p.pertucinogena)、乳脂色假單胞菌(p.cremoricolorata)、黃褐假單胞菌(p.fulva)、蒙氏假單胞菌(p.monteilii)、摩氏假單胞菌(p.mosselii)、副黃假單胞菌(p.parafulva)、惡臭假單胞菌、巴利阿里假單胞菌(p.balearica)、施氏假單胞菌(p.stutzeri)、扁桃假單胞菌(p.amygdali)、洋榛假單胞菌(p.avellanae)、番木瓜假單胞菌(p.caricapapayae)、菊苣假單胞菌(p.cichorii)、暈斑假單胞菌(p.coronafaciens)、天仙果假單胞菌(p.ficuserectae)、向日葵假單胞菌('p.helianthi')、苦棟假單胞菌(p.meliae)、薩氏假單胞菌(p.savastanoi)、丁香假單胞菌(p.syringae)、番茄假單胞菌(p.tomato)、綠黃假單胞菌(p.viridiflava)、松香假單胞菌(p.abietaniphila)、嗜酸紅假單胞菌(p.acidophila)、傘菌假單胞菌(p.agarici)、嗜堿假單胞菌(p.alcaliphila)、解堿假單胞菌(p.alkanolytica)、淀粉皮假單胞菌(p.amyloderamosa)、鐵角蕨假單胞菌(p.asplenii)、p.azotifigens、大麻假單胞菌(p.cannabina)、p.coenobios、結(jié)冰假單胞菌(p.congelans)、康氏假單胞菌(p.costantinii)、克羅斯韋假單胞菌(p.cruciviae)、德里假單胞菌(p.delhiensis)、外囊假單胞菌(p.excibis)、極東假單胞菌(p.extremorientalis)、弗雷德里克斯堡假單胞菌(p.frederiksbergensis)、褐鞘假單胞菌(p.fuscovaginae)、石花菜假單胞菌(p.gelidicola)、格氏假單胞菌(p.grimontii)、印度假單胞菌(p.indica)、杰氏假單胞菌(p.jessenii)、晉州假單胞菌(p.jinjuensis)、基爾假單胞菌(p.kilonensis)、p.knackmussii、韓國(guó)假單胞菌(p.koreensis)、亞麻假單胞菌(p.lini)、藤黃假單胞菌(p.lutea)、摩拉維亞假單胞菌(p.moraviensis)、耳炎假單胞菌(p.otitidis)、海綿假單胞菌(p.pachastrellae)、帕勒隆尼氏假單胞菌(p.palleroniana)、罌粟假單胞菌(p.papaveris)、爛泥假單胞菌(p.peli)、腐卵假單胞菌(p.perolens)、早熟禾假單胞菌(p.poae)、浦項(xiàng)假單胞菌(p.pohangensis)、嗜冷假單胞菌(p.psychrophila)、耐冷假單胞菌(p.psychrotolerans)、拉梭假單胞菌(p.rathonis)、食爬蟲(chóng)假單胞菌(p.reptilivora)、嗜樹(shù)脂假單胞菌(p.resiniphila)、根際假單胞菌(p.rhizosphaerae)、淺紅假單胞菌(p.rubescens)、薩氏假單胞菌(p.salomonii)、p.segitis、敗血假單胞菌(p.septica)、猿猴假單胞菌(p.simiae)、豬假單胞菌(p.suis)、耐熱假單胞菌(p.thermotolerans)、銅綠假單胞菌、山黃麻假單胞菌(p.tremae)、平凡假單胞菌(p.trivialis)、陀螺形假單胞菌(p.turbinellae)、杜蒂戈林假單胞菌(p.tuticorinensis)、陰城假單胞菌(p.umsongensis)、溫哥華假單胞菌(p.vancouverensis)、弗村假單胞菌(p.vranovensis)、黃色海假單胞菌(p.xanthomarina)、富養(yǎng)羅爾斯通氏菌、深紅紅螺菌(rhodospirillumrubrum)、類球紅細(xì)菌(rhodobactersphaeroides)、釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)、解脂耶氏酵母(yarrowialipolytica)和運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌(zymomonasmobile)。甚至更特別地,細(xì)胞可以選自惡臭假單胞菌、大腸桿菌和泰國(guó)伯克霍爾德氏菌。根據(jù)本發(fā)明的任何方面,以其野生型的細(xì)胞可能無(wú)法形成可檢測(cè)量的鼠李糖脂,和/或不具有酶e1、e2、e3和/或氧化還原酶的活性,或者不具有酶e1、e2、e3和/或氧化還原酶的可檢測(cè)活性。根據(jù)本發(fā)明的任何方面有利的是細(xì)胞能夠以其野生型形成具有c6至c16的單鏈烷酸鏈長(zhǎng)的聚羥基鏈烷酸。這樣的細(xì)胞是例如伯克霍爾德氏菌屬菌種,泰國(guó)伯克霍爾德氏菌,假單胞菌屬菌種,惡臭假單胞菌、銅綠假單胞菌、食油假單胞菌、施氏假單胞菌、熒光假單胞菌、香茅醇假單胞菌、食樹(shù)脂假單胞菌,睪丸酮叢毛單胞菌(comamonastestosteroni),嗜水氣單胞菌(aeromonashydrophila),鉤蟲(chóng)貪銅菌(cupriavidusnecator),廣泛產(chǎn)堿桿菌和富養(yǎng)羅爾斯通氏菌。在這方面,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以進(jìn)行遺傳修飾,使得與其野生型相比,它們能夠形成更少的聚羥基鏈烷酸。這樣的細(xì)胞例如至少在deeugenio等人,2010和rehm等人,2001中描述。與其野生型相比,能夠形成更少的聚羥基鏈烷酸的這種重組細(xì)胞的特征特別在于,與其野生型相比,它具有至少一種酶e9或e10的減少的活性。e9代表聚羥基鏈烷酸合酶,ec:2.3.1.,特別具有多肽序列seqidno:20(e9a)或seqidno:21(e9b)或者具有多肽序列,在所述多肽序列中,與分別的參考序列seqidno:20或seqidno:21相比,高達(dá)25%、20%、15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有分別的參考序列seqidno:20或seqidno:21的酶的至少10%、50%,特別是80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e9(e9a和e9b)的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基烷?;o酶a轉(zhuǎn)化為聚-3-羥基鏈烷酸,特別是將3-羥基十四烷酰基輔酶a轉(zhuǎn)化為聚-3-羥基十四烷酸的能力。e10代表3-羥基烷酰基-acp:輔酶a轉(zhuǎn)移酶,特別具有多肽序列seqidno:22(e10a)或seqidno:23(e10b)或者具有多肽序列,在所述多肽序列中,與分別的參考序列seqidno:22或seqidno:23相比,高達(dá)25%、20%、特別是15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有分別的參考序列seqidno:22(e10a)或seqidno:23(e10b)的酶的至少10%、50%,特別是80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e10(e10a和e10b)的酶促活性可以被理解為意指將3-羥基烷?;?acp轉(zhuǎn)化為3-羥基烷?;o酶a,特別是將3-羥基烷?;?acp轉(zhuǎn)化為3-羥基十四烷?;o酶a的能力。酶e9(e9a和e9b)的活性可以例如通過(guò)使用如上文對(duì)于酶e1至e3所述獲得的樣品進(jìn)行測(cè)定,通過(guò)首先混合560μl100mmtris/hclph7.5、20μl在dmso中的35mmdtnb和20μl41mm3-羥基癸酰輔酶a。隨后,加入在100μltris/hclph7.5中的5μg純化的酶e9,并且隨后在分光光度計(jì)中連續(xù)記錄1分鐘隨著時(shí)間過(guò)去在412nm處的消光增加(通過(guò)添加5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(dtnb)以釋放sh基而引起)(δe/分鐘)。酶e10(e10a和e10b)的活性可以例如通過(guò)使用如上文對(duì)于酶e1至e3所述獲得的樣品進(jìn)行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定可以含有在200μl總體積中的3mmmgcl2、40μm羥基癸酰輔酶a和50mmtris-hclph7.5中的20μm大腸桿菌acp。通過(guò)加入在50μltris/hcl,ph7.5中的5μg純化的酶e10開(kāi)始反應(yīng),并且在30℃下溫育1小時(shí)。通過(guò)加入50%(w/v)三氯乙酸和10mg/mlbsa(30μl)停止反應(yīng)。通過(guò)記錄隨著時(shí)間過(guò)去在412nm處的消光增加用分光光度法測(cè)定釋放的輔酶a,所述消光增加通過(guò)添加5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(dtnb)以釋放sh基而引起。關(guān)于本發(fā)明的任何方面使用的短語(yǔ)“減少的酶ex的活性”可以被理解為意指活性減少到其至少0.5倍,特別是減少到其至少0.1倍,更特別是減少到其至少0.01倍,甚至更特別是減少到其至少0.001倍,且最特別是減少到其至少0.0001倍。短語(yǔ)“減少的活性”還包括無(wú)法檢測(cè)的活性(“零活性”)。某些酶的活性中的減少可以通過(guò)例如選擇性突變或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的用于減少某種酶的活性的其他措施來(lái)完成。特別地,例如至少在dubeau等人2009.,singh&r?hm.2008.,lee等人,2009等等中,本領(lǐng)域技術(shù)人員找到關(guān)于借助于破壞特定基因的蛋白質(zhì)表達(dá)的修飾和減少以及酶活性的伴隨降低(尤其是對(duì)于假單胞菌屬和伯克霍爾德氏菌屬)的指導(dǎo)。根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞的特征在于通過(guò)修飾包含核酸序列之一的基因來(lái)實(shí)現(xiàn)酶促活性中的減少,其中所述修飾選自外源dna插入基因中、基因的至少部分的缺失、基因序列中的點(diǎn)突變、rna干擾(sirna)、反義rna或側(cè)接基因的調(diào)節(jié)序列諸如例如啟動(dòng)子和終止子或核糖體結(jié)合位點(diǎn)的修飾(插入、缺失或點(diǎn)突變)。外源dna在這方面應(yīng)被理解為意指對(duì)基因(而不是生物)“外源”的任何dna序列,即內(nèi)源dna序列也可以在這方面充當(dāng)“外源dna”。在這方面,特別優(yōu)選通過(guò)插入選擇標(biāo)記物基因來(lái)破壞基因,因此外源dna是選擇標(biāo)記物基因,其中優(yōu)選通過(guò)在基因座中的同源重組來(lái)完成插入。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面可以使用的細(xì)胞可以是惡臭假單胞菌細(xì)胞,與其野生型相比,其具有減少的聚羥基鏈烷酸合成。這樣的細(xì)胞例如至少在ren等人,1998,huisman等人,1991,deeugenio等人,2010和ouyang等人2007中描述為ktoy01和ktoy02。根據(jù)本發(fā)明的方法形成的鼠李糖脂可以至少為具有通式(i)或其鹽,式(i)其中,m=2、1或0,特別是1或0,n=1或0,特別是1,r1和r2=彼此獨(dú)立地具有2至24個(gè)、優(yōu)選5至13個(gè)碳原子的相同或不同的有機(jī)基團(tuán),特別是任選支化的、任選取代的、特別是羥基取代的、任選不飽和的、特別是任選單不飽和、雙不飽和或三不飽和的烷基,所述烷基可以選自戊烯基、庚烯基、壬烯基、十一碳烯基和十三碳烯基和(ch2)o-ch3,其中o=1至23,優(yōu)選4至12。在一個(gè)實(shí)例中,根據(jù)本發(fā)明的任何方面形成的鼠李糖脂可以至少為具有通式(i)或其鹽,其中n為1。特別地,鼠李糖脂可以是二鼠李糖基脂質(zhì),也稱為鼠李糖脂二糖脂(dirhamnolipid)。更特別地,二鼠李糖基脂質(zhì)可以包含下式(i):式(i)其中,m=2、1或0,特別是1或0,n=1,r1和r2=彼此獨(dú)立地具有2至24個(gè)、優(yōu)選5至13個(gè)碳原子的相同或不同的有機(jī)基團(tuán),特別是任選支化的、任選取代的、特別是羥基取代的、任選不飽和的、特別是任選單不飽和、雙不飽和或三不飽和的烷基,其可以選自戊烯基、庚烯基、壬烯基、十一碳烯基和十三碳烯基和(ch2)o-ch3,其中o=1至23,優(yōu)選4至12。對(duì)于其中根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞能夠形成具有m=1的鼠李糖脂的情況,該基團(tuán)可以借助于r1和r2進(jìn)行限定,來(lái)源于3-羥基辛?;?3-羥基辛酸、3-羥基辛?;?3-羥基癸酸、3-羥基癸酰基-3-羥基辛酸、3-羥基辛?;?3-羥基癸烯酸、3-羥基癸烯?;?3-羥基辛酸、3-羥基辛?;?3-羥基十二烷酸、3-羥基十二烷?;?3-羥基辛酸、3-羥基辛?;?3-羥基十二碳烯酸、3-羥基十二碳烯?;?3-羥基辛酸、3-羥基癸酰基-3-羥基癸酸、3-羥基癸?;?3-羥基癸烯酸、3-羥基癸烯?;?3-羥基癸酸、3-羥基癸烯?;?3-羥基癸烯酸、3-羥基癸酰基-3-羥基十二烷酸、3-羥基十二烷?;?3-羥基癸酸、3-羥基癸?;?3-羥基十二碳烯酸、3-羥基癸?;?3-羥基十四碳烯酸、3-羥基十四烷?;?3-羥基癸烯酸、3-羥基十二碳烯?;?3-羥基癸酸、3-羥基癸?;?3-羥基十四烷酸、3-羥基十四烷?;?3-羥基癸酸、3-羥基癸?;?3-羥基十四碳烯酸、3-羥基十四碳烯?;?3-羥基癸酸、3-羥基十二烷酰基-3-羥基十二烷酸、3-羥基十二碳烯?;?3-羥基十二烷酸、3-羥基十二烷?;?3-羥基十二碳烯酸、3-羥基十二烷?;?3-羥基十四烷酸、3-羥基十四烷?;?3-羥基十二烷酸、3-羥基十四烷?;?3-羥基十四烷酸、3-羥基十六烷?;?3-羥基十四烷酸、3-羥基十四烷酰基-3-羥基十六烷酸或3-羥基十六烷?;?3-羥基十六烷酸。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是,根據(jù)本發(fā)明的任何方面,可以形成通式(i)的不同鼠李糖脂的混合物。在一個(gè)實(shí)例中,可以形成單脂和二鼠李糖脂。特別地,鼠李糖脂可以是下述鼠李糖脂中的至少一種的混合物:2rl-c8-c10、1rl-c8-c10、2rl-c10-c10、1rl-c10-c10、2rl-c10-c12:1、1rl-c10-c12:1和1rl-c10-c12。特別地,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的鼠李糖脂可以是選自2rl-c8-c10、2rl-c10-c12:1、2rl-c10-c10、其組合等等的二鼠李糖脂/二鼠李糖基脂質(zhì)。在這方面,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以能夠形成通式(i)的鼠李糖脂的混合物,其特征在于在按重量計(jì)多于80%、按重量計(jì)多于90%、特別是按重量計(jì)多于95%的所形成的鼠李糖脂中,n是=1,并且在按重量計(jì)小于10%、按重量計(jì)小于5%、特別是按重量計(jì)小于2%的所形成的鼠李糖脂中,借助于r1和r2限定的基團(tuán)來(lái)源于3-羥基癸?;?3-羥基辛酸或3-羥基辛酰基-3-羥基癸酸,其中所示的按重量計(jì)%指所形成的通式(i)的所有鼠李糖脂的總和。因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞可以有利地用于生產(chǎn)鼠李糖脂,并且因?yàn)檫@些脂質(zhì)隨后任選地純化,所以如果與其野生型相比,根據(jù)本發(fā)明的任何方面的細(xì)胞具有至少一種酶e8的增加的活性,則這是有利的,所述酶e8催化通式(i)的鼠李糖脂從細(xì)胞輸出到周圍培養(yǎng)基內(nèi)。在這方面,蛋白質(zhì)e8選自下述:酶e8,其具有多肽序列seqidno:16(e8a)、seqidno:17(e8b)、seqidno:18(e8c)或seqidno:19(e8d)或者具有多肽序列,在所述多肽序列中,與各個(gè)參考序列seqidno:16(e8a)、seqidno:17(e8b)、seqidno:18(e8c)或seqidno:19(e8d)相比,高達(dá)25%,高達(dá)20%,特別是高達(dá)15%,特別是高達(dá)10、9、8、7、6、5、4、3、2、1%的氨基酸基團(tuán)通過(guò)缺失、插入、取代或其組合進(jìn)行修飾,并且仍具有具有各個(gè)參考序列seqidno:16(e8a)、seqidno:17(e8b)、seqidno:18(e8c)或seqidno:19(e8d)的酶的至少50%、65%,特別是80%,特別是多于90%的酶促活性,其中關(guān)于酶e8(e8a、e8b、e8c和e8d)的酶促活性被理解為意指將通式(i)的鼠李糖脂從細(xì)胞輸出到周圍培養(yǎng)基內(nèi)的能力。附圖簡(jiǎn)述無(wú)附圖。實(shí)施例前文描述了優(yōu)選實(shí)施方案,如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的,所述優(yōu)選實(shí)施方案可以經(jīng)受設(shè)計(jì)、構(gòu)建或操作中的變化或修改,而不背離權(quán)利要求的范圍。例如,這些變化預(yù)期被權(quán)利要求的范圍覆蓋。實(shí)施例1惡臭假單胞菌從乙酸鹽形成鼠李糖脂為了將乙酸鹽生物轉(zhuǎn)化為鼠李糖脂,使用攜帶質(zhì)粒的惡臭假單胞菌kt2440菌株。質(zhì)粒pbbr1mcs-2::abc在de102010032484a1的實(shí)施例2中描述,并且用該載體轉(zhuǎn)化惡臭假單胞菌kt2440在iwasaki等人biosci.biotech.biochem.1994.58(5):851-854中描述。重組惡臭假單胞菌kt2440pbbr1mcs-2::abc在具有50mg/l卡那霉素的lb瓊脂平板上進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)于預(yù)培養(yǎng),將100ml搖瓶中的10ml具有50mg/l卡那霉素的lb培養(yǎng)基用來(lái)自新鮮溫育的瓊脂平板的單個(gè)菌落進(jìn)行接種,并在30℃和120rpm下培養(yǎng)15小時(shí)至od600nm>3.5。然后將細(xì)胞懸浮液離心,用新鮮的m9_bs_ac培養(yǎng)基洗滌并再次離心。對(duì)于主培養(yǎng)物,用來(lái)自預(yù)培養(yǎng)物的經(jīng)離心且洗滌的細(xì)胞接種在500ml搖瓶中的100ml新鮮的m9_bs_ac培養(yǎng)基(ph7.4;6.81g/lna2hpo4、2.4g/lkh2po4、0.4g/lnacl、1.4g/lnh4cl、2ml/l1mmgso4x7h2o、1.63g/l13c2-乙酸鈉、0.13ml/l25%hcl、1.91mg/lmncl2x7h2o、1.87mg/lznso4x7h2o、0.84mg/lna-edtax2h2o、0.3mg/lh3bo3、0.25mg/lna2moo4x2h2o、4.7mg/lcacl2x2h2o、17.8mg/lfeso4x7h2o、0.15mg/lcucl2x2h2o)中至od600nm為0.12。將該培養(yǎng)物在32℃和140rpm下溫育142小時(shí)。在培養(yǎng)6小時(shí)后,向培養(yǎng)物中加入2g/l鼠李糖用于誘導(dǎo)。在培養(yǎng)7.5小時(shí)、22.5小時(shí)、30.5小時(shí)、47.25和53小時(shí)后,分別加入1g/l13c2-乙酸鈉。在開(kāi)始和培養(yǎng)期過(guò)程中,獲取樣品。測(cè)試其光密度、ph和不同分析物(通過(guò)nmr測(cè)試)。結(jié)果顯示在主培養(yǎng)物中,乙酸鹽的量從開(kāi)始的1.63g/l持續(xù)減少到71.75小時(shí)后的1.3g/l(包括5g/l13c2-乙酸鈉的乙酸鹽進(jìn)料)。另外,在培養(yǎng)71.75小時(shí)后,鼠李糖脂(2rl-c10-c10)(二鼠李糖基脂質(zhì))的濃度從0.0mg/l增加至332mg/l。所形成的鼠李糖脂是13c標(biāo)記的(在脂肪酸部分中>90%)。13c標(biāo)記的2rl-c10-c10(二鼠李糖基脂質(zhì))的碳得率(carbonyield)關(guān)于消耗的乙酸鹽為約12.96%,并且對(duì)于未標(biāo)記的2rl-c10-c10,所述碳得率為1.44%。實(shí)施例2惡臭假單胞菌從乙酸鹽和癸酸形成鼠李糖脂為了將乙酸鹽和癸酸生物轉(zhuǎn)化為鼠李糖脂,使用攜帶質(zhì)粒的惡臭假單胞菌kt2440菌株。質(zhì)粒pbbr1mcs-2::abc在de102010032484a1的實(shí)施例2中描述,并且用該載體轉(zhuǎn)化惡臭假單胞菌kt2440在iwasaki等人biosci.biotech.biochem.1994.58(5):851-854中描述。重組惡臭假單胞菌kt2440pbbr1mcs-2::abc在具有50mg/l卡那霉素的lb瓊脂平板上進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)于預(yù)培養(yǎng),將100ml搖瓶中的10ml具有50mg/l卡那霉素的lb培養(yǎng)基用來(lái)自新鮮溫育的瓊脂平板的單個(gè)菌落進(jìn)行接種,并在30℃和120rpm下培養(yǎng)15小時(shí)至od600nm>3.5。然后將細(xì)胞懸浮液離心,用新鮮的m9_bs_ac培養(yǎng)基洗滌并再次離心。對(duì)于主培養(yǎng)物,用來(lái)自預(yù)培養(yǎng)物的經(jīng)離心且洗滌的細(xì)胞接種在500ml搖瓶中的100ml新鮮的m9_bs_ac培養(yǎng)基(ph7.4;6.81g/lna2hpo4、2.4g/lkh2po4、0.4g/lnacl、1.4g/lnh4cl、2ml/l1mmgso4x7h2o、1.63g/l13c2-乙酸鈉、0.13ml/l25%hcl、1.91mg/lmncl2x7h2o、1.87mg/lznso4x7h2o、0.84mg/lna-edtax2h2o、0.3mg/lh3bo3、0.25mg/lna2moo4x2h2o、4.7mg/lcacl2x2h2o、17.8mg/lfeso4x7h2o、0.15mg/lcucl2x2h2o)中至od600nm為0.12。將該培養(yǎng)物在32℃和140rpm下溫育142小時(shí)。在培養(yǎng)6小時(shí)后,向培養(yǎng)物中加入2g/l鼠李糖用于誘導(dǎo)。在培養(yǎng)22.5小時(shí)后,向培養(yǎng)物中加入1g/l癸酸。在培養(yǎng)7.5小時(shí)、22.5小時(shí)、30.5小時(shí)、47.25小時(shí)和53小時(shí)后,分別加入1g/l13c2-乙酸鈉。在開(kāi)始和培養(yǎng)期過(guò)程中,獲取樣品。測(cè)試其光密度、ph和不同分析物(通過(guò)nmr測(cè)試)。結(jié)果顯示在主培養(yǎng)物中,乙酸鹽的量從開(kāi)始的1.63g/l持續(xù)減少到71.75小時(shí)后的0g/l(包括5g/l13c2-乙酸鈉的乙酸鹽進(jìn)料)。癸酸的濃度從在22.5小時(shí)的1g/l減少到71.75小時(shí)后的0g/l。另外,在培養(yǎng)71.75小時(shí)后,鼠李糖脂(2rl-c10-c10)(二鼠李糖基脂質(zhì))的濃度從0.0mg/l增加到779mg/l。新形成的鼠李糖脂是13c標(biāo)記的(在脂肪酸部分中34%)。13c標(biāo)記的2rl-c10-c10(二鼠李糖基脂質(zhì))的碳得率,基于消耗的乙酸鹽和癸酸為約6.05%,并且對(duì)于未標(biāo)記的2rl-c10-c10,所述碳得率為11.75%。這顯示與乙酸鹽相比,更大百分比的所得到的鼠李糖脂由未標(biāo)記的癸酸形成。實(shí)施例3惡臭假單胞菌從乙酸鹽和己酸形成鼠李糖脂為了將乙酸鹽和己酸生物轉(zhuǎn)化為鼠李糖脂,使用攜帶質(zhì)粒的惡臭假單胞菌kt2440菌株。質(zhì)粒pbbr1mcs-2::abc在de102010032484a1的實(shí)施例2中描述,并且用該載體轉(zhuǎn)化惡臭假單胞菌kt2440在iwasaki等人biosci.biotech.biochem.1994.58(5):851-854中描述。重組惡臭假單胞菌kt2440pbbr1mcs-2::abc在具有50mg/l卡那霉素的lb瓊脂平板上進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)于預(yù)培養(yǎng),將100ml搖瓶中的10ml具有50mg/l卡那霉素的lb培養(yǎng)基用來(lái)自新鮮溫育的瓊脂平板的單個(gè)菌落進(jìn)行接種,并在30℃和120rpm下培養(yǎng)15小時(shí)至od600nm>3.5。然后將細(xì)胞懸浮液離心,用新鮮的m9_bs_ac培養(yǎng)基洗滌并再次離心。對(duì)于主培養(yǎng)物,用來(lái)自預(yù)培養(yǎng)物的經(jīng)離心且洗滌的細(xì)胞接種在500ml搖瓶中的100ml新鮮的m9_bs_ac培養(yǎng)基(ph7.4;6.81g/lna2hpo4、2.4g/lkh2po4、0.4g/lnacl、1.4g/lnh4cl、2ml/l1mmgso4x7h2o、1.63g/l13c2-乙酸鈉、0.13ml/l25%hcl、1.91mg/lmncl2x7h2o、1.87mg/lznso4x7h2o、0.84mg/lna-edtax2h2o、0.3mg/lh3bo3、0.25mg/lna2moo4x2h2o、4.7mg/lcacl2x2h2o、17.8mg/lfeso4x7h2o、0.15mg/lcucl2x2h2o)中至od600nm為0.12。將該培養(yǎng)物在32℃和140rpm下溫育142小時(shí)。在培養(yǎng)6小時(shí)后,向培養(yǎng)物中加入2g/l鼠李糖用于誘導(dǎo)。在培養(yǎng)22.5小時(shí)后,向培養(yǎng)物中加入1g/l己酸。在培養(yǎng)7.5小時(shí)、22.5小時(shí)、30.5小時(shí)、47.25小時(shí)和53小時(shí)后,分別加入1g/l13c2-乙酸鈉。在開(kāi)始和培養(yǎng)期過(guò)程中,獲取樣品。測(cè)試其光密度、ph和不同分析物(通過(guò)nmr測(cè)試)。在主培養(yǎng)物中,乙酸鹽的量持續(xù)減少到71.75小時(shí)后的0g/l(包括5g/l13c2-乙酸鈉的乙酸鹽進(jìn)料)。在71.75小時(shí)后,己酸濃度也減少到0g/l。另外,鼠李糖脂(2rl-c10-c10)的濃度在培養(yǎng)期間增加。新形成的鼠李糖脂是13c標(biāo)記的(在脂肪酸部分中<80%)。與消耗的乙酸鹽和己酸相關(guān)的13c標(biāo)記的2rl-c10-c10(二鼠李糖基脂質(zhì))的碳得率較低,并且對(duì)于未標(biāo)記的2rl-c10-c10,所述碳得率高于無(wú)己酸進(jìn)料的培養(yǎng)物中的。這再次證實(shí)下述發(fā)現(xiàn):與乙酸鹽相比,更大百分比的所得到的鼠李糖脂由未標(biāo)記的己酸形成。序列表<110>evonikindustriesag<120>鼠李糖脂合成<130>201400366<140><141><160>23<170>patentinversion3.5<210>1<211>399<212>prt<213>惡臭假單胞菌<220><221>site<222>(1)..(399)<223>alkb型氧化還原酶<400>1glulyshisargvalleuaspseralaproglutyrvalasplyslys151015lystyrleutrpileleuserthrleutrpproalathrprometile202530glyiletrpleualaasngluthrglytrpglyilephetyrglyleu354045valleuleuvaltrptyrglyalaleuproleuleuaspalametphe505560glygluasppheasnasnproproglugluvalvalprolysleuglu65707580lysgluargtyrtyrargvalleuthrtyrleuthrvalpromethis859095tyralaalaleuilevalseralatrptrpvalglythrglnpromet100105110sertrpleugluileglyalaleualaleuserleuglyilevalasn115120125glyleualaleuasnthrglyhisgluleuglyhislyslysgluthr130135140pheaspargtrpmetalalysilevalleualavalvalglytyrgly145150155160hisphepheilegluhisasnlysglyhishisargaspvalalathr165170175prometaspproalathrserargmetglygluseriletyrlysphe180185190serilearggluileproglyalapheileargalatrpglyleuglu195200205gluglnargleuserargargglyglnservaltrpserpheaspasn210215220gluileleuglnprometileilethrvalileleutyralavalleu225230235240leualaleupheglyprolysmetleuvalpheleuproileglnmet245250255alapheglytrptrpglnleuthrseralaasntyrilegluhistyr260265270glyleuleuargglnlysmetgluaspglyargtyrgluhisglnlys275280285prohishissertrpasnserasnhisilevalserasnleuvalleu290295300phehisleuglnarghisserasphishisalahisprothrargser305310315320tyrglnserleuargasppheproglyleuproalaleuprothrgly325330335tyrproglyalapheleumetalametileproglntrppheargser340345350valmetaspprolysvalvalasptrpalaglyglyaspleuasnlys355360365ileglnileaspaspsermetarggluthrtyrleulyslysphegly370375380thrserseralaglyhisserserserthrseralavalalaser385390395<210>2<211>295<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(295)<223>酶e1a<400>2metargarggluserleuleuvalservalcyslysglyleuargval151015hisvalgluargvalglyglnaspproglyargserthrvalmetleu202530valasnglyalametalathrthralaserphealaargthrcyslys354045cysleualagluhispheasnvalvalleupheaspleupropheala505560glyglnserargglnhisasnproglnargglyleuilethrlysasp65707580aspgluvalgluileleuleualaleuilegluargphegluvalasn859095hisleuvalseralasertrpglyglyileserthrleuleualaleu100105110serargasnproargglyileargserservalvalmetalapheala115120125proglyleuasnglnalametleuasptyrvalglyargalaglnala130135140leuilegluleuaspasplysseralaileglyhisleuleuasnglu145150155160thrvalglylystyrleuproproargleulysalaserasnhisgln165170175hismetalaserleualathrglyglutyrgluglnalaargphehis180185190ileaspglnvalleualaleuasnaspargglytyrleualacysleu195200205gluargileglnserhisvalhispheileasnglysertrpaspglu210215220tyrthrthralagluaspalaargglnpheargasptyrleuprohis225230235240cysserpheserargvalgluglythrglyhispheleuaspleuglu245250255serlysleualaalavalargvalhisargalaleuleugluhisleu260265270leulysglnprogluproglnargalagluargalaalaglyphehis275280285glumetalaileglytyrala290295<210>3<211>346<212>prt<213>伯克霍爾德氏菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(346)<223>酶e1b<400>3metargglyserglyglutrpvalalaalaalaalaargvalarggln151015glyglyglnilealaarggluglyglytyrvalglualaserilelys202530glyalaglyseralahisleuproserargcysglyargtyralamet354045proileglulysglnvalvalalaleuproserglyleulysvalhis505560valgluarghisvalpheaspproalaphegluthrvalileleuval65707580asnglyalaleualathrthralaserpheglyglnthrileargtyr859095leuglygluargvalasnalavalcyspheaspleuprotyralagly100105110glnserargglnhisasnproglyglutyrileleuthrlysaspasp115120125gluvalgluileleuleuhisleualagluargphegluproserphe130135140leuleuservalsertrpglyglyvalalaserleuphealaleuala145150155160argglycysalaservalargargalavalilealaserpheserpro165170175pheleuasnaspalametthrasptyrvalthrargalaargasphis180185190ilealaalaglygluasnleulysalaalaglnleuleuasnaspthr195200205valglyargtyrleuproargilemetlysleutyrasntyrargtyr210215220leuthrlysleuproargthrgluglnaspglnvalalaphehisval225230235240aspglnileleusermetargprogluglntyrleuprogluphearg245250255glnileglycysalavallyspheileasnglygluleuaspglutyr260265270thrthralaseraspvalargargleualaalatyrvalargargala275280285gluphealathrileargglnalaglyhispheleuaspleuglugly290295300argglnglnglngluglnleuargalaalaileleuglyphephegly305310315320aspgluargalaseralaalaargaspaspalaglnaspgluthrleu325330335alaproleuglyglnleuproalaleuser340345<210>4<211>295<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(295)<223>酶e1c<400>4metargarggluserleuleuvalservalcyslysglyleuargval151015hisvalgluargvalglyglnaspproglyargserthrvalmetleu202530valasnglyalametalathrthralaserphealaargthrcyslys354045cysleualagluhispheasnvalvalleupheaspleupropheala505560glyglnserargglnhisasnproglnargglyleuilethrlysasp65707580aspgluvalgluileleuleualaleuilegluargphegluvalasn859095hisleuvalseralasertrpglyglyileserthrleuleualaleu100105110serargasnproargglyileargserservalvalmetalapheala115120125proglyleuasnglnalametleuasptyrvalglyargalaglnala130135140leuilegluleuaspasplysseralaileglyhisleuleuasnglu145150155160thrvalglylystyrleuproproargleulysalaserasnhisgln165170175hismetalaserleualathrglyglutyrgluglnalaargphehis180185190ileaspglnvalleualaleuasnaspargglytyrleualacysleu195200205gluargileglnserhisvalhispheileasnglysertrpaspglu210215220tyrthrthralagluaspalaargglnpheargasptyrleuprohis225230235240cysserpheserargvalgluglythrglyhispheleuaspleuglu245250255serlysleualaalavalargvalhisargalaleuleugluhisleu260265270leulysglnprogluproglnargalagluargalaalaglyphehis275280285glumetalaileglytyrala290295<210>5<211>295<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(295)<223>酶e1d<400>5metargarggluserleuleuvalservalcyslysglyleuargval151015hisvalgluargvalglyglnaspproglyargserthrvalmetleu202530valasnglyalametalathrthralaserphealaargthrcyslys354045cysleualagluhispheasnvalvalleupheaspleupropheala505560glyglnserargglnhisasnproglnargglyleuilethrlysasp65707580aspgluvalgluileleuleualaleuilegluargphegluvalasn859095hisleuvalseralasertrpglyglyileserthrleuleualaleu100105110serargasnproargglyileargserservalvalmetalapheala115120125proglyleuasnglnalametleuasptyrvalglyargalaglnala130135140leuilegluleuaspasplysseralaileglyhisleuleuasnglu145150155160thrvalglylystyrleuproglnargleulysalaserasnhisgln165170175hismetalaserleualathrglyglutyrgluglnalaargphehis180185190ileaspglnvalleualaleuasnaspargglytyrleualacysleu195200205gluargileglnserhisvalhispheileasnglysertrpaspglu210215220tyrthrthralagluaspalaargglnpheargasptyrleuprohis225230235240cysserpheserargvalgluglythrglyhispheleuaspleuglu245250255serlysleualaalavalargvalhisargalaleuleugluhisleu260265270leulysglnprogluproglnargalagluargalaalaglyphehis275280285glumetalaileglytyrala290295<210>6<211>295<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(295)<223>酶e1e<400>6metargarggluserleuleuvalthrvalcyslysglyleuargval151015hisvalgluargvalglyglnaspproglyargaspthrvalmetleu202530valasnglyalametalathrthralaserphealaargthrcyslys354045cysleualagluhispheasnvalvalleupheaspleupropheala505560glyglnserargglnhisasnproglnargglyleuilethrlysasp65707580aspgluvalgluileleuleualaleuilegluargphealavalasn859095hisleuvalseralasertrpglyglyileserthrleuleualaleu100105110serargasnproargglyvalargserservalvalmetalapheala115120125proglyleuasnglnalametleuasptyrvalglyargalaglnglu130135140leuilegluleuaspasplysseralaileglyhisleuleuasnglu145150155160thrvalglylystyrleuproproargleulysalaserasnhisgln165170175hismetalaserleualathrglyglutyrgluglnalaargphehis180185190ileaspglnvalleualaleuasnaspargglytyrleusercysleu195200205glyglnileglnserhisvalhispheileasnglysertrpaspglu210215220tyrthrthralagluaspalaargglnpheargasptyrleuprohis225230235240cysserpheserargvalgluglythrglyhispheleuaspleuglu245250255serlysleualaalaalaargvalhisargalaleuleugluhisleu260265270leualaglnprogluprotrpargsergluglnalaalaglyphehis275280285glumetalaileglytyrala290295<210>7<211>426<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(426)<223>酶e2a<400>7methisalaileleuilealaileglyseralaglyaspvalphepro151015pheileglyleualaargthrleulysleuargglyhisargvalser202530leucysthrileprovalpheargaspalavalgluglnhisglyile354045alaphevalproleuseraspgluleuthrtyrargargthrmetgly505560aspproargleutrpaspprolysthrserpheglyvalleutrpgln65707580thrilealaglymetilegluprovaltyrglutyrvalseralagln859095arghisaspaspilevalvalvalglyserleutrpalaleuglyala100105110argilealahisglulystyrglyileprotyrleuseralaglnval115120125serproserthrleuleuseralahisleuproprovalhisprolys130135140pheasnvalprogluglnmetproleualametarglysleuleutrp145150155160argcysilegluargphelysleuaspargthrcysalaproaspile165170175asnalavalargarglysvalglyleugluthrprovallysargile180185190phethrglntrpmethisserproglnglyvalvalcysleuphepro195200205alatrpphealaproproglnglnasptrpproglnproleuhismet210215220thrglypheproleupheaspglyserileproglythrproleuasp225230235240aspgluleuglnargpheleuaspglnglyserargproleuvalphe245250255thrglnglyserthrgluhisleuglnglyaspphetyralametala260265270leuargalaleugluargleuglyalaargglyilepheleuthrgly275280285alaglyglngluproleuargglyleuproasnhisvalleuglnarg290295300alatyralaproleuglyalaleuleuprosercysalaglyleuval305310315320hisproglyglyileglyalametserleualaleualaalaglyval325330335proglnvalleuleuprocysalahisaspglnpheaspasnalaglu340345350argleuvalargleuglycysglymetargleuglyvalproleuarg355360365gluglngluleuargglyalaleutrpargleuleugluaspproala370375380metalaalaalacysargargphemetgluleuserglnprohisser385390395400ilealacysglylysalaalaglnvalvalgluargcyshisargglu405410415glyaspalaargtrpleulysalaalaser420425<210>8<211>493<212>prt<213>伯克霍爾德氏菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(493)<223>酶e2b<400>8metaspalaglyargileglyleuhisaspalaalaalaalaglyarg151015ileglymetthrglualaphealaserargalaargcysseralaala202530alaleualaalaglyglyargalaproalaglyaspglyargsergly354045serasnargalaalaalaasnglyservalaspcysargalaglytrp505560asnaspglualametalalysvalilevalthralaileglyserala65707580glyaspvalhisproleuleuglyvalserargalaleuseralaarg859095glyhisgluvalvalphecysthrhisalapropheglualaalaval100105110argalaserglyphealaphevalprovalglythralagluasptyr115120125valargalametalaaspproalaleutrpaspproargthrserphe130135140lysthrleutrpargvalilealaprovalvalargprohispheglu145150155160valleuargalaleuseraspalaaspthrvalleuvalglythrleu165170175trpalapheseralaargleumetglngluargpheglythrargtyr180185190valservalglnvalserproserthrleuleuseralahisalapro195200205prothrhislysargleuthrileprolysglyleuproleualaval210215220lysalaglyleumetthrleuilegluargglnvalleuaspargval225230235240cysglyprogluleuasnalaalaargglnalaleuglyleualapro245250255alalysargileleuglyargtrpleuhisserthraspglyvalleu260265270cysleupheprosertrpphealaproalaglnproasptrpproala275280285asnhisleuglnserglypheproleupheasnaspalaglyproala290295300glnalaaspalagluleuglualaphevalalaserglyglualapro305310315320valvalphethralaglyserthrleuvalaspglyargthrtyrglu325330335hisalavalthrglnvalleuglnalathrglyvalargglyileleu340345350leualaproaspalaproaspalaproalaalaseraspglyalaala355360365leuleulysargargtyrvalproleualaalaleuleuproargcys370375380argalaleuvalhishisglyglyileglythralaserleualatyr385390395400alaalaglyvalproglnvalvalthrprophealahisaspglnphe405410415aspasnalaglnargvalalaalaserglycysglyvalargleuasp420425430alaprovalargglygluproleualaargalaleualaglnvalleu435440445glyaspalaalametalaalaargcysalaglnvalargalaargmet450455460alaalagluproasnglycysaspalaalaalaargpheilegluarg465470475480phealaproglyvalalaalaargargalaglnproala485490<210>9<211>426<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(426)<223>酶e2c<400>9methisalaileleuilealaileglyseralaglyaspvalphepro151015pheileglyleualaargthrleulysleuargglyhisargvalser202530leucysthrileprovalpheargalaalavalgluglnhisglyile354045gluphevalproleuseraspgluleuthrtyrargargthrmetgly505560aspproargleutrpaspprolysthrserpheglyvalleutrpgln65707580alailealaglymetilegluprovaltyrglutyrvalcysalagln859095arghisaspaspilevalvalvalglyserleutrpalaleuglyala100105110argilealahisglulystyrglyileprotyrleuservalglnval115120125serproserthrleuleuseralahisleuproprovalhisproarg130135140pheasnvalprogluglnvalproleualametarglysleuleutrp145150155160argcysilegluargphelysleuaspargthrcysalaprogluile165170175asnalavalargarglysvalglyleuvalglyproalalysargile180185190phethrglntrpmethisserproglnglyvalleucysleuphepro195200205alatrpphealaproproglnglnasptrpproglnproleuhismet210215220thrglypheproleupheaspglyservalproglythrargleuasp225230235240aspgluleuglnargpheleugluglnglyserargproleuvalphe245250255thrglnglyserthrgluhisleuglnglyaspphetyralametala260265270leuargalaleugluargleuglyalaargglyilepheleuthrgly275280285alaglyglngluproleuargglyleuproserhisvalleuglnarg290295300sertyrvalproleuglyalaleuleuproalacysalaglyleuval305310315320hisproalaglyileglyalametserleualaleualaalaglyval325330335proglnvalleuleuprocysalahisaspglnpheaspasnalaglu340345350argleuvalargleuglycysglyileargleuglyleuproleuarg355360365gluglnalaleuarggluserleutrpargleuleugluaspproala370375380leualaalaalacysargargphemetgluleuserglnprohisser385390395400ilealacysglylysalaalaglnvalvalgluargcyshisargglu405410415glyaspvalargtrpleulysalaalaser420425<210>10<211>426<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(426)<223>酶e2d<400>10methisalaileleuilealaileglyseralaglyaspvalphepro151015pheileglyleualaargthrleulysleuargglyhisargvalser202530leucysthrileprovalpheargaspalavalgluglnhisglyile354045alaphevalproleuseraspgluleuthrtyrargargthrmetgly505560aspproargleutrpaspprolysthrserpheglyvalleutrpgln65707580alailealaglymetilegluprovaltyrglutyrvalseralagln859095arghisaspaspilevalvalvalglyserleutrpalaleuglyala100105110argilealahisglulystyrglyileprotyrleuseralaglnval115120125serproserthrleuleuseralahisleuproprovalhisprolys130135140pheasnvalprogluglnmetproleualametarglysleuleutrp145150155160argcysilegluargphelysleuaspargthrcysalaprogluile165170175asnalavalargarglysvalglyleugluthrprovallysargile180185190phethrglntrpmethisserproglnglyvalvalcysleuphepro195200205alatrpphealaproproglnglnasptrpproglnproleuhismet210215220thrglypheproleupheaspglyserileproglythrproleuasp225230235240aspgluleuglnargpheleuaspglnglyserargproleuvalphe245250255thrglnglyserthrgluhisleuglnglyaspphetyralametala260265270leuargalaleugluargleuglyalaargglyilepheleuthrgly275280285alaglyglngluproleuargglyleuproasnhisvalleuglnarg290295300alatyralaproleuglyalaleuleuprosercysalaglyleuval305310315320hisproglyglyileglyalametserleualaleualaalaglyval325330335proglnvalleuleuprocysalahisaspglnpheaspasnalaglu340345350argleuvalargleuglycysglymetargleuglyvalproleuarg355360365gluglngluleuargglyalaleutrpargleuleugluaspproala370375380metalaalaalacysargargphemetgluleuserglnprohisser385390395400ilealacysglylysalaalaglnvalvalgluargcyshisargglu405410415glyaspalaargtrpleulysalaalaser420425<210>11<211>426<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(426)<223>酶e2e<400>11methisalaileleuilealaileglyseralaglyaspvalphepro151015pheileglyleualaargthrleulysleuargglyhisargvalser202530leucysthrileprovalpheargaspalavalgluglnhisglyile354045alaphevalproleuseraspgluleuthrtyrargargthrmetgly505560aspproargleutrpaspprolysthrserpheglyvalleutrpgln65707580alailealaglymetilegluprovaltyrglutyrvalseralagln859095arghisaspaspilevalvalvalglyserleutrpalaleuglyala100105110argilealahisglulystyrglyileprotyrleuseralaglnval115120125serproserthrleuleuseralahisleuproprovalhisprolys130135140pheasnvalprogluglnmetproleualametarglysleuleutrp145150155160argcysilegluargphelysleuaspargthrcysalaprogluile165170175asnalavalargarglysvalglyleugluthrprovallysargile180185190phethrglntrpmethisserproglnglyvalvalcysleuphepro195200205alatrpphealaproproglnglnasptrpproglnproleuhismet210215220thrglypheproleupheaspglyserileproglythrproleuasp225230235240aspgluleuglnargpheleuaspglnglyserargproleuvalphe245250255thrglnglyserthrgluhisleuglnglyaspphetyralametala260265270leuargalaleugluargleuglyalaargglyilepheleuthrgly275280285alaglyglngluproleuargglyleuproasnhisvalleuglnarg290295300alatyralaproleuglyalaleuleuprosercysalaglyleuval305310315320hisproglyglyileglyalametserleualaleualaalaglyval325330335proglnvalleuleuprocysalahisaspglnpheaspasnalaglu340345350argleuvalargleuglycysglymetargleuglyvalproleuarg355360365gluglngluleuargglyalaleutrpargleuleugluaspproala370375380metalaalaalacysargargphemetgluleuserglnprohisser385390395400ilealacysglylysalaalahisvalvalgluargcyshisargglu405410415glyaspalaargtrpleulysalaalaser420425<210>12<211>323<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(323)<223>酶3a<400>12argileaspmetglyvalleuvalvalleupheasnproglyaspasp151015aspleugluhisleuglygluleualaalaalapheproglnleuarg202530pheleualavalaspasnserprohisseraspproglnargasnala354045argleuargglyglnglyilealavalleuhishisglyasnarggln505560glyilealaglyalapheasnglnglyleuaspalaleupheargarg65707580glyvalglnglyvalleuleuleuaspglnaspserargproglygly859095alapheleualaalaglntrpargasnleuglnalaargasnglygln100105110alacysleuleuglyproargilepheaspargglyaspargargphe115120125leuproalailehisleuaspglyleuthrleuargglnleuserleu130135140aspglyleuthrthrproglnargthrserpheleuilesersergly145150155160cysleuleuthrargglualatyrglnargleuglyhispheaspglu165170175gluleupheileasphisvalaspthrglutyrserleuargalagln180185190alaleuaspvalproleutyrvalaspproargleuvalleugluhis195200205argileglythrarglysthrargargleuglyglyleuserleuser210215220alametasnhisalaproleuargargtyrtyrleualaargasngly225230235240leuleuvalleuargargtyralaargserserproleualaleuleu245250255alaasnleuprothrleuthrglnglyleualavalleuleuleuglu260265270argasplysleuleulysleuargcysleuglytrpglyleutrpasp275280285glyleuargglyargglyglyalaleugluthrasnargproargleu290295300leulysargleualaglyproalavalalaservalalaserglylys305310315320alalysala<210>13<211>321<212>prt<213>伯克霍爾德氏菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(321)<223>酶3b<400>13metthrileleuglyalaleuvalileleutyraspprothraspglu151015glnleuserglyleuglualaleualaargaspseraspalaleuval202530valvalaspasnthrprohisgluhisalaalaalaarggluargval354045argalaleuseralaargthrasnthrvaltrparghishisglyasn505560argglyglyvalalaglyglytyrasnalaglyleuservalleuphe65707580alaglnglyvalglualavalalaleupheaspglnaspserthrval859095proalaglytyrphegluargmetargglualacysalaglnleugly100105110gluglnproglyalahisalaglyalapheilealaglyproargile115120125tyraspalaasngluglnargpheleuprogluleumetthrsergly130135140valthrvalargargvalargvalgluglygluthralaproglnarg145150155160cysalapheleuileserserglyservalileserargalaalatyr165170175alaargleuglyargpheaspglualaleupheileasphisvalasp180185190thrglutyrcysleuargalaleualahisasnvalproleutyrval195200205valproproleuvalleuthrhisargileglyalaargargarghis210215220lysvalglyprophegluleuthralamethishisglytrpleuarg225230235240argtyrtyrglyalaargasnalametglnleuglyleuglntyrgly245250255leuargpheprovalalaleuvalproasnleuleuthriletrpgln260265270valileglnvalvalleucysgluargglulysglyalalysleuarg275280285glyilealaleuglyvalleuaspglyleupheglyargleuglyser290295300pheaspaspalaargalaglyalaalaalaarggluprovalarggln305310315320glu<210>14<211>325<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(325)<223>酶e3c<400>14metaspargileaspmetglyvalleuvalvalleupheasnprogly151015aspaspaspleugluhisleuglygluleualaalaalapheprogln202530leuargpheleualavalaspasnserprohisseraspproglnarg354045asnalaargleuargglyglnglyilealavalleutyrhisglyasn505560argglnglyilealaglyalapheasnglnglyleuaspthrleuphe65707580argargglyleuglnglyvalleuleuleuaspglnaspserargpro859095glyglyalapheleualaalaglntrpargasnleuglnalacysasn100105110glyglnalacysleuleuglyproargilepheaspargglyasparg115120125argpheleuproalailehisleuaspglyleualaleuargglnleu130135140serleuaspglyleuthrthrproglnargthrserpheleuileser145150155160serglycysleuleuthrargglualatyrglnargleuglyhisphe165170175aspglugluleupheileasphisvalaspthrglutyrserleuarg180185190alaglnalaleuaspvalproleutyrvalaspproargleuvalleu195200205gluhisargileglythrarglysthrargargleuglyglyleuser210215220leuseralametasnhisalaproleuargargtyrtyrleualaarg225230235240asnglyleuleuvalleuargargtyralaargserserproleuala245250255leuleualaasnleuprothrleuthrglnglyleualavalleuleu260265270leugluargasplysleuleulysleuargcysleuglytrpglyleu275280285trpaspglyleuargglyargglyglyalaleugluargasnargpro290295300argleuleulysargleualaglyproalavalalaprothrvalpro305310315320glylysalalysala325<210>15<211>325<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(325)<223>酶e3d<400>15metaspargileaspmetglyvalleuvalvalleupheasnprogly151015aspaspaspleugluhisleuglygluleualaalaalapheprogln202530leuargpheleualavalaspasnserprohisseraspproglnarg354045asnalaargleuargglyglnglyilealavalleuhishisglyasn505560argglnglyilealaglyalapheasnglnglyleuaspalaleuphe65707580argargglyvalglnglyvalleuleuleuaspglnaspserargpro859095glyglyalapheleualaalaglntrpargasnleuglnalaargasn100105110glyglnalacysleuleuglyproargilepheaspargglyasparg115120125argpheleuproalailehisleuaspglyleuthrleuargglnleu130135140serleuaspglyleuthrthrproglnargthrserpheleuileser145150155160serglycysleuleuthrargglualatyrglnargleuglyhisphe165170175aspglugluleupheileasphisvalaspthrglutyrserleuarg180185190alaglnalaleuaspvalproleutyrvalaspproargleuvalleu195200205gluhisargileglythrarglysthrargargleuglyglyleuser210215220leuseralametasnhisalaproleuargargtyrtyrleualaarg225230235240asnglyleuleuvalleuargargtyralaargserserproleuala245250255leuleualaasnleuprothrleuthrglnglyleualavalleuleu260265270leugluargasplysleuleulysleuargcysleuglytrpglyleu275280285trpaspglyleuargglyargglyglyalaleugluargasnargpro290295300argleuleulysargleualaglyproalavalalaservalalaser305310315320glylysalalysala325<210>16<211>422<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(422)<223>酶e8a<400>16valserthrthrserleucysproseralathrarggluhisglypro151015glyalalysargvalleuproleuleupheleuthrcysleuleuasp202530alaalaglyvalglyleuilevalproleuleuprothrleuilegly354045servalalaproleualavalargaspalaalathrtrpglyalaala505560leuvalmetthrphealaleuleuglnleuphepheserprovalleu65707580glyserleuseraspargpheglyargargprovalleuvalleuala859095metleuglyphealaleusertyrleuleuleualaleualaaspser100105110leutrpmetleupheleuglyargalaleualaglyleuthrglyala115120125servalalathralametalacysalaalaaspleuglythrhisgly130135140glnargthrarghispheglytrpleutyralaglyleualaleugly145150155160metileleuglyproalaleuglyglyleuleualavalhisglythr165170175thrleuproleuleuleualaalaglyleucysleuleuasnalaleu180185190leualaglyleupheleuglugluthrleuproprothrargargarg195200205argleuaspproargargmetasnalaleuargserileserglyleu210215220alaargglnproglyvalglyargleuleualavalleualaleuval225230235240pheleuglyleuglnalavalmetvalvaltrpprophephevalile245250255glulysphehistrpserseralatrpileglytyrserleualaleu260265270tyrglyvalleualavalleualaglnthrleuglyvalasnleucys275280285lysargargleuaspaspalaargleuleuargleuglyleualaleu290295300glnglycysglyleuleuleuphealaleuvalaspserserphetrp305310315320leuvalcysalaleuleuprophealaleuglyserleualathrpro325330335alametglnglyleuleuseralaargvalprovalaspargglngly340345350gluleuglnglyvalleuserserleumetserleualaalaileval355360365glyproproleumetserglyleuphehistrpglyserglyproleu370375380alaproleuproleualaglyalapropheleualaglyalaleuleu385390395400valleualaglyleuvalleualatrpglnleuargprothrglyglu405410415gluargsertrpthrgly420<210>17<211>518<212>prt<213>伯克霍爾德氏菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(518)<223>酶e8b<400>17metseralaaspglnalaglyvalalaproproalaalaalaproleu151015argglyalalysleualaleuleuthrphealaleuserleualathr202530pheilegluvalleuaspserthrvalalaasnvalalavalproala354045ileserglyserleuglyvalserasnserglnglythrtrpvalile505560sersertyrservalalaalaalailealavalproleuthrglytrp65707580leualaargargvalglygluleuargleuphevalalaservalile859095leuphethrleuthrserleuleucysglyleualaargaspleuglu100105110valleuvalalacysargalaleuglnglyleupheserglypromet115120125valproleuserglnthrileleumetargalapheproproalaarg130135140argthrleualaleualaleutrpglymetthrvalleuleualapro145150155160ilepheglyprovalvalglyglytrpleuileaspasnphesertrp165170175protrpilepheleuileasnleuproileglyleupheserpheala180185190valcysthrleumetleuargproglnalaglnargglyglualaser195200205proileaspalaproglyilevalleuleuvalileglyvalglyser210215220leuglnalametleuaspleuglyhisaspargglytrppheaspser225230235240proleuilethralaleualailealaalaglyvalserleuvalser245250255leuleuiletrpgluleuglyglualahisprovalvalaspleuser260265270leuphearggluargthrphethrphecysvalvalileileserleu275280285glymetmetserpheservalvalglyvalvalpheproleutrpleu290295300glnalavalmetglytyrthralatyrglnalaglyleualathrala305310315320sermetglyvalleualaleuvalpheserileleuvalglyleutyr325330335alaserargvalaspalaargvalleuvalthrpheglypheglyval340345350phealaalavalmettrptrpserthrhisphethrleusermetthr355360365phealaglnvalvalthrproargleuileglnglymetglyleupro370375380cysphepheileproleuthralaalathrleuserargvalproasp385390395400glulysleualaalaalaserserleuserasnpheleuargthrleu405410415seralaalapheglythralaleuservalthrtrptrpaspasnarg420425430alathrtyrhistyralavalvalserglnservalthrargalaser435440445gluasnthrglnargtyrvalaspalaleuhisalametglyleuhis450455460glyalaarggluleuserserleuhisglnvalvalargglnglnala465470475480tyrmetmetalathrasnaspmetphetyrmetalaseralathrcys485490495leuleuleualaglyleumettrpleuthrargprolysargglyala500505510alaalaalaleuglyhis515<210>18<211>553<212>prt<213>伯克霍爾德氏菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(553)<223>酶e8c<400>18metargalaargalaargargargalaserargcysglyargasnglu151015argasnglyproglnargaspthrglylysglngluglyargileile202530argmetthrglnthralathrglnalaalathrargalametileala354045thrglyserargalaalaargargleualaalaalaalaleualatrp505560alaleualaglycysvalproserglyphegluproalaleualapro65707580argthrproglyaspaspalaleualahisthralaglyglyalaala859095hisglyalatrpproserproasptrpvalargglnleuglyasppro100105110glnleuaspalaleuvalaspglualaleuargglnasnprothrleu115120125glnalaalaglnalaargileglyvalalaglnserglnleuglngln130135140phegluserleuthrglyleuthralathralaglyalaserleuser145150155160lysalahisvalproargserglyglythrileasnthrthrpheasn165170175glyleuprovalservalproleuvalglygluservalvalserser180185190serserleuphevalglyleuasntyrglnleuaspleutrpglylys195200205asnalaalaalathrargglyleuleusermetargaspalaalaarg210215220valglualagluglnalaargleualaleuservalalailevalthr225230235240leutyrglygluleuaspargalatyralaleuarggluleuleugln245250255glnlysargargalasergluglnvalgluthrvalleuarggluarg260265270alaalaargglyileaspasnglytyraspalaaspaspalaalaleu275280285lysargglylysleuleugluglnleualaleuthraspgluglnile290295300glnleuglnlysleuglnleuglyvalleuserglyargglyproglu305310315320argglyleuserleualaargprolysleualaproleualaaspala325330335proleuproalaargleuproalaglyleuleuglyargargproasp340345350ilevalalaalaargleuargvalglualaalatyralaalaileasp355360365glythrargalaserphetyrproaspvalasnleualaalaleugly370375380glyleuphealaleuthrproalaserleuphelyshisaspalaleu385390395400glyglyserileglyproalaleuserleuproilepheasparggly405410415argleulysalalysleuglyglyaspvalalaasnalaaspvalala420425430leualaleutyrasnglnthrvalaspalaalaleuglygluvalala435440445argglnleuthrserleuserthrvalaspalaleuleuglualagln450455460glnglnalavalargseralaglnargmetvalalaleualaglnasp465470475480arghisargargglymetglymetarglysaspvalasnvalalalys485490495leuthrleuleuaspgluargalahisvalilegluleuglnalaarg500505510argargthrleuargvalglyleuileglyalaleuglyglyglyphe515520525aspalaargproalaglyglyalaproleualaglnglylysprophe530535540alaalaalaseraspargproproasp545550<210>19<211>466<212>prt<213>伯克霍爾德氏菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(466)<223>酶e8d<400>19metargproglualathraspthrargarghisarghisglnarghis151015leuhisargvalhisgluargpheasnarghisargproargalaser202530lysprovalglyproileargaspglyleuargalaglyproalaval354045alaglyargarghisarghishisalaarggluaspleugluargtyr505560arghisargtyrproalaarggluglyalahisargserglyargpro65707580argargargalaargalaalaargalaglyalaargalaargileala859095seralaalaglyserargglyaspalaargargalaproargaspala100105110proproalaleuargalavalleuargalaalaglyalaglyargala115120125aspargglyalaleuleuvalargargargalaleuglnargglyasp130135140glyargargvalargglyargglnargglyalaaspargargalaasp145150155160proglyaspglyaspargargalaglyglyglyhisalaalaglyglu165170175glyglyalaglyalaglyglualaargargargglyargvalglygly180185190valargalaglyalaglyalaalaargalaglyglyalaalaglygly195200205gluhisalaalaleuaspglyaspvalargglyaspglygluglyala210215220argglyglyproglualacysalaalaglyvalserglyglythrgly225230235240alaalalysvalvalalaglygluargalaglyglyalaglyglygly245250255alaglyalaalaglyglyglyalaargalaglyglnargalaalagly260265270argalagluproglyglyalaalaglyglyargalavalglnalagly275280285valprogluproglualahisaspaspargvalalaglyglyarghis290295300glyargseralavalglyalaaspargseralaglyglyalaglygly305310315320alaalaaspvalglyglyalavalalaalaglyvalglyglyglyglu325330335leuglnglyargalaaspproalahisalaglyglyproalaglyala340345350alaargileglyprovalargargalaglyaspvalproargprogly355360365glyglyglyleuglyglyhisglyglnargvalleuaspalaalaval370375380alagluargglyglygluleuaspglnglyglyalaalaproalagly385390395400glyaspleualaglyalavalglyalaglyglyalaproalaalagly405410415glyalavalaspalaargaspglyglyaspgluglyalatrpargpro420425430proalaargargargargalaalaalaglyalaalahisalaglyala435440445argseralaglyglyargglyargglyargglypheglyseraspser450455460glyglu465<210>20<211>559<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(559)<223>酶e9a<400>20metserasnlysasnasnaspgluleuglnargglnalasergluasn151015thrmetglyleuasnprovalileglyileargarglysaspleuleu202530serseralaargthrvalleuargglnalavalargglnproleuhis354045seralalyshisvalalahispheglyleugluleulysasnvalleu505560leuglylysserserleualaproaspseraspaspargargpheasn65707580aspproalatrpserasnasnproleutyrargargtyrleuglnthr859095tyrleualatrparglysgluleuglnasptrpvalserserserasp100105110leuserproglnaspileserargglyglnphevalileasnleumet115120125thrglualametalaprothrasnthrleuserasnproalaalaval130135140lysargphephegluthrglyglylysserleuleuaspglyleuser145150155160asnleualalysaspmetvalasnasnglyglymetproserglnval165170175asnmetaspalaphegluvalglylysasnleuglythrserglugly180185190alavalvaltyrargasnaspvalleugluleuileglntyrserpro195200205ilethrgluglnvalhisalaargproleuleuvalvalproprogln210215220ileasnlysphetyrvalpheaspleuserproglulysserleuala225230235240argphecysleuargserglnglnglnthrpheileilesertrparg245250255asnprothrlysalaglnargglutrpglyleuserthrtyrileasp260265270alaleulysglualavalaspalavalleuserilethrglyserlys275280285aspleuasnmetleuglyalacysserglyglyilethrcysthrala290295300leuvalglyhistyralaalaleuglygluasnlysvalasnalaleu305310315320thrvalleuvalservalleuaspthrthrmetaspasnglnvalala325330335leuphevalaspgluglnthrleuglualaalalysarghissertyr340345350glnalaglyvalleugluglyserglumetalalysvalphealatrp355360365metargproasnaspleuiletrpasntyrtrpvalasnasntyrleu370375380leuglyasngluproprovalpheaspileleuphetrpasnasnasp385390395400thrthrargleuproalaalaphehisglyaspleuileglumetphe405410415lysserasnproleuthrargproaspalaleulysvalcysglythr420425430alaileaspleulysglnvallyscysaspiletyrserleualagly435440445thrasnasphisilethrprotrpprosercystyrargseralahis450455460leupheglyglylysilegluphevalleuserasnserglyhisile465470475480glnserileleuasnproproglyasnprolysalaargphemetthr485490495glyalaaspargproglyaspprovalalatrpglngluasnalaile500505510lyshisalaaspsertrptrpleuhistrpglnsertrpleuglyglu515520525argalaglyalaleulyslysalaprothrargleuglyasnargthr530535540tyralaalaglyglualaserproglythrtyrvalhisgluarg545550555<210>21<211>560<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(560)<223>酶e9b<400>21metthrasplysproalalysglyserthrthrleuproalathrarg151015metasnvalglnasnalaileleuglyleuargglyargaspleuleu202530serthrleuargasnvalglyarghisglyleuarghisproleuhis354045thralahishisleuleualaleuglyglyglnleuglyargvalmet505560leuglyaspthrprotyrglnproasnproargaspalaargpheser65707580aspprothrtrpserglnasnprophetyrargargglyleuglnala859095tyrleualatrpglnlysglnthrargglntrpileaspgluserhis100105110leuasnaspaspaspargalaargalahispheleupheasnleuile115120125asnaspalaleualaproserasnserleuleuasnproglnalaval130135140lysglyleupheasnthrglyglyglnserleuvalargglyvalala145150155160hisleuleuaspaspleuarghisasnaspglyleuproargglnval165170175aspgluargalaphegluvalglyvalasnleualaalathrprogly180185190alavalvalpheargasngluleuleugluleuileglntyrserpro195200205metserglulysglnhisalaargproleuleuvalvalproprogln210215220ileasnargphetyrilepheaspleuseralathrasnserpheval225230235240glntyrmetleulysserglyleuglnvalphemetvalsertrpser245250255asnproaspproarghisargglutrpglyleusersertyrvalgln260265270alaleugluglualaleuasnalacysargserileserglyasnarg275280285aspproasnleumetglyalacysalaglyglyleuthrmetalaala290295300leuglnglyhisleuglnalalyslysglnleuargargvalargser305310315320alathrtyrleuvalserleuleuaspserlysphegluserproala325330335serleuphealaaspgluglnthrileglualaalalysargargser340345350tyrglnargglyvalleuaspglyglygluvalalaargilepheala355360365trpmetargproasnaspleuiletrpasntyrtrpvalasnasntyr370375380leuleuglylysthrproproalapheaspileleutyrtrpasnala385390395400aspserthrargleuproalaalaleuhisglyaspleuleugluphe405410415phelysleuasnproleuthrtyralaserglyleugluvalcysgly420425430thrproileaspleuglnglnvalasnileaspserphethrvalala435440445glyserasnasphisilethrprotrpaspalavaltyrargserala450455460leuleuleuglyglygluargargphevalleualaasnserglyhis465470475480ileglnserileileasnproproglyasnprolysalatyrtyrleu485490495alaasnprolysleuserseraspproargalatrpphehisaspala500505510lysargsergluglysertrptrpproleutrpleuglutrpilethr515520525alaargserglyleuleulysalaproargthrgluleuglyasnala530535540thrtyrproleuleuglyproalaproglythrtyrvalleuthrarg545550555560<210>22<211>295<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(295)<223>酶10a<400>22metargprogluilealavalleuaspileglnglyglntyrargval151015tyrthrgluphetyrargalaaspalaalagluasnthrileileleu202530ileasnglyserleualathrthralaserphealaglnthrvalarg354045asnleuhisproglnpheasnvalvalleupheaspglnprotyrser505560glylysserlysprohisasnargglngluargleuileserlysglu65707580thrglualahisileleuleugluleuilegluhispheglnalaasp859095hisvalmetserphesertrpglyglyalaserthrleuleualaleu100105110alahisglnproargtyrvallyslysalavalvalserserpheser115120125provalileasngluprometargasptyrleuaspargglycysgln130135140tyrleualaalacysaspargtyrglnvalglyasnleuvalasnasp145150155160thrileglylyshisleuproserleuleulysargpheasntyrarg165170175hisvalserserleuaspserhisglutyralaglnmethisphehis180185190ileasnglnvalleugluhisaspleugluargalaleuglnglyala195200205argasnileasnileprovalleupheileasnglygluargaspglu210215220tyrthrthrvalgluaspalaargglnpheserlyshisvalglyarg225230235240serglnpheservalileargaspalaglyhispheleuaspmetglu245250255asnlysthralacysgluasnthrargservalmetleuglypheleu260265270lysprothrvalarggluproargglnargtyrglnprovalglngln275280285glyglnhisalaleualaile290295<210>23<211>300<212>prt<213>假單胞菌屬菌種<220><221>site<222>(1)..(300)<223>酶10b<400>23metargprogluthralaileilegluilehisglyglntyrargile151015histhrgluphetyrglyasnproalaalaglnglnthrileileleu202530valasnglyserleuserthrthralaserphealaglnthrvallys354045tyrleuglnprohistyrasnvalvalleutyraspglnprotyrala505560glyglnserlysprohisasngluasnhisthrproileserlysglu65707580cysglualaargileleuleugluleuilegluargpheargalaglu859095valvalmetserphesertrpglyglyvalalathrleuleualaleu100105110alaglnargproglyargileargargalavalvalasnserpheser115120125proglnleuasnproalametleuasptyrleuhisargglyleuasp130135140tyrleualaalacysaspargthrglnileglyasnleuvalasnglu145150155160thrileglyargtyrleuproglnleuphelysargtyrasnphearg165170175hisvalserserleuaspgluhisglutyrhisglnmethisphehis180185190ilearggluvalleuargleuasnalaaspsertyrthrgluserphe195200205alaglyilegluileprometleuphemetasnglygluleuaspile210215220tyrthrthrprohisglualaargglnpheglyglnleuilearggly225230235240alagluphehisthrileargasnalaglyhispheileaspvalglu245250255hislysalaalatrpglnglnthrglnaspalaleuleualapheleu260265270argproglnargthrglnproleuasnproiletyrargproglnpro275280285asnglyalaservalproleualaalaleualaser290295300當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12
當(dāng)前第1頁(yè)1 2 
網(wǎng)友詢問(wèn)留言 已有0條留言
  • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1