本發(fā)明屬于真菌分離純化領(lǐng)域，特別涉及一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法。
背景技術(shù)：
西藏一種黑耳Exidia sp.真菌是木耳科Auriculariaceae中的一種珍惜可食用的野生物種。因其風(fēng)味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)豐富而廣受當(dāng)?shù)匕傩障矏?ài)，目前在西藏，此種珍惜黑耳每公斤售價(jià)達(dá)到3800元/公斤，且供不應(yīng)求。因此研究此種黑耳的人工栽培成為一個(gè)亟需的熱門研究工作。
目前研究發(fā)現(xiàn)炭角菌是黑耳中的一種伴生菌，因此，如何得到黑耳中伴生菌炭角菌，獲知炭角菌和黑耳的關(guān)系成為了一個(gè)新的課題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法，該方法分離純化工藝簡(jiǎn)單，成本低，可以有效從黑耳中得到炭角菌，具有良好的應(yīng)用前景。
本發(fā)明的一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法，包括：
于薔薇科植物林中，采集有黑耳子實(shí)體發(fā)生的枝條，對(duì)黑耳子實(shí)體表面進(jìn)行消毒，隨后放置于滅菌后的純凈水中清洗，取子實(shí)體組織塊放置于培養(yǎng)基中，避光培養(yǎng)，得到黑耳的伴生菌，即炭角菌；其中，培養(yǎng)基的組成為葡萄糖20g、氯化鈣0.05g、硫酸鎂0.15g、氯化鈉0.025g、磷酸氫二鉀0.25g、1％氯化鐵溶液1.2ml、瓊脂20g、維生素B1100mg、麥芽汁10g、牛肉膏5g、蒸餾水1000ml，調(diào)節(jié)pH至6。
所述消毒具體為放置于84消毒液中消毒2min。
所述避光培養(yǎng)溫度為18-23℃，時(shí)間為3-5天。
所述得到的炭角菌通過(guò)ITS序列測(cè)序驗(yàn)證。
有益效果
本發(fā)明分離純化工藝簡(jiǎn)單，成本低，可以有效從黑耳中得到炭角菌，具有良好的應(yīng)用前景。
附圖說(shuō)明
圖1為野生黑耳的子實(shí)體照片。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
實(shí)施例1
(1)黑耳子實(shí)體的采集
于薔薇科植物林中，將有黑耳Exidia sp.真菌子實(shí)體發(fā)生的枝條采集后，放置于透氣的籃子中，室備用。
(2)對(duì)黑耳子實(shí)體表面進(jìn)行消毒，去除雜菌
將野生黑耳子實(shí)體放置于84消毒液中消毒2min，后取出放置于滅菌后的純凈水中1min，用滅菌的吸水紙把子實(shí)體上的水清洗干凈；
(3)用鑷子取子實(shí)體組織塊，放置于事先配制并滅菌的培養(yǎng)基中，置于18-23℃無(wú)光照溫室中培養(yǎng)3-5天，得到炭角菌；其中，培養(yǎng)基的組成為葡萄糖20g、氯化鈣0.05g、硫酸鎂0.15g、氯化鈉0.025g、磷酸氫二鉀0.25g、1％氯化鐵溶液1.2ml、瓊脂20g、維生素B1100mg、麥芽汁10g、牛肉膏5g、蒸餾水1000ml，調(diào)節(jié)pH至6。
(4)菌種的鑒定
對(duì)獲得的菌種進(jìn)行ITS序列測(cè)序，再與Genbank中的序列進(jìn)行Blast比對(duì)，發(fā)現(xiàn)所測(cè)序列與炭角菌序列相似度達(dá)96％以上，則判定此菌為炭角菌，而非黑耳菌種。