本發(fā)明涉及一種芳香族化合物，尤其涉及一種查爾酮衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，對(duì)11β-HSD1的催化方向具有雙重調(diào)節(jié)作用，能明顯降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平，能明顯降低血糖和血脂水平，具有防治代謝綜合征和II型糖尿病的作用。

背景技術(shù)：

天然查爾酮屬于黃酮類化合物，廣泛存在于水果蔬菜和天然藥物中，并且具有抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗?jié)兒涂咕饔?，以及抗瘧疾等多種生物學(xué)活性，且毒性非常低。

糖尿病是由于體內(nèi)胰島素分泌不足或者胰島素抵抗引起的以高血糖和糖尿?yàn)樘卣鞯膬?nèi)分泌代謝疾病，常伴有動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病、糖尿病腎病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、下肢潰瘍、眼部病變?nèi)绨變?nèi)障、視網(wǎng)膜病變等多種并發(fā)癥。因此，糖尿病已經(jīng)成為繼心腦血管、癌癥之后的嚴(yán)重危害人類健康的第三大疾病。

糖尿病是由于體內(nèi)胰島素分泌不足或者胰島素抵抗引起的以高血糖和糖尿?yàn)樘卣鞯膬?nèi)分泌代謝疾病，常伴有動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病、糖尿病腎病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、下肢潰瘍、眼部病變?nèi)纾喊變?nèi)障、視網(wǎng)膜病變等多種并發(fā)癥。因此，糖尿病已經(jīng)成為繼心腦血管、癌癥之后的嚴(yán)重危害人類健康的第三大疾病。

胰島素是調(diào)節(jié)葡萄糖和脂質(zhì)代謝的激素。糖尿病分為兩類：I型糖尿病和II型糖尿病。I型糖尿病(即胰島素依賴型糖尿病)由于胰島素分泌減少引起。II型糖尿病(即非胰島素依賴型糖尿病)由于胰島素抵抗引起。通常，II型糖尿病患者中胰島素水平升高(即，高胰島素血癥)，但這種代償性增加不足以克服胰島素抵抗。I型和II型糖尿病持續(xù)或不受控制的高血糖增加大血管和微血管并發(fā)癥，包括動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈心臟疾病、周圍血管疾病、中風(fēng)、腎病、神經(jīng)病和視網(wǎng)膜病變的發(fā)生率。

胰島素抵抗，即使在高血糖臨界可以發(fā)生，是代謝綜合征的一個(gè)組成部分。最近，代謝綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)建立。下列五個(gè)條件必須滿足三個(gè)就可以診斷為代謝綜合癥：(1)血壓高于130/85毫米汞柱；(2)空腹血糖超過110毫克/分升；(3)腹型肥胖腰圍大于40″(男性)或35″(女性)；(4)甘油三酯高于150毫克/分升；(5)高密度脂蛋白膽固醇低于40毫克/分升(男性)或50毫克/分升(女性)。

世界上大約有1.2億的糖尿病患者。據(jù)WHO估計(jì)，到2020年，全球糖尿病患者將接近3億。

II型糖尿病的治療方法有限。飲食和身體鍛煉對(duì)II型糖尿病患者有益，但依從性差。需要其他方式的治療，以進(jìn)一步提高葡萄糖和脂質(zhì)代謝。I型糖尿病的治療采用胰島素。II型糖尿病糖尿病的治療采用一些藥物，如：二甲雙胍和苯乙雙胍，可改善糖尿病患者中胰島素敏感性和葡萄糖代謝，然而，作用機(jī)理還不很清楚，兩種化合物可導(dǎo)致乳酸性酸中毒和胃腸道副作用(例如，惡心或腹瀉)。α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖)可以從腸道飯后延緩碳水化合物的吸收，反過來降低血糖水平。像雙胍類，這些化合物也可以引起胃腸道的副作用。格列酮類是一種較新的治療2型糖尿病的化合物，通過修改過PPARγ亞型的活性，格列酮類副作用包括體重增加和外周水腫。其他藥物有胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物、Exendin-4和二肽基肽酶IV(DPPIV)的抑制劑，其增加胰島素的分泌，參與肝葡萄糖產(chǎn)生和分泌的關(guān)鍵酶的抑制劑(例如：果糖1，6-二磷酸酶抑制劑)。

從目前的II型糖尿病藥物研制趨勢(shì)來看，從內(nèi)分泌失調(diào)和代謝紊亂機(jī)制入手研制II型糖尿病治療藥物的正在逐漸起步。

其中一種方法是使用11β-羥基類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)抑制劑。糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇控制葡萄糖和脂質(zhì)代謝，過度皮質(zhì)醇作用可導(dǎo)致胰島素抗性、II型糖尿病、血脂異常、增加腹部肥胖和高血壓。糖皮質(zhì)激素包括血液中循環(huán)的活性皮質(zhì)醇(人)和非活性形式(即：可的松)。11β-HSD1在肝臟和脂肪組織中高度表達(dá)，其還原酶轉(zhuǎn)換可的松到皮質(zhì)醇導(dǎo)致皮質(zhì)醇局部濃度增高。11β-HSD1還原酶的抑制可防止或減小糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇作用(Curr Med Chem.，17，412～22)。

11β-HSD包括兩種酶：11β-HSD1和11β-HSD2，有兩個(gè)不同的基因表達(dá)。它們的作用也不同。其中，11β-HSD1是氧化還原酶，含有還原酶和氧化酶兩種酶活性形式，其中在肝臟和脂肪以還原酶占主要地位，促進(jìn)非活性糖皮質(zhì)激素可的松向活性糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化。而氧化酶的作用方向相反，占次要地位。而11β-HSD2在腎臟，保護(hù)鹽皮質(zhì)激素的作用，11β-HSD2的抑制或失變異可造成高血壓和低血鉀(Curr Med Chem.，17，412～22)。11β-HSD2促進(jìn)活性糖皮質(zhì)激素向非活性糖皮質(zhì)激素的轉(zhuǎn)化。國外已有多家大型藥物公司開始了11β-HSD1還原酶抑制劑的研究，如：BVT 7702(Diabetologia 2002，45，1528～32)、NCB13793(IDmgs 2010，13，266～75)和BMS-770767(J Labelled Comp.Radiopharm，2016)等。其中，Incyte公司的11β-HSD1選擇性抑制劑NCB13793正在進(jìn)行II期臨床研究。11β-HSD1還原酶的主要作用是促進(jìn)非活性糖皮質(zhì)激素可的松向活性糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化(Curr Med Chem.，17，412～22)。這些11β-HSD1還原酶抑制劑大多不抑制11β-HSD2活性，以免造成高血壓和低血鉀的副反應(yīng)，所以是11β-HSD1還原酶抑制劑選擇性抑制劑。

目前所報(bào)道的11β-HSD1抑制劑，表觀上體現(xiàn)出對(duì)11β-HSD1還原酶的抑制，但均同時(shí)抑制11β-HSD1氧化酶和還原酶兩種活性。11β-HSD1氧化酶有著與11β-HSD2相同的作用，在肝臟和脂肪組織中可以降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇的濃度、增加胰腺胰島素合成，降低肝糖輸出和血糖水平，增強(qiáng)胰島素敏感性，抵抗糖尿病發(fā)生發(fā)展。雖然在已報(bào)道的11β-HSD1抑制劑對(duì)11β-HSD1的混合抑制中，抑制氧化酶所產(chǎn)生的影響小于抑制還原酶所產(chǎn)生的影響，但勢(shì)必會(huì)抵消抑制劑的部分藥效。而且，抑制11β-HSD1還原酶只能預(yù)防和阻止氫化可的松的生成，阻止血糖濃度生高，但是卻無法降低已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇濃度。局部組織中已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇水平仍將維持刺激肝糖輸出和胰島素抵抗。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種查爾酮衍生物，能夠同時(shí)降低11β-HSD1還原酶活性并增加11β-HSD1氧化酶活性。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種查爾酮衍生物，能顯著降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平。

本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種查爾酮衍生物，能顯著降低血糖水平。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種查爾酮衍生物，能顯著降低血脂水平。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種查爾酮衍生物，在制備防治代謝綜合征藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種查爾酮衍生物，在制備防治II型糖尿病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種藥物組合物，含有查爾酮衍生物。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種低劑量藥物組合物，含有查爾酮衍生物。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種藥劑盒，含有查爾酮衍生物。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基，Z選自于C1～C6烷氧基和NR₁R₂，R₁和R₂獨(dú)立地選自于H和C1～C6烷基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式II所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式III所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式IV所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式V所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，具有如下結(jié)構(gòu)：

RS02：2-氯-4’-氨基查爾酮(化學(xué)式：C₁₅H₁₂ClNO)；

RS03：2-氟-4’-氨基查爾酮(化學(xué)式：C₁₅H₁₂FNO)；

RS04：2-氯-4’-甲氧基查爾酮(化學(xué)式：C₁₆H₁₃ClO₂)；

RS05：4-甲氧基-4’-甲氧基查爾酮(化學(xué)式：C₁₇H₁₆O₃)；

RS06：4-羥基-4’-甲氧基查爾酮(化學(xué)式：C₁₆H₁₄O₃)。

本發(fā)明提供的各種查爾酮衍生物，還包括其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明提供的各種查爾酮衍生物，能夠同時(shí)降低11β-HSD1還原酶的活性并增加11β-HSD1氧化酶的活性，能顯著降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平，顯著降低血糖水平和血脂水平。因此非常有效于治療或預(yù)防代謝疾病和II型糖尿病。

本發(fā)明還提供的一種組合物，包含以查爾酮衍生物為活性成分。

此外，組合物還包括各種與所含化合物或組合物相適應(yīng)的藥物輔料，以制成有利于給藥(drug delivery)的劑型，如：但不僅限于水溶液注射劑、粉針劑、丸劑、散劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜?jiǎng)?、凝膠劑、顆粒劑、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑和控釋劑等。這些藥用輔料既可以是各種制劑中常規(guī)使用的，如：但不僅限于等滲劑、緩沖液、矯味劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、崩解劑和潤滑劑等；也可以是為了與所述物質(zhì)相適應(yīng)而選擇使用的，如：乳化劑、增溶劑、抑菌劑、止痛劑和抗氧劑等，這類輔料能有效提高組合物所含化合物的穩(wěn)定性和溶解性或改變化合物的釋放速率和吸收速率等，從而改善各種化合物在生物體內(nèi)的代謝，進(jìn)而增強(qiáng)組合物的給藥效果。此外，還可以為實(shí)現(xiàn)特定的給藥目的或方式，如：緩釋給藥、控釋給藥和脈沖給藥等，而使用的輔料，如：但不僅限于明膠、白蛋白、殼聚糖、聚醚和聚酯類高分子材料，如：但不僅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。所稱的“有利于給藥”的主要表現(xiàn)有：但不僅限于提高治療效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者順應(yīng)性等。

在水溶液注射劑中，輔料一般包括等滲劑和緩沖液，以及必要的乳化劑(如：Tweeen-80、Pluronic和Poloxamer等)、增溶劑和抑菌劑等。此外，還包括含有藥學(xué)上可接受的其它藥用輔料，如：抗氧劑、pH調(diào)節(jié)劑和止痛劑等。

用于制取口服液體制劑的輔料一般包括溶劑，以及必要的矯味劑、抑菌劑、乳化劑和著色劑等。

用于制取片劑的輔料一般包括填充劑(如：淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可壓性淀粉、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣和甘露醇等)、粘合劑(如：乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、明膠溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解劑(如：干淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)和潤滑劑(如：硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸鎂等)等。

用于制取乳劑的輔料一般為水、油(如：脂肪酸)、乳化劑，以及必要的防腐劑和矯味劑等。

用于制取顆粒劑的輔料與片劑類似，但造粒過程不同。根據(jù)需要，將制得的顆粒劑與助流劑混合后裝入膠囊即得膠囊劑。

本發(fā)明所稱的“C1～C6”表示碳原子個(gè)數(shù)為1～6。其中，字母C表示碳原子，其后數(shù)字為正整數(shù)，如：1、2或3，表示基團(tuán)所含的碳原子個(gè)數(shù)，如：1、2、3、4、5和6等。

本發(fā)明所稱的“烷基”作為一基團(tuán)或一基團(tuán)的一部分時(shí)是指直鏈或者帶有支鏈的飽和脂肪烴基團(tuán)，如：但不僅限于甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基和己基等。

本發(fā)明所稱的“烷氧基”為烷基與氧原子連結(jié)后而成的基團(tuán)，如：但不僅限于甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。

本發(fā)明所稱的“生物體”、“動(dòng)物”或“患者”是指人、野生動(dòng)物和家畜(Livestock)。野生動(dòng)物為自然狀態(tài)下未經(jīng)人工馴化的動(dòng)物。家畜是為了提供食物來源而人工飼養(yǎng)的動(dòng)物，如：但不僅限于狗、貓、鼠、大鼠、倉鼠、豬、兔、奶牛、水牛、公牛、綿羊、山羊、鵝和雞等。給予治療的“患者”或“生物體”優(yōu)先選擇哺乳動(dòng)物，尤其是人。

本發(fā)明所稱的“預(yù)防”是指在未被臨床標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)定的疾病前，各種用于防止疾病發(fā)生或發(fā)展的手段或措施，包括醫(yī)學(xué)、物理或化學(xué)的方法，以阻止和降低疾病各種癥狀的發(fā)生或發(fā)展。

本發(fā)明所稱的“預(yù)防糖尿病”是指將本發(fā)明組合物用于還未符合“糖尿病”臨床指標(biāo)的，隨著時(shí)間的延續(xù)將慢慢發(fā)展成為臨床上定義為“糖尿病”的潛在患者，從而改善這些患者對(duì)葡萄糖的耐受，促進(jìn)肌體對(duì)糖代謝的能力，增加肌體對(duì)胰島素的敏感性。這類潛在的患者通?；加小按x綜合癥(Metabolic Syndrome)”(Annnu.Rev.Nutri.，2005，25，391-406；Annnu.Rev.Med.，2005，56，45-62；Nat.Rev.Drug.Disc.，2006，5，295-309；Nat.Rev.Endocri.，2006，2，335-348)，如：肥胖、胰島素抵制、葡萄糖不耐受、高血壓、動(dòng)脈硬化證(antherosclerosis)、血脂異常癥(dyslipidemia)(即血液中的甘油三酯水平偏高，高密度脂蛋白同時(shí)偏低)等。

本發(fā)明所稱的“治療”是指為了阻止和降低疾病的發(fā)生或發(fā)展，使疾病病程的發(fā)展或加重得以抑制、遏制、減輕、改善、減緩、停止、延遲或反轉(zhuǎn)，所描述的保持和/或用藥時(shí)的疾病的、紊亂的或病理學(xué)狀態(tài)的各種指標(biāo)包括減輕或減少癥狀或并發(fā)癥，或治愈或消除疾病、紊亂或狀況。

本發(fā)明所稱的“治療糖尿病”是指將本發(fā)明組合物用于臨床診斷為“糖尿病”的患者，改善這些患者對(duì)葡萄糖的耐受，促進(jìn)肌體對(duì)糖代謝的能力，增加肌體對(duì)胰島素的敏感性。進(jìn)而使得患者的餐后和空腹血糖得以控制在正常的水平。由于對(duì)葡萄糖代謝的能力得以提高，從而減緩了因長期高血糖而產(chǎn)生的各種心血管疾病、慢性腎衰竭、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及微血管病變的發(fā)生和發(fā)展。

本發(fā)明所稱的“食品”是指包括本發(fā)明提供的各種化合物、組合物或提取物制成可食用的單一化合物或組合物。該種單一化合物或組合物的生產(chǎn)和制造應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)食品安全標(biāo)準(zhǔn)，但是這些食品安全標(biāo)準(zhǔn)不得限定本發(fā)明。

本發(fā)明所稱的“保健品”是指將包括本發(fā)明提供的各種化合物、組合物或提取物制成可食用的單一化合物或組合物以施于患者，起到對(duì)疾病進(jìn)行預(yù)防和治療的目的。其屬于本發(fā)明所稱的食品，但其生產(chǎn)、制造和銷售還應(yīng)當(dāng)符合各種相關(guān)的要求、標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。

本發(fā)明所稱的“藥物”是指可以用于預(yù)防或治療某種疾病的單一化合物、多種化合物形成的組合物、中藥材及其提取物，或指以單一化合物為主要活性成分的組合物或制劑(formulation)，還指由多種化合物為活性成分的組合物或制劑?！八幬铩睉?yīng)理解為不僅指根據(jù)一國之法律規(guī)定，通過其設(shè)立的行政機(jī)構(gòu)審批并準(zhǔn)予生產(chǎn)的產(chǎn)品，還指在為了獲得通過審批和準(zhǔn)予生產(chǎn)的過程中，所形成的含單一化合物為活性成分的各類物質(zhì)形態(tài)?！靶纬伞睉?yīng)理解為通過化學(xué)合成、生物轉(zhuǎn)化或購買等途徑獲得。

優(yōu)選在一方面中，代謝疾病和II型糖尿病相對(duì)于健康或正常個(gè)體、器官、組織或細(xì)胞報(bào)道，具有11β-HSD1還原酶活性增加和/或11β-HSD1氧化酶活性降低的癥狀，更優(yōu)選具有11β-HSD1還原酶活性增加和11β-HSD1氧化酶活性降低的癥狀。更優(yōu)選，代謝類疾病是由于11β-HSD1還原酶活性增加和/或11β-HSD1氧化酶活性降低造成。由于本發(fā)明提供的各種查爾酮衍生物，尤其是化合物RS02～RS06能夠同時(shí)降低11β-HSD1還原酶活性并增加11β-HSD1氧化酶活性，所以本發(fā)明第一方面中更優(yōu)選代謝疾病和II型糖尿病是由于11β-HSD1還原酶活性增加和11β-HSD1氧化酶活性降低造成的。

優(yōu)選在另一方面中，代謝疾病和II型糖尿病是可通過降低11β-HSD1還原酶活性和/或增加11β-HSD1氧化酶活性而治療或預(yù)防代謝疾病和2型糖尿病，更優(yōu)選代謝疾病和II型糖尿病是可通過降低11β-HSD1還原酶活性和增加11β-HSD1氧化酶活性而治療或預(yù)防代謝疾病和2型糖尿病。經(jīng)本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，由于提供的各種查爾酮衍生物，尤其是化合物RS02～RS06能夠同時(shí)降低11β-HSD1還原酶活性并增加11β-HSD1氧化酶活性，所以本發(fā)明另一方面中更優(yōu)選代謝類疾病可通過降低11β-HSD1還原酶活性和增加11β-HSD1氧化酶活性中之任一途徑(優(yōu)選同時(shí)通過這兩個(gè)途徑)而治療或預(yù)防的。例如：代謝疾病和II型糖尿病選自糖尿病、肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、肝硬化、脂肪肝、高血糖、高血脂和高血壓。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式中，代謝類疾病選自糖尿病、脂肪肝、高血糖和高血脂。在本發(fā)明優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，代謝類疾病是糖尿病，如：I型糖尿病和II型糖尿病。

優(yōu)選在另一方面中，經(jīng)制備過程，藥物含有有效劑量的本發(fā)明各種查爾酮衍生物，尤其是化合物RS02～RS06等之一個(gè)或者多個(gè)。有效劑量可以是單位給藥劑量形式(如：一片、一針、一丸或一劑)的藥物中的含量，也可以是所需治療/預(yù)防的患者的單位劑量(如：單位體重劑量)。藥物制造商能夠很容易地通過所需治療/預(yù)防的患者群體的平均體重將所需治療/預(yù)防的患者的單位體重劑量換算成單位給藥劑量形式的藥物中的含量。

本發(fā)明技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的有益效果：

本發(fā)明提供的查爾酮衍生物，能夠同時(shí)降低11β-HSD1還原酶的活性并增加11β-HSD1氧化酶的活性，能顯著降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平，顯著降低血糖水平和血脂水平。因此非常有效于治療或預(yù)防代謝疾病和II型糖尿病。

經(jīng)驗(yàn)證，本發(fā)明提供的查爾酮衍生物，未觀察到給藥動(dòng)物的異常行為和情況，具有安全性。也未觀察到給藥動(dòng)物的異常行為和情況，說明毒性低，無測(cè)量LD50值。

附圖說明

圖1為制取本發(fā)明查爾酮衍生物的化學(xué)合成示意圖；

圖2為本發(fā)明雙重調(diào)節(jié)11β-HSD1機(jī)制的示意圖；

圖3A為本發(fā)明化合物RS02對(duì)11β-HSD1還原酶抑制的作用(Mean±SEM，n＝4)；

圖3B為本發(fā)明化合物RS02對(duì)11β-HSD1氧化酶激活的作用(Mean±SEM，n＝4)；

圖4為本發(fā)明化合物RS02對(duì)大鼠血糖水平和酯質(zhì)代謝的影響(Mean±SEM，n＝10)，其中，A圖為血糖(Glucose)，B圖為三酰甘油(TG)，C圖為總膽固醇(Cholesterol)，D圖為低密度脂蛋白(LDL)，相同字母間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；

圖5A為本發(fā)明化合物RS02～RS06體外對(duì)大鼠腎微粒體11β-HSD2活性的影響；

圖5B為本發(fā)明化合物RS02～RS06體外對(duì)人腎微粒體11β-HSD2活性的影響。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案。本發(fā)明實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。

實(shí)施例1

參見圖1的方式，即通過取代的苯乙酮和取代或未取代的苯甲醛之間在5℃～8℃，5～7.5eq NaOH條件下進(jìn)行Claisen-Schmidt縮合反應(yīng)合成，獲得化合物RS02～RS06，其合成通法為：在Fisher-約翰斯熔點(diǎn)裝置測(cè)定熔點(diǎn)。在600MHz的光譜儀記錄¹H NMR光譜。在HCT光譜儀以正模式Electrospray電離質(zhì)譜(LC-ESI-MS)記錄數(shù)據(jù)。經(jīng)硅膠60(Merck)進(jìn)行柱層析純化化合物。

(E)-2-氯-4′-氨基查爾酮(RS02)：黃色粉末，收率81.1％，熔點(diǎn)132.3～135.7℃。¹H核磁共振(CDCl₃)，δ：8.132(d，J＝15.6Hz赫茲，1H，H-β)，7.926(d，J＝8.4Hz赫茲，2H，H-2′，H-6′)，7.733(d，J＝9.6Hz赫茲，1H，H-6)，7.490(d，J＝15.6Hz赫茲，1H，H-α)，7.431(d，J＝9赫茲，1H，H-3)，7.307(m，1H，H-5)，7.302(m，1H，H-3)，6.700(d，J＝8.4Hz赫茲，2H，H-3′，H-5′)，4.190(brs，2H，NH2-4′)。ESI-MS m/z：258.3(M+1)⁺；計(jì)算C₁₅H₁₂ClNO，257.71。

(E)-2-氟-4′-氨基查爾酮(RS03)：黃色粉末，收率92.3％，熔點(diǎn)38.7～140.4℃。¹H核磁共振(CDCl₃)，δ：7.936(d，J＝7.8Hz，2H，H-2，H-6)，7.863(d，J＝15.6Hz，1H，H-β)，7.653(d，J＝15.6Hz，1H，H-α)，7.6197.647(m，1H，H-6)，7.345～7.362(m，1H，H-4)，7.170～7.196(m，1H，H-5)，7.105～7.138(m，1H，H-3)，6.704(d，J＝7.8Hz，2H，H_3，H_5)，4.185(brs，2H，NH2_4)。IR(cm-1)：3216，3329(NH2)，1650(C＝0)，1485，1557，1587(Ar)，1602(C＝C)。ES1-MS m/z：240.2(M-I)；計(jì)算C₁₅H₁₂FNO，241.26。

(E)-2-氯-4′-甲氧基查爾酮(RS04)：白色粉末，收率94.0％。¹H-WR(CDCl₃)，δ：8.159(d，J＝16.2Hz，1H，H-β)，8.038(d，J＝9Hz，2H，H_2，H_6)，7.742(d，J＝6.6Hz，1H，H-3)，7.495(d，J＝15.6Hz，1H，H-α)，7.442(d，J＝9Hz，1H，H-6)，7.326(t，1H，H_4)，7.314(t，1H，H-5)，6.989(d，J＝8·4Hζ，2H，H-3，H-5)，3.896(s，3H，0CH3_4)。ESI-MS m/z：274.2(M+1)⁺；計(jì)算C₁₆H₁₃ClO₂，272.73。

(E)-4-甲氧基-4′-甲氧基查爾酮(RS05)：收率65.0％。¹H NMR(δ/ppm)：8.02(d，2H，J＝8.7Hz)-7.77(d，1H，J＝15.6Hz)-7.69(d，2H，J＝8.7Hz)-7.42(d，1H，J＝15.6Hz)-6.97(d，2H，J＝9Hz)-6.93(d，2H，J＝8.7Hz)-3.88(s，3H)-3.85(s，3H)。¹³C NMR(δ/ppm)：55.46-55.54-113.83-114.83-119.59-127.85-130.15-130.75-131.40-143.86-161.55-163.31-188.82；計(jì)算C₁₇H₁₆O₃，268.307。

(E)-4-羥基-4′-甲氧基查爾酮(RS06)：淡黃粉末，收率14.7％，熔點(diǎn)170.4～171.0℃。¹H NMR(CDCl₃)，δ：10.048(s，1H，OH-4)，8.122(d，J＝8.4Hz，2H，H-2′，H-6′)，7.721(d，J＝8.4Hz，2H，H-2，H-6)，7.720(d，J＝15.6Hz，1H，H-β)，7.641(d，J＝15.6Hz，1H，H-α)，7.070(d，J＝9.0Hz，2H，H-3，H-5)，6.834(d，J＝8.4Hz，2H，H-3′，H-5′)，3.860(s，3H，OCH 3-4′).ESI-MS m/z：253.0(M-1)^-，計(jì)算C₁₆H₁₄O₃，254.28。

實(shí)施例2 RS02～RS06體外雙重調(diào)節(jié)11β-HSD1活性

圖2所示，目前所報(bào)道的11β-HSD1抑制劑都僅指對(duì)11β-HSD1還原酶(11β-HSD1 reductase)選擇性，尚未涉及到對(duì)11β-HSD1還原酶(reductase)和氧化酶(oxidase)兩個(gè)催化方向之間的選擇性。所報(bào)道的11β-HSD1抑制劑同時(shí)抑制11β-HSD1還原酶和氧化酶，但由于還原酶占主要地位，因而表觀上體現(xiàn)為抑制還原酶，降低機(jī)體和局部的皮質(zhì)醇(cortisol)濃度。目前尚未見對(duì)11β-HSD1還原酶和氧化酶分別篩選測(cè)試和具有11β-HSD1方向選擇性藥物的報(bào)道。雖然目前的抑制劑抑制氧化酶所產(chǎn)生的影響小于抑制還原酶所產(chǎn)生的影響，但其缺陷在于：(1)勢(shì)必會(huì)抵消抑制劑的部分藥效；(2)雙向抑制11β-HSD1只能阻止可的松(cortisone)向皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化，但是卻無法降低已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇濃度，組織中已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇水平仍將維持刺激肝糖輸出和胰島素抵抗；已有的皮質(zhì)醇濃度需要通過刺激11β-HSD1氧化酶使其轉(zhuǎn)化為無活性的可的松。理想的11β-HSD1雙重調(diào)節(jié)劑(本發(fā)明的查爾酮化合物(Chalcone derivative)即為11β-HSD1雙重調(diào)節(jié)劑)，它能抑制11β-HSD1還原酶同時(shí)激活11β-HSD1氧化酶，更大幅度地降低糖皮質(zhì)激素(cortisol)活性，最終發(fā)揮更好的抑制代謝綜合征型和2型糖尿病的效果，形成理想的通過11β-HSD1→糖皮質(zhì)激素→胰島素→血糖通道發(fā)揮抗糖尿病作用的藥物。

本實(shí)施例大鼠間質(zhì)細(xì)胞分離：用CO₂窒息法處死大鼠后，摘除睪丸以提取和純化間質(zhì)細(xì)胞，方法參考(J Androl，2001，22，665～71)。間質(zhì)細(xì)胞的純度通過3β-羥甾脫氫酶活性組織化學(xué)染色法測(cè)定(以0.4mM本膽烷醇酮為甾體底物)，該方法可以95％純度以上的成熟間質(zhì)細(xì)胞。

針對(duì)整體間質(zhì)細(xì)胞11β-HSD1氧化酶和還原酶活性檢測(cè)：利用檢測(cè)[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的濃度分別表征11β-HSD1氧化酶或還原酶活性。每個(gè)11β-HSD1活性檢測(cè)管中加入25nM[3H]-可的松(該濃度在可的松生理學(xué)活性濃度范圍之內(nèi))。50000個(gè)原代間質(zhì)細(xì)胞在含有25nM[3H]-可的松的培養(yǎng)液中培養(yǎng)30min后，[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的濃度表征11β-HSD1氧化酶或還原酶活性。反應(yīng)在一定時(shí)間后用2ml冰乙醚終止。然后，用有機(jī)溶劑提取孵育液中的甾體，氮?dú)鈿饬髦懈稍锖螅月确?甲醇(9∶1，v/v)為流動(dòng)相，通過薄層層析法分離甾體，[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的放射性通過掃描輻射儀檢測(cè)(System AR2000，Bioscan Inc.，Washington，USA)，可的松和氫化可的松之間的轉(zhuǎn)化率由它們本身的放射性標(biāo)準(zhǔn)數(shù)計(jì)算確定。

表1：RS02～RS06對(duì)間質(zhì)細(xì)胞11β-HSD1氧化酶和還原酶方向影響(Mean±SEM，n＝4)

實(shí)施例3 RS02在大鼠間質(zhì)細(xì)胞中對(duì)11β-HSD1還原酶和氧化酶的雙重調(diào)節(jié)作用。

參見圖3A和圖3B，氧化酶活性通過50000個(gè)間質(zhì)細(xì)胞加入皮質(zhì)醇(10^-9～10^-5M)處理30分鐘后測(cè)量。11β-HSD1還原酶通過在50000個(gè)間質(zhì)細(xì)胞加入可的松(10^-9～10^-5M)處理30分鐘后測(cè)量。RS02對(duì)11β-HSD1還原酶抑制的IC₅₀是98nM，而其對(duì)11β-HSD1氧化酶激活的EC₅₀是54nM。

實(shí)施例4 RS02～RS06體外對(duì)間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體11β-HSD1還原酶活性

大鼠間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體蛋白的制備：大鼠間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體制備參考Ge RS等報(bào)道的方法進(jìn)行制備(Endocrinology 1997，138，435～42)。

化合物處理與檢測(cè)：對(duì)于微粒體中的11β-HSD1活性檢測(cè)，微粒體(10μg蛋白)與11β-HSD1底物0.2mM NADPH、1mM G6P一起孵育，反應(yīng)在一定時(shí)間后用2ml冰乙醚終止。然后，用有機(jī)溶劑提取孵育液中的甾體，氮?dú)鈿饬髦懈稍锖?，以氯?甲醇(9∶1)為流動(dòng)相，通過薄層層析法分離甾體，[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的放射性通過掃描輻射儀檢測(cè)(System AR2000，Bioscan Inc.，Washington，USA)，可的松和氫化可的松之間的轉(zhuǎn)化率由它們本身的放射性標(biāo)準(zhǔn)數(shù)計(jì)算確定。11β-HSD2的檢測(cè)方法如11β-HSD1氧化酶的檢測(cè)方法。

表2

RS02～RS06對(duì)間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體11β-HSD1還原酶的影響(Mean±SEM，n＝4)

實(shí)施例5 RS02～RS06體外對(duì)大鼠和人腎微粒體11β-HSD2活性

大鼠腎微粒體和人腎微粒體蛋白的制備：大鼠腎微粒體制備參考Ge RS等報(bào)道的方法進(jìn)行制備(Endocrinology 1997，138，435～42)。

化合物處理與檢測(cè)：對(duì)于微粒體中的11β-HSD2活性檢測(cè)，微粒體(10μg蛋白)與11β-HSD2底物0.2mM NAD⁺一起孵育，反應(yīng)在一定時(shí)間后用2ml冰乙醚終止。然后，用有機(jī)溶劑提取孵育液中的甾體，氮?dú)鈿饬髦懈稍锖螅月确?甲醇(9∶1)為流動(dòng)相，通過薄層層析法分離甾體，[3H]-可的松和[3H]-11-氫化可的松的放射性通過掃描輻射儀檢測(cè)。氫化可的松轉(zhuǎn)化可的松的轉(zhuǎn)化率由它們本身的放射性標(biāo)準(zhǔn)數(shù)計(jì)算確定。

如圖5A和圖5B所示，RS02-RS06對(duì)大鼠和人腎微粒體11β-HSD2活性的無抑制作用。

實(shí)施例6 RS02對(duì)動(dòng)物模型血糖水平和酯質(zhì)代謝的影響

雄性成年SD大鼠30只，每組10只分別用正常飲食喂養(yǎng)(CON，對(duì)照組)和高脂飲食喂養(yǎng)(HFD，高脂模型組)，灌胃給藥RS02(2mg/kg組)，對(duì)照組和高脂模型組給溶媒(1％羧甲基纖維素)，RS02懸浮于1％羧甲基纖維素，灌胃給藥2個(gè)月。

各種指標(biāo)通過生化分析儀檢測(cè)血糖(Glucose)三酰甘油(TG)、總膽固醇(Cholesterol)和低密度脂蛋白(LDL)。

如圖4所示，化合物RS02明顯降低血糖、三酰甘油、總膽固醇和低密度脂蛋白作用。

實(shí)施例7 RS02的安全性實(shí)驗(yàn)：低劑量亞急性毒性試驗(yàn)

將RS02懸溶于1％的羥甲基纖維素鈉溶液中，取15～18g的雄性Balb/C小鼠，分為4組，每組10只，普通飲食喂養(yǎng)，分別是陰性組(正常飼養(yǎng)，不灌胃)、溶劑組(灌胃相同量的％羥甲基纖維素鈉溶液)、400mg/kg的RS02組、800mg/kg的RS02組，灌胃給藥，每天一次，連續(xù)灌胃14天。

14天內(nèi)沒有小鼠因毒性死亡，也未觀察到給藥小鼠的異常行為和情況，說明安全。

實(shí)施例8RS02的安全性實(shí)驗(yàn)：急性毒性試驗(yàn)

將RS02懸溶于1％的羥甲基纖維素鈉溶液中，取15-18g的Balb/C雄性小鼠20只，普通飲食喂養(yǎng)，以4g/kg的劑量灌胃RS02，每天一次，連續(xù)灌胃7天，然后再觀察7天。

14天內(nèi)沒有小鼠因毒性死亡，也未觀察到給藥小鼠的異常行為和情況，說明毒性低，無測(cè)量LD50值。

結(jié)論：RS02顯著的降低血糖的作用，毒性低。